Name: 3D Nöral Kök Hücre Kültürü yerelleştirme Protein: Hybrid Görselleştirme Metodolojisi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-12-19T18:00:00.000+00:00
Duration: 21 min 47 s
Description: Öğrenin, 3D nöral kök hücre kültüründe protein yerelleştirmesini hibrit görselleştirme ile nasıl haritalandıracağınızı. Bu yöntem, hipokampal nörosferlerdeki protein işlevlerini anlamanıza yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Evan Dysart ve Marc Léonard video prodüksiyon ve düzenleme, veri toplama konusunda yardım için Matt Cooke uzman teknik yardım için teşekkür eder, ve uzman yayın yardım için Sarah Gelbard. Kanada Sağlık Araştırma Enstitüsü (CIHR, MOP 62.626) SALB, Sağlık Araştırma programı hibe SALB ve SF Stratejik Eğitim Girişimi (TGF Nörodejeneratif Lipidomics CIHR Eğitim Programı, 9121) ve altyapı işletme hibeleri tarafından finanse edildi Kanada Vakfı Yenilik ve Ontario Yenilik Güven SF destek. SI Parkinson Araştırma Konsorsiyumu katkıları ile bir Ontario Bilim ve Teknoloji Yüksek Lisans Bursu aldı. NV Yaşlanma Enstitüsü ve sonrası profesyonel dostluk Nörodejeneratif Lipidomics CIHR Eğitim Programı alır. Biz minnetle AutoDesk Research tarafından sağlanan eğitim, yazılım ve teknik destek kabul etmiş sayılırsınız.

<ol><li>Kempermann, G., Jessberger, S., Steiner, B., Kronenberg, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Milestones+of+neuronal+development+in+the+adult+hippocampus%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Milestones of neuronal development in the adult hippocampus.</a> Trends Neurosci. 27, 447-452 (2004).</li>
<li>Campos, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurospheres%3A+insights+into+neural+stem+cell+biology%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Res%22%5BJournal%5D)">Neurospheres: insights into neural stem cell biology.</a> J Neurosci Res. 78, 761-769 (2004).</li>
<li>Imbeault, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+extracellular+matrix+controls+gap+junction+protein+expression+and+function+in+postnatal+hippocampal+neural+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The extracellular matrix controls gap junction protein expression and function in postnatal hippocampal neural progenitor cells.</a> BMC Neurosci. 10, 13-13 (2009).</li>
</ol>

Tüm hayvanlar üzerinde yapılan deneyler, Ottawa Hayvan Bakım Komitesi Üniversitesi ve Kanada Hayvan Bakım Konseyi tarafından belirlenen kurallara ve yönetmeliklere uygun olarak yapıldı.

