Name: Gaz Geçirgen Malzeme Teknolojisi HYPERStack gemiler Kapalı Sistem Hücre Kültürü Protokolü (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-11-29T17:45:00.000+00:00
Duration: 11 min 48 s
Description: Öğrenin, gaz geçirgen HYPERStack kapalı sistem hücre kültürü protokolünü kullanarak yüksek verimli yapışkan hücre hasadı için etkili dolum ve hasat yöntemlerini. Bu teknik kontaminasyon riskini azaltır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Yazarlar Lonza Walkersville kapalı bir sistem bilgisi, çanta tasarımı, çanta Avcılar ve kaynakçılar kredi, çanta gibi HYPERStack şemadaki oluşturarak onların yardım için teşekkür etmek istiyorum.

1. HYPERStack Gemi - Gaz Geçirgen Malzeme Teknolojisi Arkaplan <ol><li> HYPERStack Gemi hücre metabolizması için bir 76.2micron gaz geçirgen polimer film ile gaz alışverişi dayanmaktadır hücreleri kapalı sistem kültür için çok katmanlı bir gemi. </li><li> HYPERStack damar damar içindeki hücreler üzerinde bir "headspace" sahip olmadığını daha geleneksel hücre kültürü gemileri farklıdır. Damar içinde gaz değişimi için bu "headspace" yerine, gaz geçirgen ürünleri, atmosfere açık, her kültür odası altında hava boşluk ("trakea" alanları "olarak anılacaktır) var. </li><li> Bu trakeal alan eşdeğer gaz değişimi, geminin her bir hücre kültürü bölmesi büyüyen hücreleri sağlar. </li><li> Gaz geçirgen film, steril bir ortamda korurken gaz değişimi meydana sağlar. Çoklu katmanlardan her biri için tüm sıvı manipülasyonlar tek bir giriş portu aracılığıyla oluşur. </li></ol> 2. HYPERStack Gemi Bileşen Özet <ol><li> Stackette üst plaka ve gaz geçirgen film oluşan tek bir hücre kültürü bölmesi. Hücreleri bu bölmesi içinde kültür. </li><li> Sıvı Manifold, 12 stackette katmanlarının her bir HYPERStack modül içinde birlikte bağlanır. Modüller, 12 katmanları katları gemilerin oluşturmak için boru ile bağlanır. Manifoldu kullanıcı bir sıvı manipülasyon yapmak için tüm gemi sağlar. </li><li> Hava Manifold stackette katmanları bir araya bağlanır, ama sıvı eklemeler meydana geldiğinde, geminin hava yerinden. Bu dolgu sırasında kullanılmak üzere bir dolgu hattı içerir. </li><li> Trakeal Uzay gaz değişimi her katmanları 'gaz geçirgen film yoluyla gerçekleşmesini sağlayan, her stackette katmanı arasında açık hava alanıdır. </li><li> Sıvı taşıma boru sıvı manifolduna bağlı olan ve tüm kapalı sistem sıvı manipülasyonlar yapmak için kullanılır. Bu bileşen, özelleştirilebilir. </li><li> Havalandırma hortumu, hava manifolduna bağlı bir hava filtresi içeren ve sterilite korurken aşırı hava serbest bırakmak için kullanılır. </li><li> Kovalamak boru, filtre ve kelepçe ve sıvı taşıma boru bağlanır ve geminin doldurduktan sonra sıvı taşıma boru içindeki sıvıyı tahliye etmek için kullanılır. </li><li> Corning Yığın Manipulator veya CSM gemilerin kullanım sırasında doğru pozisyonlara yerleştirerek yardımcı olmak için bir işleme cihazı. </li><li> Dolum Kama, bir paslanmaz çelik, el ile HYPERStack damarları doldururken kullanılan yardımcı. </li></ol> 3. Gaz Geçirgen Film HYPERStack gemiler kullanılır sayesinde Gaz Difüzyon Sonuçlar <ol><li> Bacalı headspace geleneksel hücre büyümesi sistemleri, medya oksijen, kültür 3 gün içinde ortalama% 50 tükenmiş. (Şekil 1) </li><li> Aynı hücre büyümesi sistemi, medya 3mm yüksekliğinde oksijen gradiyenti hücre katmanı daha headspace kavşak medya neredeyse% 50 daha fazla. (Şekil 2) </li><li> 76.2micron gaz geçirgen polistiren film aracılığıyla oksijen difüzyon, medya 2.6mm aracılığıyla difüzyon eşit. HYPERStack damarlarda kullanılan gaz geçirgen film gaz alışverişi hücre tabakasının ortaya sağlar. </li><li> Trakeal HYPERStack gemilerin uzayda oksijen% hücreleri izdiham büyüdükçe sabit kalır. (Şekil 3) </li></ol> 4. Medya Çanta Hazırlık <ol><li> HYPERStack-12 katman damar medya 1.3L HYPERStack-36 kat gemi alır ve medya 3.9L alır. </li><li> Torbalı medya aşılamak için önce serum kullanılacak ise, tüp medya çanta serum çanta kaynak ve iyice karıştırın. </li><li> Kelepçe medya yaklaşık 300 ml, büyük çanta kelepçeler kullanarak çanta. Bu inoküle edilen tüm hücrelerin hiçbiri medya torba içinde kalan ve dolum sırasında kullanılan sağlayacaktır. Yeri medya çanta çanta standında. </li></ol> 