Name: Subkutan Enfeksiyon Metisiline Dirençli Stafilokok Aureus (MRSA) (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-02-09T18:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 18 s
Description: Öğrenin, farelerde subkutan MRSA enfeksiyon modeli kurarak bakteri yayılımını ve sitokin yanıtlarını incelemeyi. Bu yöntem, virülans ve bağışıklık dinamiklerini değerlendirmek için kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışma, Burroughs-Wellcome Kariyer Ödülü ve GY Liu Sağlık hibe AI074832 Ulusal Sağlık Enstitüleri tarafından desteklenmiştir.

1. Enfeksiyon MRSA (Enfeksiyon önce iki Gün) Hazırlama <ol><li> Bir hisse senedi kültürünün bir kan agar (Triptikaz Soya Agar (TSA)) plaka MRSA loopful İnokülasyon. </li><li> Kanlı agar plaka üzerinde hemoliz fenotip (her koloni etrafında açık bir bölge) kontrol edin. </li><li> Diğer deneylerin tutarlı bir hemolitik fenotip bir koloni seçin. </li><li> 15 ml snap-kapaklı tüp, tahsis antibiyotik gerektiğinde, 3 ml Todd Hewitt Broth (THB) koloni İnokülasyon. </li><li> 37 ° ° C'de 220 rpm'de sallayarak ile geceleme. </li></ol> 2. Enfeksiyon Fare hazırlanması (Hastalığın bir Gün önce) <ol><li> Farelerin büyüklüğüne bağlı olarak, 3 x 4 cm alan farelerin arka kapalı kürk tıraş. </li><li> ~ 5 mm 3 tüy dökücü krem (yerel bir uyuşturucu deposu satın) traş bölgeye uygulayın. </li><li> Tüy dökücü krem, cilt yüzeyinde yaklaşık 1 dakika inkübe izin verin. </li><li> GKD 2 O ıslak kağıt havlu </li><li> Tüy dökücü krem, ıslak kağıt havlu ile silin. </li></ol> 3. (Day Enfeksiyon) Enfeksiyon MRSA hazırlanması <ol><li> 50 ml vidalı kapaklı tüp içinde, önceden ısıtılmış THB 10 ml 1:500 1:1000 için gecelik bakteri kültürü sulandırınız. </li><li> 37 ° C yaklaşık 2,5 saat için bir 540 2.5 ulaşıncaya kadar, 220 rpm'de titreme ile inkübe. </li><li> 4, 10 dakika süreyle 3225 xg'de santrifüj yoluyla MRSA toplayın ° C </li><li> Süpernatantı atın. </li><li> Bakteriyel pelletini tekrar 10 ml Dulbecco'nun fosfat tamponlu salin (DPBS). </li><li> 3. ve 4. adımları tekrarlayın. </li><li> DPBS içinde istenilen konsantrasyonda bakteri pelletini tekrar. </li><li> 8 Ekim - 1 Ekim seri bakteriyel süspansiyon sulandırmak. </li><li> Plaka kanlı agar plakaları üzerine seyreltilmiş bakteriyel süspansiyon. </li><li> ° C gecede 37 plakalar inkübe edin. </li><li> Gözlemleyin ve inocula hemolitik fenotip kayıt. </li><li> Plaka üzerinde Birimleri oluşturulması Colony (CFU) sayısını saymak. </li><li> Inocula plaka CFU sayısına göre hesaplayın. </li></ol> 4. Subkutan Enfeksiyon MRSA (Day Enfeksiyon ve enfeksiyon sonrası 3 Gün) <ol><li> Traş alanda subkutan 100 mcL bakteriyel süspansiyon enjekte edilir. </li><li> Farelerin hayatta emin olmak için enjeksiyon sonrası 3 ila 5 saat hayvanları gözlemleyin. </li><li> Günlük hayvanların geri lezyon gözlemleyin ve gerektiğinde günlük lezyon alanı kaydı. Lezyon gözlem, lezyon büyüklüğü ve morfolojisi kayıt içermelidir. Her iki kas ve deri lezyonlarının lezyonun uzunluğu ve genişliği çarpılarak quantitated. Düzensiz şekilli lezyonlar, daha küçük simetrik parçalar halinde parçalanır