Name: Fare Geleneksel NASA Hindlimb Boşaltma Model bir Alternant Yöntemi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-03-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 50 s
Description: Öğrenin farelerde arka bacak boşaltma için basit bir kuyruk halkası yöntemi. Bu teknik, stresi azaltarak kas atrofisi oluşturur ve vücut ağırlığını korur. Kas-iskelet fizyolojisi ve uzay biyolojisi araştırmaları için güvenilir bir alternatif sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar Andrew J Dunn, laboratuvarda olağanüstü bir lisans araştırma öğrenci, teknik yardım ve hayvanlar için bakım teşekkür etmek istiyorum. Sağlık hibe HD058834 ve Missouri Yaşam Bilimleri Fellowship Üniversitesi Ulusal Enstitüsü tarafından finanse edilen bu çalışma.

Ön-Cerrahi Aletler / Malzeme <ul><li> Tel kesiciler / pense </li><li> Tül 2 x 2 "pedleri </li><li> Isıtma yastığı </li><li> Gümüş nitrat çubukları </li><li> Steril cerrahi eldiven </li><li> İsofluranın inhalasyon anestezik </li><li> Klorheksidin glukonat% 4 (antiseptik cerrahi fırçalayın) </li><li> Steril 2-0 cerrahi çelik sütür </li><li> 25 X 5 / 8 iğne (otoklavlı) </li><li> Hemostat (otoklavlı) </li><li> Cerrahi çelik sütür </li></ul> Cerrahi Prosedür <ol><li> Steril bir alan oluşturun. Steril prosedürü takip edin. </li><li> 2 ile fare anestezi -% 3 izofluran. </li><li> Fare ısıtma yastığı yerleştirin. </li><li> Klorheksidin çözümü ile kuyruk fırçalayın. </li><li> Bulun 5, 6 ve 7 inci intervertebral mesafe (kuyruk iki kemik diken diken arasında, kuyruk dibinde, vücut saç sonundan itibaren saymaya başlayın). </li><li> Intervertebral uzaya iki omurları arasında bir pilot delik Hemostat ve 25G iğne kullanın. </li><li> 10 cm uzunluğunda çelik sütür kesmek için tel kesiciler kullanın. </li><li> İğneyi çıkarın ve kuyruk iki ucunda delik, 5 cm dikiş ile çelik sütür eklemek. </li><li> Kuyruk her tarafında dikiş + 5 cm olmalıdır. </li><li> Başparmak ucu kuyruk üzerine yerleştirin. </li><li> Serbest el ve baş parmağınızın ucuna çelik sütür rüzgar ve biter büyük bir döngü oluşturacak şekilde bükün. Yara veya dairesel kısmında uzun + 3 mm olmalıdır. </li><li> Baş parmağınızla çıkarın. </li><li> Hemostat ile sütür bir iplikçik Kelepçe ve daha küçük bir döngü, orijinal büyük bir döngü büküm mümkün olduğunca yakından bağlı olduğu sonuna doğru eğip. </li><li> Fazla tel kesti ve bükülmüş tel geri bükün. </li><li> Herhangi bir aşırı kanama varsa, gümüş nitrat sopalarla onu durduramaz. </li><li> Hindlimb boşaltma 5-7 gün önce kurtarmak için tek bir evin kafes izofluran ve yerde fare kapatın. Eğer birden fazla fare birlikte ev sahipliği yapmaktadır kuyruk halkaları dolaşmış olsun. </li></ol> 1. Hindlimb Boşaltma işlemi Malzemeler <ul><li> Size 10-24 X 4 makine vidaları, hayvan başına biri. </li><li> Naylon somunu boyutu 10 - 24, başına bir hayvan. </li><li> Kelebek somun boyutu 10 X 24, hayvan başına iki. </li><li> Yıkama boyutu ¼ X 1, hayvan başına iki. </li><li> Ek bileşenini kanca boyutu # 6, 1-11/16 "ve tek başına hayvan Balıkçılık döner. </li><li> Bobin Metal dikiş makinesi. Bir hayvan başına. </li><li> S-şekilli kanca için küçük ataş, hayvan başına </li><li> Penseler. </li><li> 2 x 2 "gazlı bez. </li><li> 2 "siyah kağıt bağlayıcı kelepçeler. </li><li> Kanal kaset / laboratuvar bant. </li><li> Kafesin tam uzunlukta biraz ötesine uzanan 1-3/8 "Kaplama oluklu çelik çubuk </li><li> 50cm x 40cm x 20cm kafes (sıçan kafes). </li><li> Bükülmüş boru ile su Şişe. </li><li> Paslanmaz çelik tel, su şişesi destek U-şeklinde. </li></ul> Kafes Kurulum <ol><li> Kanal bant ile bu zamansal aşağı 1-38 "Kaplama oluklu çelik kafesin üstünden bar, ve bant yatırın. </li><li> 1 kanat somun, makine vida vida, bir çamaşır makinesi takın ve makine vida oluğu oluklu çelik levha ± kafesin kenarından 15 cm ekleyin. </li><li> Başka bir yıkama ve kanat somun ekleyin. Her iki kanat fındık sıkın, ancak daha sonra ayarlamalar yapmak için gerekli olacak gibi tamamen sıkmayın. </li><li> Bobin merkezi delikten makine vida yerleştirin. </li><li> Bobin düşmesini önlemek için, makine vida sonuna kadar naylon somunu sıkın. Bobin serbestçe dönebilen olmalıdır. </li><li> Balıkçılık döner bobin alt kısmından gelen ek kanca takın. </li><li> Ataç S şekilli bir kanca oluşturmak için pense kullanın. (Bir kanca formu ataş 2cm Cut). </li><li> S-şekilli kanca bir ucunu balıkçılık döner delikten sokun ve pense ile kapattı tutam. </li><li> Kafes yan iç makine vida paralel U-şeklinde bir tel, koyun ve tam bir su şişesi desteklemek için biter bükün. </li><li> Spicket aşağı bakacak şekilde, ancak alt dokunmadan su şişesi, U-şekilli tel içine yerleştirin. </li><li> Bu gıda parçalamak kelepçe gücünü engelleyerek, ya da üzerinde aşağı sıkma olduğunu bu yüzden onlar yakın kapatmaya değil. Olduğunu. Onu dışarı düşen bu 3 - 4 adet gıda tutmak için Sadece yeterince gerginlik., 2 "bağlayıcı kelepçe açık bükün Fare burun. </li><li> Place 3 - 4 adet bağlayıcı kıskaç içine kemirgen chow. </li></ol> Mouse Hindlimb Boşaltma <ol><li> S-şekilli kanca kuyruk halka küçük halka açık ucuna takın. </li><li> Alt kanat somun sıkma makinesi vida veya gevşeterek fare yüksekliğini ayarlayın. Alt ekstremite ağırlık taşıyan olmamalıdır. Sonra optimum