Name: Tavuk İşitsel Beyin Sapı Dilimleri hazırlanması ve Kültür (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-03-21T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 16 s
Description: Öğrenin, tavuk işitsel beyin sapı dilimlerinin hazırlanması ve kültürü için bu yöntemi. Embriyo diseksiyonu, beyin izolasyonu ve vibratom ile dilimleme adımlarını keşfedin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Mevcut ve eski Rubel laboratuvar üyeleri.

1. Alan Diseksiyon hazırlanması <ol><li> Kabarcık (pH 7,2-7,4 arasında, ozmolarite 295-310 mOsm / l)% 95 O 2 /% 5 CO2 karışımı ile sürekli yapay beyin omurilik sıvısı (ACSF). </li><li> ACSF köpürme iken,% 70 EtOH ile çalışma alanı temizleyin. Vibratome ve dilimleme bıçağı temizleyin. Distile su (dH 2 O) ile durulayın bıçak. </li><li> Uygun kesme aletleri ile diseksiyon alanı temiz sıvı emilimi pedi yerleştirin. </li><li> Tutkal vibratome-dilimleme odasının sahneye agar bloğu (40 mg agaroz dH 2 O / ml, yani% 4,) *. * İpucu: diseksiyon önce agar hazırlamak. Buzdolabında kapalı bir petri içinde Mağaza önceden yapılmış agar. Agaroz Merck Kimyasallar veya Invitrogen satın aldı. </li></ol> 2. 6-Kültür ve Orta iyi Tabaklar hazırlanması <ol><li> Steril bir Kaputun altında, 1 ml kültür ortamı ve inkübe 35 ile 6 plaka hayvan başına 1 doldurmak ° C ve% 5 CO 2. </li><li> Gerektiği gibi gibi birçok kültür membran ekler hazırlayın ve daha sonra kullanmak için bir başlık koyun. </li></ol> 3. Tavuk İşitsel Beyin Sapı, İzolasyon <ol><li> Yeri yumurta embriyo (genellikle yumurta büyük yan) hava dolu bir uzay boşluğu belirlemek için parlak bir ışık kaynağının altında. </li><li> Membran kese açığa yumurta büyük bir tarafı açık kırın. Bistüri ile zar kese dilim olun ve tavuk embriyo baş hafifçe kaldırın. </li><li> Hızla makasla başkanı başını kesmek. </li><li> Yeri ve gözler arasında biraz arka jilet ucu. Sadece hafif bir basınç uygulayarak kafatası yoluyla bir rostral-kaudal orta hat insizyonu olun *. * İpucu: uygulanan basınç, embriyonun yaşına bağlıdır (yani, genç = daha az, daha büyük = daha fazla) </li><li> Deri ve tüy, kafatası maruz ve orta hat kesme doğrulamak için yavaşça kenara itin. </li><li> Bir jilet ile dilimleme kafatası rostral kısmı engelleyin. Gözleri posterior ve hızla tüm kafatası ve beyin dokusu kesti Pozisyon bıçak *. * İpucu: güçlü bir baskı rostral bölümü tamamen kaldırmak için gereklidir. </li><li> Başın her iki tarafında görülebilir boyun kasları biraz ön kafatası kaudal bölgede küçük makas, orta hat-lateral insizyon olun. Kafatası ve maruz serebellum ve beyin doku dışarı doğru çekin. </li><li> Bağlı doku, küçük makas ile keserek hafifçe kafa tabanı, beyin sapı çıkarın. Tüm doku kesilir sonra, beyin, kafatasının uzakta serbestçe hareket etmelidir *. * İpucu: Eğer kafatası (beyin aşağı) bağlı doku kesmek için çevirmek gerekebilir. </li></ol> 4. Dilimleme için Beyinsapı hazırlanması <ol><li> Kafatası çıkarıldı, optik tecta aracılığıyla beyin sapı aşağı pin. </li><li> Tamamen beyincik hafifçe peduncles, küçük bir makas ile kesme, dördüncü ventrikül zemin açığa çıkarın. </li><li> Cımbız ile beyin yüzeyinde herhangi bir membranöz doku ve kan damarı çıkarın ve beyin sapı izole optik tecta ile yan keser. </li><li> Agar bloğu önünde vibratome aşaması (vibratome bıçak doğru), süper yapıştırıcı