Name: Akustik Membran mikropartikül Teknoloji Geliştirme Özel Çin Hamsteri Yumurtalık-host Hücre Proteini Tahliller (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-02-03T18:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 13 s
Description: Öğrenin, ViBE platformu kullanarak Çin hamsteri yumurtalık hücre proteinleri için özelleştirilmiş immünoassay geliştirme yöntemini. Bu otomatik sistem, hassas ve tekrarlanabilir sonuçlar sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

1. Mikropartikül Hazırlık <ol><li> Biotin NHS Kimya kullanarak Etiket Antikorlar </li><li> Biyotinilasyon Derece belirlenmesi </li><li> Biotinlenmiş Antikor Konjugat Streptavidin Boncuk <ol><li> 1-2 dakika karıştırın orijinal flakon boncuk süspanse edin </li><li> Bir mikrosantrifüj tüp içine boncuk istenen birimde kısım </li><li> Boncuk PBST ile 3 kere yıkayın: <ol><li> 2 dakika boyunca boncuk mıknatıs içeren tüp Yeri </li><li> Mıknatıs tüp ile aspirasyon ile süpernatantı çıkarın. Boncuklar bozmak için dikkatli olun </li><li> Mıknatıs tüp çıkarın ve 1 ml PBST ekleyin </li><li> Boncuklar tekrar süspansiyon için 20 saniye boyunca Vortex </li><li> Boncuk kapağı kaldırmak için 5 saniye boyunca santrifüjleyin </li><li> Iki kez daha 2.3.1-2.3.5 tekrarlayın. </li></ol></li><li> Mıknatıs üçüncü yıkama yeri tüp sonra PBST aspirat </li><li> Boncuk biotinlenmiş antikor ekleyin ve tekrar süspansiyon </li><li> Gerekirse PBS ile 300 mcL biotinlenmiş antikor ses getirmek. Antikor hacmi ise 300 mcL daha herhangi bir PBS katmayan </li><li> Vorteks çalkalayıcı veya tüp rotator, RT 30 dakika boncuk / antikor süspansiyon inkübe </li><li> 3. adımda PBST ile 3 kere yıkayın. </li><li> Biotinlenmiş BSA ile boncuk Blok <ol><li> 300 mcL üçüncü yıkama 10 mikrogram / mg biotinlenmiş BSA ekledikten sonra, PBS gerekirse ile ses seviyesini ayarlamak ve ajitasyon ile 30 dakika inkübe </li></ol></li><li> 3. adımda PBST ile 3 kere yıkayın </li><li> PBS/0.05% BSA 100 mcL boncuk süspanse edin. Sodyum azid, uzun süreli depolama için eklenebilir </li></ol></li><li> Standart NHS Floresein protokolleri kullanarak, dedektör antikor fluoresceinate </li><li> Fluorescination, Derece belirleyin </li></ol> 2. OP - Geliştirme <ol><li> Çalışma çözümler hazırlayın: <ol><li> Floresein etiketli Antikor (Fl-Ab): En CHO-HCP testlerin son bir 400 ng / ml konsantrasyonda Fl-Ab kullanın. Fl-Ab nihai tahlil hacminin ¼ 'ü olarak eklenir, bu nedenle çalışma çözeltisi konsantrasyonu 1.6 mg / ml. Flab stok BioScale Boncuk / flab Dilüent ile seyreltilmesi ile bu çözüm hazırlayın. </li><li> Boncuk: En CHO-HCP Testler 2x10 5 boncuk / mL nihai konsantrasyonda boncuk kullanmayın. Boncuk reaktif son tahlil hacminin ¼ 'ünü oluşturmaktadır, bu nedenle çalışma çözeltisi konsantrasyonu 5 boncuk / ml 8x10 konumundadır . Boncuk stok BioScale Boncuk / flab Dilüent ile seyreltilmesi ile bu çözüm hazırlayın. Vorteks, tüm boncuk yapmak için boncuk hisse senedi, bir kısım çıkarmadan önce süspansiyon vardır. </li><li> Tampon Koşu: tampon kompozisyon ancak birkaç CHO HCP deneyleri 10 mM HEPES tamponu,% 1 Tween, pH 7.5 kullanılarak geliştirilmiş olan testin geliştirilmesi için kullanılabilir antikorlar için optimize edilmesi gerekebilir. BioScale için bir katkı maddesi kullanmadan önce% 1 'lik bir konsantrasyon tampona eklenen çalışan tamponu (geliştirme kiti ile birlikte) geliştirmiştir. </li></ol></li><li> BioScale Sample Diluent kalibratörler ve örnekler sulandırınız. </li></ol> 3. ViBE Sistemi Kurma <ol><li> Üzerinde ViBE Workstation açın </li><li> Connect sistem kaynağı ve atık </li><li> Başbakan sistem </li><li> ViBE Kartuş Ekle </li><li> ROUTE tüpler </li><li> "Örnek Setup" etiketli sac doldurarak tahlil şablon hazırlayın. BioScale her ViBE İş İstasyonu tahlil için bir test şablonu vardır yeteneği sağlar. Bu kullanıcı, farklı deneyleri, deney tam bir kaydını tutmak için şablon "Notlar" sayfasında özel notlar düzenlemek ve kaydetmek için izin verir. </li><li> İlk tahlil şablonu kurdu: "Örnek Setup" sayfasında tayininde standartlarının