Name: Fare Tails Genomik DNA izolasyonu (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-07-29T00:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 26 s
Description: Öğrenin fare yavrusu kuyruk biyopsisi ile genomik DNA izolasyonu yöntemini. Bu teknik, genetik analiz için bireysel fareleri tanımlamada ve çapraz kontaminasyonu önlemede kritik öneme sahiptir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

<ol style="margin-top: 0in"><li> Kuyruk parçaları (3mm) ve işareti kulakları kesin. </li><li> 720 m l STE ve 30 m l Proteinaz K (10 mg / ml stok) ekleyin. </li><li> 55 inkübe ° C ısıtma bloğu ve vorteks her saat 3 saat için 10 saniye boyunca en yüksek hızda. </li><li> 70 ° C&#39;de 5 dakika proteinaz K inaktive. </li><li> 5 dakika boyunca buz üzerinde Quench. </li><li> Tam hızda 10 dakika kuyruk DNA santrifüjleyin. </li><li> 720 m l Isopropanol içeren yeni bir tüp içine süzün . &nbsp; </li><li> Çökelme DNA tersini tüp veya vorteks. </li><li> 5 dakika tam hızda DNA aşağı spin. Süpernatantı. </li><li> Pelet% 70 etanol ile yıkayın. </li><li> Genomik DNA 5 dakika tam hızda dönerler. Süpernatantı. </li><li> DNA 1-2 dakika kurumasını bekleyin. </li><li> Pelet boyutuna bağlı olarak 100-200 m l DNA süspanse edin. </li><li> Yeri tüp 55 ° C &#39;de 1 saat süreyle DNA çözülme kolaylaştırmak. &nbsp; </li></ol>

<table><tbody><tr><td>STE</td><td>Tampon</td><td></td><td></td><td>100 mm Tris; pH 8.5 /5 mM EDTA /0.2% SDS /200 mM NaCl / H2O içinde</td></tr><tr><td>TE</td><td>Tampon</td><td></td><td></td><td>100 mM Tris; pH 5.0 /1 mM EDTA /10 mM NaCl</td></tr></tbody></table>