küçük bir miktar koyun. </li><li> Cımbız kullanarak, nazik ve hızla vibratome bıçak aşağı doğru rostral tarafında ve sırt tarafında, omurilik ve yer doku süper yapıştırıcı üzerine beyin sapı kaldırma *. * İpucu: aşırı yapıştırıcı ile absorbe edilmelidir kim-silin ya da bir sonraki adım önce kağıt filtre. </li><li> Oksijenli ACSF vibratome aşamasında içine yavaşça dökün *. * Not: Bu ACSF sürekli O 2 / CO 2 ile kabarmış olabilir. Ancak, beyin sapı dilim istenmeyen hareketi çözüm sonuçlarının gibi küçük bir hacim (ve olası hasar) ACSF, köpürme. Hızla gerçekleştirildiği takdirde, zaten diseksiyonu ACSF yeterli oksijenli. </li><li> Vibratome bıçak 20-22 ° açı olmalıdır. Başlangıç ​​vibratome (salınım maksimum genlik set olması lazım) ve doku üst dilimleme önce bıçak ile paralel olacak şekilde bıçak doğru sahne yukarı taşımak. </li><li> Beyin sapı doku hızla doğru bıçak taşıyın. , Doku ile bıçak temas ölçüde hemen önce yavaşlayın. </li><li> Yavaş mümkün ileri hareket doku dilimleme başlayın. Tüm doku koronal bölümü aracılığıyla, nazik bir fırça ya da kırık bir cam dilim bıçak uzaklaşmaya, cilalı pipet lastik bir ampul ile bir ucunda uygun ateşledi. </li><li> Alt 300-500 mikron adımları sahne ve tekrar dilim. Anatomik imzaları beyin sapı doku görünür olana kadar bu işlemi tekrarlayın. Şu anda, 200-1000 mm dilim beyin sapı işitsel yapıları içeren doku, doku ve deneysel ihtiyaçları yaşına bağlı olarak, kalınlıkları. </li><li> Dikkatli bir şekilde korumak, yani dilimleme amacıyla kullanılabilir dilim 1. dilim devrenin en kaudal bölge (düşük frekanslı ses işleme) temsil eden ve son dilim en rostral bölümü (yüksek frekanslı processi temsil ederng) *. * Not: kültür kullanmak için dilimleri yerleşim için, bölüm 6 gitmek. In-vitro fizyoloji depolama için, bir sonraki bölüme bakın. </li></ol> 5. In-vitro Fizyolojisi Dilim Depolama <ol><li> Her hayvan, tavuk embriyo ve dilim kalınlığı yaşına bağlı olarak 1 ila 6 dilim vermelidir. </li><li> Yavaşça lastik bir ampul bir ucuna monte yangın parlatılmış cam pipet kullanarak odasında tek tek dilimleri yerleştirin. Odası numaralı olmalıdır. Bazı tonotopic özgüllük (örneğin, 1 kamara en kaudal dilim ve son odasında en rostral dilim) korumak için, yanı başına sadece bir dilim koyun. Odası ACSF ile dolu ve sürekli olarak% 95 O 2 /% 5 CO 2 (pH 7.4, ozmolarite 295-310 mOsm / l) oluşan bir karışım ile kabarmış olmalıdır. </li><li> Dilimleri, yaklaşık 1 saat (36 ° C) ılık bir banyo odasının koyarak gelmesini sağlayınız. </li><li> Ilık bir banyo odasının çıkartın ve oda sıcaklığında yaklaşık yarım saat dinlenmek için izin. </li><li> Oda sıcaklığında yarım saat sonra, dilimler elektrofizyolojik deneyler için bir mikroskop üzerine monte ~ 0.5 mL kayıt odasına tutarak odasına transfer olabilir. </li><li> Dilimler çıkarıldıktan sonra sıcak bir banyo ~ 6 saate kadar kullanılmış olabilir. </li></ol> 6. Organotipik Dilim Kültürler hazırlanması 8 <ol><li> Hemen transferi dilim bir ucunda bir buz üzerinde 48 plaka bir kauçuk ampul takılmış yangın parlatılmış cam pipet kullanarak ~ 500 mcL ACSF dilimleme prosedürü izleyerek (bkz. Bölüm 6). Bir de her dilim *. * İpucu: Dilimler, en az 300 mm ve 1000 mm kalınlığa kadar olması gerekir. </li><li> Dilimleri toplanmıştır sonra, kaput 48-plaka aktarın. </li><li> 6-iyi bir kuluçka plaka içeren