konsantrasyon aralığı tablo (sol üst köşe) doldurarak başlayın. </li><li> Sonra, uzun örnekleri inkübe için ne ViBE İş İstasyonu talimat standartları (Basit Sütun Kurulum Oku, Bir Reaktif ekle ve İki Reaktif Ekle kurulumları) sağ tabloda ek bilgileri girin, ne kadar reaktif hacmi aktarılacak. Örnek birikimi gereken ne kadar uzun ve sensör klima ve probları ve kartuş dekontaminasyon gerekli olup olmadığını, vb. </li><li> Plaka düzeni doldurun. </li><li> Plakalar halinde numune / reaktifler yükleyin. ViBE reaktif plaka için gerekli hacim sağlayacaktır. Örnek hacmi değişir, ancak toplam 120 mcL tahlil hacminin yarısını iyi bir başlangıç ​​yeridir. </li><li> Plakası örtüleri uygulayın. Iş istasyonu güverte üzerine tabak yükleyin. </li><li> Testin başlangıç ​​sihirbazı çalıştırın, sihirbaz üzerinden gidin ve tahlil başlatmak. </li></ol> 4. Temsilcisi Sonuçlar <img src="/files/ftp_upload/2493/2493fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1: AMMP Sandviç İmmünoassay ViBE İş İstasyonu, bir AMMP test antijen konsantrasyonu ölçer. Sinyal boncuk-antijen-hapten antikor hapten / anti-hapten etkileşimi aracılığıyla sensör bağlanır ölçülür. Yenileme bağışıklık kompleksleri çıkarmadan, başlangıç ​​durumuna geri sensör getirir. <img src="/files/ftp_upload/2493/2493fig2.jpg" alt="Şekil 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2: CHO-OP AMMP Testi kalibrasyon eğrisi CHO OP AMMP Testi kalibrasyon eğrisi Şekil 2 yukarıdaki bir örnek. Bu örneklerin analizi de dahil olmak üzere, yüksek hassasiyet ve tekrarlanabilirlik ile reaktör arıtma akışı genelinde yapılabilir. <img src="/files/ftp_upload/2493/2493fig3.jpg" alt="Şekil 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 3"> Şekil 3: Protein AMMP Testi kalibrasyon eğrisi Şekil 3 VIBE Artık Protein A Testi Kiti ile yapılan bir Kalıntı Protein AMMP Testi için bir kalibrasyon eğrisi. Aynı kiti bir 30 dakikalık inkübasyon dönemi ile bir hızlı tahlil, için ya da genellikle eşdeğer ELISA Kullanıcı kullanıcıları daha iyi olan, her ikisi de hassas ya da doğruluk kaybı olmadan bir daha uzun kuluçka dönemi, daha hassas sonuçlar ve geniş dinamik aralık için kullanılan olabilir. ' eller <img src="/files/ftp_upload/2493/2493fig4.jpg" alt="Şekil 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 4"> Şekil 4: Ürün titresi AMMP Testi ViBE İş İstasyonu Ürün titresi tahlil, şekil 4'deki sonuçlar için de kullanılabilir. Diğer AMMP Tahliller farklı seslendirilen bu testte basit seyreltme veya boncuk daha örnek tedavi gerektirmeyen, ve kantitatif canlılığında geniş bir yelpazede üzerinde 10 milyondan fazla hücre içeren "spin" örnekleri onaylandı. <img src="/files/ftp_upload/2493/2493fig5.jpg" alt="Şekil 5" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 5"> Şekil 5: GST-Gadd34 biyomarker tahlil için AMMP Testi standart eğri Şekil 5 ViBE BioAnalyzer (Panel A) veya rekombinant GST-Gadd34 AlphaScreen Teknolojisi kullanılarak elde edilen sinyal standart bir eğri gösterilmiştir. ViBE platformu Sonuçlar aynı antikorları kullanarak daha duyarlı yaklaşık bir günlük. AMMP henüz az büyük parçacıkları hala çözüm faz yakalama ve algılama kompleks oluşum faydaları ölçümü yararlanır. <img src="/files/ftp_upload/2493/2493fig6.jpg" alt="Şekil 6" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 6"> Şekil 6: tümör örnek GST-Gadd34 AMMP Testi standart eğri Şekil 6, CWR22 xenografts Gadd34 indüksiyonu ViBE BioAnalyzer (Panel A) veya AlphaScreen (B Paneli) veya analiz gibi bir boronate proteazom inhibitörü varlığı ya da yokluğu test edildi. ViBE platformu AlphaScreen sinyali ise in vivo tümör xenografts artan protein mikrogram ile söndürülür hassas ve tekrarlanabilir sonuçlar elde etmek mümkün oldu. Bu örnek, son derece karmaşık örnekler AMMP teknolojinin gücünü gösterir. Yongaları yakın mıknatıs hassas algılama yongası ve yüksek verimlilik nedeniyle, az sayıda manyetik mikro, verimli ve tekrarlanabilir parçalanmış hücresel (lizis reaktifler de dahil olmak üzere) ve kan enkaz karmaşıklığı ortasında düşük bolluk hedef için scavenge.