fare tails genomik dna izolasyonu

Isolation of Genomic DNA from Mouse Tails

Fare Tails Genomik DNA izolasyonu

Burada 10 günlük bir fare yavrusu var; kuyruk biyopsisi yapacağım ve ardından kuyruğundan genomik DNA ekstraksiyonu gerçekleştireceğim. İşlem olarak, kuyruğun ucundan yaklaşık üç milimetre kadar küçük bir parça keseceğim, ardından bu kuyruk parçasını bir Eppendorf tüpüne yerleştirip tüpü kuru buz üzerine koyacağım. Bir fareden diğerine kontaminasyonu önlemek için, genellikle jilet üzerinde son kesimi yaptığım yeri işaretlerim.Böylece bir sonraki fare için, bir sonraki kuyruk biyopsisini alırken temiz bir jilet parçası kullandığımdan emin olacağım. Yumatanızdaki farklı fareleri birbirinden ayırt etmek için fareleri tanımlamanın bir yoluna ihtiyacınız olacak. Bunun bir yolu, burada gösterilen bir kulak delici kullanarak kulaklarına delik açmaktır.Fareyi, göründüğü gibi ensesinden nazikçe tutun, ters çevirin ve kuyruğunu parmaklarınızla sıkıştırın. Diğer elinizle kulak delme aletini alın ve farenin kulağında hızlıca bir kesik oluşturun. Bunun ne kadar ağrısız olduğunu gördünüz mü?Tamam, şimdi bu Eppendorf tüplerinde bazı kuyruk parçaları olduğunu görebilirsiniz ve şimdi bunların sindirilmesine yardımcı olacak solüsyonları ekleyeceğim. İlk olarak 720 µL STE solüsyonu ekleyeceğim ve ardından 30 µL Proteinase K ekleyeceğim. İşte sindirim işleminden önce kestiğimiz kuyruk parçasına yakından bir bakış.Şimdi kuyruk parçalarını 55 °C'lik bir ısıtma bloğuna yerleştireceğim. Birçok protokol 55 °C'de sürekli sallama işlemi gerektirir, ancak benim çalışmamda kuyruk parçalarını vorteksleyeceğim için buna gerek olmayacaktır. Şimdi kuyruk parçasını iki saniye boyunca vorteksleyeceğim.Bir, iki. Vortekslemeden sonra, ependorf tüpünün içindeki kalıntılara baktığımızda, kuyruk parçasının tamamen çözündüğünü görebilirsiniz; proteinaz K'yi 70 °C'de beş dakika boyunca aktive edin. Beş dakika boyunca buz üzerinde soğutarak işlemi durdurun.Kuyruk parçalarını bir mikro santrifüjde tam hızda 10 dakika boyunca çöktürün. Bu mikro santrifüjde tam hız 13,000 RPM'dir. Sindirim kuyrukları çöktürülürken, bazı einor tüplerini etiketleyin ve einor tüplerini 750 µL isopropanol ile doldurun.Sindirilen kuyruklar santrifüj edildikten sonra, kıl ve sindirilmemiş materyaller tüpün dibinde bir pelet oluşturacaktır; çözeltiyi boşaltın. Sindirilmiş materyali, STE ve proteinaz K içeren çözeltiyi, izopropanol içeren Eppendorf tüpüne aktarın; DNA çözeltiden ayrılmaya başlayacak, hayaletimsi ve tüy gibi görünecektir ve işte orada yüzen o kabarcık, farenin kuyruğundan izole edilmiş genomik DNA'dır. İzopropanol ve STE çözeltisi karıştırıldıktan sonra, genomik DNA çözeltiden ayrılacak ve tam burada küçük bir top şeklinde görünecektir; çökelmiş genomik DNA'yı bir mikrosantrifüjde beş dakika boyunca tam hızda santrifüj edin.Tüpün dibinde peletlenmiş genomik DNA'mızı görebiliriz. Şimdi, tüpteki çözeltiyi aspire ederek sadece genomik DNA peletini geride bırakacağım. Her yeni tüpü aspire ettiğimde pipet ucunu değiştireceğim.Aspiratörün ucuna bir pipet takın. STE ve izopropanolü aspire ettikten sonra, genomik DNA peletini yıkamak için 1 mL %70 etanol ekleyeceğim. Genomik DNA peleti genellikle mikro santrifüj tüpünün kenarına yapıştığından ve %70 etanol içinde tamamen yıkamak için yerinden çıkarmak zor olduğundan, burada bulunan mikro santrifüj tüpü rafına sürterek peleti yerinden oynatmanız gerekecektir.Bunu şu şekilde yapabilirsiniz. İşte çöktürüldükten ve %70 ethanol ile yıkandıktan sonraki genomik DNA'nın görünümü. Bunu tekrar tam hızda beş dakika boyunca santrifüj edeceğim ve ardından %70 ethanol'ü aspire edeceğim; yıkama işlemi tamamlanan genomik DNA peletlerini santrifüjle çöktürün.%70 etanol ile beş dakika boyunca tam hızda santrifüjleyip, ardından %70 etanolü aspire edeceğiz ve DNA'nın beş dakika boyunca kurumasını bekleyeceğiz. Tüpün dibindeki genomik DNA peletine baktığımızda, istediğimiz kuruluk seviyesine ulaştığını görebiliriz. Böylece fare kuyruklarından elde edilen genomik DNA peletlerini kuruttum ve şimdi 100 µL pH 8'de 40 mM Tris ekleyeceğim.Genomik DNA'yı, oda sıcaklığına kıyasla daha hızlı çözünmesini sağlamak için 50 °C'ye getirdim. 50 °C'de yaklaşık bir saat beklettikten sonra, transgenim için hangi farelerin pozitif olduğunu belirleyeceğim PCR reaksiyonlarını gerçekleştirmek isteyeceğim zamana kadar örnekleri ya donduracağım ya da 4 °C'de saklayacağım.

isolation-of-genomic-dna-from-mouse-tails

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Doku sindirim ve PCR okuma da dahil olmak üzere bir fare kuyruğu örnek tam genotipleme, bir ve bir buçuk saat Sigma'nın SYBR Green Özü-N-Amp Doku PCR kiti kullanılarak yapılır.

Sigma&#39;nın Özü-N-Amp Doku PCR Kit kullanarak Fare Doku hızlı Genotiplendirme

Biz fare embriyonik doku doku-spesifik gen ekspresyonu başlangıcı sırasında veya sonrasında doku spesifik genlerin faktör etkileşimleri belirlemek için yöntem bir kromatin immunoprecipitation (ChIP) göstermektedir. Bu protokol, normal embriyonik gelişim sırasında ortaya çıkan doku-spesifik gen aktivasyon çalışması için yaygın olarak uygulanabilir olmalıdır.