5. Aşılamak Medya <ol><li> Hücre süspansiyonu ile bağlı tüp ile bir şırınga doldurun. Tüp kaynak medya çanta hücre süspansiyonu içeren bir şırınga 3 / 16 "boru. </li><li> Medya Çanta Hücre Süspansiyon içine enjekte edilir ve iyice karıştırın. </li></ol> 6. Prosedür doldurun <ol><li> Tüp HYPERStack geminin 3 / 8 "sıvı taşıma boru (bağlar Steril veya Çok Amaçlı (MPCs) bağlanır, aynı zamanda damar medya çanta ekleyebilirsiniz) inoküle medya çanta kaynak. </li><li> HYPERStack sıvı taşıma ve kovalamaca tüpler kelepçeler kapatın. </li><li> Kanca havalandırma filtresi tüp CSM tutan kelepçe, yük pozisyonda CSM HYPERStack 36 Katman Gemi yerleştirin. Kapağı sıkın ve CSM dolgu konumu taşımak. Gemi doğru dolgu pozisyon içine koyarak; hava filtresi dolgu işlemi sırasında ıslanma önlemek için en yüksek konumda şu anda. 10 ° açı izinleri equilibrdolum esnasında sıvı katmanları ation. Dolum kama yan yerleştirilen HYPERStack-12 tabaka damar doldurmak için doğru pozisyonda. </li><li> Çanta HYPERStack gemi (yüksek olmayan) olarak aynı seviyede konumlandırarak doldurma çizgisine temizleyin hava. Kovalamaca tüp kelepçe kapalı tutulması; gemi girmek için sıvının sıvı taşıma tüp kelepçe ve medya çanta kelepçe açmak. </li><li> Çanta standı kullanarak, kabına hücre süspansiyonu akışını yardımcı olmak için medya çanta yükseltmek. </li><li> Gemi inoküle medyanın tüm gemi girinceye kadar doldurun; 300 ml medya hala medya çanta üst kısmında kalmalıdır. Gemi dolum devam etmek için medya çanta kelepçeyi çıkarın. Sıvı üst hava manifoldu yaklaşırken, dolgu üzerinde önlemek için medya çanta düşürerek dolgu hızını yavaşlatır. Yavaş yavaş sıvı seviyesi doldurma çizgisine getirmek ve sıvı taşıma boru kelepçe. </li></ol> 7. Into Katmanlar Sıvı Lock İzolasyon Prosedürü <ol><li> Manifoldu, her iki seti de en yüksek konumda böylece izolasyon konumuna CSM HYPERStack gemi getirin ve altındaki medya çanta geminin yüksekliği daha düşük. HYPERStack-12 katman gemi, geminin yan tarafında bir el koyarak ve diğer dolum kama asansör kullanarak izolasyon pozisyona kaldırılabilir. </li><li> Dik bir pozisyonda yapılan kovalamaca filtresi ile kovalayan, tüp kelepçe açın. Bu medya torbaya geri sıvı tüp içinde ele medya boş ya da kovalamak olacak. Hortumun boş sonra medya çanta boru, kelepçe kapatın. </li><li> Takip tüp filtre dik bir pozisyonda tutmak, kalan herhangi bir kap içinde sıvı girin ve denge sağlaması için izin HYPERStack sıvı taşıma boru kelepçe açmak. Bunun gerçekleşmesi için 1-2 dakika bekleyin. </li><li> Manifoldlar soldaki böylece CSM HYPERStack gemi açın. CSM üzerindeki yükü konumuna geminin indirin. HYPEStack-12 kat gemi biraz sola Sallanır dolum kama kaldırılması izin verecektir. Kovalamak ve sıvı taşıma boru kelepçeleri kapatın. </li><li> Şimdi medya çanta gemiden kaldırılır ya da daha sonra hasat yordamı kullanmak için bağlı kalır. Ekli medya çanta saklamak için HYPERStack geminin depolama tepsisi tespit bantları altında boş çanta ve torba içinde kalan herhangi bir medya, yer ve döndürün. </li><li> Inkübatör HYPERStack geminin hareket ettirin. Gemi bakım taşırken havalandırma filtreye giren sıvı tutmak için önlemler alınmalıdır. Bu biraz yukarı HYPERStack manifoldu sonuna devrilme tarafından gerçekleştirilir. </li></ol> 8. Hasat Protokolü <ol><li> Hasat işlemi başlatmak için, tüp hasat çanta montaj oluşturmak üzere bir araya hücre disosiasyon çözüm ve quench çanta kaynak. Tüm boru kelepçeleri kapalı olduğundan emin olun. (Göstermek için karikatür) </li><li> Inkübatör HYPERStack gemi çıkarın tespit bantları altında medya çanta bırakın ve çanta standı asmak. Geminin yük pozisyonda CSM geminin güvenli kapak yerleştirin ve sıkın. Holding kıskaç içine havalandırma boru Kanca CSM ve dolgu konumuna taşımak. </li><li> Medya çanta boru ve medya ekli torba içine akmasını sağlamak için geminin sıvı taşıma boru kelepçe açık; medya çanta çanta standında HYPERStack daha asılı emin olun. </li><li> Sonra gemi hakkında ¾ boş, son boş pozisyon CSM ayarlarını değiştirmek. HYPERStack gemi ve sıvı taşıma boru boş zaman, harcanan medya çanta boru kelepçe geçmişte medya kovalamak için boru kaldırın, sonra sıvı taşıma boru, kelepçe ve harcanan medya çanta boru