Bu makalenin yazarları, bu yazıda kullanılan bazı araçlar ve reaktifler üretir Bioscale, Inc tarafından istihdam edilmektedir.

Yukarıdaki örnekler, karmaşık örneklerinde AMMP son derece duyarlı kantitatif sonuçlar göstermektedir. Bu performans, kolaylık ve kontrol sistemi içine reaktifler biçimlendirme ile teslim çeşitli uygulamalar için sağlıyor. Bu uygulamalar tümör Gadd34 gibi bir hedef için özel ya da konak hücre proteini tespit ve kantitatif arıtma akışı çapraz örneklerinde olduğu gibi hedeflerin bir spektrum için genel olabilir. Son derece esnek AMMP ile birlikte düşük yükü ViBE platformu kritik testleri sunmak için güçlü bir araç sağlar.

<table><tbody><tr><td>NHS-Kromojenik-biotin veya NHS-Kromojenik Biotin İşaretleme kiti</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>NHS-Kromojenik-biotin bir reaktif olarak satın alınırsa şu ek malzemeler gerekecektir</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dimetil sülfoksit (DMSO) veya dimetilformamid (DMF) gibi suyla karışabilen organik çözücü</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fosfat tamponlu salin (PBS) veya diğer amin içermeyen tamponlar (pH 7 &amp;#8211; 9)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tampon değişimi için tuz giderme kolonları veya diyaliz üniteleri</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Protein ve biotin konsantrasyonlarını ölçmek için 354 ve 280 nm &amp;#8211; dalga boylarında ölçüm yapabilen spektrofotometre</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Biyotinize antikor (2-5 biotin/Ab)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Streptavidin manyetik boncuklar</td><td><a href="http://www.bioscale.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> BioScale</a></td><td></td><td>(10 mg/mL) ~10&lt;sup&gt;8&lt;/sup&gt; boncuk/mg</td></tr><tr><td>Mikrosantrifüj tüpleri için mıknatıs</td><td>New England Biolabs</td><td>kat # S1510S</td><td></td></tr><tr><td>Bloklama için biyotinize BSA</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fosfat tamponlu salin (PBS)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>PBS %0,1 Tween 20</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vorteks</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Vorteks için mikrosantrifüj tutucu veya tüp rotatörü</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>İşaretlenecek antikor veya protein</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>NHS-Fluorescein veya NHS-Fluorescein İşaretleme kiti</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>NHS-Fluorescein bir reaktif olarak satın alınırsa şu ek malzemeler gerekecektir</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dimetil sülfoksit (DMSO) veya dimetilformamid (DMF) gibi suyla karışabilen organik çözücü</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>50 mM borat, pH 8,5 veya diğer amin içermeyen tamponlar (pH 7 &amp;#8211; 9)</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tampon değişimi için tuz giderme kolonları veya diyaliz üniteleri</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Protein ve fluorescein konsantrasyonlarının ölçümü için 493 ve 280 nm dalga boylarında ölçüm yapabilen bir spektrofotometre gereklidir.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Seyreltici</td><td><a href="http://www.bioscale.