yüksekliği, üst kanat somununu sıkın elde edilir. </li><li> Fare arka ayaklarında spicket tırmanırlar, böylece su şişesi, ve U-şekilli tel konumlandırın. Kanal bant ile kafesinin yan su şişesi sabitleyin. </li><li> Fare üzerine tırmanmaya böylece kafesinin altındaki gıda ile bağlayıcı kelepçe yeri; bantlar ile bant aşağı. </li><li> Birden fazla hayvan hindlimb kafesin diğer tarafta boş ise aynı prosedürü tekrarlayın. House kafes başına iki hayvan alan hayvanların neredeyse birbirine temas böylece. </li><li> Fare kuyruğu gevşek balık döner üzerine sarmak için 2 X 2 gazlı bez kullanın. Tül kuyruk güvenliği, gazlı bez etrafında sarmak için küçük bir parça bant kullanın. Bu adım, kuyruk ucu ve bu kuyruk olma nekrotik havuzu kan önde gelen, aşağı sarkık kuyruğu önlemek için önemlidir. </li><li> Kafesine koçanı yataklar küçük bir miktar ekleyin. Fare, bir höyük yatak ve arka ayaklarında yataklar üzerine yüklemeye çalışmayın aksi takdirde çok fazla yatak katmayın. </li></ol> 2. Temsilcisi Sonuçlar: Kuyruk halka HÜ tekniğin başarı kurmak için kuyruk halka ameliyat öncesi ve öncesinde, HU ve kurtarma hayvan vücut ağırlığı ölçülür; tüm gruplarda ve adrenal kitle; soleus kas kütlesi. Deney boyunca farelerin vücut ağırlıkları Şekil 1'de gösterilmiştir. Kuyruklu halka cerrahisi (24.7 ± 3.5g) önce farelerin vücut ağırlıkları kuyruklu halka cerrahisi (24.3 ± 2.9g), HU için önce 5 gün sonra iyileşme anlamlı bir farklılık yoktu. Ayrıca vücut ağırlığının önemli ölçüde 28 gün HU (21.3 + 2.1g), (22.7 ± 1.9g), HÜ, 14 gün sonra hemen düşüş veya 3 gün sonra kurtarma HU (24.0 ± 1.8g). 14 ve 28 gün boyunca HÜ (-6,8% ve% 12) küçük ama anlamlı olmayan bir beden-kitle kaybına rağmen, farelerin öncesi HÜ vücut ağırlıkları tam iyileşme 3 gün sonra kurtarıldı. Gıda tüketimi ayaktan kontrol fareler ve HÜ fareler için Şekil 3'te gösterilmiştir. Ortalama günlük gıda alımı kontrol grubu ile karşılaştırıldığında 28 gün içinde HÜ farelerde farklı değildi. Biz etkili bir HÜ prosedürü (Şekil 2) gösteren 14 ve 28 gün (-39,1% -46,6%) HÜ aşağıdaki önemli soleus kas atrofi gözlemledi. Ayrıca bu atrofi derecesi HÜ 2, 7, 8, 2-4 hafta boyunca beklenen literatür değerleri ile tutarlı. HÜ soleus kitle toparlanmanın ardından 3 gün kontrol değerleri% 74 oranında önemli ölçüde arttı. Kurtarma grubunda soleus kitle HU grupları hem de önemli derecede daha fazla oldu, ama hala ayaktan kontrol hayvanlara göre önemli ölçüde daha az. Adrenal ağırlıkları hayvan stresin bir göstergesi olarak ölçüldü; sağ ve sol böbreküstü bezleri eksize ve tartıldı hem de. Ortalama ağırlıkları kontrolü ve tüm gruplarda HÜ fareler fareler (Şekil 4) için karşılaştırılabilir. Daha önce sıçanlarda HÜ başında hayvan sayısı için başarı oranı süspansiyon cihazların gelmeden HÜ tamamladı hayvan sayısı (kuyruk çekme bant ile çiğneme hayvanlar nedeniyle) ile karşılaştırıldığında göstermiştir 10 oldu 12 Morey Holton tekniği 1. Bu çalışmada, farelerin hiçbiri (n = 54) hiç HÜ döneminin tamamlanmasından önce süspansiyon indi. Ancak, ağır iltihaplı bir kuyruk geliştirilen bir fare oldu. Inflamasyonu belirgin hale gelince, biz iltihaplı alan iyileşmek için izin kuyruk halka kaldırıldı ve daha sonra HÜ süresini tamamlamak için başka bir kuyruk-ring yerleştirilir. Askı aparat çıkıyor, çünkü geçmişte HÜ Morey Holton yöntemi kullanıldığı zaman, biz genellikle 1-2 fare / grup ortadan kaldırmak. Iz halka yöntemi ile yanlışlıkla döneminde, 14 veya 28 gün (n = 54 fare) HÜ HÜ aparat çıkan fareler hiçbir bölüm vardı. <img src="/files/ftp_upload/2467/2467fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1. Vücut Ağırlığı Değişimi (± SD). Kısaltmalar: CON: ağırlık taşıyan kontrol fareler (n = 76); Ön-HU: HU (n = 54) öncesinde tüm fareler; HU14: 14 gün (n = 34) fareler hindlimb boşaltılır; HU28: fareler hindlimb boşaltılır 3 gün (n = 22) 28 gün (n = 20); REC: kafes izin hindlimb boş fareler kurtarabilirsiniz. Vücut ağırlığı gruplar arasında anlamlı bir fark gözlendi. <img src="/files/ftp_upload/2467/2467fig2.jpg" alt="Şekil 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2 soleus kas atrofi (± SD). Kısaltmalar: CON: ağırlık taşıyan kontrol fareler (n = 76); HU14: 14 gün (n = 34) fareler hindlimb boşaltılır; HU28: 28 gün (n = 20) fareler hindlimb boşaltılır ve REC: izin hindlimb boş fareler 3 gün (n = 22) kurtarmak için kafes. * Ağırlık taşıyan kontrolü (CON) göre önemli derecede farklılık gösteriyor (p &lt;0,001). HÜ grupları hem de daha δSignificantly farklı (p &lt;0.01). 467fig3.jpg "alt =" Şekil 3 "/&gt; Şekil 3. Gıda Tüketimi (Ortalama ± SD). Ağırlık taşıma ve hindlimb boşaltma sırasında ortalama günlük gıda alımı (g / gün). Kısaltmalar: ağırlık taşıyan kontrol fareler (n = 76), HU: fareler hindlimb unloaded14 - 28 gün. CON ve HU grupları arasında anlamlı bir farklılık gözlenmedi. <img src="/files/ftp_upload/2467/2467fig4.jpg" alt="Şekil 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 4"> Şekil 4 Adrenal Kütle (± SD). Kısaltmalar: CON: ağırlık taşıyan kontrol fareler (n = 76); HU14: 14 gün (n = 34) fareler hindlimb boşaltılır; HU28: 28 gün (n = 20) fareler hindlimb boşaltılır ve REC: izin hindlimb boş fareler 3 gün (n = 22) kurtarmak için kafes. Gruplar arasında anlamlı bir fark gözlenmiştir.

