Name: Kraniofasial Geliştirme sırasında Ektodermal Epiteli Sinyal Özellikleri değerlendirilmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-03-24T11:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 25 s
Description: Keşfedin kraniyofasiyal gelişim sırasında yüzey sefalik ektodermin sinyal ve desenleme özelliklerini incelemek için doku nakli tekniğini. Bu yöntem, kimerik embriyolar oluşturarak gelişim biyolojisinde doku etkileşimlerini anlamaya yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışma, R01-DE018234 ve R01-DE019638 tarafından finanse edildi.

1. Donör Doku hazırlanması <ol><li> Kültür ortamı hazırlayın, cam pimleri keskinleştirmek, tungsten iğneler keskinleştirmek. </li><li> Kabuk embriyonun toplayın, buz gibi soğuk PBS içinde yıkayın. <ol class="lalpha"><li> 10 ml şırınga ve 18 gauge iğne ile yumurta kabuğu sivri ucundan 1.0 mL albumin çıkarın. </li><li> Makas noktasını kullanarak kabuğun üstünde küçük bir delik açın ve sonra embriyo maruz dairesel bir açılış kesip </li></ol></li><li> DMEM (serum serbest, oda sıcaklığı), baş ve yer çıkarın </li><li> Embriyo Frontonasal Süreci teşrih (veya maksiller ve mandibular süreci gibi diğer donör sitesi) </li><li> 20mins için buz üzerinde PBS içinde 2.4U / ml dispase Digest </li><li> Sindirim durdurmak için% 1 BSA DMEM birlikte dokularda Kapak </li><li> Ayrı ektoderm, mezenşimin ve neuroectoderm bilenmiş tungsten iğne kullanın. </li><li> Host nakli için hazır olana kadar buz üzerinde DMEM% 1 BSA greft doku Mağaza </li></ol> 2. Host hazırlanması <ol><li> Embriyo Açığa <ol class="lalpha"><li> 10 ml şırınga ve 18 gauge iğne ile yumurta kabuğu sivri ucundan 1.0 mL albumin çıkarın. </li><li> Makas noktasını kullanarak kabuğun üstünde küçük bir delik açın. Delik üzerine bir parça bant yerleştirin ve sonra embriyonun maruz dairesel bir açılış kesmek. </li></ol></li><li> 2 çift forseps kullanarak, amniyon kavrayın ve yavaşça bir delik yapmak için gözyaşı. </li><li> Sağ göz forseps bir çift yerleştirerek ve basınç uygulayarak baş döndürün. Kafa sabit tutarken, greft yerleştirmek için ev sahibi ektoderm kaldırmak için bir tungsten iğne kullanınız. </li><li> Cam bir pipet kullanarak ana greft aktarın. </li><li> Greft kaldırılan ektoderm yerine yerleştirin. Greft pin aşılı doku her köşesinde bir cam pimi takın. Cam pimleri yapmak için, alkol ateşte ince bir nokta microcapillary tüp çekin. </li><li> Delik üzerinde sıkı bir bant yerleştirin ve analiz için zaman uygun uzunluğu için inkübatör embriyo geri. </li><li> ayrıca bkz: 9 </li></ol> 3. Temsilcisi Sonuçlar: Kimeralar değerlendirmek için, embriyolar toplanan ve ev sahibi ve donör dokuları dağılımı analizi için işlenmiş olmalıdır. QcPN antikor kullanarak bıldırcın hücreleri, immünhistokimya tespiti için (açıklandığı: 3) istihdam ve fare hücreleri algılama, kesitler in situ hibridizasyon için 6 kullanılır. Donör hücreleri epitel sınırlı olmalı ve donör mezenkimal dokuların herhangi bir kanıt olması gerekir (Şekil 1). Mezenşimin izole donör hücrelerinin varlığı yüz geliştirme (örneğin, 10) pek çok açıdan bu hücrelerin etkisi nedeniyle herhangi bir morfolojik yorumlanması bulandırabilir kirlenme nöral krest hücrelerinin varlığını gösterir. Bir kez ikna greft tekniği mezenşimin kirlenmesine neden olduğunu ileri morfolojik veya moleküler sonuç ölçümleri, kuruntulardan değerlendirmek için kullanılabilir. Bizim amaçlarımız için, üst çene (Şekil 3) (Şekil 2) aşılı ektoderm yanıt nakledilen dokuları ve mezenkimal dokuların moleküler değişiklikler ile indüklenen mükerrer denk ektopik kıkırdak ve kemiklerin varlığı tespit 5,6. <img src="/files/ftp_upload/2557/2557fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1. Kimerizm Değerlendirmesi (A) Anti-QcPN boyama, bıldırcın civciv kimeralar bıldırcın hücreleri algılamak için kullanılır . Mezenşimin boyanma hiçbir kanıt yoktur. (B) in situ hibridizasyon fare civciv kimeralar SINE B2 transkript ifade algılamak için kullanılır. İfade greft oluşan ektoderm sınırlıdır. <img src="/files/ftp_upload/2557/2557fig2.jpg" alt="Şekil 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2 trikrom boyama, (A) bıldırcın-chick chimera üst çene iskelet çoğaltılması ve (B) fare ve civciv kimeralar gösterir. <img src="/files/ftp_upload/2557/2557fig3.jpg" alt="Şekil 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 3"> Şekil 3 ektoderm mezenşimin gen ekspresyonu regultes. (A) Normal bir civciv embriyo mezenşimin Bmp7 ifade (Adobe Photoshop olumlu sinyal pseudo-kırmızı boyalı in situ hibridizasyon radyoaktif). (B) Bmp7 ifade kimerik embriyolar greft (Ok) bitişik mezenşimin indüklenir.