ve her bir parçanın aynı yöntemi ile ölçülür olması gerekir. Lezyon ölçümler bilgisayar destekli histomorfometrik değerlendirme programı (NIH kullanılabilir açık kaynak ImageJ kullanabilirsiniz <a href="http://rsb.info.nih.gov/ij">http://rsb.info.nih.gov/ij/</a> 2). </li><li> Servikal dislokasyon izofluran inhalasyonu gün 3 sonrası enfeksiyon hayvanların Kurban. </li><li> Gözlemleyin ve cilt üzerinde lezyon kayıt. </li><li> Steril makas bir çift Nick cilt. </li><li> Cildin soyulmasına dikkatli ve gözlemlemek ve kas lezyon kaydetmek. </li><li> Vergi lezyon ve yaklaşık 2 - 5 mm çevresi. </li><li> Dalak ve böbrekler toplayın. </li><li> Bir doku Homojenizatör kullanarak dokular homojenize veya doku ve DPBS 100 mcL içeren bir mikrofuge'de tüpüne 1 ml şırınga pistonu tekrarlanan uygulama tarafından. </li><li> Her bir tüp DPBS 900 mcL ekleyin. </li><li> 5 dakika boyunca vorteksleyin örnekleri. </li><li> Seri DPBS 10 1 10 6 süspansiyon sulandırmak. </li><li> Plaka TKP plakalar üzerinde seyreltilmiş süspansiyonlar. </li></ol> 5. Temsilcisi Sonuçlar: <ol><li> Hemen her subkutan enjeksiyondan sonra, bir bleb enfeksiyonu (Şekil 1A) doğru bir şekilde yapılırsa, deri yüzeyinde görülen olacaktır. Bleb deri yüzeyinde görülürse, enjeksiyon çok derin olabilir ve bu enfeksiyon (lezyon boyutu, CFU) sonucu etkileyebilir. </li><li> Bakteriyel süspansiyon seri seyreltilerek gereken ve CFU her bir deney için kan agar plaklarına incelenmesi gerekir. 1) inocula homojen fenotip olup olmadığını; 2) enfeksiyon için tam bir canlı bakteri sayısı: Bu adım önemli bilgiler verecektir. </li><li> Lezyonlar ve bakteriyel hayatta kalma, çeşitli zaman noktalarında sonrası enfeksiyon değerlendirilebilir. Burada, 3. gün sonrası enfeksiyon, enfeksiyon inceledi. Lezyon boyutları cilt yüzeyi (: 1x 10 9 Şekil 1D: Şekil 1B 1 x 10 7 CFU) analiz edilir ve kas yüzeyi (Şekil 1C: 1x 10 9 7 CFU). Lezyon alanı (mm) x genişliği (mm) (Şekil 2 A ve B) doku hasarı değerlendirmek için ölçülen olabilir süresini eşittir. Bu sonuç, belirli bir virülans faktörü doku hasarı ölçüde belirlemenize yardımcı olabilir. Ayrıca, lezyonlar eksize ve DPBS homojenize ve enfeksiyon yerinde bakterilerin canlılığını gösterir CFU numarası (Şekil 2C), ölçmek için kaplama. </li></ol><img src="/files/ftp_upload/2528/2528fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1. Cilt ve kas lezyonları CD1 fareler MRSA (LAC) ile bir kanadında subkutan ekildi. Resimleri zaman 0 ve 3. gün sonrası enfeksiyon alınmıştır. (A) Zaman 0 sonrası enfeksiyon (pi), (B) - (G) 3. Gün pi; B, D ve F: deri lezyonları, C, E ve G: kas lezyonları, B ve C: 1x 10 9 CFU bulaşmış, D ve E: 1x 10 7 CFU enfekte; F ve G: alay. <img src="/files/ftp_upload/2528/2528fig2.jpg" alt="Şekil 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2. Cilt lezyon büyüklüğü ve canlı bakteri CD1 fareleri enfekte MRSA (LAC) 3. gün sonrası enfeksiyon Deri ve kas lezyonları enfeksiyon yerinde saymak. (A) Cilt lezyon büyüklüğü. (B) Kas lezyon boyutu. (C) Toplam doku CFU. H: 1 x 10 9 CFU inocula L: 1 x 10 7 CFU inocula. *: P &lt;0.05, Mann-Whitney testi.