<ol><li>Brown, M., Foley, A. M., Hasser, E. M., Foley, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+alternative+method+for+hindlimb+unweighting%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gravitational+Physiol%22%5BJournal%5D)">An alternative method for hindlimb unweighting.</a> J Gravitational Physiol. 12, 43-50 (2005).</li>
<li>Fitts, R. H., Metzger, J. M., Riley, D. A., Unsworth, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Models+of+disuse%3A+a+comparison+of+hindlimb+suspension+and+immobilization%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Models of disuse: a comparison of hindlimb suspension and immobilization.</a> J Appl Physiol. 60, 1946-1953 (1986).</li>
<li>Ingalls, C. P., Warren, G. L., Armstrong, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracellular+Ca2%2B+transients+in+mouse+soleus+muscle+after+hindlimb+unloading+and+reloading%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Physiology%22%5BJournal%5D)">Intracellular Ca2+ transients in mouse soleus muscle after hindlimb unloading and reloading.</a> Journal of Applied Physiology. 87, 386-390 (1999).</li>
<li>Morey, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spaceflight+and+bone+turnover%3A+correlation+with+a+new+rat+model+of+weightlessness%5BTitle%5D)+AND+%22BioScience%22%5BJournal%5D)">Spaceflight and bone turnover: correlation with a new rat model of weightlessness.</a> BioScience. 29, 168-172 (1979).</li>
<li>Morey-Holton, E. R., Globus, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hindlimb+unloading+of+growing+rats%3A+a+model+for+predicting+skeletal+changes+during+space+flight%5BTitle%5D)+AND+%22Bone%22%5BJournal%5D)">Hindlimb unloading of growing rats: a model for predicting skeletal changes during space flight.</a> Bone. 22, 83-88 (1998).</li>
<li>Morey-Holton, E. R., Globus, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hindlimb+unloading+rodent+model%3A+technical+aspects%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Hindlimb unloading rodent model: technical aspects.</a> J Appl Physiol. 92, 1367-1377 (2002).</li>
<li>Thomason, D. B., Booth, F. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Atrophy+of+the+soleus+muscle+by+hindlimb+unweighting%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Atrophy of the soleus muscle by hindlimb unweighting.</a> J Appl Physiol. 68, 1-12 (1990).</li>
<li>Thomason, D. B., Herrick, R. E., Surdyka, D., Baldwin, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time+course+of+soleus+muscle+myosin+expression+during+hindlimb+suspension+and+recovery%5BTitle%5D)+AND+%22J+Appl+Physiol%22%5BJournal%5D)">Time course of soleus muscle myosin expression during hindlimb suspension and recovery.</a> J Appl Physiol. 63, 130-137 (1987).</li>
</ol>

