Name: Murin Mesane Kanseri bir Ortotopik Model (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-02-06T17:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 7 s
Description: Öğrenin, dişi C57BL/6 farelerde kateterizasyon, koterizasyon ve karsinoma hücre yapıştırma adımlarını kullanarak mesane karsinomu için ortotopik bir model kurmayı. Bu yöntem, kanser biyolojisi ve tedavi araştırmaları için değerli bir araç sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, Ulusal Bilim Vakfı KARİYER ödülü (CBET 0.846.395) ve Karşılaştırmalı Tıp Anabilim Dalı, Tulane Üniversitesi tarafından finanse edildi.

1. Hayvanlar <ol><li> Kadın C57BL/6J farelerde (Mus musculus) 17 fare virüsleri bulaşıcı ektoparazit, helmint endoparasites ve antikorlar ücretsiz nakliye önce satıcı tarafından doğrulanmaktadır. Fareler Tulane Üniversitesi Laboratuvar Hayvanları Bakım ve Kullanım Kılavuzu doğrultusunda AAALAC akredite hayvan tesisi içinde muhafaza edilir. 1 </li><li> Özellikle, fareler üzerinde bireysel parke yataklar havalandırılan polikarbonat cageswith microisolation filtre üstleri ev sahipliği grup (4-5 fare / kafes). Bu ad libitum pelet kemirgen gıda ve musluk suyu verilmektedir. </li><li> Fareler çalışma başlamadan 7 gün önce gelmesini izin verilir. </li></ol> 2. Hücreler <ol><li> Fare transizyonel hücreli karsinom hücre hattı MB49 mesane tümörleri üretmek için kullanılır. </li><li> Hücreler% 10 fetal sığır serumu, 100 ünite / ml penisilin ve 100 ünite / ml streptomisin ile desteklenmiş Dulbecco&#39;nun modifiye Eagle ortamında kültüre. </li><li> Kültürler 37 korunur ° C ve% 5 CO 2 medya ile 2-3 günde bir değişir. </li></ol> 3. Hayvan Ortotopik Tümör Modeli Mesane tümörü modeli burada açıklanan instilasyon Gunther ve arkadaşları tarafından açıklanan prosedürün bir değişiklik. 2 <ol><li> Anestezi oksijen izofluran% 2 (MWI / VetOne, Meridian, ID, Kedi # 501.017) ile indüklenen ve% 0,75-1,25 tutulur. (Birden fazla hayvanlar izofluran seviyelerinde bir artış gerektirecek, eş zamanlı olarak tedavi edilebilir.) Kornea buharlaşmayı önlemek için, göz bir suni gözyaşı oftalmik pomad ile yağlanır. Vücut ısı bir kağıt asmak altında ısıtılmış bir ped ile korunur. </li><li> Sırtın alt kürk metal topraklama plakası ile temas tanıtmak için kırpılır ve traş alan electroconduction jel ile kaplanmıştır. </li><li> Her fare sonra tek tek dorsal recumbancy metal bir topraklama plakası üzerine yerleştirilir ve mesane transüretral, 3 / 4 inç, over-the-iğne IV kateter kaldırıldı stile ile yağlanmış 24-ölçer kullanarak kateterize. </li><li> Mesane, idrar boşaltılır ve bir platin tel, kateterin her iki ucunda kablonun açıkta bırakarak mesane içine kateter sokulur - kateterin lumenal ucuna yaklaşık 2 mm. Oksidasyona malzeme direnci nedeniyle platin tel yapılır. </li><li> A 2.5 W akımı yaklaşık 0,5 saniye sonra pıhtılaşma için ayarlanmış bir elektrokoter ünitesi ile telin dış kısmına dokunarak mesane uygulanır. </li><li> Tel sonra ikinci bir konumu ve mesane uygulanan 2,5 W şarj taşınır. </li><li> Tel kaldırılır ve 1x10 6 hücre / ml, 1 ml şırınga yoluyla mesane içine kateter aracılığıyla aşılandığı bir konsantrasyon MB49 hücrelerinin 100 ul . </li><li> Şırıngalar hücre süspansiyonları efflux önlemek için kateterler eklenir ve kateterize farelerin hücreleri yanık siteler eklemek için izin vermek için 90 dakika için anestezi altında korunur bırakılır. </li><li> 100-200 ul steril serum fizyolojik kurtarma önce her fare IP enjeksiyon yoluyla uygulanır. </li><li> Kuluçka dönemi sonunda kateter çıkarılır ve hayvanlar dik refleksleri, farelerin evlerinde kafesleri iade edilir ve bu noktada, dönene kadar ısıtılmış pad üzerinde kurtarmak için izin verilir. </li></ol> 4. Ultrason <ol><li> Tümörler farelerde tümör büyümesini izlemek için mesane ultrasonla muayene önce 3-5 gün büyümeye izin verilir. </li><li> İlk ultrason muayenesi için, yukarıda açıklandığı gibi hayvanların anestezi. Fare dorsal recumbancy yerleştirilir ve karın deri kürk kırpma tarafından hazırlanır. </li><li> 24 gauge IV kateter mesane içine transüretral eklenir. Bu noktada, mesane boşaltılır ve daha fazla analiz için toplanan idrar olabilir. </li><li> 100 ul steril serum fizyolojik ultrasonda mesane görünürlüğünü artırmak için kateter yoluyla mesane içine aşılamış. </li><li> Ultrason iletim jel karın bölgesine uygulanan ve mesane duvar ve lümen değerlendirmek için ultrasonografi yapılır. </li></ol> 5. Temsilcisi Sonuçlar: Tümör dokusu aşılar 3-5 gün sonra ortaya çıkmaya başlar. Günde beş Deneyimlerimize göre, 12 farelerin bir grup,% 50 veya daha fazla rutin (1.0 ul, V = π / 6 · L · G · H kullanarak 0.5) mesane içinde algılanabilir bir doku kitlesi var. MB 49 hücreleri kullanılarak, tümör büyümeye devam edecek ve farelerin tedavi edilmezse giderseniz ötenazi günde 24 gerekecektir. Fareler uyuşuk veya kaşektik olunca Ötenazi önerilir hunching karıştırdı kürk, ve duyarlı olmayan davranış, ya da onların başlangıçtaki vücut ağırlığının% 20 kaybedersiniz. Görüntülemek./ P&gt; Bu tümörler hızlı büyür ve gelişmekte olan tümör hücrelerinin anjiyogenik kan temini ile hizmet ne olabilir daha hızlı çoğalırlar çünkü görünürde 200 mg veya daha fazla, 3 bir kitle ulaştıktan sonra nekrotik merkezleri olacak. Bir de dolaylı hematurea, muhtemelen gelişmekte olan tümörler içinde hızla anjiyogenez ile ilgili düzeyi ile tümör progresyonu izleyebilirsiniz. Bu sürekli tedavi edilmezse Tümör taşıyan farelere idrar 14 gün kan içerdiği kaydedildi. Kırmızı kan hücrelerinin konsantrasyonunun zamanla bu farelerde artırmak için ortaya çıkmış ve idrar hacimleri azalmış toplanan. 50 mg aşan tümörler de, tipik olarak 14 gün aşılar ile göreli kolaylıkla palpe edilebilir.