kültür ortamı dışarı çıkarın ve kaput transfer. </li><li> Hemen önce iyi bir kültür ortamı ile (bkz. Bölüm 2.2), membranlar üzerine tek bir beyin dilimleri hazırlanan membran ekler birini yerleştirerek. Hiç hava kabarcığı membran altında bulunduğundan emin olun. </li><li> Cam bir pipet kullanarak, bir dilim ACSF kültür membran üzerine bir damla transferi ve mikropipet aşırı ACSF kaldırmak. Kalan dilimleri için bu işlemi tekrarlayın (membran başına azami 4 dilim) *. * İpucu: dilim membran jant dokunmayın böylece membran merkezi birbirine temas ve yer dilim yok emin olun. </li><li> Gerektiği gibi birçok beyin dilimleri için tekrarlayın *. * İpucu: kültürler, daha sonraki bir zaman noktada manipüle Eğer kültürler inkübatör kaldırılır süresini azaltmak için, 6-plaka başına 3 membran miktarını sınırlamak için avantajlı olabilir. </li><li> Kültür ortamı haftada 3 kez bir başlık altında değiştir: membran eklemek iyi bir çift forseps kaldırdı ise, bir vakum tüp steril bir ucu eski orta çıkarın. Iyi membran eklemek iyi kaldırdı ise 1 ml taze kültür ortamı ekleyin. Tüm orta değiştirildiğinde, kuvöz içine arka plaka koymak. </li></ol> 7. Temsilcisi Sonuçlar: <img src="/files/ftp_upload/2527/2527fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1. Tavuk işitsel beyin sapı Binaural devresi koronal bir bölümünün (A) Şematik ve tavuk işitsel beyin sapı (BF), in-vitro dilim görüntüler. (A) devre nükleus magnocellularis (NM) ve çekirdek angularis (NA) işitme siniri (AN) afferent eksitatör girişleri gösterir. NM nükleus laminaris (NL), beyin sapı her iki iki tarafında ikili eksitatör giriş projeler. NA, NM ve NL üstün olivary çekirdeği (SON) projeleri inhibitör giriş. De in-vitro dilimleri (BF), ardışık görüntüler yüksek frekans bölgelerinde düşük temsil kaudal (B) tavuk işitsel beyin sapı rostral (F) (her biri 200 mikron), sırasıyla . Devresi, öncelikle ses lokalizasyonu için kullanılan ses zamansal özellikleri kodlama için sorumludur. Ölçek çubuğu IN (B) = 500 mikron ve görüntüleri (CF) için de geçerlidir. NL, tek bir hücre gövdesi katmanı, (D) noktası oklar. <img src="/files/ftp_upload/2527/2527fig2.jpg" alt="Şekil 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2. Kültüre nöronların normal fizyolojik yanıtı özellikleri gelişir. Akut (A &amp; C) ve 4 (B) ve 7 (D) kültürü gün (DIC) kültüre doku geçerli adımları hiperpolarizan ve depolarizan yanıt membran voltaj değişiklikleri süperempoze. Not yaş eşdeğer akut doku ile karşılaştırıldığında dilim kültür yaklaşımı benzer şekilde gelişir gerilim "sarkma", dışa akım güçlü bir azalma, tek bir AP ateş hiperpolarizan değişir. Şu enjeksiyonları 50-100 pA 200 ms, adımları. RMPs -55 ve -60 mV arasında idi. <img src="/files/ftp_upload/2527/2527fig3.jpg" alt="Şekil 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 3"> Şekil 3. Kültür sli anatomik yapısıces E11 kültür 7 gün sonra bir tavuk (DIC), işitsel beyin sapı Sol yarısı. Soma ve dendritler oluşur mikrotübül ilişkili protein 2 (map2), karşı bir antikor, yeşil etiketli. Bir küme çekirdeği magnocellularis (NM) nöron ve aksonlar bir Alexa dekstran boya elektroporasyon yoluyla kırmızı olarak etiketlenir. NM ve NL hücre hattı her ikisi de görülebilir. Ipsilateral NM akson terminalleri dorsal NL dendritler (beyaz ok başları) için projelendirme görülebilir.