Biz, son derece başarılı olduğu belirlendi hindlimb boşaltma farelerin bir alternatif yöntem değerlendirildi. Burada açıklandığı gibi kuyruk halka yöntemi uzun vadeli hindlimb süspansiyon kullanılmış ve kurtarma aşağıdaki HÜ çalışma. Bu koşulların her birinin altında, istikrarlı bir gıda alımı, vücut ağırlıkları ve farelerin adrenal ağırlıkları ile kanıtlandığı gibi uyum başarısızlık herhangi bir kanıt yoktu. Bu kuyruk halka HÜ tekniği gerçekleştirmek için kolay ve çok küçük bir cerrahi uygulama ile kolaylıkla entegre edilebiliyor. Kuyruk halka yöntemi geleneksel Morey-Holton 5, 6 yöntemi ile karşılaştırıldığında pek çok avantajı vardır . İlk olarak, sorunları ortaya eğer öyleyse, sadece askı süresi sonunda hemen belli değildir bu kuyruk deri ve halka implantasyonu sitesi, her zaman görülebilir. İkincisi, hayvanlar, HU sırasında herhangi bir zamanda veri kümesi ya da bir fare tutmak için bir belirlemeyi yapmak için gerek kalmayabilir askı aparat almak mümkün değildir. Ayrıca, farelerin halka aparat rahatsız ve kurtarma için HU yayımlanan, HU sorunsuz bir iyileşme fazı için izin, kuyrukları sabotaj yok. Son olarak, kuyruk-ring yöntemi ile hindlimb boş fareler, farelerin hindlimb Morey-Holton kuyruk çekme tekniği ile boşaltılır daha iyi kendi vücut ağırlığını korumak. HÜ 14 gün sonra elimizde biz küçük (% -6,8), fakat önemli olmayan bir beden-kütle kaybı izlenebilir. Ingalls et al. Morey Holton yöntem 3 HÜ 14 gün sonra, farelerin vücut ağırlığının önemli bir% 12 azalma gözlenen Oysa . Ingalls adrenal ağırlıkları rapor rağmen, bizim kuyruk halka yöntemi fare (HÜ farelerin adrenal ağırlıkları kontrollere göre farklı değildir) ve vücut ağırlığı hindlimb boşaltma süresi boyunca daha iyi bakım, daha az stres sağladığını görünür. Özetle, bir kuyruk hindlimb boşaltma halka yöntemi geliştirilmiş ve test, 14 ve 28 gün boyunca fareleri HU ve fareler üzerinde HÜ sonra 3 gün boyunca kafes geri döndü. Adrenal ağırlıkları, vücut kitle ve gıda alımının temelinde, fare tail-ring aparatı iyi adapte olması görünür. Yöntemi boşaltma kuyruk-ring hindlimb geleneksel Morey Holton hindlimb boşaltma tekniği basit, kullanışlı bir alternatif.

<table><tbody><tr><td>Kablo kesici/pense</td><td>Ace Hardware</td><td>84-056</td><td></td></tr><tr><td>Gazlı bez</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-037-901</td><td></td></tr><tr><td>Isıtma pedi</td><td>Sunbeam</td><td>Z-1228-001</td><td></td></tr><tr><td>Gümüş nitrat aplikatörleri</td><td>ARZOL</td><td>0001-2</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane,USP</td><td>Novaplus</td><td>NDC 0409-3292-49</td><td></td></tr><tr><td>Klorheksidin Glukonat %4</td><td>Purdue Products L.P.</td><td>NDC 67618-200-01</td><td></td></tr><tr><td>Steril 2-0 cerrahi çelik sütür</td><td>Ethicon Inc.</td><td>SS-28</td><td></td></tr><tr><td>25 X 5/8 A ayar iğne</td><td>Terumo Medical Corp.</td><td>NN 2516R</td><td></td></tr><tr><td>Hemostat/iğne tutucu</td><td>Fine Science Tools</td><td>12500-12</td><td></td></tr><tr><td>10-24 X 4 boyut makine vidaları</td><td>Hillman The Fastener Center</td><td>90272</td><td></td></tr><tr><td>Naylon kontra somun 10 X 24 boyut</td><td>Hillman The Fastener Center</td><td>180141</td><td></td></tr><tr><td>Kelebek somun 10 X 24 boyut</td><td>Hillman The Fastener Center</td><td>180243</td><td></td></tr><tr><td>Geniş pul &amp;#188; X 1 boyut</td><td>Hillman The Fastener Center</td><td>290012</td><td></td></tr><tr><td>Kilitli klipsli fırdöndü #6 boyut, 1-11/16&amp;#8221;</td><td>Bass Pro Shop</td><td>38-481-554-01</td><td></td></tr><tr><td>Metal dikiş makinesi masurası</td><td>Singer Instruments</td><td>45785</td><td></td></tr><tr><td>Ataş</td><td>Office Depot</td><td>221720</td><td></td></tr><tr><td>2&amp;#8221; siyah kağıt binder klipsleri</td><td>Office Depot</td><td>308957</td><td></td></tr><tr><td>Scotch Çok Amaçlı Tamir Bandı</td><td>Office Depot</td><td>790710</td><td></td></tr><tr><td>1-3/8&amp;#8221; Kaplamalı kanallı çelik bar</td><td>Home Depot</td><td>548932</td><td>Kafesin toplam uzunluğunu biraz aşar</td></tr><tr><td>50cm X 40cm X 20cm kafes (sıçan kafesi)</td><td>Alternative Design Manufacturing</td><td>RC88D-PC</td><td></td></tr><tr><td>Su Şişesi</td><td>Alternative Design Manufacturing</td><td>WB16FS</td><td></td></tr><tr><td>Paslanmaz Çelik tel</td><td>Small Parts, Inc.</td><td>SWX-4029</td><td>Su şişesini desteklemek için U şeklinde tel</td></tr></tbody></table>