kelepçe kapatın. </li><li> Harcanan medya çanta boru kaynağı ile hasat çanta montaj ile değiştirin ve çanta standı kullanarak HYPERStack yüksekliği yukarıda hücre disosiasyon torba montaj yüksekliği yükseltmek. </li><li> CSM dengeleme pozisyonda yerleştirin. Hücre disosiasyon çözüm tüp HYPERStack çözüm kelepçe ve transfer açın. Transfer tamamlandığında, sıvı taşıma boru ve hücre disosiasyon çözüm boru kelepçeleri kapatın. </li><li> CSM yük konumuna getirin. Yatay konumlandırma kolu açık tutarak, yavaşça hücre katmanları üzerinden çözüm dağıtmak, geminin yan tarafına tekerleğini kullanarak kaya. Gemi zaman zaman çözümün eşit dağılımını sağlamak için sallanan sırasında dengeleme konumuna iade edilebilir. Katmanları tamamen kaplı olduğunu görsel olarak belirgin olmayabilir, ancak ayrışma çözümü hücrelerin yüzeye eşit dağılmış olacak. Çözüm yeterince dağıtılan edildikten sonra, yük konumu HYPERStack kilitlemek için CSM kolunu serbest bırakın. Bu pozisyonda HYPERStack bırakınhücreleri için gerekli disosiasyon süre içinde. </li><li> Sonra hücreleri müstakil, bir kılavuz olarak bulanıklık kullanarak, dengeleme konumuna CSM taşımak. Bakım hücreler üzerinde sindirmek için alınmalıdır. Quench medya gemi girmesine izin quench çanta kelepçe ve HYPERStack sıvı taşıma boru kelepçe açın. HYPERStack sıvı taşıma boru kelepçe transferi tamamlandıktan sonra kapatın. </li><li> CSM yük pozisyonuna dönün ve geminin yan tarafına rock yatay konumlandırma kolunu tutun. </li><li> Çanta standı HYPERStack seviyesinin altında hasat torba montaj konumunu kullanarak, daha düşüktür. Damar sıvı taşıma tüpü söndürmeye torbaya geri hücre çözümü kelepçe ve transfer açık, boş pozisyon için CSM ayarlayın. CSM yük pozisyonuna dönün ve bir tüp macunu kullanarak geminin hasat çanta montaj bağlantısını. Hücre çözümü işlem için hazırdır. </li></ol> 9 - Temsilcisi Sonuçlar <ul><li> Hasat zamanı, standart bir polistiren yüzeyinden gaz geçirgen polistiren yüzeye dönüştürürken optimize edilmesi gerekiyor. Hücreler HYPERStack ürünü daha hızlı serbest eğilimindedir. </li><li> Hücreleri mikroskop altında görmek için havalandırma ve sıvı taşıma boru bağlanarak gerekir. Manifoldlar mikroskop sahnede aşağı dönük HYPERStack geminin baş aşağı yerleştirin. </li><li> Önleme adımları çalışmamasına neden olacak kullanım sırasında filtreler ıslatma önlemek için alınabilir. Değil HYPERStack gemi doldurma ve kelepçeler açık olduğunda, havalandırma ve kovalamaca tüp yüksekte tutmak içinde, hiçbir ıslatma meydana gelmelidir. </li><li> Tüp kapalı kelepçeler basınç kelepçeler açıldıktan sonra kapalı kalmaya neden olur. Ters yönde boru pinching açacaktır. </li><li> Medya akış süresi giren ve yerçekimi linki üzerinden HYPERStack gemi çıkmadan HYPERStack damar medyanın üst düzey ve üst düzey medya konteyner medya medya arasındaki yükseklik farkı dayanmaktadır. Daha fazla mesafe, daha hızlı akışını. Maksimum akış 1.5L/min filtreleri derece sınırlıdır. </li><li> HYPERStack geminin uygun dolgu hacmi bakımı, hücre büyümesi odaları hava kabarcığı oluşumunu önlemek. Evaporatif su kaybı nedeniyle unhumidified ortamda alma ya da kuluçka için hava kabarcıkları nedeniyle oluşabilir. Son kullanıcı tarafından ek sıvı eklenmelidir inkübasyon koşullarının yanı sıra, örnekleme miktarı ve sıklığı belirleyecektir. </li></ul><img src="/files/ftp_upload/2499/2499fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1, standart hücre kültürü damar medya Oksijen tükenmesi . Bu rakam, 3 gün içinde hücreleri düzeyinde mg / L oksijen azalması gösterir. <img src="/files/ftp_upload/2499/2499fig2.jpg" alt="Şekil 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2, standart hücre kültürü gemisi medya Oksijen degrade . Bu rakam, Oksijen mg / L medya headspace kesiştiği hücre tabakasının daha büyük gösterir. <img src="/files/ftp_upload/2499/2499fig3.jpg" alt="Şekil 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 3"> Şekil 3 HYPERStack hücre büyümesi sırasında trakeal boşluk Oksijen yüzdesi. Bu rakam, 96 saat boyunca, her bir gaz geçirgen film alt malzemeleri katmanları arasındaki oksijen yüzdesi, sabit kaldığını gösteriyor. Bu hücrelerin büyüme confluency sırasında oksijen erişim yeteneğini göstermektedir.