<ol><li>Howard, M. A., Burger, R. M., Rubel, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+developmental+switch+to+GABAergic+inhibition+dependent+on+increases+in+Kv1-type+K%2B+currents%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">A developmental switch to GABAergic inhibition dependent on increases in Kv1-type K+ currents.</a> J Neurosci. 27, 2112-2123 (2007).</li>
<li>Kuba, H., Koyano, K., Ohmori, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+membrane+conductance+improves+coincidence+detection+in+the+nucleus+laminaris+of+the+chicken%5BTitle%5D)+AND+%22J+Physiol%22%5BJournal%5D)">Development of membrane conductance improves coincidence detection in the nucleus laminaris of the chicken.</a> J Physiol. 540, 529-542 (2002).</li>
<li>Gao, H., Lu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+development+of+intrinsic+and+synaptic+properties+of+chicken+nucleus+laminaris+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Early development of intrinsic and synaptic properties of chicken nucleus laminaris neurons.</a> Neuroscience. 153, 131-143 (2008).</li>
<li>Sanchez, J. T., Wang, Y., Rubel, E. W., Barria, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+glutamatergic+synaptic+transmission+in+binaural+auditory+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Development of glutamatergic synaptic transmission in binaural auditory neurons.</a> J Neurophysiol. 104, 1774-1789 (2010).</li>
<li>Jackson, H., Hackett, J. T., Rubel, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organization+and+development+of+brain+stem+auditory+nuclei+in+the+chick%3A+ontogeny+of+postsynaptic+responses%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Organization and development of brain stem auditory nuclei in the chick: ontogeny of postsynaptic responses.</a> J Comp Neurol. 210, 80-86 (1982).</li>
<li>Rubel, E. W., Parks, T. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organization+and+development+of+brain+stem+auditory+nuclei+of+the+chicken%3A+tonotopic+organization+of+n.+magnocellularis+and+n.+laminaris%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Organization and development of brain stem auditory nuclei of the chicken: tonotopic organization of n. magnocellularis and n. laminaris.</a> J Comp Neurol. 164, 411-433 (1975).</li>
<li>Rubel, E. W., Smith, D. J., Miller, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organization+and+development+of+brain+stem+auditory+nuclei+of+the+chicken%3A+ontogeny+of+n.+magnocellularis+and+n.+laminaris%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Neurol%22%5BJournal%5D)">Organization and development of brain stem auditory nuclei of the chicken: ontogeny of n. magnocellularis and n. laminaris.</a> J Comp Neurol. 166, 469-489 (1976).</li>
<li>Stoppini, L., Buchs, P. A., Muller, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+for+organotypic+cultures+of+nervous+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">A simple method for organotypic cultures of nervous tissue.</a> J Neurosci Methods. 37, 173-182 (1991).</li>
<li>Reyes, A. D., Rubel, E. W., Spain, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Membrane+properties+underlying+the+firing+of+neurons+in+the+avian+cochlear+nucleus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Membrane properties underlying the firing of neurons in the avian cochlear nucleus.</a> J Neurosci. 14, 5352-5364 (1994).</li>
<li>Monsivais, P., Rubel, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accommodation+enhances+depolarizing+inhibition+in+central+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Accommodation enhances depolarizing inhibition in central neurons.</a> J Neurosci. 21, 7823-7830 (2001).</li>
<li>Lu, T., Trussell, L. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+elimination+of+endbulb+synapses+in+the+chick+cochlear+nucleus%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Development and elimination of endbulb synapses in the chick cochlear nucleus.</a> J Neurosci. 27, 808-8017 (2007).</li>
<li>Kuba, H., Yamada, R., Fukui, I., Ohmori, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tonotopic+specialization+of+auditory+coincidence+detection+in+nucleus+laminaris+of+the+chick%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Tonotopic specialization of auditory coincidence detection in nucleus laminaris of the chick.</a> J Neurosci. 25, 1924-1934 (2005).</li>
<li>Trussell, L. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+mechanisms+for+preservation+of+timing+in+central+auditory+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Cellular mechanisms for preservation of timing in central auditory pathways.</a> Curr Opin Neurobiol. 7, 487-492 (1997).</li>
<li>Trussell, L. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synaptic+mechanisms+for+coding+timing+in+auditory+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Annu+Rev+Physiol%22%5BJournal%5D)">Synaptic mechanisms for coding timing in auditory neurons.</a> Annu Rev Physiol. 61, 477-496 (1999).</li>
<li>Sorensen, S. A., Rubel, E. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+level+and+integrity+of+synaptic+input+regulates+dendrite+structure%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The level and integrity of synaptic input regulates dendrite structure.</a> J Neurosci. 26, 1539-1550 (2006).</li>
</ol>