fare geleneksel nasa hindlimb boşaltma model bir alternant yöntemi

An Alternant Method to the Traditional NASA Hindlimb Unloading Model in Mice

Morey-Holton hindlimb boşaltma (HU) yöntemi yaygın olarak kabul edilen Ulusal Havacılık ve Uzay Dairesi (NASA), kemirgenler 4-6 kullanmama atrofisi eğitim için yer tabanlı bir model. Bizim çalışmamızda bir alternant yöntemi farelerde altın standart Morey Holton HÜ kuyruk çekme tekniği değerlendirildi. Elli dört dişi farelerde (4-8 ay), HU (n = 34) 14 gün veya 28 gün (n = 20). Kurtarma HU HU (n = 22) 3 gün sonra normal kafes ambulasyon sonra değerlendirildi. Yaşlı uyumlu fareler (n = 76) ağırlık taşıyan kontrol olarak görev yaptı. HÜ için önce bir kuyruk halka, 5., 6., 7., inter-vertebral disk alanı geçirilir ve farelerin askıya alındığı bir halka içine şekillenen bir 2-0 steril cerrahi çelik tel ile kuruldu. Kuyruk-ring Vertebra konumu uygun dışkılama ile müdahale olmadan hayvan vücut ağırlığı dengelemek için seçildi. Biz, HU, soleus atrofi derecesi, ve adrenal kitle aşağıdaki HÜ öncesi ve sonrası vücut ağırlığı değerlendirerek bu romanı HU tekniği başarısı belirlenir. HU (24.3 ± 2.9g) önce farelerin vücut ağırlığı önemli ölçüde (24.0 ± 1.8g), HÜ 14d (22.7 ± 1.9g), HÜ 28d (21.3 + 2.1g) sonra veya 3 gün kurtarma sonra hemen düşüş vermedi . Soleus kas kütlesi sırasıyla 14 gün ve 28 gün boyunca HU (p &lt;0,001) önemli ölçüde azalmıştır (-39,1% -46,6%). Kurtarma soleus kitle ardından 3 gün kontrol değerleri% 74 oranında önemli ölçüde arttı. HÜ farelerin adrenal ağırlıkları kontrol farelere göre farklı değildi. Beklenen edebiyat değerlerine karşılık gelen HU, 2, 7, 8 hayvan vücut ağırlığı, karşılaştırılabilir böbreküstü bezi ağırlıkları, ve soleus atrofi bakım roman HÜ yöntemin başarısı kanıtlanmıştır. Bu HÜ yöntemin başlıca avantajları şunlardır: 1) kuyruk muayene sırasında süspansiyon kolaylığı; 2) kuyruk-bantlama ve HU ile sık sık görülen siyanotik, iltihaplı ve / veya nekrotik kuyrukları olasılığı azaldı; 3), farelerde hiçbir olasılığı çekiş çiğneme bant ve askı aparat çıkan ve 4), hemen HÜ sonra hızlı iyileşme ve normal kafes aktivite.

Biz farelerde model boşaltma alternant hindlimb geliştirdi. Geleneksel Morey Holton kuyruk çekme tekniği üzerinde hindlimb boşaltma kuyruk halka yöntemi birincil avantajı hayvan üzerine stresi en aza indirir basit bir işlemdir.

Fare Geleneksel NASA Hindlimb Boşaltma Model bir Alternant Yöntemi

Morey-Holton arka bacak boşaltma (HU) yöntemi, ... incelemek için yaygın olarak kabul görmüş bir Ulusal Havacılık ve Uzay Dairesi (NASA) yer tabanlı modelidir.