7745209: HYPERStack gemi gaz geçirgen teknoloji, ABD Patent # kapsamında. Yazarlar, bu yazıda kullanılan alet üreten Corning, Yaşam Bilimleri, Inc çalışanları.

HYPERStack damar başarılı bir şekilde büyüdü, birincil ve kök hücre mühendislik vardır. Agirlik yem ve steril bir ortam konteyner pompalama aseptik torbada bağlantıları aracılığıyla damar içine Akışkan eklemeler yapılmıştır. Geminin büyüme alanında daha fazla 2.5X artış vs aynı hacimsel ayak izi yığılmış plaka ürünü sağlar. HYPERStack-12 6.000 cm 2 büyüme alanı, HYPERStack-36 18.000 cm 2 büyüme alanı ve HYPERStack-120 60.000 cm 2 büyüme alanı vardır. Yüzey alanını arttırarak, kullanıcıların aynı hücrede nüfus veya çok daha fazla hücre üretmek ve değişkenliği azaltmak mümkün. Ayrıca, aynı hücre çıkışı elde, ya da insanların, temiz oda suit, veya inkübatör eklemeden hücre çıkış artırmak için daha az damarları kullanarak, uzay ve / veya işçilikten tasarruf edebiliyoruz. Sistem, düşük partikül montaj yöntemleri ve yapıştırıcı kullanılmadan üretilmektedir. Üçlü Torbalı ve steril sağlanan boru setleri ve filtreler ile önceden monte edilmiş kapalı bir sistem.

<table><tbody><tr><td>1,5L Torba Besiyeri</td><td>Lonza Inc.</td><td>TBD</td><td>1350ml besiyeri + 150ml serum (gerekliyse)</td></tr><tr><td>4,0L Torba Besiyeri</td><td>Lonza Inc.</td><td>TBD</td><td>3600ml besiyeri + 400ml serum (gerekliyse)</td></tr><tr><td>HYPERStack Vessel-12</td><td>Corning</td><td>10012</td><td></td></tr><tr><td>HYPERStack Vessel-36</td><td>Corning</td><td>10036</td><td></td></tr><tr><td>Dolum Kaması</td><td>Corning</td><td>10040</td><td></td></tr><tr><td>Yığın Manipülatörü</td><td>Corning</td><td>TBD</td><td></td></tr><tr><td>HyQtainer Alt Düzenek Örnekleme Cihazı</td><td>Hyclone</td><td>SH3B0324.01</td><td></td></tr><tr><td>600ml Torba Besiyeri Durdurucu (%10 FBS IMDM)</td><td>Lonza Inc.</td><td>TBD</td><td></td></tr><tr><td>600ml Hücre Ayrıştırma Solüsyonu</td><td>Lonza Inc.</td><td>TBD</td><td></td></tr></tbody></table>

gaz geçirgen malzeme teknolojisi hyperstack gemiler kapalı sistem hücre kültürü protokolü

Closed System Cell Culture Protocol Using HYPERStack Vessels with Gas Permeable Material Technology