Birkaç on yıl için, akut dilim hazırlık tavuk beyin sapı işitsel işleme 9, 10 çalışma için kullanılır olmuştur. Bu yaklaşım, muazzam bir gelişim ve olgun hem de devletler 4, 11, 12 Binoral işleme in-vitro fizyolojik verilerin miktarı sağladı . Bu son derece özel bir devre ve her bir çekirdeği, 13, 14 ses temporal işleme oynadığı rol hakkında çok bilinir. Aslında, bu iyi karakterize bir devre yapısı ve işlevi, kısa vadeli deneysel manipülasyonlar ve etkileri avantajlı ...

<table><tbody><tr><td>&lt;güçlü&gt;Tavuk ACSF (Yapay Beyin Omurilik Sıvısı)&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td></td><td>Fisher Scientific</td><td>M-11624</td><td>130 mM</td></tr><tr><td>NaHCO₃&lt;sub&gt;3&lt;/sub&gt;</td><td></td><td>Fisher Scientific</td><td>M-10576</td><td>26 mM</td></tr><tr><td>KCl</td><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P-9333</td><td>3 mM</td></tr><tr><td>NaH&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;PO&lt;sub&gt;4&lt;/sub&gt;</td><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S-8282</td><td>1,25 mM</td></tr><tr><td>Glikoz</td><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G-7528</td><td>10 mM</td></tr><tr><td>MgCl2&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;</td><td></td><td>Fisher Scientific</td><td>M33-500</td><td>1 mM</td></tr><tr><td>CaCl₂&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;</td><td></td><td>Acros Organics</td><td>423525000</td><td>2 mM</td></tr><tr><td>&lt;güçlü&gt;Tavuk kültür ortamı (4°C'de saklayın)&amp;#x00B0;C)&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ileri düzey minimum esansiyel ortam (NEAA ve 110 mg/l sodyum piruvat içeren, L-glutamat içermeyen)</td><td></td><td>Life Technologies ürünü GIBCO</td><td>12492-013</td><td>48.00%</td></tr><tr><td>Earl&amp;rsquo;dengeli tuz çözeltisi</td><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E-2888</td><td>24.00%</td></tr><tr><td>L-glutamin (200 mM)</td><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G-7513</td><td>1.00%</td></tr><tr><td>Glikoz çözeltisi (200 g/l, steril filtre edilmiş)</td><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G-7528</td><td>2.75%</td></tr><tr><td>at serumu (ısı ile inaktive edilmiş, steril filtrelenmiş)</td><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H-1138</td><td>24.00%</td></tr><tr><td>Penisilin-streptomisin*</td><td></td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P-0781</td><td>1,00 ml&lt;br/&gt;* = Kontaminasyonu önlemek için gerekirse 100 ml kültür ortamına ekleyin</td></tr><tr><td>&lt;güçlü&gt;Özel ekipmanlar&lt;/strong&gt;</td><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Millicell-CM hücre kültürü insertleri</td><td>PICMORG50</td><td>EMD Millipore</td><td></td><td></td></tr><tr><td>6 kuyucuklu plaka</td><td>6 Kuyucuklu Hücre Kültür Kümesi</td><td>Corning</td><td></td><td></td></tr><tr><td>İnkübatör</td><td>Forma Scientific CO&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; Su Ceketli İnkübatör</td><td>Forma Scientific</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