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> BioScale</a></td><td></td><td>boncukları ve FlAb'yi seyreltmek için</td></tr><tr><td>Numune Seyrelticisi</td><td><a href="http://www.bioscale.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> BioScale</a></td><td></td><td>numuneleri ve kalibratörleri seyreltmek için</td></tr><tr><td>Koşu Tamponu Katkısı</td><td><a href="http://www.bioscale.com" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> BioScale</a></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

akustik membran mikropartikül teknoloji geliştirme Özel Çin hamsteri yumurtalık-host hücre proteini tahliller

Developing Custom Chinese Hamster Ovary-host Cell Protein Assays using Acoustic Membrane Microparticle Technology

Özel testlerin benzersiz proteinler için genellikle zaman alıcı manuel algılama ve ELISA veya alternatif platformları üzerinde geliştirme karmaşıklığı nedeniyle Western blot gibi kantitatif teknikleri ile sınırlıdır. BioScale tescilli Akustik Membran mikropartikül (AMMP) teknolojisi daha iyi bir hassasiyet, tekrarlanabilirlik ve otomatik kullanım sağlayan, sandviç immunoassay kolay ViBE platform üzerinde kullanım için geliştirilmiş olmasını sağlar. Bir örnek olarak verilmiştir, bu protokol, özel bir Çin Hamsteri Yumurtalık-Host Hücre Proteini (CHO-OP) tahlil geliştirmek için prosedür özetlenmektedir. Burada özetlenen immun geniş bir yelpazede gelişmesi için genel ilkeler takip edilebilir. Hesaplamak için sensör yüzeye mikro bağlama kaynaklanan salınım frekans değişiklikleri ölçerek bir AMMP tahlil önlemleri antijen konsantrasyonu. Bu dört ana bileşenden oluşur: (1) Fonksiyonlu sekiz sensör çipi içeren bir kartuş, (2) antikor etiketli manyetik mikro Fonksiyonlu yonganın yüzey antijeni içeren örnekler (4) bağlanır (3) hapten etiketli antikor ilgi. BioScale Kullanıcı biyosensör, sekiz ayrı akışkan yolları ile bireysel membranlar içeren bir rezonans bir cihazdır. Membranlar kütlesi yüzeyde biriken ve bu frekans değişikliği eklendi kütle miktarını ölçmek için kullanılır yanıt salınım frekansını değiştirmek. Sensörü anti-hapten antikor ile işlevselleştirildiyse immunoassay geniş bir yelpazede kullanım kolaylaştırmak için. Testi spesifik antikorların tek bir antikor ve diğer biotin hapten etiketi kovalent konjugasyon ile modifiye edilmiştir. Biotin etiketi hapten etiketli antikor ile birlikte, bir sandviç analit yakalamak için kullanılan, çiftli manyetik boncuk streptavidin antikor bağlamak için kullanılır. Kompleks anti-hapten/hapten etkileşim yoluyla çip bağlanır. Her testin sonunda sensörleri 96-plaka sıralı sütun analizi sağlayan bir seyreltik asit ile temizlenir çalıştırın. Burada, biyoproses geliştirme için özel bir CHO-OP AMMP testi geliştirmek için yöntemi mevcut. AMMP testlerin geliştirilmesi veya AMMP testleri mevcut testlerin değiştirerek karmaşık örnekleri ve azaltılmış operatörü saati (tekrarlanabilirlik, hassasiyet) daha iyi performans sağlayabilir. Protokol, kalkınma için adımlar gösterir ve tartışma bölümüne temsilcisi sonuçlarının gözden geçirilmesi. BioScale tahlil optimizasyon ve özelleştirme parametreleri hakkında daha ayrıntılı bir açıklama için başvurun. Bu kit Artık Protein A, Ürün titre ve CHO-OP gibi genel biyoproses geliştirme testleri sunuyor.