Büyük hacimli yapışık hücre kültürü microcarrier boncuk optimal bir tercih değildir yığılmış plaka hücre büyümesi ürünler üzerinde standardize edilmiştir. HYPERStack gemiler mevcut yığılmış plaka ürünleri kapalı sistem ölçekli kadar izin verir ve aynı hacimsel ayak izi&gt; 2.5X daha fazla hücre sunar. Bu nedenle HYPERStack damarları gaz değişimi meydana sağlar gaz geçirgen malzeme ile fonksiyon, bir geminin içinde iç headspace ihtiyacını ortadan kaldırır. Headspace ortadan kaldırılması, hücre büyümesini en aza indirilecektir oluşur bölmesi aynı hacimsel ayak izi içinde hücre büyümesi yüzey alanı daha fazla katman izin azaltmak için, uzay sağlar. Hücre tedavi veya aşı üretimi gibi birçok uygulama için, kapalı bir sistem, hücre büyümesi ve hasat için gereklidir. HYPERStack damar medya çanta veya diğer yöntemlerle tüp yoluyla hücre ve reaktif ekleme ve çıkarma sağlar. Bu protokol HYPERStack kaplar, gaz difüzyon sonuçları hücreleri, kapalı sistem hücre büyümesi protokolleri ve çeşitli hasat yöntemleri metabolik ihtiyaçlarını karşılamak için kullanılan gaz geçirgen malzeme arkasındaki teknoloji açıklayacağız.

Teknoloji, protokol ve yüksek verim yapışık hücre kültürü için kullanılan Corning HYPERStack gemiler ve aksesuarları işlenmesi halinde bir giriş. Protokol, mevcut yığılmış plaka ürünler üzerinde artan hücre hasat için kapalı sistem gemileri nasıl kullanılacağını gösterecektir.

Gaz Geçirgen Malzeme Teknolojisi HYPERStack gemiler Kapalı Sistem Hücre Kültürü Protokolü

Mikrotaşıyıcı boncukların optimal bir seçenek olmadığı durumlarda, yüksek hacimli yapışkan hücre kültürü günümüzde üst üste istiflenebilir plak hücre büyütme ürünleri ile standartlaştırılmıştır.