Erken evre Fare Embriyolar kullanarak Doku özel Genler Kromatin Immunoprecipitation Testi

Biz Amerikan pika gösterildiği gibi, verimli bir şekilde zor küçük memeliler saç örnekleri toplamak için bir non-invaziv örnekleme yaklaşımı sunuyoruz. Biz örneklenmiş saç DNA açılan ve yaban hayatı ekolojisi ve korunması çalışmalarında yaygın olarak kullanılan moleküler belirteçler çeşitli yükseltme bu yöntemin yararını göstermektedir.

Elusive Küçük Memeliler Yüksek Kalite DNA Edinme Noninvaziv Saç Örnekleme Tekniği

Bu videoda, periferik kanı toplamak için bir fare modelinde kuyruk kesme prosedürünü gösteriyoruz. Toplanan kan daha sonra daha ileri deneyler için kullanılabilecek ayrı plazma için santrifüjlemeye tabi tutulur.

Periferik Kan Alma ve Plazma İzolasyonu için Bir Fare Kuyruğu Snip Prosedürü

Bu kulak ve farelerin kuyrukları primer fibroblastlar üretilmesi için basit ve hızlı bir deney prosedürü tarif etmektedir. Prosedür özel hayvan eğitim gerektirmeyen ve 10 gün oda sıcaklığında saklanan kulaklardan fibroblast kültürlerin üretimi için de kullanılabilir.

Fare Kulak ve Kuyruk Dokular Yaratma İlköğretim Fibroblast Kültürleri

Fare oositlerinin mikroenjeksiyonu hem klasik transgenezis ( yani, transgenlerin rastgele bütünleşmesi) hem de CRISPR aracılı gen hedeflemesi için yaygın olarak kullanılır. Bu protokol, kalite kontrolü ve genotiplendirme stratejileri üzerinde özel bir vurguyla mikroenjeksiyondaki en son gelişmeleri gözden geçiriyor.

Oositlerin Mikroenjeksiyonu ile Genetiği Değiştirilmiş Farelerin Üretilmesi

Biz Lambda seçin CII mutasyon tahlil transgenik kemirgenler kültürlü hücrelerdeki veya faiz kimyasal/fiziksel ajanı ile tedavi karşılık gelen hayvanlar için detaylı bir protokol tanımlamak. Bu yaklaşım yaygın kanserojen memeli hücreleri, mutagenisitesinin test etmek için kullanılmıştır.

Lambda seçin CII mutasyon tespit sistemi

Burada, hızlı bir şekilde yüksek kaliteli çekirdekleri aşağı akım kitlesel paralel RNA sıralama için taze veya dondurulmuş dokusundan izole etmek için bir iletişim kuralı mevcut. İkisi de çekirdek yalıtımı için kullanılan deterjan-mekanik ve mekanik hipotonik doku bozulma ve hücre lizis seçenekleri, içerir.

Yetişkin omurilik çekirdeği yalıtım kitlesel paralel tek-çekirdek RNA sıralama için

Mevcut protokol, Gja1'de tam uzunlukta Connexin43 jenerasyonunu koruyan, ancak daha küçük GJA1-20k dahili olarak çevrilmiş izoformun translasyonunu önleyen tek bir M213L mutasyonunu tanımlamaktadır.

Tam Boy Proteinin İfadesini Korurken mRNA'dan Bir İç Translasyonel Başlangıç Bölgesinin Çıkarılması

Bu protokol, otoimmün hastalığın gelişimi sırasında murin bağırsak mikrobiyota değişikliklerinin analizi için basit, uygun maliyetli bir DNA izolasyon yöntemi sağlar.

Lupus Eğilimli Farelerde Fekal Mikrobiyota Dinamiğinin Basit, Uygun Maliyetli Bir DNA İzolasyon Yöntemi Kullanılarak Analizi

Genetiği değiştirilmiş fare modellerinde ortaya çıkan tümörlerde terapötik hedefleri ve karşılık gelen insan tümör tipini belirlemek ve karşılaştırmak için genomik analizler ve fonksiyonel genomik ekranlar kullanan türler arası karşılaştırmalı bir onkogenomik yaklaşım geliştirdik.

Malign Periferik Sinir Kılıfı Tümörünün Fare Modellerinde Terapötik Hedefleri Belirlemek için Genetik Profilleme ve Genom Ölçeğinde Bırakma Taraması

Öğrenin fare yavrusu kuyruk biyopsisi ile genomik DNA izolasyonu yöntemini. Bu teknik, genetik analiz için bireysel fareleri tanımlamada ve çapraz kontaminasyonu önlemede kritik öneme sahiptir.

Fare Tails Genomik DNA izolasyonu

Daha fazla video keşfet