ViBE karmaşık matrisler daha hassas, tekrarlanabilir, otomatik sonuçlar için platform üzerinde özel testlerinin geliştirilmesi açıklanmıştır. Evrensel kartuşu testleri özel testlerin kullanım için kolayca adapte edilmelidir sağlar. Bu çok yönlülük, roman deneyleri ya da bu video örneklediği mevcut manuel testleri otomatik sürümleri, hızlı geliştirme ve doğrulama sağlar.

Akustik Membran mikropartikül Teknoloji Geliştirme Özel Çin Hamsteri Yumurtalık-host Hücre Proteini Tahliller

Benzersiz proteinlere yönelik özel analizler, ... nedeniyle genellikle ELISA veya Western blot gibi zaman alan manuel saptama ve miktar belirleme teknikleriyle sınırlıdır.

Bu prosedürün genel amacı, sınırlı uygulama süresiyle tekrarlanabilir sonuçlar sağlayan, özelleştirilmiş ve sağlam bir immünassay oluşturmaktır. Bu, öncelikle uygun assay bileşenlerinin hazırlanarak gerçekleştirilir. Prosedürün ikinci adımı, assay parametrelerine dayanarak assay'in optimize edilmesidir.Prosedürün üçüncü adımı, numune ve reaktif plakalarının yüklenmesi ve analiz prosedürünün tanımlanmasıyla analizi Vibe platformu üzerinde kurmaktır. Vibe yazılımı ile prosedürün son adımı, başlangıç sihirbazı ile Vibe'ı başlatmaktır. Sonuç olarak, Vibe platformunun kullanımı sayesinde, özel antikorlarla, sınırlı manuel çalışma süresiyle, hassas ve tekrarlanabilir immünolojik analiz sonuçları elde edilebilir.Bu teknolojinin Eli'ninkiler gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, Vibe İş İstasyonunun standart protokollere uygun olarak başında durulmayan işlemler ve daha tekrarlanabilir veriler sunmasıdır. NHS Kromojenik, biotin Bio atin, biyotinize antikoru streptavidine ve manyetik boncuklara tutturmak için yakalama antikorunu kullanarak; öncelikle, streptavidin manyetik boncuk şişesini yeniden süspanse etmek için bir ila iki dakika boyunca vorteksleyin. İstenen hacimdeki boncukları bir santrifüj tüpüne pipetleyin ve manyetik bir ayırıcı yardımıyla süpernatantı uzaklaştırın. Yazılı protokole uygun olarak, boncukları geri kazanmak için manyetik ayırma yöntemini kullanarak boncukları üç kez PBST ile yıkayın.Son yıkamadan sonra PBST uzaklaştırıldığında, biotinize antikor solüsyonunu boncuklara ekleyin ve pipetleme yaparak boncukları yeniden süspande edin. Antikor hacminin en az 300 µL olduğundan emin olun. Eğer hacim daha düşükse, PBS ile ayarlayın.Süspansiyonu oda sıcaklığında, ajitasyon eşliğinde 30 dakika boyunca inkübe edin. Ardından boncukları daha önce yapıldığı gibi PBST ile yıkayın. Daha önce uygulanan prosedüre uygun olarak biotinillenmiş BSA ekleyin.Biyo-biotinize antikor yıkamaları yapıldıktan sonra, boncuklar uzun süreli saklama için 100 µL %0,05 BSA içeren PBS içinde yeniden süspanse edildiğinde, standart protokollere uygun olarak sodyum azid eklenebilir. Detektör antikoru florize etmek için NHS fluroresan kullanın. Çin hamster yumurtası konağı hücre proteini analiz geliştirme işlemine başlayın.