Bu prosedürün genel amacı, Corning Hypers istif kaplarının doğru kapalı sistem kullanımını göstermektir. Bu işlem, öncelikle kapların yer çekimi besleme yöntemiyle medya ile aşılanması ve doldurulmasıyla gerçekleştirilir. Ardından, hücre süspansiyonu her bir katmanda izole edilir ve hücreler inkübe edilir.İnkübasyonun ardından, kullanılmış besiyeri uzaklaştırılır. Prosedürün son adımı, hücrelerin hypers stack kaplarından hasat edilmesidir. Sonuç olarak, hypers stack kapalı sistemi kullanıldığında, hücrelerin konfluens düzeyine kadar olan büyüme sürecinde oksijene erişim yeteneğini göstermek amacıyla gaz difüzyon sonuçları elde edilir.Gaz geçirgen malzemeli hypers stack kabının temel avantajı, hücre büyümesi için artırılmış yüzey alanı sağlamasıdır. Kabın içindeki boş alanı ortadan kaldırarak, meslektaşım p pardo şimdi hypers stack kabı kullanımı için kapalı sistem protokolünü gösterecektir. Hypers stack kabı, üst plaka ve gaz geçirgen filmden oluşan bireysel hücre kültürü bölmesi olan bir stattan meydana gelir.Hücreler bu bölme içerisinde kültüre edilir. Sıvı manifold, bir modül içindeki ette katmanlarının her birini birbirine bağlar. Modüller, 12'nin katları şeklinde katmanlara sahip kaplar oluşturmak için hortumlarla birbirine bağlanır.Manifold, kullanıcının tüm kap boyunca tek bir akışkan manipülasyonu yapmasına olanak tanır. Hava manifoldu ayrıca stat katmanlarını birbirine bağlar, ancak akışkan eklemeleri sırasında kaptaki havayı uzaklaştırmak için kullanılır ve her bir dolum işlemi arasında kullanılmak üzere bir dolum hattı içerir. Stat katmanı, her katmanın gaz geçirgen filmi aracılığıyla gaz değişiminin gerçekleşmesini sağlayan ve trakeal boşluk olarak adlandırılan açık bir hava boşluğudur.Sıvı aktarım borusu, sıvı manifolduna bağlıdır ve steriliteyi korurken fazla havayı tahliye etmek amacıyla tüm kapalı sistem sıvı manipülasyonlarını gerçekleştirmek için kullanılan özelleştirilebilir bir bileşendir. Havalandırma borusu kullanılır. Havalandırma borusu, hava manifolduna bağlıdır ve bir hava filtresi içerir.Sıvı aktarım tüplerine, kabın doldurulmasından sonra sıvı aktarım tüplerindeki sıvıyı tahliye etmek için kullanılan takip tüpü ve filtre bağlıdır. Ayrıca bu protokolde, kullanım sırasında kapların doğru konumlara yerleştirilmesine yardımcı olan bir taşıma cihazı olan Corning Stack manipülatörü veya CSM kullanılmaktadır. Bu gösterimde, gaz geçirgen 36 katmanlı bir kap için kapalı sistem hücre kültürü uygulaması gösterilmektedir.Ancak, bir CSM kullanıldığında, dolum kaması kullanılarak 12 katmanlı bir kapta bu prosedürün gerçekleştirilmesine ilişkin ayrıntılar beraberindeki yazılı protokolde bulunabilir. Medya tüpünü inoküle etmeden önce 3,9 litre torbalanmış medya hazırlayarak başlayın. Serum torbasını medya torbasına ekleyin ve istenen serum konsantrasyonunu elde etmek için iyice karıştırın.Büyük torba klempleri kullanarak torbadaki medyanın yaklaşık 300 mililitresini klempleyerek kapatın. Bu işlem, doldurma sırasında inoküle edilen tüm hücrelerin kullanılmasını ve medya torbasında hiç hücre kalmamasını sağlayacaktır. Medyayı inoküle etmek için medya torbasını bir torba standına yerleştirin.Hücre süspansiyonu ile boru hattına bağlı bir şırıngayı doldurun. Hücre süspansiyonu içeren şırıngayı, tüp kaynağı yöntemiyle medya torbasına bağlayın. Şırıngadan torbaya kadar 16 inçlik borunun üç katını kullanın.Hücre süspansiyonunu medya torbasına enjekte edin ve iyice karıştırın. İnoküle edilmiş medya torbası, tüp kaynağı veya çok amaçlı konnektörler kullanılarak düzeneğin üç sekizde bir inçlik sıvı aktarma borusuna bağlanabilir. Bugün tüp kaynağı yöntemini kullanacağız.Kabın sıvı aktarım ve tahliye tüplerindeki klempleri kapatın. 36 katmanlı kabı CSM'deki yükleme konumuna yerleştirin. Havalandırma filtresi tüpünü CSM üzerindeki tutucu klempe takın.Dolum işlemi sırasında ıslanmayı önlemek için hava filtresini en yüksek konuma getirmek amacıyla, kapağı sıkın ve CSM'yi dolum konumuna getirin. 10 derecelik açı, dolum sırasında dolum hattındaki havayı tahliye ederek sıvının katmanlar arasında dengelenmesini sağlar. Chase tüpü klempi kapalı tutarak, medya torbasını kap ile aynı seviyeye konumlandırın.Sıvının kaba girmesini sağlamak için sıvı aktarım tüpü klempsini ve besiyeri torbası klempsini açın. Hücre süspansiyonunun kaba akışına yardımcı olmak için torba standını kullanarak besiyeri torbasını yukarı kaldırın. İnoküle edilmiş besiyerinin tamamı kaba girene kadar kabı doldurun.Medya torbasının üst kısmında hâlâ 300 mililitre medya bulunmalıdır. Sıvı üst hava manifolduna yaklaştığında, kabın doldurulmasına devam etmek için medya torbasındaki klempi çıkarın. Aşırı dolumu önlemek için medya torbasını aşağı indirerek dolum hızını yavaşlatın.Sıvı seviyesini yavaşça dolum çizgisine getirin ve sıvı aktarım tüplerini kıstırın. CSM içindeki kabı, her iki manifold setini de en yüksek