Bu protokol, kültür ve seri cryosection post-natal hipokampal NPC&#39;ler, bir yordam açıklanır İmmuno protein ekspresyonu yerelleştirmeniz ve nihayet tüm 3D neurosphere içinde immünopozitif hücreleri topografik konumu yeniden ve analiz. Hücre biyolojisi kültürü ve işleme teknikleri, mikroskopi görüntüleme (openlabın, Doğaçlama ve diğer görüntü analiz yazılımları) birleştirerek, grafik düzenleme yazılımı kapasiteleri (Adobe Photoshop), 3D animasyon ve kompozisyon yazılım kapasiteleri (Autodesk Maya), biz yeniden bir metodoloji mevcut sadık bir neurosphere kültür boyunca hücresel konum ve protein ifade yeniden inşası için izin seri 2D görüntüleri 3D kültürlerin tüm hücresel bileşimi. Bu protokol, kayıt ve kalın seri bölümleri ile epifluorescent ince seri bölümleri veya konfokal Z-yığınlarının rekonstrüksiyonu eşit etkinliği ile kombine edilebilir. Çünkü doğum sonrası beyindeki nöron ve gliogenesis boyunca gözlenen birçok aşamadan neurosphere kültür özetlediği tek NPC&#39;ler klonal genişleme, 3D yapısının etkisi aynı deneysel ortam 1 ​​maruz döl önemli bir NPC kaderini belirleyici temsil eder. Seri neurosphere bölümleri, merkez ve çevre soy ve protein ekspresyonu Farklılıklar NPC biyoloji 2 düzenleyen hücre konumu, mekanik stres ve kesme kuvveti de dahil olmak üzere birden çok fiziksel faktörler önemli rol oynamaktadır. Ayrıca, Konneksin protein ekspresyonu, burada analiz NPC&#39;ler 3D süspansiyon neurospheres veya hücreleri, plastik ve yüzey veya 3D ücretsiz kültür olup olmadığını değişmiş fonksiyonel Konneksin aracılı iletişim laminin substrat kaplama olarak kültüre bağlı olarak değişiklik gösterilmiştir kayan kültürler 3. NPC kaderi hücresel pozisyon etkisi belirsizliğini korumaktadır. Bu teknik, soy ve sinyalizasyon proteinler antijenik değerlendirme 3D mimarisi bozulması hücre permeabilization ve tüm hücrelerin antikor erişimi sağlamak için ihtiyaç duyduğu verilen NPC biyoloji 3D kültür içinde mekansal konumu etkisini analiz etmek zordur. Burada, biz melez bir görselleştirme metodoloji bazı proteinler, benzersiz 3D kültür pozisyonel lokalizasyonu sergi olup olmadığını belirleyen bir vasıta olduğunu, belki de en önemlisi, bölgesel lokalizasyon açısından neurosphere içinde protein fonksiyonu ve düzenleme anlaması ve test etmek için kullanılır, ve olabilir 3D topografya ve hücresel konumlandırma 3D kültür NPC kaderi üzerindeki etkilerini incelemek için gerekli olan konumsal veri sağlar.

* Protokol listelenen tüm diğer standart kimyasal reaktifler Sigma-Aldrich. Diğer tüm standart doku kültürü reaktifler Invitrogen.

3d nöral kök hücre kültürü yerelleştirme protein: hybrid görselleştirme metodolojisi

Localizing Protein in 3D Neural Stem Cell Culture: a Hybrid Visualization Methodology

Nöral kök ve progenitör hücre etkileyen 3 boyutlu (3D) topografyanın önemi (NPC) fenotipi yaygın henüz çalışmaya zorlu kabul edilmektedir. Embriyonik veya doğum sonrası beyin ne zaman ayrışmış, tek NPC&#39;ler neurospheres formu askıya çoğalacak. Bu kültürlerin içinde kızı hücreleri aynı ekstrasellüler ortam maruz olmasına rağmen kendiliğinden genişleme içerisinde farklı gelişim soyları (nöronlar, oligodendrosit ve astrositler) benimsemek. Bu ilerlemesini özetlediği aşamaları çoğu doğum sonrası beyindeki nöron ve gliogenesis boyunca gözlenen ve kontrollü bir ortam içinde temel NPC biyoloji okumak için sık sık kullanılır. NPC kaderi bu kültürlerin içinde 3D topografya ve hücresel konumlandırma tam etkisini değerlendiren Ancak, zordur. Hedef proteinler lokalize ve immünhistokimya ile NPC soy belirlemek için, serbest neurospheres bir substrat üzerindeki kaplama veya seri kesitli olmalıdır. Bu işleme eşdeğer hücre permeabilization ve küreden antikor erişim sağlamak için gereklidir. Sonuç olarak, cryosections veya 3D Z-yığınlarının konfokal rekonstrüksiyonlar epifluorescent 2D görüntüleri sadece mekansal ayrık fiziksel veya dijital 3D dilimleri içinde hücre konumu hakkında bilgi verebilir ve bozulmamış bir alanda hücresel konum görselleştirmek yok. Burada neurosphere kültür topografya yinelemek ve tüm kültür boyunca protein ekspresyonu mekansal analizi izin verecek, biz bir protokol izolasyonu için, genişleme ve hedef proteinlerin epifluorescent veya konfokal İmmuno için uygun doğum sonrası hipokampal neurospheres seri kesit sunuyoruz. Connexin29 (Cx29) bir örnek olarak analiz edilir. Sonra, grafik düzenleme ve 3D modelleme bir melez kullanarak biyolojik detay titizlikle korumak için uygulanan yazılımları, bu görüntülerin 3 boyutlu yapısal konumlandırma yeniden birleştirmek ve dijital olarak tam neurosphere içinde etiketli hücreler haritası nasıl açıklar. Bu metodoloji, tüm 3D kültür topoğrafya boyunca hedef proteinleri ve hücreleri hücresel pozisyon görselleştirme ve analiz sağlar ve daha ayrıntılı bir analizi, in vitro nöron ve gliogenesis boyunca hücreleri arasındaki mekansal ilişkileri kolaylaştıracaktır. Imbeault ve Valenzuela Her ikisi de eşit derecede katkıda bulunan ve ilk yazarın ortak düşünülmelidir.