<ol><li>Ahn, J. Y., Song, J. Y., Yun, Y. S., Jeong, G., Choi, I. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protection+of+Staphylococcus+aureus-infected+septic+mice+by+suppression+of+early+acute+inflammation+and+enhanced+antimicrobial+activity+by+ginsan%5BTitle%5D)+AND+%22FEMS+Immunol+Med+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Protection of Staphylococcus aureus-infected septic mice by suppression of early acute inflammation and enhanced antimicrobial activity by ginsan.</a> FEMS Immunol Med Microbiol. 46, 187-197 (2006).</li>
<li>Girish, V., Vijayalakshmi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Affordable+image+analysis+using+NIH+Image%2FImageJ%5BTitle%5D)+AND+%22Indian+J+Cancer%22%5BJournal%5D)">Affordable image analysis using NIH Image/ImageJ.</a> Indian J Cancer. 41, 47-47 (2004).</li>
<li>Hahn, B. L., Onunkwo, C. C., Watts, C. J., Sohnle, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Systemic+dissemination+and+cutaneous+damage+in+a+mouse+model+of+staphylococcal+skin+infections%5BTitle%5D)+AND+%22Microb+Pathog%22%5BJournal%5D)">Systemic dissemination and cutaneous damage in a mouse model of staphylococcal skin infections.</a> Microb Pathog. 47, 16-23 (2009).</li>
<li>Hruz, P., Zinkernagel, A. S., Jenikova, G., Botwin, G. J., Hugot, J. P., Karin, M., Nizet, V., Eckmann, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NOD2+contributes+to+cutaneous+defense+against+Staphylococcus+aureus+through+alpha-toxin-dependent+innate+immune+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">NOD2 contributes to cutaneous defense against Staphylococcus aureus through alpha-toxin-dependent innate immune activation.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 106, 12873-12878 (2009).</li>
<li>Ji, Y., Zhang, B., Van, S. F., Horn, P. W. arren, Woodnutt, G., Burnham, M. K., Rosenberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+critical+staphylococcal+genes+using+conditional+phenotypes+generated+by+antisense+RNA%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Identification of critical staphylococcal genes using conditional phenotypes generated by antisense RNA.</a> Science. 293, 2266-2269 (2001).</li>
<li>Somerville, G. A., Beres, S. B., Fitzgerald, J. R., DeLeo, F. R., Cole, R. L., Hoff, J. S., Musser, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+serial+passage+of+Staphylococcus+aureus%3A+changes+in+physiology%2C+virulence+factor+production%2C+and+agr+nucleotide+sequence%5BTitle%5D)+AND+%22J+Bacteriol%22%5BJournal%5D)">In vitro serial passage of Staphylococcus aureus: changes in physiology, virulence factor production, and agr nucleotide sequence.</a> J Bacteriol. 184, 1430-1437 (2002).</li>
<li>Tseng, C. W., Kyme, P., Low, J., Rocha, M. A., Alsabeh, R., Miller, L. G., Otto, M., Arditi, M., Diep, B. A., Nizet, V., Doherty, T. M., Beenhouwer, D. O., Liu, G. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Staphylococcus+aureus+Panton-Valentine+leukocidin+contributes+to+inflammation+and+muscle+tissue+injury%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Staphylococcus aureus Panton-Valentine leukocidin contributes to inflammation and muscle tissue injury.</a> PLoS One. 4, e6387-e6387 (2009).</li>
<li>von Kockritz-Blickwede, M., Rohde, M., Oehmcke, S., Miller, L. S., Cheung, A. L., Herwald, H., Foster, S., Medina, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunological+mechanisms+underlying+the+genetic+predisposition+to+severe+Staphylococcus+aureus+infection+in+the+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Immunological mechanisms underlying the genetic predisposition to severe Staphylococcus aureus infection in the mouse model.</a> Am J Pathol. 173, 1657-1668 (2008).</li>
</ol>

<ol><li> Fare deri ve yumuşak doku enfeksiyonu modeli bir patojenin in vivo virülans değerlendirmesi için güçlü bir araçtır. S. patojenite aureus, deri ve yumuşak doku enfeksiyonu, bir takım parametreler bağlı olarak değişebilir . Bunlar inokulum büyüklüğü, bakteriyel büyüme aşamasında, aşılama derinliği, fareler yaş, ve farenin genetik arka plan 7, 8. Bu model kullanılarak virülans işlevini incelerken, sonuçları tutarlı olacağını sağlamak için bu parametrelerin kontrol etmek için kritik öneme sahi...