konuma getirerek izolasyon konumuna alın. Besiyeri torbasını kabın yüksekliğinin altına indirin.Chase filtresi dik konumda tutulurken, chase tüp klempsini açın. Bu işlem, sıvı taşıma tüpündeki medyanın boşaltılmasını veya chase yöntemiyle medya torbasına geri gönderilmesini sağlayacaktır. Tüpler boşaldığında, medya torbası tüpü üzerindeki klempsi kapatın.Chase tüpü filtresi dik konumda tutulur. Kalan sıvının kaba girmesini ve dengelenmesini sağlamak için kabın sıvı aktarım tüpündeki klempi açın. Bu işlemin gerçekleşmesi için bir ila iki dakika bekleyin.Ardından, manifoldlar solda kalacak şekilde CSM içindeki kabı çevirin. Kabı CSM üzerindeki yükleme konumuna indirin. Hem takip hem de sıvı taşıma borularındaki klempleri kapatın.Besiyeri torbası artık kaptan çıkarılabilir veya hasat prosedüründe daha sonra kullanılmak üzere bağlı bırakılabilir. Bağlı besiyeri torbasını saklamak için, besiyeri torbasını rulo yapın ve kabın saklama tepsisindeki sabitleme bantlarının altına yerleştirin. Son olarak, kabı inkübatöre taşıyın. Kabı taşırken, hava tahliye filtresine herhangi bir sıvının girmemesine dikkat edin.Bu işlem, manifold ucunun hafifçe yukarı kaldırılmasıyla gerçekleştirilir. Hasat prosedürüne başlamak için, hücreler Ayrıştırma solüsyonu ve quenching torbalarını birbirine kaynatın. Hasat torbası düzeneğini oluştururken, tüm boru klemplerinin kapalı olduğundan emin olun. Kabı inkübatörden çıkarın ve CSM'ye yükleme konumunda yerleştirin.Medya torbasını tutucu bantların altından çıkarın ve askıya asın. Yanında durarak, kabı sabitlemek için kapağı sıkın. Havalandırma borusunu tutma klemposuna takın ve CSM'yi doldurma konumuna getirin.Besiyeri torbasının torba askısında kaptan daha aşağıda asılı olduğundan emin olun. Besiyerinin bağlı olan torbaya akmasını sağlamak için besiyeri torbası borusundaki ve kabın sıvı aktarma borusundaki klempi açın. Kap yaklaşık dörtte üç oranında boşaldığında, CSM ayarlarını nihai boşaltma konumuna getirin.Kap ve sıvı taşıma tüpleri boşaldığında, besiyerini harcanmış besiyeri torbası tüpündeki klembin ötesine itmek için tüpleri yukarı kaldırın. Ardından hem sıvı taşıma tüpündeki klembi hem de harcanmış besiyeri torbası tüpündeki klembi kapatın. Harcanmış besiyeri torbasını, tüp kaynağı yöntemiyle hasat torbası düzeneği ile değiştirin.Torba standını kullanarak hücre ayrıştırma torbası düzeneğinin yüksekliğini kabın yüksekliğinin üzerine çıkarın. CSM'yi doldurma konumuna getirin. Hücre ayrıştırma solüsyonu tüp klempsini ve hasat torbası düzeneği klempsini açarak solüsyonu kaba aktarın.Transfer işlemi tamamlandığında, sıvı aktarım borularındaki ve hücre disosyasyon solüsyonu borularındaki klempleri kapatın. Ardından, yatay konumlandırma kolunu açık tutarak CSM'yi yükleme konumuna getirin. Çarkı kullanarak kabı nazikçe iki yana sallayın ve solüsyonu hücre katmanlarına yayın.Çözeltinin eşit dağılımını sağlamak için sallama işlemi sırasında kap ara ara doldurma konumuna geri getirilebilir. Çözelti yeterince dağıtıldıktan sonra, doldurma konumunda kilitlemek için CSM üzerindeki kolu serbest bırakın. Hücreler için gerekli olan dissosiyasyon süresi boyunca kabı bu konumda bırakın.Hücre kopmasını belirlemek için kılavuz olarak bulanıklığı kullanın. Kopma gerçekleştiğinde, CSM'yi yükleme konumuna getirin. Söndürme medyasının kaba girmesini sağlamak için söndürme torbası klambini ve sıvı taşıma boru klambinini açın.Sıvı aktarım hortumundaki klempi kapatın. Aktarım tamamlandığında, CSM'yi yükleme konumuna geri getirin ve kabın yan kısmını sağa sola sallamak için yatay konumlandırma kolunu tutun. Torba standını kullanarak, hasat torbası düzeneğinin konumunu kabın seviyesinin altına indirin.CSM'yi boş konuma ayarlayın. Kap sıvı transfer borusu kelepçesini açın ve hücre solüsyonunu söndürme torbasına geri aktarın. CSM'yi yükleme konumuna getirin ve hasat torbası düzeneğini bir boru kapatıcı kullanarak kaptan ayırın.Hücre solüsyonu artık geleneksel hücre büyüme sistemlerinde işlenmeye hazırdır. Headspace ile, medyadaki oksijen üç gün boyunca ortalama %50 oranında tükenir. Kültürde, bu değer aynı büyüme sistemindeki hücre düzeyinde litre başına miligram cinsinden oksijendeki azalmayı zamanla göstermektedir; üç milimetrelik medya yüksekliği boyunca oluşan oksijen gradyanı, medya ile Headspace birleşim noktasında, hücre tabakasına kıyasla neredeyse %50 daha fazladır.Hücre büyümesi sırasında hypers yığınının trakeal boşluğundaki oksijen yüzdesi gösterilmiştir. Şekil, 96 saat boyunca, her bir gaz geçirgen film tabanını besleyen katmanlar arasındaki oksijen yüzdesinin sabit kaldığını göstermektedir. Bu durum, hücrelerin konfluense ulaşana kadar büyüme sırasında oksijene erişebilme yeteneğini kanıtlamaktadır.Bu videoyu izledikten sonra, kapalı sistemdeki Corning Hypers stack kabının nasıl doldurulacağı ve hasat edileceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.