Burada, üç boyutlu (3D) kültür üretmek genişletmek ve immunolabel postnatal hipokampal nöral progenitör hücrelerin (NPC) nasıl açıklar. Sonra, hibrid görselleştirme teknolojiler kullanılarak, dijital görüntüler immunolabelled cryosections tüm 3D neurosphere boyunca immünopozitif hücreler mekansal konumunu yeniden ve harita için nasıl kullanılabileceğini göstermektedir.

3D Nöral Kök Hücre Kültürü yerelleştirme Protein: Hybrid Görselleştirme Metodolojisi

3 boyutlu (3B) topografyanın nöral kök ve progenitör hücre (NPC) fenotipini etkilemedeki önemi yaygın olarak kabul edilmekle birlikte, ...

localizing-protein-3d-neural-stem-cell-culture-hybrid-visualization

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Burada kendi kendine montaj 3-boyutlu iskele kültür insan nöral progenitör hücrelerin kullanımını tanımlamak. Biz flow sitometri ile analiz edilecek daha sonra örneğin iskeleleri hücreleri serbest bırakmak için bir protokol mevcut. Bu protokol detaylı mekanistik çalışmalar gerçekleştirmek için diğer hücre türlerine adapte olabilir.

3 boyutlu montaj Self-Peptid Hidrojel İnsan Sinir Progenitör Hücreler Yetiştiriciliği

Bu video, üç boyutlu bir yapı iskelesi içinde insan nöral kök hücrelerinin gelişimini ve farklılaşmasını göstermektedir. İskele üzerindeki bir laminin kaplama, hücre bağlanmasını teşvik ederken, büyüme faktörü içermeyen bir nöral ortam, süreçlerini gözenekli bir mimari içinde birden çok yöne uzatan ve üç boyutlu bir kültür oluşturan nöral progenitör hücrelere hücre farklılaşmasını...

İnsan Nöronal Kök Hücrelerinin Gözenekli İskele Kullanılarak 3D Kültüre Ayırt Edilmesi

Source: Gómez-Villafuertes, R., et. al., canlı görüntüleme ve ardından hücre biyolojisini ve çoklu nöral popülasyonların soy ilerlemesini izlemek için tek hücre izleme. J. Vis. Exp. (2017) Video, hücresel çalışmayı incelemek için yetişkin nöral kök hücreleri gerçek zamanlı olarak hazırlama, görüntüleme ve izleme sürecini göstermektedir bölme ve farklılaşma dahil olmak üzere davranışlar.

 Yetişkin Nöral Kök Hücrelerde Nöral Kökeni İzlemek için Canlı Görüntüleme ve Tek Hücreli İzleme

Yetişkin beyin hasat nöral kök hücreler sinir sistemi gelişiminin temel araştırma rejeneratif tıpta potansiyel klinik uygulamaları keşfetmek için çeşitli uygulamalar kullanılmaktadır artmaktadır. Bu deneysel sonuçların ses için kritik bu hücreleri büyümek için kullanılan yalıtım ve kültür koşullarında titiz kontrolü yapar.

Yetişkin Kemirgen Beyin konvansiyonel ve konvansiyonel olmayan Bölgelerinden Nöral Kök Hücreler Büyüyen

Farklılaşmış insan nöral kök hücreleri (hNSC'ler) üzerindeki miRNA'lardaki değişiklikleri karakterize etmek amacıyla, üç boyutlu bir sistemde hNSC farklılaşmasını, miRNA PCR dizisi ile mikroRNA ekspresyonundaki değişikliklerin değerlendirilmesini ve miRNA hedef tahmini için hesaplamalı analizi ve ikili lusiferaz testi ile doğrulanmasını açıklıyoruz.