<table><tbody><tr><td>THB</td><td>VWR international</td><td>95025-314</td><td></td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Invitrogen</td><td>21-031-CV</td><td></td></tr><tr><td>1 ml şırınga</td><td>BD Biosciences</td><td>309602</td><td></td></tr><tr><td>27G1/2 iğne</td><td>BD Biosciences</td><td>305109</td><td></td></tr><tr><td>Koyun Kanlı Agar (TSA)</td><td>VWR international</td><td>90004-328</td><td></td></tr></tbody></table>

subkutan enfeksiyon metisiline dirençli stafilokok aureus (mrsa)

Subcutaneous Infection of Methicillin Resistant Staphylococcus Aureus (MRSA)

MRSA, halk sağlığı için dünya çapında bir bir tehdit ve MRSA deri ve yumuşak doku enfeksiyonları, şimdi Amerika Birleşik Devletleri&#39;nde tüm yumuşak doku enfeksiyonları yarısından fazlasının hesabı. Yumuşak doku enfeksiyonları arasında, miyozit, pyomyositis ve nekrotizan fasiit giderek MRSA toplum kaynaklanan ilişkili olarak rapor edilmiştir. MRSA ve daha şiddetli enfeksiyonlara yol açan ev sahibi bağışıklık arasındaki etkileşimi anlamak için, host ve bakteriyel faktörler çalışma izin, hayvan modellerinde durumu kritik öneme sahiptir. S. patogenezinde değerlendirmek için birçok enfeksiyon modelleri tanıtıldı yüzeyel cilt enfeksiyonu sırasında aureus. Burada, deri, derialtı ve kas patolojileri inceleyen bir subkutan enfeksiyon modeli açıklanmaktadır.

Murin deri ve yumuşak doku enfeksiyonu modeli metisiline dirençli Staphylococcus aureus (MRSA) ve ev sahibi immünolojik yanıtlar virülans fonksiyonu değerlendirmek için kullanılmaktadır. Burada, biz, deri ve yumuşak doku enfeksiyonu için bir deri altı enfeksiyon modeli sundu.

Subkutan Enfeksiyon Metisiline Dirençli Stafilokok Aureus (MRSA)

MRSA, halk sağlığına yönelik dünya çapında bir tehdittir ve MRSA kaynaklı cilt ve yumuşak doku enfeksiyonları şu anda ...'daki tüm yumuşak doku enfeksiyonlarının yarısından fazlasını oluşturmaktadır.

Aşağıdaki deneyin genel amacı, metisiline dirençli staphylococcus aureus veya MRSA'nın sağkalımını ve yayılımının yanı sıra enfeksiyon bölgelerindeki kemokin ve sitokin seviyelerini incelemektir. Bu, net bir gözlem alanı sağlamak için farelerin sırtlarındaki tüylerin temizlenmesiyle gerçekleştirilir. İkinci bir adım olarak.Süspansiyon halindeki MRSA, enfeksiyondan üç gün sonra farelere deri altına uygulanacaktır; enfeksiyon patolojileri ve bakteri sayıları, doku homojenatlarından agar plakları üzerindeki koloni oluşturan birim sayısının belirlenmesiyle değerlendirilebilir. Merhaba, nasılsınız? Benim adım De Lordon.Ben bir doktora sonrası araştırmacıyım. Merhaba, benim adım Mariel Sanchez. Ben bir doktora öğrencisiyim ve ben de Andrea Huda.Ben bir araştırma görevlisiyim; Cedar-Sinai Tıp Merkezi pediatri bölümündeki George Lee'nin laboratuvarında görev alıyoruz. Bu yöntem; miyozit, polimiyozit ve nekrotizan fasiyitis dahil olmak üzere ağır enfeksiyonların modellenmesi gibi tıp alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu yöntem ağır acil enfeksiyonlar hakkında bilgi sağlayabilmenin yanı sıra, grup A streptokoklar ve diğer organizmalar gibi diğer sistemlere de uygul

subcutaneous-infection-methicillin-resistant-staphylococcus-aureus

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Metisiline dirençli nedeniyle deneysel rat endokardit...