İlk olarak, çalışma çözeltilerini hazırlayın. HAPTEN işaretli antikor veya HAB, bio scale bead HAB dilüenti ile seyreltilmiş 1,6 µg/mL konsantrasyonunda dört kat konsantrasyonlu bir çalışma çözeltisi olarak hazırlanır ve çözelti en az beş dakika boyunca döndürülür. Ardından, boncuk çözeltisini hazırlayın.Boncuk stok çözeltisini iyice vorteksleyin. Tüm boncukların süspansiyonda olduğundan emin olmak için, BioScale Bead HAB dilüent ile seyreltilmiş, mililitrede sekiz çarpı 10 üzeri 5 boncuk içeren dört katlık bir çalışma karışımı hazırlamak üzere bir alikot alın. Çözeltiyi en az beş dakika boyunca döndürün.Ardından yürütme tamponunu hazırlayın. Birkaç CHO HCP analizi, 10 millimolar HEPES tamponu, %1 tween, pH 7.5 kullanılarak geliştirilmiştir.Bununla birlikte, tamponun, analizini geliştirmek için kullandığınız antikorlara göre optimize edilmesi gerekebilir. Her beş iş istasyonu analizi için bir analiz şablonu hazırlanması önerilir. Analiz şablonu; talimatlar, örnek kurulum notları, ham veri hesaplamaları, kalibrasyon grafiği ve sonuçlar şeklinde etiketlenmiş yedi sayfadan oluşmaktadır.Şablon kurulumuna başlamak için örnek kurulum sayfasını seçin ve tablodaki standartların konsantrasyon aralığını doldurun. Sayfanın sol üst köşesinde, standartların sağındaki tabloya; vibe iş istasyonuna örneklerin ne kadar süre inkübe edilmesi gerektiğini, ne kadar reaktif hacminin transfer edileceğini, örnek birikim süresini ve sensör koşullandırması ile probların ve kartuşun dekontaminasyonunun gerekli olup olmadığını bildirmek için ek bilgileri girin. Ardından plaka düzenini doldurun, kalibratörleri ve örnekleri bio scale örnek dilüenti ile seyreltin ve örnekleri plakalara yükleyin.Reaktifleri üçüncü 96 kuyucuklu duvar plakasına yükleyin. Plakaları mühürleyin. Plakaları iş istasyonu güverte sarsıcılarına yerleştirin ve sistemi yıkama tamponu ile rejenerasyon çözeltisi ile kurun.Vibe iş istasyonunu açın ve sistem besleme ile atık hatlarını bağlayın. Sistemi hazırlamaya (priming) başlayın. Vibe kartuşunu yerleştirin.Son olarak analiz Başlangıç sihirbazını çalıştırın. Ekrandaki talimatları izleyin ve başlayın. Analiz sinyali A MMP teknolojisi ile ölçülür. Boncuk antijeni HAPTEN antikoru, hapten anti hapten etkileşimi yoluyla sensöre bağlandığında, rejenerasyon immun kompleksleri uzaklaştırarak sensörü başlangıç durumuna getirir.Gösterildiği gibi.İşte bir CHO H-C-P-A-M-M-P analizi örneği. Kalibrasyon eğrisi analizi, biyoreaktör örneklerinde tekrarlanabilir sonuçlarla gerçekleştirilebilir. Bu kalibrasyon eğrisi, kalıntı bir protein içindir.A-A-M-M-P testi, bir vibe kalıntı protein analiz kiti ile gerçekleştirilmiştir. Aynı kit, 30 dakikalık inkübasyon süresi ile daha hızlı bir analiz için veya daha uzun bir inkübasyon süresi ile daha hassas sonuçlar ve daha geniş bir dinamik aralık elde etmek için kullanılabilir. Vibe Workstation, diğer A MMP testlerinden farklı şekilde gerçekleştirilen bir ürün titresi analizi için de kullanılabilir.Bu analiz, numune işlemine veya boncuklara ihtiyaç duymaz ve 10 milyonun üzerinde hücre içeren santrifüj edilmemiş numunelerde kantifikasyon doğrulanmıştır. Burada, Vibe platformundaki rekombinant GST GAD 34 sonuçlarını kullanan Vibe Bioanalyzer veya Alpha Screen Teknolojisi ile elde edilen sinyalin standart eğrisi gösterilmektedir. Burada bir log daha hassastır.CWR 22 ksenogreftlerinden GAD 34 indüksiyonu, Vibe, bioanalyzer veya Alpha screen ile analiz edilerek bir proteazom inhibitörünün varlığında veya yokluğunda test edilmiştir. Vibe platformu, in vivo tümör ksenogreftlerinde hassas ve tekrarlanabilir sonuçlar üretebilirken, alpha screen sinyali geliştirme sonrası protein mikrogram miktarının artmasıyla sönümlenmiştir. Bu teknik, onkoloji ilaç keşfi alanındaki araştırmacıların tümör örneklerinde ilaç inhibisyonunu incelemelerinin önünü açmış ve biyolojik işlem uygulamalarında daha verimli operasyonlara olanak sağlamıştır.