Üç Boyutlu Kültürleri, mıkroRNA Analizi ve Putatif Hedef Genler üzerinde bir İnsan Sinir Kök Hücre Hattı Farklılaşma

Piramidal nöronlar dendritik dikenleri memeli beyin korteksinde en uyarıcı sinaps sitelerdir. Bu yöntem, uyarılmış pluripotent kök hücrelerinden elde edilen insan kortikal piramidal glutamaterjik nöronları omurga morfolojileri 3D kantitatif analiz açıklanır.

İnsan uyarılmış pluripotent kök hücrelerin türetilmiş Piramidal Nöronlar gelen Dendritik Spine Üç boyutlu Niceleme

Canlı görüntüleme gerçek zamanlı olarak hücresel davranışlarını incelemek için güçlü bir araçtır. Burada, hızlandırılmış video-ayrıntılı bir inceleme, birincil sinir kök hücreleri farklı nöronlar ve glia lineage ilerleme sırasında yürürlüğe giren aşamaları sağlayan mikroskobu Primer serebral korteks hücre için bir protokol açıklayın.

Primer serebral korteks hücre bir 2D kültür sistemi kullanarak görüntüleme yaşamak

Açıklanan boru hattı, gigabaytlardan daha büyük elektron mikroskobu veri kümelerinin tüm hücre morfolojilerini ayıklamak için segmentasyonu için tasarlanmıştır. Hücreler 3B olarak yeniden oluşturulduktan sonra, bireysel ihtiyaçlar etrafında tasarlanmış özelleştirilmiş yazılım, görüntüleme tıkanıklığının üstesinden gelmek için sanal gerçekliği kullanarak doğrudan 3D olarak nitel ve nicel bir analiz yapmak için kullanılabilir.

Glial ve Nöronal Hücrelerin 3D Rekonstrüksiyonu ve Sanal Gerçeklik Analizi Için Bir Yöntem

Burada sunulan yöntem, memeliyle ilgili kültürlerin içinde uzamsal organizasyon ortaya çıkarmak için nicel görüntüleme ile birlikte micropatterning kullanır. Teknik standart bir hücre biyoloji laboratuarında kurmak kolaydır ve in vitro desen çalışması için bir uysal sistemi sunar.

Meme hücrelerinin Mikrodesenler ve nicel görüntüleme kullanarak acil uzamsal organizasyonu haritalama

Burada, desenli nöronlar üzerinde glioblastoma (GBM) göçünü analiz etmek için kullanımı kolay bir ortak kültür tahlili sunuyoruz. Nöronlar üzerinde GBM hücre göçünün kolay ölçülmesi için FiJi yazılımında bir makro geliştirdik ve nöronların GBM hücre invaziv kapasitesini değiştirdiğini gözlemledik.

Göç ve Hücresel Etkileşimleri İncelemek İçin Desenli Nöronlarda Glioblastoma Kök Benzeri Hücrelerin Ortak Kültürü

2D ve 3D insan kaynaklı pluripotent kök hücre (hIPSC) tabanlı neokortik gelişim modellerinin üretimi ve karakterizasyonu için ayrıntılı protokollerin yanı sıra primer selyyum (PC) biyogenez ve fonksiyonunun nitel ve nicel analizini sağlayan tamamlayıcı metodolojiler sunuyoruz.

Neokortik Gelişim Sırasında Primer Seyum Tutulumını Diseksiyona Yönelik 2D ve 3D İnsan Kaynaklı Pluripotent Kök Hücre Bazlı Modeller

Öğrenin, 3D nöral kök hücre kültüründe protein yerelleştirmesini hibrit görselleştirme ile nasıl haritalandıracağınızı. Bu yöntem, hipokampal nörosferlerdeki protein işlevlerini anlamanıza yardımcı olur.

3D Nöral Kök Hücre Kültürü yerelleştirme Protein: Hybrid Görselleştirme Metodolojisi

Daha fazla video keşfet