tavuk İşitsel beyin sapı dilimleri hazırlanması ve kültür

Preparation and Culture of Chicken Auditory Brainstem Slices

Tavuk işitsel beyin sapı, yaygın kalkınma 1-4 sağduyulu dönemlerde de, merkezi sinir sistemi 5-7 temporal kodlama için mekanizmaları gibi işitsel işleme anatomi ve fizyoloji çalışmak için kullanılan bir köklü bir model sistem. Burada akut deneysel yöntemler ya da uzun vadeli deneysel manipülasyonlar için kültür Organotipik dilim kullanılabilir tavuk işitsel beyin sapı dilimleri hazırlamak için bir yöntem mevcut. Tavuk işitsel beyin sapı, magnocellularis, laminaris ve üstün zeytin çekirdeği angularis oluşmaktadır. Bu çekirdeklerin Binoral ses işleme ve tek koronal dilim hazırlıkları tüm devreleri korumak için sorumludur. Sonuçta, Organotipik dilim kültürleri, sinaptik aktivite, pre ve postsinaptik bileşenler ifade, uyarılabilirlik ve diferansiyel gen ekspresyonu yönlerini kontrol ifade gibi çeşitli gelişimsel parametreleri işlemek için fırsat sağlayabilir Bu yaklaşım, nöral devre geliştirme, arıtma ve olgunlaşma hakkında genel bilgi genişletmek için kullanılabilir.

Tavuk işitsel beyin sapı Binoral ses işleme için sorumlu çekirdekleri oluşur. Kültürlü bir yaklaşım, nöron yapısı ve işitsel fonksiyonu, moleküler, hücresel ve ağ seviyelerinde gelişimini incelemek için eşsiz bir hazırlık sağlarken tek bir koronal dilim hazırlık tüm devre tutar.

Tavuk İşitsel Beyin Sapı Dilimleri hazırlanması ve Kültür

Tavuk işitsel beyin sapı, ... düzeyindeki işitsel işlemenin anatomisini ve fizyolojisini incelemek için yaygın olarak kullanılan, kendini kanıtlamış bir model sistemdir.

Bu prosedürün genel amacı, in vitro tüm hücre fizyolojisi veya uzun süreli organotipik kültürlerde kullanılmak üzere tavuk işitsel beyin sapı kesitleri hazırlamaktır. Bu işlem, öncelikle embriyonun yumurtadan çıkarılmasıyla gerçekleştirilir. Prosedürün ikinci adımı ise beynin kafatasından diseke edilmesi ve işitsel beyin sapı bölgesinin izole edilmesidir.Prosedürün üçüncü adımı, bir viome üzerinde beyinsapı bölgesi kesitleri hazırlamaktır. Prosedürün son adımı ise beyinsapı kesitlerini fizyolojik kayıtlar için bir hazneye veya kültürleme için Millipore plaklarına yerleştirmektir. Nihayetinde, fizyolojik kayıtlar veya uzun süreli organotipik kültürler aracılığıyla tavuk embriyolarından elde edilen sağlıklı işitsel beyinsapı kesitlerini gösteren sonuçlar elde edilebilir.Merhaba, benim adım Armand Sidle. Bu yöntem, kuşların işitsel gelişimine dair içgörü sağlayabileceği gibi, bu binaural işitsel devrenin benzersiz yapısı ve fonksiyonu sayesinde topografik akson rejenerasyonunu, dendrit dinamiklerini, ayrıca intrinsik ve sinaptik özellikleri incelemek için de kullanılabilir.Genellikle, bu tekniği yeni öğrenen kişiler zorluk yaşayacaktır. Fizyolojik ve kültür yaklaşımları için canlı örn

preparation-and-culture-of-chicken-auditory-brainstem-slices

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Bu piramidal nöronların elektriksel kayıtlar yapma amaçlı bir Organotipik kültür neokortikal dilim hazırlama hazırlamak ve sürdürmek için bir protokoldür.

Neokorteks bir Organotipik Dilim Hazırlık Tüm Hücre Kaydı

Bu video, laboratuvar ortamında kama şeklinde beyin dilimleri hazırlama sürecini göstermektedir. Bir vibratom kullanılarak, bir farenin beyninden kama şeklinde bir dilim, değişen kalınlıklarda hazırlanır. Bu dilim daha kalın uçta yer alan işitme sinir kökünü içerirken, daha ince uçta işitme ile ilgili nöronlar yer alır.

İşitsel Nöronları Görselleştirmek için Kama Beyin Dilimlerinin Hazırlanması

Video, beyincik dilimlerinin hazırlanışını göstermektedir. Beyinciğin bir civciv embriyosundan izole edilmesi için ayrıntılı bir prosedür gösterir. Dilimler daha sonra daha fazla deneysel analiz için bir doku kıyıcı kullanılarak diseke edilmiş beyincikten hazırlanır.