developing-custom-chinese-hamster-ovary-host-cell-protein-assays

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Bu video, Çin Hamster Yumurtalık hücrelerinden hasat edilen hücre kültürü sıvısından monoklonal antikorların saflaştırılması için bir testi göstermektedir. Numunedeki antikorların Fc bölgesine bağlanan ve onları kirleticilerden etkili bir şekilde ayıran hareketsizleştirilmiş protein A içeren gözenekli bir cam reçine kullanır. Düşük pH'lı bir elüsyon tamponunun kullanılması, saflaştırılmış antikorların alınmasını kolaylaştırarak etkileşimi zayıflatır.

Çin Hamster Yumurtalık Hücreleri Tarafından Üretilen Monoklonal Antikorları Saflaştırmak İçin Bir Teknik

Burada, yüksek çözünürlüklü (~ 30.000) MS-algılama, peptid parçacıkları Monoklonal antikor çivili peptid standartları miktar için ardından peptid öncüleri iyon hareketlilik ayrılması ile birleştiğinde bir Kromatografik tahlil açıklamak Özet.

Bir HS-MRM tahlil için Protein Biyofarmasötikler sıvı Kromatografi iyon hareketlilik QTOF kütle spektrometresi tarafından Host-hücre proteinleri miktar

Otomatik microbioreactors hasat hücre kültürü sıvı (HCCF) bir monoklonal antikor arıtma ve sonraki analizi için ayrıntılı bir protokol açıklanmıştır. Kritik kalite niteliklerini (CQAs) belirlemek ve önemli bilgileri ayıklamak için sınırlı numune hacmini maksimize etmek için analitiklerin kullanılması da sunulmaktadır.

Otomatik bir Mikrobioreactor sistemi kullanılarak Çin hamster yumurtlama hücrelerinden bir monoklonal antikor arıtma ve analitik

Tekrarlanarak mRNA'ların içinde bireysel yumurtalar, tek molekül RNA Floresans in situ olarak sayıları saymak için hibridizasyon (RNA-balık) yapışık olmayan hücreler için optimize edildi. Yumurtalar toplanmıştır, transkript belirli probları ile melezleşmiştir ve bir görüntü miktar yazılımı kullanarak sayılabilir.

Tek molekül floresan ın Situ hibridizasyon (SM-balık) kullanmak için fare yumurta miktarını ve Localize mRNA

Burada, otomatik bir mikro-biyoreaktörde deney tasarımı ve ardından hücre hasadı ve protein nicelemi nin bir Protein A sütunu kullanılarak çalıştırılaması için ayrıntılı bir prosedür saklıyız.