<ol><li>Institute of Laboratory Animal Resources. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Guide+for+the+Care+and+Use+of+Laboratory+Animals%22">Guide for the Care and Use of Laboratory Animals</a>. , National Academies Press. Washington, DC. (1996).</li>
<li>Gunther, J. H., Jurczok, A., Wulf, T., Brandau, S., Deinert, I., Jocham, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimizing+syngeneic+orthotopic+murine+bladder+cancer+%28MB49%29%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Optimizing syngeneic orthotopic murine bladder cancer (MB49).</a> Cancer Res. 59, 2834-2837 (1999).</li>
<li>Zhang, X., Atala, A., Godbey, W. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression-targeted+gene+therapy+for+the+treatment+of+transitional+cell+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Expression-targeted gene therapy for the treatment of transitional cell carcinoma.</a> Cancer Gene Ther. 15, 543-552 (2008).</li>
</ol>

Tulane Üniversitesi Kurumsal Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından belirlenen kurallara ve yönetmeliklere uygun olarak hayvanlar üzerinde deneyler yapıldı.

Bu minimal invaziv yöntem, dişi farelerde ortotopik mesane tümörleri kurulması, farklı sonuçlar beklenebilir rağmen daha MB49 diğer hücre türleri için de uygulanabilir. Daha az agresif tümör hücrelerinin kullanıldığı zaman, biraz watt (yeni optimum kurmak için 0,5 W artışlarını kullanarak) tümör hücre ek daha yumuşak bir alan verecektir ve aşılamış hücreleri için uzun mesane inkübasyon sürelerinde büyük miktarda verecektir yanık siteleri (yayınlanmamış veri) hücre eki. Bazı protokoller, elektrokoter, 2 ile 10...