Bu prosedürün genel amacı, hayvan için stresi minimize eden daha basit ve doğrudan bir yöntemle farelerde arka bacak boşaltma veya hu gerçekleştirmektir. Bu kuyruk sabitleme yöntemi, genel sağlık durumunu ve vücut ağırlığını bozmadan arka bacak atrofilerini başarıyla indükler. İlk adım, yetişkin bir fareye bir kuyruk halkası implante etmektir.Çalışma boyunca vücut ağırlığının ve sağlık gözlemlerinin kaydedilmesi önemlidir. Ardından, arka ekstremite yük boşaltma düzeneği kurulur ve yük boşaltma işleminin gerçekleştirileceği kafesin içine yerleştirilir. Hayvan iyileştikten sonra, yük boşaltma prosedürü için düzeneğe yerleştirilir.Nihayetinde, yüklemesiz farelerin arka ekstremitelerinde kas atrofisini gösteren hem vücut hem de kas kütlesi ölçümleri aracılığıyla sonuçlar elde edilebilir. Bu tekniğin, Maori Holton bantlama tekniği gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, kuyruk derisinin her zaman görünür olmasıdır. Fareler askı aparatından çıkamazlar veya halkayla oynayamazlar; ayrıca daha hızlı iyileşirler ve stabil bir vücut ağırlığını korurlar.Bu yöntem; uzun süreli fiziksel hareketsizlik, yatak istirahati, ekstremite mobilizasyonu, mikroçekim, nöromüsküler hastalıklar ve yaşlanma sonrası iskelet kası atrofisini ve kemik kaybını önlemenin yolları gibi, kas-iskelet fizyolojisi alanlarının yanı sıra yerçekimsel ve uzay biyolojisindeki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu fikri ilk olarak Maury Holden kuyruk bantlama tekniğiyle ilgili komplikasyonlar yaşadığımızda geliştirdik. Farelerin arka ekstremite düzeneğinden kaçması nedeniyle sürekli olarak hayvan ve deneysel veri kaybı yaşıyorduk; bu teknikle bunu kanıtlıyoruz.Bugün yanımızda laboratuvarımdan kıdemli araştırma görevlisi Andre Ferrara var. Andre'ye laboratuvarda doktora öğrencisi olan Jacqueline Chrissy ve yine laboratuvarda lisans öğrencisi olan Andrew Dunn eşlik ediyor. Cerrahi alanı sterilize ederek başlayın, yetişkin bir fare olan Ty'yi izofluran ile anesteziye alın, ardından farenin ağırlığını kaydedin ve fareyi bir ısıtma pedinin üzerine yerleştirin. Kuyruğu, klorheksidin çözeltisi ile ovarak cerrahi işleme hazırlayın.Kuyruk tabanındaki vücut kıllarının bittiği yerden saymaya başlayarak, kuyruktaki iki kemikli çıkıntı arasındaki beşinci, altıncı veya yedinci intervertebral boşluğu belirleyin. İki vertebra arasında intervertebral boşluğa bir ön delik açmak için bir hemostat ve 20 5G iğne kullanın. İğneyi çıkarın ve çelik bir sütür yerleştirin.Delikten geçecek şekilde 10 santimetre uzunluğunda kesin. Süturun beş santimetresi kuyruğun her iki yanından dışarı çıkmalıdır. Başparmağınızın ucunu kuyruğun üzerine yerleştirin ve boşta kalan elinizi kullanarak çelik süturu başparmağınızın etrafına sarın.Uçları büyük bir halka oluşturacak şekilde döndürün. Sarılmış veya dairesel kısmın uzunluğu artı veya eksi üç milimetre olmalıdır. Sütürün bir şeridini hemostat ile sıkıştırın ve onu daha küçük bir halka şeklinde bükün; bu halkanın ucu, orijinal büyük halkanın döndürüldüğü noktaya mümkün olduğunca yakın şekilde tutturulmalıdır.Fazla teli kesin ve bükülmüş teli geriye doğru kıvırın. Fazla kanamayı gümüş nitrat çubuklarıyla durdurun. Hayvanın cerrahi işlem sonrası arka ekstremite boşaltma (hind limb unloading) veya hu işleminden önce beş ila yedi gün boyunca iyileşmesine izin verin.Kuyruk halkalarının birbirine dolanmasını önlemek için tekli bir düzenek oluşturun. Kafesin üst kısmına bir inç genişliğinde ve üç sekizde bir kalınlığında kaplamalı kanallı çelik bar yerleştirin ve bantla sabitleyin. Bir pul ve kelebek somun daha ekleyin, ancak daha sonra ayarlama yapabilmek için bunları tamamen sıkmayın.Bobinin yerinden çıkmasını önlemek için makine vidasını bobinin merkez deliğinden geçirin. Makine vidasının ucuna bir naylon kontra somun vidalayın. Bobin serbestçe dönebilmelidir.Bir balıkçılık fırdöndüsünün klipsini bobinin alt kısmından geçirin. Bir ataçtan S şeklinde bir kanca oluşturmak için kargaburun kullanın. S şeklindeki kancanın bir ucunu balıkçılık fırdöndüsünün deliğinden geçirin ve kargaburun ile sıkıştırarak kapatın.U şeklinde bir teli, kafesin iç kısmında makine vidasına paralel olarak