Gaz Geçirgen Malzeme Teknolojisi HYPERStack gemiler Kapalı Sistem Hücre Kültürü Protokolü

Bu prosedürün genel amacı, Corning Hypers istif tanklarının doğru kapalı sistem kullanımını göstermektir. Bu, önce kapların yerçekimi besleme yöntemi ile aşılanması ve ortamla doldurulmasıyla gerçekleştirilir. Daha sonra, hücre süspansiyonu katmanların her birinde izole edilir ve hücreler inkübe edilir.

İnkübasyonun ardından, harcanan ortam çıkarılır. Prosedürün son adımı, hücreleri hiper yığın kaplarından toplamaktır. Sonuç olarak, hiper yığın kapalı sistem kullanıldığında hücrelerin büyüme sırasında oksijene erişme yeteneğini koakıcılık sağlamak için gaz difüzyon sonuçları elde edilir.

Gaz geçirgen malzemeli hiper yığın kabının temel avantajı, hücre büyümesi için daha fazla yüzey alanı sağlamasıdır. Gemideki kafa boşluğunu ortadan kaldırarak, meslektaşım p pardo şimdi hypers yığın kabını kullanmak için kapalı bir sistem protokolü gösterecek. Hiper yığın kabı, üst plaka ve gaz geçirgen filmden oluşan bireysel hücre kültürü bölmesi olan bir stattan oluşur.

Hücreler bu bölme içinde kültürlenir. Sıvı manifoldu, ette katmanlarının her birini bir modül içinde birbirine bağlar. Modüller, 12 katmanın katları halinde kaplar oluşturmak için boru ile bağlanır.

Manifold, kullanıcının tüm kaba tek bir sıvı manipülasyonu yapmasına izin verir. Hava manifoldu ayrıca stat katmanlarını birbirine bağlar, ancak sıvı ilaveleri meydana geldiğinde kaptan havayı çıkarmak için kullanılır ve her biri arasında doldurma sırasında kullanılmak üzere bir doldurma hattı içerir. Stat katmanı, trakeal boşluk adı verilen ve her katmanın gaz geçirgen filmi boyunca gaz değişiminin gerçekleşmesine izin veren bir açık hava alanıdır.

Sıvı taşıma borusu, sıvı manifolduna bağlıdır ve steriliteyi korurken fazla havayı serbest bırakmak için tüm kapalı sistem sıvı manipülasyonlarını yapmak için kullanılan özelleştirilebilir bir bileşendir. Havalandırma borusu kullanılır. Havalandırma borusu hava manifolduna bağlıdır ve bir hava filtresi içerir.

Sıvı taşıma borusuna bağlı, kabı doldurduktan sonra sıvıyı sıvı taşıma borusundan boşaltmak için kullanılan kovalama borusu ve filtredir. Bu protokolde ayrıca, kullanım sırasında kapların doğru pozisyonlara yerleştirilmesine yardımcı olan bir taşıma cihazı olan Corning Stack manipülatörü veya CSM de kullanılır. Bu demonstrasyonda, gaz geçirgen 36 katmanlı bir kap için kapalı sistem hücre kültürü gösterilmiştir.

Bununla birlikte, bir CSM kullanarak, bu prosedürün bir doldurma takozu kullanılarak 12 katmanlı bir kap üzerinde gerçekleştirilmesine ilişkin ayrıntılar, ekteki yazılı protokolde bulunabilir. Medya tüpünü aşılamadan önce 3,9 litre torbalı ortam hazırlayarak başlayın. Serum torbasını medya torbasına ıslatın ve istenen serum konsantrasyonunu elde etmek için iyice karıştırın.

Büyük torba kelepçeleri kullanarak torbadaki yaklaşık 300 mililitre ortamı sıkıştırın. Bu, aşılanmış tüm hücrelerin doldurma sırasında kullanılmasını ve medya torbasında hiçbirinin kalmamasını sağlayacaktır. Medyayı aşılamak için medyayı bir torba standına yerleştirin.

