Kasık lenf düğüm intravital Mikroskopi

Bu prosedürün genel amacı, inguinal lenf nodunu besleyen arterin in vivo olarak görüntülenmesi ve değerlendirilmesidir. Bu işlem, öncelikle farenin inguinal bölgesindeki deri dikkatlice disseke edilerek inguinal lenf nodunu örten bir deri flebi oluşturularak gerçekleştirilir. Ardından, lenf nodu bölgesinin üzerindeki bağ dokusu ayrılır.

Ardından, lenf düğümünün besleyici arteriyel damarlanmasını açığa çıkarmak için çevre yağ dokusu temizlenmelidir. Son olarak, lenf düğümü damarlanmasındaki değişiklikler intravital mikroskopi ile görüntülenir ve değerlendirilir. Bugün göreceğiniz preparat inguinal lenf düğümü mikro sirkülasyonudur. Bu cerrahi teknikler, iskelet kası ve beyin gibi diğer preparatlar için de kullanılabilir.

Genel olarak, bu teknik uygulanırken yeni başlayanlar iki temel nedenden dolayı zorluk yaşarlar. Birincisi, canlı bir hayvanla çalışıyor olmanız; ikincisi ise çok küçük bir alanda cerrahi işlem yaptığınız için, damarın kendisine veya çevresindeki bölgeye yönelik herhangi bir müdahalenin, gerçekleştirmek istediğiniz deneyi olumsuz etkileyecek zararlı sonuçlar doğurabilmesidir. Bu tekniğin görsel anlatımı, başarının sağlanması açısından kritik öneme sahiptir.

Metinden uygulamaya aktarıldığında pek iyi karşılık bulmayan, tekniğin gerçekleştirilmesini içeren bir dizi karmaşık adım bulunmaktadır. Doğru şekilde uygulayabilmek için bu adımları görmek önemlidir. Başarılar dileriz.

Fare öncelikle anestezi altına alınır ve cerrahi bölge tıraş edilir. Detaylar için lütfen metin taslağına bakınız. Fare daha sonra şeffaf bir cerrahi tahtasına sırtüstü pozisyonda yerleştirilebilir.

Her bir ayak pedini bantlayarak fareyi tahtaya sabitleyin. Deneyden bir gün önce, thes guard 180 4'ü üreticinin talimatlarına göre karıştırın. Ardından, standart tek kullanımlık bir Petri kabını kalıp olarak kullanarak, karışımı yaklaşık bir çeyrek inç derinliğe kadar dökün ve gece boyunca kürleşmeye bırakın. Thes guard'ı Petri kabından çıkarın ve cerrahi tahtanın üzerine yerleştirin.

Tıraş edilmiş ve anestezi uygulanmış fareyi diseksiyon mikroskobunun altına yerleştirin. Beş numara paslanmaz çelik pens ve düz uçlu yaylı makas kullanarak abdominal boşluğun ventral yüzeyi boyunca orta hat üzerinden bir insizyon yapın. Ardından, orta hat insizyonunu ekstremitelere doğru diyagonal olarak devam ettirin ve cildi masif spinal kolona doğru geri çekin.

ln kolayca görünür hale geldiğinde, geri çekilmiş deriyi paslanmaz çelik entelektüel iğneler ve inox epoksi kaplı pensler kullanarak puro şeklinde 180 4 pedestale sabitleyin. Bölgeye fizyolojik salin solüsyonu veya PSS ekleyin.

Ardından, lenf düğümünün etrafındaki bölgeyi örten ince bağ dokusu tabakasını kaldırın. Pens kullanarak küçük bağ dokusu parçalarını dikkatlice tutun ve lenf düğümünden ayırın. Daha sonra, mikrovasküler yatak açığa çıkana kadar yaylı makas kullanarak lenf düğümünün üzerini ve çevresini örten adipoz dokuyu temizleyin.

Bu adımda, cerrahi aletlerle ilgilenilen vaskülatüre temas etmemeye veya çevre dokuları manipüle ederken damarlara aşırı kuvvet uygulayarak onlara zarar vermemeye dikkat etmek önemlidir. Yağ dokusunu ln bölgesinden uzaklaştırmanın en iyi yolu, bağ dokusunu gevşetip adipoz dokuyu forsepsle tutarak, görüş alanı netleşene kadar adipoz dokuyu nazikçe temizlemektir. Bağ ve adipoz dokular uzaklaştırıldığında, LN'ye komşu ana arter segmenti ve üzerindeki eşlik eden ven görünür hale gelir.