Çin Hamster Yumurtalık Hücre Yetiştiriciliğinde Yüksek İş-İş BulaMetli Otomatik Mikro-Biyoreaktörler Kullanılarak Proses Optimizasyonu

pIRES2-ZSGreen1-rAbs-APN-CHO hücrelerinde eksprese edilen rekombinant antikor proteini ve geleneksel hibridoma teknolojisi kullanılarak üretilen monoklonal antikorlar, domuz aminopeptidaz N (APN) proteinini tanıyabilir ve bağlanabilir.

Domuz Bağırsak Mukozal Epitelinde Aminopeptidaz N'yi Hedef Alan Monoklonal Antikorların Üretimi

Protokol, disseke edilmiş fare embriyo yüz süreçlerinden veya kültürlenmiş fare embriyonik palatal mezenkim hücrelerinden tüm hücre protein lizatlarını izole etmek ve fosforile protein seviyelerini değerlendirmek için müteakip batı lekelemesini gerçekleştirmek için bir yöntem sunar.

Fosfoprotein Analizi için Fare Yüz İşlemleri ve Kültürlenmiş Palatal Mezenkim Hücrelerinden Tüm Hücre Protein Lisatlarının İzolasyonu

Bir antikorun glikozilasyon paterni klinik performansını belirler, bu nedenle glikozilasyonu kontrol etmek için endüstriyel ve akademik çabalar devam eder. Tipik glikomühendislik kampanyaları zaman ve emek yoğun olduğundan, geçici susturma kullanarak glikozilasyon genlerinin etkisini karakterize etmek için hızlı bir protokolün oluşturulması yararlı olacaktır.

Çin Hamster Yumurtalık Hücrelerinde Hızlı Antikor Glikomühendisliği

İlaç ürünlerinden (DP) konak hücre proteinlerini (HCP'ler) zenginleştirmek ve proteom zenginleştirme boncukları kullanarak peptitleri tespit etmek için bir protokol sunulmaktadır. Yöntem, performans açısından farklı yöntemleri değerlendirmek ve karşılaştırmak için iyi karakterize edilmiş bir referans materyal olan, kurum içinde üretilmiş bir monoklonal antikor (mAb) ilaç maddesi (DS) kullanılarak gösterilmiştir.

Sınırlı Sindirim ile Birleştirilmiş Zenginleştirme Boncukları Kullanılarak Konak Hücre Protein Analizi

Burada, hipoksiye duyarlı kimerik antijen reseptörü (CAR)-T hücrelerinin üretilmesi ve fonksiyonel doğrulaması için bir protokol sunuyoruz. Bu protokol, hipoksiye bağlı CAR ekspresyonunun ve seçici sitotoksisitenin doğrulanması dahil olmak üzere lentivirüs bazlı hipoksiye duyarlı CAR-T hücrelerinin neslini ve bunların karakterizasyonunu sunar.

Hipoksiye Duyarlı Kimerik Antijen Reseptörü-T Hücrelerinin Üretimi ve Fonksiyonel Doğrulaması

Eksozomlar önemli klinik potansiyele sahiptir, ancak kolay in vivo klerens ve zayıf stabilite nedeniyle pratik uygulamaları sınırlıdır. Mikroiğneler, fizyolojik engelleri delerek ve kuru halde koruma sağlayarak lokalize uygulamayı mümkün kılarak, böylece eksozom uygulamasının sınırlamalarını ele alarak ve klinik faydalarını genişleterek bir çözüm sunar.

Eksozomların yüklenmesi ve teslimi için mikroiğne yamalarının üretimi ve karakterizasyonu

Öğrenin, ViBE platformu kullanarak Çin hamsteri yumurtalık hücre proteinleri için özelleştirilmiş immünoassay geliştirme yöntemini. Bu otomatik sistem, hassas ve tekrarlanabilir sonuçlar sağlar.

Akustik Membran mikropartikül Teknoloji Geliştirme Özel Çin Hamsteri Yumurtalık-host Hücre Proteini Tahliller

Daha fazla video keşfet