Tüpe bağlı bir şırıngayı hücre süspansiyonu ile doldurun. Hücre süspansiyonu içeren şırıngayı tüp kaynağı ile ortam torbasına takın. Şırıngadan torbaya üç adet 16 inç boru.

Hücre süspansiyonunu medya torbasına enjekte edin ve iyice karıştırın. Aşılanmış medya torbası, tankın sekiz inçten fazla üç sıvı taşıma borusuna boru kaynağı veya çok amaçlı konektörler kullanılarak takılabilir. Bugün boru kaynağı kullanacağız.

Kabın sıvı taşıma ve takip tüpleri üzerindeki kelepçeleri kapatın. 36 katmanlı kabı yük konumunda A CSM'ye yerleştirin. Havalandırma filtresi borusunu tutma kelepçesine asın.amp CSM üzerinde.

Doldurma işlemi sırasında ıslanmayı önlemek için hava filtresini en yüksek konuma yerleştirmek için kapağı sıkın ve CSM'yi doldurma konumuna getirin. 10 derecelik açı, dolum hattından temiz havanın doldurulması sırasında sıvının katmanlara dengelenmesine de izin verir. Medya torbasını kap ile aynı seviyeye yerleştirerek, takip borusu kelepçesini kapalı tutarak.

Sıvının kaba girmesine izin vermek için sıvı taşıma tüpü kelepçesini ve medya torbası kelepçesini açın. Torba sehpasını kullanarak, hücre süspansiyonunun kaba akmasına yardımcı olmak için ortam torbasını kaldırın. Aşılanmış ortamın tamamı kaba girene kadar kabı doldurun.

Medya torbasının üst kısmı hala 300 mililitre medya içermelidir. cl'yi çıkarınamp sıvı üst hava manifolduna yaklaşırken kabı doldurmaya devam etmek için ortam torbasından. Aşırı doldurmayı önlemek için medya torbasını indirerek doldurma hızını yavaşlatın.

Sıvı seviyesini yavaşça doldurma hattına getirin ve sıvı işleme borusunu topaklayın. CSM'deki kabı izolasyon konumuna getirin ve her iki manifold setini de en yüksek konuma getirin. Medya torbasını kabın yüksekliğinin altına indirin.

Takip filtresi dik konumda tutulurken, kovalama borusu cl'yi açın.amp. Bu, sıvı işleme tüpündeki medyayı boşaltacak veya medya torbasına geri kovalayacaktır. Boru boşaldığında, medya torbası hortumundaki kelepçeyi kapatın.

Takip borusu filtresini dik konumda tutmak. Kalan sıvının kaba girmesine ve dengelenmesine izin vermek için kabın sıvı taşıma borusundaki kelepçeyi açın. Bunun gerçekleşmesi için bir ila iki dakika bekleyin.

Ardından, manifoldlar solda olacak şekilde CSM'deki kabı çevirin. Tekneyi CSM üzerindeki yük konumuna indirin. Hem kovalama hem de sıvı taşıma borusundaki kelepçeleri kapatın.

Medya torbası şimdi kaptan çıkarılabilir veya daha sonra hasat prosedüründe kullanılmak üzere takılı kalabilir. Takılı medya torbasını saklamak için, medya torbasını yuvarlayın ve kabın saklama tepsisindeki tutma bantlarının altına yerleştirin. Son olarak, kabı kuluçka makinesine taşıyın Kabı taşırken, havalandırma filtresine herhangi bir sıvının girmemesine dikkat edin.

Bu, manifold ucunun hafifçe yukarı doğru eğilmesiyle gerçekleştirilir. Hasat prosedürü tüpüne başlamak için, hücreleri Kaynaklayın İlişkilendirme solüsyonu ve söndürme torbaları Hasat torbası tertibatını oluşturmak için tüm boru kelepçelerinin kapalı olduğundan emin olun. Kabı inkübatörden çıkarın ve yük konumunda CSM'ye yerleştirin.

Medya torbasını tutma bantlarının altından çıkarın ve torbaya asın. Sonraki durun, kabı sabitlemek için kapağı sıkın. Havalandırma borusunu tutma kelepçesine asın ve CSM'yi doldurma konumuna getirin.