Embriyonik Civciv Beyninden Beyincik Dilimleri Elde Edilmesi

Dilim kültürleri gen ve farmakolojik tedirginliklerin tarafından embriyo gelişiminin manipülasyonu kolaylaştırır. Ancak, kültür koşullarının normal gelişim dilim azalır ortamında devam edebilirsiniz emin olmalısınız. Biz en az 24 saat süreyle devam etmek omurilikteki normalde gelişimi kolaylaştıran bir protokol göstermektedir.

Tavuk embriyo Omurilik Dilim Kültür Protokolü

Burada sinir ve arka beyin işitsel akson liflerinin izleme seçici için erken civciv embriyo akustik ganglion içine floresan boya enjeksiyonu takiben mikrodiseksiyon tekniği tarif.

Kuş Embriyonik vestibülokoklear sinir İşitsel Elyaf seçici Aydınger

Salınımlar temel ağ özellikleri ve hastalık ve ilaçlarla modüle edilir. Beyin dilim salınımlar incelenmesi kontrollü koşullar altında izole ağların karakterizasyonu sağlar. Protokoller CA1 γ salınımları çağrıştıran akut beyin dilimleri hazırlanması için temin edilmiştir.

Tetanik Uyarım tarafından Yerel CA1 γ Titreşim Üretimi

Serebellar dış granül tabakası gelişmekte olan beyinde büyük Transit amplifikasyon sitedir. Burada, embriyonik Gün 14 civciv embriyolardan ex vivo elektroporasyon ve serebellar dilim kültürü kullanarak çoğalması zirvesinde bu tabakaya genetik modifikasyon hedeflemek için bir protokol mevcut.

Ex Vivo Chick Serebellar Dilimleri Kültür ve Mekansal Elektroporasyon granül hücre öncülerinin Hedefli

Kuş ve memelilerin işitsel beyin sapı nöronları, normal işitme işlevleri için temel bir süreç olan hızlı sinirsel kodlama için uzmanlaşmıştır. Bu nöronlar, embriyonik arka bedenin belirgin öncüllerinden kaynaklanmaktadır. İşitme gelişiminde gen işlevini incelemek için tavuk embriyolarının arka bacasında genleri ifade etmek için elektroporasyon teknikleri sunuyoruz.

Tavuk İşitsel Beyinsapındaki Ovo Elektroporasyonunda

Bu iletişim kuralı hem görsel olarak beyin-omurilik hazırlık iletişim kurar ve beyin sapı enine dilimleri hazırlanması kapsamlı adım adım bir şekilde açıklar. Bu tekrarlanabilirlik artırmak ve beyin solunum bölgelerinden sinir çıkış kayıt için uygun, uzun ömürlü, ritmik aktif dilimleri elde etme olasılığını artırmak için tasarlanmıştır.

Ritmik aktif hazırlanması Vitro yenidoğan kemirgen beyin-omurilik ve ince dilim

Nöronlar için çeşitli sinaptik girdilerin entegrasyonu en iyi doğal zamanlama ve devre plastisite için tüm pre-sinaptik çekirdekleri koruyan bir hazırlık ölçülür, ancak beyin dilimleri genellikle birçok bağlantıları sever. In vitro deney yeteneğini korurken in vivo devre aktivitesini taklit etmek için değiştirilmiş bir beyin dilimi geliştirdik.

In Vitro Kama Dilimi In Vivo Nöronal Devre Bağlantısı Nın TaklitI Için Hazırlık

Burada, bir beyin sapı dilimi içinde tonotopik özelliklerin ve gelişimsel yörüngelerin araştırılması için tavuk embriyosunun koronal olmayan işitsel beyin sapı dilimlerinin elde edilmesine yönelik bir protokol sunuyoruz. Bu dilimler, geleneksel koronal kesitlerin tek bir dilim düzlemi içindeki daha büyük tonotopik bölgeleri kapsayan sagital, yatay ve yatay / enine bölümleri içerir.

Tonotopik gradyanları ve mikrodevreleri değerlendirmek için embriyonik tavuk işitsel beyin sapının dilimlenmesi

Öğrenin, tavuk işitsel beyin sapı dilimlerinin hazırlanması ve kültürü için bu yöntemi. Embriyo diseksiyonu, beyin izolasyonu ve vibratom ile dilimleme adımlarını keşfedin.

Tavuk İşitsel Beyin Sapı Dilimleri hazırlanması ve Kültür

Daha fazla video keşfet