<table><tbody><tr><td>C57Bl/6J fareler</td><td>Jackson Laboratory</td><td>000664</td><td>3-5 haftalık</td></tr><tr><td>Polikarbonat kafesler ve havalandırmalı raf</td><td>Lab Products</td><td>Super Mouse 750</td><td>327mm x&lt;br/&gt;190mm x&lt;br/&gt;143mm</td></tr><tr><td>Sert ağaç altlığı</td><td>Harlan Laboratories</td><td>Laboratuvar &amp;#8211;grade SaniChips</td><td></td></tr><tr><td>Kemirgen diyeti</td><td>Harlan Laboratories</td><td>Rodent Diet 2019</td><td></td></tr><tr><td>IV kateter</td><td>MWI Veterinary Supply</td><td>009231</td><td>24 G x &amp;#190; in. </td></tr><tr><td>Elektrokoter ünitesi</td><td>Bovie Medical Corporation</td><td>Aaron 900</td><td></td></tr><tr><td>Ultrason ünitesi</td><td>Sonosite</td><td>180 Plus (Vet)</td><td></td></tr><tr><td>MB49 hücre hattı</td><td>Wake Forest University Baptist Medical Center</td><td>N.A.</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Invitrogen</td><td>21063-029</td><td></td></tr><tr><td>Fetal Bovine Serum</td><td>Gemini Bio Products</td><td>100106 500A57B</td><td></td></tr><tr><td>Penisilin-Streptomisin</td><td>Invitrogen</td><td>15140-163</td><td></td></tr></tbody></table>

murin mesane kanseri bir ortotopik model

An Orthotopic Model of Murine Bladder Cancer

Bu basit işlem, kateterizasyon, yerel koterizasyon, ve sonraki hücre adezyon yoluyla kadın C57 farelerde mesane tümörleri kurulur. Mesanesi transüretral kateterize ve süzülmüş sonra, hayvanlar, üretra veya mesane zarar vermeden tekrar mesanesi bir platin tel takılmasına izin kateterize. Kateterler, bir tel, bir yanık oluşturmak için mesane içine elektrik akımı yürütecek yalıtkan olarak hizmet Teflon yapılır. Ekstrasellüler katmanları uzakta yanan ve bir sonraki kateterizasyon ile mesane askıya teslim edilir karsinom hücreleri için eklenti sitelerini sağlayan bir elektrokoter ünitesi, tel maruz sonuna kadar 2.5W sunmak için kullanılır. Hücreler kateterler çıkarılır ve mesanesi doğal drenaj izin, 90 dakika sonra mesanede kalır. Tümör gelişimi ultrason ile takip edilir. Özel dikkat beraberindeki video kateterizasyon tekniği ödenir.

Kateterizasyon, yerel koterizasyon ve yanık sitelerine karsinom hücreleri sonraki yapışma ile minimal invaziv bir moda dişi farelerde mesane tümörleri kurulur.

Murin Mesane Kanseri bir Ortotopik Model

Bu basit prosedürde, kateterizasyon, lokal koterizasyon ve ... kullanılarak dişi C57 farelerde mesane tümörleri oluşturulur.

Ben Profesör WT Godbe; Dr. Georgina Dobe ile birlikte, fare mesane karsinomunun ortotopik bir modelini oluşturma yöntemini sunmak istiyoruz. Öncelikle, hayvanlarımızı bu prosedüre hazırlamak için izlediğimiz adımlarla başlayalım. Bugün gösterdiğimiz fareler, Jackson Laboratories'den temin edilen dişi C57BL/6 farelerdir.Kateterizasyonun kolaylığı nedeniyle dişi fareler seçilmiştir. Üç ila beş haftalık olan ve tipik olarak 16 ile 20 gram arasında ağırlığa sahip olan fareler, 0.8 ile 1 litre/dakika akış hızında oksijen içinde %2 isofluran verecek şekilde ayarlanmış bir ventilatör kullanılarak anesteziye alınır. Kornea kurumasını önlemek için solunum hızları sürekli olarak izlenir.Bir buçuk saati aşan bu prosedür sırasında, gözler doğrudan gözlerin üzerine uygulanan ve ardından gözlerin içine yedirilen bir suni gözyaşı oftalmik pomad ile yağlanır; alt sırt bölgesindeki tüyler, mesanede yanık yaralanması oluşturacak elektrokoter prosedürü sırasında kullanılacak olan metal topraklama plakasıyla teması artırmak amacıyla kısaltılır. Yanık bölgeleri, tümör hücreleri mesane lümenine yerleştirildikten sonra bu hücrelerin tutunma noktaları olarak hizmet edecektir. Bu protokolde kullanılan diğe

an-orthotopic-model-of-murine-bladder-cancer

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Fare mesane duvar enjeksiyon orthotopically mesane kök hücre ve kanser biyolojisi incelemek için yararlı bir yaklaşımdır. Bu hassas mikrocerrahi yöntemi dikkatli tekniği ve uygulamaları ile hakim olabilir.

Fare mesane Duvar Enjeksiyon

Ultrason ve bioluminescent görüntüleme ile intravezikal teslim Sarna ve izleme tümör büyümesinin antitümör etkileri değerlendirmek için ortotopik mesane tümörü modeli oluşturmak.