yerleştirin ve uçlarını kenardan dışarıya doğru bükün. Tam dolu bir su şişesini desteklemek için, musluğu aşağı bakan ancak tabana değmeyen bir su şişesini U şeklindeki telin içine yerleştirin. Su şişesini koli bandı ile kafese sabitleyin.Arka ekstremite yüklemesini kaldırma prosedüründen önce, peletleri ezmeden birkaç parça yiyeceği tutacak kadar gerginlik bırakacak şekilde iki inçlik bir klasör klipsini bükerek açın. Karşılaştırmalarda kullanmak üzere farenin ağırlığını kaydedin. Daha sonra, S şeklindeki kancanın açık ucunu kuyruktan çıkıntı yapan daha küçük halkadan geçirin.Makine vidasındaki alt kelebek somunu sıkarak veya gevşeterek farenin yüksekliğini ayarlayın. Alt ekstremiteler ağırlık taşımamalıdır. Optimal yükseklik sağlandığında üst kelebek somununu sıkın, su şişesini yeniden konumlandırın ve farenin arka üyeleriyle musluğun üzerine çıkamaması için yeni şekillendirilmiş bir tel yerleştirin.Çalışma süresince gıda tüketimini ölçmek için, peletleri bağlayıcı klembin içine yerleştirmeden önce tartın. Günde yaklaşık beş ila altı gram yem tüketimine olanak sağlamak için yaklaşık sekiz ila 10 gram gıda sağlayın. Fare başına, gıda içeren bağlayıcı klembi, farenin üzerine tırmanamayacağı şekilde kafesin altına yerleştirin ve koli bandı ile sabitleyin.İki inç boyutunda ikişer adet Gore parçası gevşekçe kullanın. Kuyruk kısmını balık fırdövene sarın. Gore parçalarını kuyruğa sabitlemek için kuyruktan küçük bir parçayı Gore'lerin etrafına sarın.Bu adım, kuyruğun aşağı doğru sarkmasını önlemek için önemlidir; aksi takdirde kan uç kısımda toplanır ve kuyruk nekrotik hale gelir. Aynı prosedürü kafesin diğer tarafındaki ek bir hayvan için tekrarlayın. Kafes başına iki hayvan barındırırken, onları neredeyse birbirlerine değecek şekilde yerleştirin.Kafesin ortasına. Farelerin bir tümsek oluşturabileceği kadar çok olmamasına dikkat ederek kafese az miktarda mısır koçanı altlığı ekliyorum. Arka ekstremite boşaltma prosedürünün ardından, hayvanı aparattan çıkarın ve kuyruk halkasını çıkarın.Bir tel kesici kullanarak vücut ağırlığını kaydedin ve hayvanın toparlanması için onu kendi kafesine geri koyun. Bir toparlanma süresinden sonra, hayvanlar tekrar bekletilir ve soleus kası ile adrenal kütleler ölçülür. Kuyruk ameliyatı öncesindeki vücut ağırlıkları, ameliyattan beş gün sonraki ve hu öncesindeki ağırlıklardan anlamlı düzeyde farklı değildi.14 ve 28 günlük arka ekstremite askılaması, vücut kütlesinde küçük ancak anlamlı olmayan bir kayba yol açmış olsa da, fareler üç günlük iyileşme süresinin ardından HU öncesi vücut ağırlıklarına tamamen geri dönmüşlerdir. Ambulatuvar kontrol fareleri ve HU farelerinin gıda tüketimi burada gösterilmektedir.HU farelerinde 28 gün boyunca ortalama günlük gıda alımı kontrollere kıyasla farklılık göstermemiştir. 14 ve 28 günlük HU sonrası belirgin soleus kası atrofisi gözlemlenmiş olup, bu durum üç günlük iyileşme süresinden sonra etkili bir prosedüre işaret etmektedir. Soleus kütlesi, her iki HU grubundan da anlamlı derecede daha yüksek, ancak ambulator kontrol hayvanlarından hala anlamlı derecede daha düşük bulunmuştur.Hayvan stresinin bir göstergesini sağlamak için hem sol hem de sağ adrenal bezler çıkarıldı ve tartıldı. Burada görüldüğü üzere, kontrol ve HU fareleri arasındaki ortalama ağırlıklar karşılaştırılabilir düzeydeydi. Uzmanlaşıldığında, terzi cerrahisi fare başına beş ila 10 dakika içinde tamamlanabilir ve bu prosedürün ardından kafes kurulumu 15 dakika içinde bitirilebilir. Kas ve kemik sistemlerinin bu uzun süreli hareketsizlik dönemlerinden nasıl kurtulabileceği ve nasıl tepki verebileceği gibi ek soruları yanıtlamak için fareler, Hein, ekstremite yeniden yüklemesi ve disuse atrofisinden iyileşme gibi diğer yöntemler uygulanabilir.Bu videoyu izledikten sonra, farelerde arka ekstremite boşaltma işleminin nasıl gerçekleştirileceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmuş olmalısınız. Bu teknik; kardiyovasküler, kas-iskelet ve interment gibi birden fazla doku ve sistemin yükleme ve yeniden yükleme koşulları altında ve nakavt (knockout) veya nakin (knockin) gibi çeşitli fare modelleri kullanılarak incelenmesine olanak tanır.