İlgilenilen damar segmenti dissection mikroskobu altında açığa çıkarıldıktan sonra, preparatı intra vital mikroskoba sabitleyin. Süperfüzyon ve vakum hatlarını kurun. Prosedürün bu aşamasında, açığa çıkarılan dokunun her zaman Dengelenmiş PSS solüsyonu ile süperfüzyon altında tutulması esastır.

PSS superfüzyonu yerçekimi ile gerçekleştirilir. Besleme, başlangıç rezervuarından %5 Karbondioksit balans azot ile perfüze edilen ve su ceketli bir ısıtıcı rezervuara, ardından dakika başına 10 mililitre hızla bir damlatma hattı üzerinden yapılır. Süperfüze edilen PSS'yi preparasyondan uzaklaştırmaya devam etmek için, deri flebinin altına yerleştirilmiş bir vakum hattı kullanılmalıdır; ardından sirküle eden su banyosunun sıcaklığı ve PSS superfüzyon hızı kontrol edilerek yaklaşık 36 degrees Celsius civarında optimal bir sıcaklığa ulaşılacak şekilde ayarlanmalıdır.

Hazırlık boyunca, damar yapısının PSS ile en az 60 dakika boyunca dengelenmesine izin verin. Rektal termometre kullanarak hayvanın hipotermiye girmediğinden emin olun ve harici bir ısı lambası sağlayın. PSS dengelenirken, damar çapını ölçün.

Damarın stabilize olduğundan emin olmak için video kumpasları birden fazla zaman noktasında kullanın; stabilizasyon, çap boyutunun 20 dakikalık bir süre boyunca beş mikrometre dahilinde tutarlı kalması olarak tanımlanır. Çap ölçümleri, chart lab yazılımı kullanılarak bir bilgisayara kaydedilir. Dengeleme döneminden sonra, burada phenylephrine ile gösterildiği gibi, phenylephrine gibi düz kas spesifik bir agonist kullanarak damarın sağlıklı olup olmadığını değerlendirin.

Agonisti sisteme ekleyin. Her log artışındaki kümülatif agonist konsantrasyonu için sekiz agonist değerlendirilmelidir; her agonist uygulaması arasında SUP kaderine eklenen agonist konsantrasyonu artırılmalıdır. PSS kullanılarak 30 dakika boyunca veya damar dinlenme çapına dönene kadar bir yıkama fazı gerçekleştirilmelidir.

Burada, dengeleme süresi sonrası bir inguinal lenf düğümünün temsilci sonuçları yer almaktadır. Arterin fizyolojik tuzlu çözelti ile beslenmesi, inguinal lenf düğümünü besleyen ve burada kırmızı ok ile gösterilen besleyici arterin ve yeşil ok ile gösterilen venin tanımlanmasına olanak tanıyan net bir görüntü sağlar. Grafik, bir inguinal lenf düğümü besleyici arterinin, fizyolojik tuzlu çözeltiye ardışık olarak eklenen SUP füzyonlu fenilefrine karşı tipik vazoaktif yanıtını göstermektedir.

10⁻⁹ molar ile 10⁻⁵ molar arasındaki konsantrasyonlarda, güçlü bir vazokonstriksiyonun varlığı arterdeki normal düz kas fonksiyonuna işaret eder. Bu grafikte, fizyolojik saline çözeltisine kümülatif olarak eklenen asetilkoline verilen tipik vazoaktif yanıt gösterilmektedir. 10⁻⁹ molar ile 10⁻⁵ molar arasındaki konsantrasyonlar gösterilmektedir.

Güçlü bir vazodilatasyonun varlığı, arterde normal endotel fonksiyonunun mevcut olduğunu gösterir. Bu preparasyon yapılırken, başarıyı maksimize etmek için damara ve çevre bölgeye verilen rahatsızlığı en aza indirmenin kritik olduğu unutulmamalıdır. Bu prosedürün ardından, hücre trafiği gibi diğer hücre fonksiyonlarını incelemek için floresan gibi diğer yöntemler uygulanabilir.

Bu tekniğin geliştirilmesinin ardından, immünoloji ve vasküler biyoloji alanlarını birbirine bağlayarak vasküler immünoloji adında yeni bir alanın önü açılmıştır.