Metisiline Dirençli Deneysel Endokardit Modeli<em&gt; Staphylococcus aureus</em&gt; (MRSA) Sıçan

Litik faj biyosensörler ve antikor boncuk metisiline dirençli (MRSA) ve duyarlı stafilokok bakterileri ayırt edebiliyoruz. Faj bir kuvars kristal mikro sensörünün bir yüzey üzerine Langmuir-Blodgett yöntemi ile hareketsiz ve geniş stafilokok prob olarak çalışıyordu. Antikor boncuk MRSA tanır.

Antibiyotik Dirençli Stafilokok bakteri tespiti için biyosensör

Bir yaklaşım Kutanöz yaralama için doğuştan gelen bağışıklık yanıtının gerçek zamanlı algılama ve Staphylococcus aureus enfeksiyon farelerin için tanımlanır. Karşılaştırma LysM-EGFP tarafından (floresan nötrofil sahip) fareler LysM EGFP ile immünyetmezligi fare zorlanma olacak, biz anlayışımız enfeksiyon ve enfeksiyon mücadele için yaklaşımlar gelişimi önceden.

Bir fare modeli için değerlendirmek doğuştan gelen bağışıklık yanıtı Staphylococcus aureus enfeksiyon

Bu protokol, yeni bir nanoemülsiyon adjuvan aşısının fiziksel özelliklerini, immün yanıtını ve in vivo koruyucu etkisini hazırlar ve değerlendirir.

Bir nanoemülsiyon adjuvan aşısının metisiline dirençli Staphylococcus aureus (MRSA) Enfeksiyonuna Karşı İmmün Yanıtının Değerlendirilmesi

Staphylococcus aureus (S. aureus) tüm vücuda yayılma yeteneğine sahiptir, bu da kalıcı ve tekrarlayan enfeksiyonlara neden olur. Bu süreçleri daha iyi anlamak için, bu çalışma S. aureus için bir hücre içi enfeksiyon modeli oluşturmaktadır. Bu model, hücre içi enfeksiyonların arkasındaki mekanizmaları araştırmak için çok önemli bir temel sağlayacaktır.

Staphylococcus aureus için Hücre İçi Enfeksiyon Modellerinin Geliştirilmesi ve Değerlendirilmesi

Mevcut protokol, implant ile ilişkili enfeksiyonları araştırmak için subkutan dorsal implantasyon kullanan, patofizyolojik mekanizmaların kapsamlı bir şekilde araştırılmasını sağlayan ve hedefe yönelik terapötik stratejilerle tanı kriterlerinin geliştirilmesini destekleyen bir fare modelini tanımlamaktadır.

Farelerde İmplantla İlişkili Enfeksiyonların Hayvan Modeli

Damla akış reaktörleri, açık sistem akış biyofilm kullanan ve diski reaktörler dönen için Protokoller ayrıntılı olarak sunulmuştur.

Damla Akış ve Döner Disk Reaktörler kullanın Staphylococcus aureus Biyofilm Analizi

Demir Kaynağı Olarak İnsan Hemoglobin kullanarak Staphylococcus aureus Büyüme

Metisiline dirençli Staphylococcus aureus için Staphylococcal Cassette Chromosome mec (SCCmec) tip I-V'nin hızlı taraması ve tiplendirilmesi için basit bir multipleks PCR testi gösteriyoruz ve bu testi bireysel laboratuvarlara uyarlamak için başarılı kılan bazı hayati adımları ve prosedürel nüansları sağlıyoruz.

Metisiline diren

Biz tarafından salgılanan PSM ve diğer toksinlerin etkisini araştırmak için yöntemler...

Etkileşimi incelenmesi<em&gt; Staphylococcus aureus</em&gt; Akım Sitometri ve Time Lapse Mikroskopi tarafından Nötrofiller ile

Öğrenin, farelerde subkutan MRSA enfeksiyon modeli kurarak bakteri yayılımını ve sitokin yanıtlarını incelemeyi. Bu yöntem, virülans ve bağışıklık dinamiklerini değerlendirmek için kullanılır.

Subkutan Enfeksiyon Metisiline Dirençli Stafilokok Aureus (MRSA)

Daha fazla video keşfet