an-alternant-method-to-traditional-nasa-hindlimb-unloading-model

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Lazer Doppler perfüzyon sintigrafisi ile iskemi onayı ile tek taraflı hindlimb iskemi indüksiyonu için cerrahi işlem olduğunu göstermiştir.

Murin Model Hindlimb İskemi

Tibial sinir kesisi modeli iskelet kas atrofi bir, iyi tolere doğrulanmış ve tekrarlanabilir bir model. Model cerrahi protokol C57Black6 farelerde açıklanan ve gösterilmiştir.

Tibial Sinir transeksiyonu - Farelerde denervasyon bağlı İskelet Kas Atrofi için bir Standart Model

MicroRNA'lar beyinde çok önemli roller oynar ve nöro-dejenerasyonu modellemek için potansiyel hedeflerdir. Bununla birlikte, miRNA'nın kısa uzunluğu ve beyin dokusunun erişilememesi nedeniyle miRNA seviyelerini bozmak zordur. Bu video, farelerde bir nöropeptit kullanarak antagomir tasarımı ve beyne özgü uygulama için bir yöntem sunmaktadır.

MiRNA Beyin Özgül demonte için Stereotaktik Injection Basit Alternatif

Süper mikrovasküler anastomoz olmayan bir dikiş manşet tekniği uygulayarak fare ortotopik arka uzuv nakli için bu yeni model, vaskülarize kompozit doku yamasında (VCA) ile ilgili in vivo mekanik immünolojik araştırmalar için güçlü bir araç sağlar.

Fare Ortotopik Hind Ekstremite nakli

Farede arka bacak iskemisinin cerrahi indüksiyonu, anjiyogenezi incelemek için yararlıdır, ancak bu, belirgin iskemiye bağlı doku nekrozu gösteren bazı akraba fare suşlarında tehlikeye girer. Kademeli arteriyel oklüzyonun indüksiyonu yoluyla bu sorunu aşmak için ameroid büzücüler kullanarak subakut ekstremite iskemisini indüklemek için yöntemler açıklanmaktadır.

Akut ve Subakut Fare Arka ayağın İskemi Yöntemleri

Yenilikçi bir yere tabanlı analog modeli kullanarak, biz (0 g) bir gezi ve bir konaklama Mars (0.38 g) de, fareler gibi bir boşluk göreve simüle etmek edebiliyoruz. Bu modeli görevi iki hipo-çekim aşaması sırasında meydana gelen fizyolojik değişiklikler boyuna bir değerlendirmesine olanak sağlar.

Hindlimb boşaltma ve kısmi ağırlık taşıyan fareler Mars uzay görevi taklit

Bu hayvan modeli, araştırmacıların farelerin arka eklerinde en az 8 hafta süren istatistiksel olarak anlamlı sekonder lenfödemi indüklemelerini sağlar. Model lenfödem patofizyolojisi çalışma ve yeni tedavi seçenekleri araştırmak için kullanılabilir.

Farelerin Hindlimb Sekonder Lenfödem Indükleme için Gözden Geçirilmiş Bir Yöntem

Bu protokol, immünoloji ve fonksiyonel iyileşme nin eşzamanlı çalışmasına yönelik sağlam, tekrarlanabilir vasküler kompozit allotransplant (VCA) modelini sunmaktadır. El dikilmiş vasküler anastomozlar ve nöral coaptation ile sağ orta uyluk arka ekstremite ortopik nakli titiz tekniği yatırım zaman fonksiyonel kurtarma çalışma yeteneği verir.

Sonraki Adım Taking: Bir Nöral Coaptation Ortotopic Hind Limb Transplant Modeli Sıçan Fonksiyonel Kurtarma Maksimize etmek

Bu makale, küçük bir kesi ile farelerde akut iskemi kurmak için etkili bir cerrahi yaklaşım göstermektedir. Bu yaklaşım, laboratuvar yükseltmesi yapılmadan çoğu araştırma grubu tarafından uygulanabilir.

ApoE'de Hind Limb iskemisinin Modifiye Cerrahi Modeli-/- Minyatür Kesi Kullanan Fareler

Minimal invaziv teknikler ve basit bir laboratuvar cihazı, deney hayvanlarına operatif hasarı azaltarak ve anatomik morfoloji bakımına izin vererek omurilik yaralanması modelinin tekrarlanabilirliğini arttırır. Yöntem değerlidir, çünkü güvenilir sonuçlar ve tekrarlanabilir prosedür, hastalık onarım mekanizmalarının araştırılmasını kolaylaştırır.

Minimal İnvaziv Bir Tekniğe Dayalı Bir Fare Kontüzyonu Omurilik Yaralanması Modelinin Oluşturulması

Bu murin modeli, tipik septik hastanın yatalak özelliğini özetlemek için septik bir hakareti arka bacak kaslarının kullanılmaması ile birleştirir. Model, sepsiste kas disfonksiyonunu incelemek için önceki modellerden önemli bir ayrılmayı temsil eder ve bu durumu tedavi etmek için terapötik stratejileri ele almak için tekrarlanabilir bir yaklaşımdır.

Farelerde Kullanılmayan Sepsis ile İndüklenen Miyopatinin Preklinik Modeli

Öğrenin farelerde arka bacak boşaltma için basit bir kuyruk halkası yöntemi. Bu teknik, stresi azaltarak kas atrofisi oluşturur ve vücut ağırlığını korur. Kas-iskelet fizyolojisi ve uzay biyolojisi araştırmaları için güvenilir bir alternatif sunar.

Fare Geleneksel NASA Hindlimb Boşaltma Model bir Alternant Yöntemi

Daha fazla video keşfet