Bir Ortotopik Mesane Tümörü Model ve intravezikal Sarna Tedavisinin Değerlendirilmesi

Bu videoda, organ ortamının gelişmekte olan tümörler üzerindeki rolünü incelemek için kültürlenmiş mesane tümörü organoidlerinin murin mesanesine ortotopik transplantasyonunu açıklıyoruz.

Mesane Tümörü Organoid Modeli: Mesane Organoidlerinin Alıcı Murin Mesanesine Ortotopik Transplantasyonu İçin Bir Yöntem

Bu videoda, kanser hücrelerini bir fare modelinin mesanesine iletmenin intravezikal prosedürünü açıklıyoruz. Bu prosedür, terapötik stratejiler geliştirmek için kullanılabilecek bir ortotopik mesane tümörü modeli oluşturmaya yardımcı olur.

Ortotopik Mesane Tümörünün Fare Modelinde Modellenmesi: Kanser Hücrelerinin Murin Mesanesine İntravezikal Uygulanması İçin Bir Prosedür

Kaynaklı organ içine kanser hücrelerinin implantasyonu yeni tedaviler değerlendirmek için yararlı bir ön-klinik modeli olarak hizmet edebilir. MB49 mesane karsinom hücreleri intravezikal Damla damla akıtma sonrası mesane içinde yetiştirilebilir. Bu protokol, tümör implantasyonu ve adenoviral teslimat amacıyla fare mesane kateterizasyon gösterir.

Gene Teslim Çalışmaları Ortotopik Mesane Kanseri Modeli

Bir N-bütil-N-(4-hidroksibutil) nitrozamin bağımlı mesane kanseri modelinde insan müsin 1 (MUC1), test amacıyla MUC1 yönlendirilmiş immünoterapi için transgenik farenin olarak geliştirilmiştir. Bir MUC1 hedefli bir peptid aşının sonra, MUC1 bir sitotoksik T-lenfosit yanıt sitokin seviyeleri ve T-hücresi spesifik aktivitesi ölçülerek teyit edilmiştir.

Bağışıklık Sağlam İnsan MUC1 Transgenik Farelerde İnvaziv Geçici Hücre Mesane Karsinomu indüksiyon: immünoterapi Kalkınma İçin Bir Model

Birincil invaziv kadavradan mesane kanseri zenograftlarını aşılamak için kurulan teknik laparotomi ve mesane seferberlik gerektirir. Bu prosedür, fareler üzerinde önemli morbidite uğratan teknik açıdan zor ve zaman alıcıdır. Bu nedenle perkütan yaklaşım ultrason rehberlik kullanarak, yüksek hassasiyet geliştirdi.

Kemirgen Ortotopik Mesane ksenogratflarının Minimal İnvaziv kurulması

Bu protokol, dişi C57BL / 6J fareler, tümör büyümesi izlenmesinde sıçangil ortotopik mesane tümörlerinin üretimini tarif eder.

Bir Fare Ortotopik Mesane Tümör Modeli ve Tümör Tespit Sistemi

Bu protokol, yüksek dereceli ürosityal Hücre Karsinomu hücrelerinin intra-vesically instilling veya intra-rektal enjekte kolorektal kanser hücreleri olmayan obez diyabetik/şiddetli kombine tarafından hasta türeyen ortootopik xenograft modellerinin oluşturulması açıklanmaktadır immüneksikliği (NOD/SCıD) primer tümör büyümesi için fareler ve lenf nodu stromal hücrelerin etkisi altında spontan metastaz, hangi insan metastatik hastalıkların ilerlemesini taklit.

Insan Üromotorial Hücre Karsinomu ve kolorektal kanser tümörü büyüme ve spontan Metasrik için hasta türevi Ortootopik xenograft modelleri

Bu protokol, kanserojen kaynaklı murin mesane kanserinden elde edilen mesane tümörü organoidlerinin üç boyutlu in vitro kültürünü oluşturmak için ayrıntılı deneysel adımlar sağlar. Paslanma, genetik mühendislik ve tümör organoidlerinin ortotopik transplantasyonlarını içeren kültür yöntemleri tanımlanmıştır.

Fare Mesane Tümörü Organoidlerinin Kültürü, Manipülasyonu ve Ortotopik Transplantasyonu

Öğrenin, dişi C57BL/6 farelerde kateterizasyon, koterizasyon ve karsinoma hücre yapıştırma adımlarını kullanarak mesane karsinomu için ortotopik bir model kurmayı. Bu yöntem, kanser biyolojisi ve tedavi araştırmaları için değerli bir araç sunar.

Murin Mesane Kanseri bir Ortotopik Model

Daha fazla video keşfet