closed-system-cell-culture-protocol-using-hyperstack-vessels-with-gas

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

6 plaka mekansal ve zamansal oksijenasyonu üzerinden gelişmiş kontrol imkanı sağlayan bir add-on bir platform imalatı ve doğrulama. Cihaz bir dizi kültür sistemleri uyarlanabilir ve yara iyileşmesi üzerine oksijen etkilerini araştırmak amacıyla kullanılabilir.

İmalat ve Operasyon yapışkan Hücresel Kültürler Oksijen Ekle

Kanser kök hücre göçü araştırılması için bir bölme oluşturan mikroakışkan cihaz tarif edilmektedir. Bu yeni platform canlı hücresel mikroçevrede oluşturur ve canlı hücre lokomosyon mikroskobik görselleştirme sağlar. Son derece hareketli kanser hücrelerinin potansiyel olarak daha etkin gelecekteki tedaviler neden agresif infiltrasyon moleküler mekanizmaları, çalışma izole edilmiştir.

Bölümlere Mikroakışkan Cihazlar ve Canlı Hücre Görüntüleme kullanma Kanser Kök Hücre Göç Değerlendirilmesi

Epitel hücreleri 3-D hücre toplam oluşumu ile sonuçlanarak, fizyolojik koşullar altında büyüyebilir olanak sağlayan bir döner hücre kültürü sistemi tarif edilmektedir. Agregalar ekran...

Kültüre ve Duvar Gemi Biyoreaktör Döner Uygulamaları 3D Epitel Hücre Modelleri Türetilmiş

Biz mikro ölçekli hücre stimülasyonu deneyler için otomatik bir hücre kültürü ve sorgulama platformu geliştirdik. Platform yetiştirilmesi ve hücrelerin küçük nüfus uyarıcı ve moleküler analizler için lizatları kurtarma, basit, çok yönlü ve hassas kontrol sağlar. Platform de değerli hücreleri ve / veya reaktif kullanmak çalışmalar için uygundur.

Mikro ölçekli Hücre Stimülasyon deneyler için Çok Yönlü Otomatik Platformu

Bu protokol, bir atıl gaz akımı kullanılarak yapışkan hücrelerin geçici nüfuziyet için bir yöntem tarif etmektedir. Bu teknik, plazma zarını bozan mekanik kuvvetlerin kullanılması ile yapışık memeli hücrelerine genetik malzeme ve biyomoleküllerin transferini kolaylaştırır.

Bir atıl gaz püskürtüsünün kullanılması Uygulanan Hücrelerinin Permeabilization

İşte pluripotent kök hücreleri (PSC) ve nöral kök hücreleri (NSC), geleneksel biyogüvenlik kabini ve inkübatörünün yerini alarak maksimum sterilite ve tekrarlanabilirliğe izin veren kapalı bir hücre kültürü sisteminde büyütmek için bir protokol. Bu ekipman, klinik iyi üretim uygulaması (cGMP) ve klinik iyi laboratuvar uygulaması (cGLP) yönergelerine uygundur.

Temel ve Klinik öncesi Araştırma bir Kapalı Hücre Kültürü Sistemi İnsan Pluripotent ve Sinir Kök Hücre Kültürleme

Burada, yüksek verimli tek hücre izolasyonu ve uzun süreli klonal kültüre izin vermek için yeni bir mikro kuyu tasarım konseptini kullanan mikroakışkan bir platformla tek hücreleri izole etmek ve kültürlemek için bir protokol sunuyoruz.

Yüksek verim Tek hücreli İzolasyonu ve Kültür mikroakışkan Platformu

Tek hücreli de iyi tanımlanmış çevre koşulları içinde kanser dinamikleri uzun vadeli gerçek zamanlı kantitatif çalışmalar için kontrol edilebilir bir platform sağlayan bir mikroakışkan kanser-on-çip modeli, "Evrim Hızlandırıcı" teknolojisi saiyoruz Düzey. Bu teknolojinin temel araştırma veya klinik öncesi ilaç geliştirme için bir in vitro model olarak çalışması beklenmektedir.

Gerçek Zamanlı Gözlem için Mikroakışkan Evrim Hızlandırıcı kanser popülasyonları arasında Heterojen İlaç Gradyanların Üretimi

Burada, bir ters akış santrifüjleme sistemi kullanarak çok katmanlı şişelerden yapışkan hücreleri kapalı yarı otomatik bir şekilde toplamak için bir protokol sunuyoruz. Bu protokol, mevcut adımlarda birkaç değişiklikle diğer hücre genişletme platformlarından hem yapışkan hem de süspansiyon hücrelerini toplamak için uygulanabilir.

Kapalı Yarı Otomatik İş Akışı Kullanarak Klinik Uygulamalar için İnsan Mezenkimal Kök Hücre İşleme

Burada, GMP sınıfı çözünebilir mikro taşıyıcılara dayanan tamamen kapalı bir sistem aracılığıyla yapışık hücrelerin büyük ölçekli üretimini gerçekleştirmek için bir protokol sunuyoruz. İnsan mezenkimal kök hücrelerinin, HEK293T hücrelerinin ve Vero hücrelerinin yetiştirilmesi doğrulandı ve hücre ve gen terapisi endüstrisi için hem miktar taleplerini hem de kalite kriterlerini karşıladı.

GMP Sınıfı Çözünebilir Gözenekli Mikro Taşıyıcılara Dayalı Büyük Ölçekli Hücre Üretimi

Öğrenin, gaz geçirgen HYPERStack kapalı sistem hücre kültürü protokolünü kullanarak yüksek verimli yapışkan hücre hasadı için etkili dolum ve hasat yöntemlerini. Bu teknik kontaminasyon riskini azaltır.

Gaz Geçirgen Malzeme Teknolojisi HYPERStack gemiler Kapalı Sistem Hücre Kültürü Protokolü

Daha fazla video keşfet