Çanta standındaki medya çantasının kaptan daha alçakta asılı olduğundan emin olun. Ortamın ekli torbaya akmasına izin vermek için medya torbası borusu ve kabın sıvı taşıma borusu üzerindeki kelepçeyi açın. Teknenin yaklaşık dörtte üçü boşaldığında, CSM ayarlarını son boş konuma değiştirin.

Kap ve sıvı taşıma borusu boşaldığında, kullanılmış ortam torbası borusu üzerindeki kelepçeyi geçmek için ortamı kovalamak için boruyu kaldırın. Ardından hem sıvı taşıma borusundaki kelepçeyi hem de kullanılmış ortam torbası borusundaki kelepçeyi kapatın. Kullanılmış medya torbasını, boru kaynağı ile hasat torbası tertibatı ile değiştirin.

Torba standını kullanarak hücre ayrıştırma torbası düzeneğinin yüksekliğini kabın yüksekliğinin üzerine yükseltin. CSM'yi doldurma konumuna yerleştirin. Hücre ayrışma çözeltisi tüp kelepçesini ve hasat torbası tertibatı Kelepçesini açın ve çözeltiyi kaba aktarın.

Aktarım tamamlandığında, sıvı işleme borusu ve hücre ayrışma çözeltisi borusu üzerindeki kelepçeleri kapatın. Ardından, yatay konumlandırma kolunu açık tutarken CSM'yi yük konumuna getirin. Tekerleği kullanarak kabı nazikçe yan yana sallayın ve çözeltiyi hücre katmanlarına dağıtın.

Çözeltinin eşit dağılımını sağlamak için kap, sallanma sırasında zaman zaman doldurma konumuna geri döndürülebilir. Çözelti yeterince dağıtıldıktan sonra, doldurma konumunu kilitlemek için CSM üzerindeki kolu serbest bırakın. Hücreler için gerekli ayrışma süresi boyunca damarı bu pozisyonda bırakın.

Hücre ayrılmasını belirlemek için bulanıklığı bir kılavuz olarak kullanın. Ayrıldıktan sonra CSM'yi yük konumuna getirin. Söndürme torbası cl'yi açınamp ve sıvı taşıma borusu clamp söndürme ortamının kaba girmesine izin vermek için.

Sıvı işleme borusu üzerindeki kelepçeyi kapatın. Aktarım tamamlandıktan sonra, CSM'yi yük konumuna getirin ve tekneyi yan yana sallamak için yatay konumlandırma kolunu tutun. Torba sehpasını kullanarak, hasat torbası tertibatının konumunu kap seviyesinin altına indirin.

CSM'yi boş konuma ayarlayın. Kap sıvı taşıma tüpünü açın, kelepçeleyin ve hücre çözeltisini tekrar söndürme torbasına aktarın. CSM'yi yük konumuna geri getirin ve bir boru mühürleyici kullanarak hasat torbası tertibatını kaptan ayırın.

Artık hücre çözeltisi, geleneksel hücre büyüme sistemlerinde işlenmeye hazırdır. Headspace ile ortamdaki oksijen üç gün içinde ortalama %50 oranında tükenir. Kültürde, bu şekil, aynı büyüme sisteminde zaman içinde hücrelerin seviyesinde litre oksijen başına miligram cinsinden azalmayı gösterir, üç milimetrelik bir ortam yüksekliğinden geçen oksijen gradyanı, ortamdan Headspace bağlantısına kadar neredeyse %50 daha fazladır.

Hücre büyümesi sırasında hipers yığınının trakeal boşluğundaki oksijen yüzdesi gösterilir. Şekil, 96 saatin üzerinde, her bir gaz geçirgen film tabanını sağlayan katmanlar arasındaki oksijen yüzdesinin sabit kaldığını göstermektedir. Bu, hücrelerin büyüme sırasında co akıcılığına kadar oksijene erişme yeteneğini gösterir.

Bu videoyu izledikten sonra, Corning Hypers istif tankının kapalı sistemde nasıl doldurulacağını ve hasat edileceğini iyi anlamış olmalısınız.