<ol><li>Noden, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Role+of+the+Neural+Crest+in+Patterning+of+Avian+Cranial+Skeletal%2C+Connective%2C+and+Muscle+Tissues%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">The Role of the Neural Crest in Patterning of Avian Cranial Skeletal, Connective, and Muscle Tissues.</a> Developmental Biology. 96, 144-144 (1983).</li>
<li>Bronner-Fraser, M., Stern, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Mesodermal+Tissues+on+Avian+Neural+Crest+Cell+Migration%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Effects of Mesodermal Tissues on Avian Neural Crest Cell Migration.</a> Developmental Biology. 143, 213-213 (1991).</li>
<li>Schneider, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neural+crest+can+form+cartilages+normally+derived+from+mesoderm+during+development+of+the+avian+head+skeleton%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Neural crest can form cartilages normally derived from mesoderm during development of the avian head skeleton.</a> Developmental Biology. 208, 441-441 (1999).</li>
<li>Couly, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interactions+between+Hox-negative+cephalic+neural+crest+cells+and+the+foregut+endoderm+in+patterning+the+facial+skeleton+in+the+vertebrate+head%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Interactions between Hox-negative cephalic neural crest cells and the foregut endoderm in patterning the facial skeleton in the vertebrate head.</a> Development. 129, 1061-1061 (2002).</li>
<li>Evans, D. J., Noden, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+relations+between+avian+craniofacial+neural+crest+and+paraxial+mesoderm+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Dyn%22%5BJournal%5D)">Spatial relations between avian craniofacial neural crest and paraxial mesoderm cells.</a> Dev Dyn. , (2006).</li>
<li>Hu, D., Marcucio, R., Helms, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+zone+of+frontonasal+ectoderm+regulates+patterning+and+growth+in+the+face%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">A zone of frontonasal ectoderm regulates patterning and growth in the face.</a> Development. 130, 1749-1749 (2003).</li>
<li>Hu, D., Marcucio, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unique+organization+of+the+frontonasal+ectodermal+zone+in+birds+and+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Unique organization of the frontonasal ectodermal zone in birds and mammals.</a> Dev Biol. 325, 200-200 (2009).</li>
<li>Le Lièvre, C. S., Le Douarin, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenchymal+derivatives+of+the+neural+crest%3A+analysis+of+chimaeric+quail+and+chick+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Embryology+and+Experimental+Morphology%22%5BJournal%5D)">Mesenchymal derivatives of the neural crest: analysis of chimaeric quail and chick embryos.</a> Journal of Embryology and Experimental Morphology. 34, 125-125 (1975).</li>
<li>Bollag, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+a+repetitive+mouse+B2+element+to+identify+transplanted+mouse+cells+in+mouse-chick+chimeras%5BTitle%5D)+AND+%22Exp+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Use of a repetitive mouse B2 element to identify transplanted mouse cells in mouse-chick chimeras.</a> Exp Cell Res. 248, 75-75 (1999).</li>
<li>Korn, M. J., Cramer, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Windowing+chicken+eggs+for+developmental+studies%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Windowing chicken eggs for developmental studies.</a> J Vis Exp. , (2007).</li>
<li>Eames, B. F., Schneider, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quail-duck+chimeras+reveal+spatiotemporal+plasticity+in+molecular+and+histogenic+programs+of+cranial+feather+development%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Quail-duck chimeras reveal spatiotemporal plasticity in molecular and histogenic programs of cranial feather development.</a> Development. 132, 1499-1499 (2005).</li>
<li>Odent, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+the+Sonic+hedgehog+%28SHH+%29+gene+during+early+human+development+and+phenotypic+expression+of+new+mutations+causing+holoprosencephaly%5BTitle%5D)+AND+%22Hum+Mol+Genet%22%5BJournal%5D)">Expression of the Sonic hedgehog (SHH ) gene during early human development and phenotypic expression of new mutations causing holoprosencephaly.</a> Hum Mol Genet. 8, 1683-1683 (1999).</li>
<li>Szabo-Rogers, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+skeletogenic+patterning+roles+for+the+olfactory+pit%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Novel skeletogenic patterning roles for the olfactory pit.</a> Development. 136, 219-219 (2009).</li>
</ol>

Bu nakli yöntemi kullanarak bize ektoderm dorsoventral polarite ve üst çene proximodistal uzatma düzenleyen sinyal bilgisini içerdiğini belirlemek için izin verdi. Bıldırcın veya fare ektoderm, ve birçok türün 6,11 arasında bu doku moleküler sinyaller korunması kullanarak sonuçların benzerlik omurgalıların hiçbirinde görülmeyen, son derece korunmuş bir sinyalizasyon merkezi olduğunu gösterir . Ayrıca, diğer araştırmacılar, farklı bölgelerin yüzey sefalik ektoderm sinyalizasyon özelliklerini test etmek için be...

<table><tbody><tr><td>1x PBS</td><td>Tektronix, Inc.</td><td>TEKZR114</td><td></td></tr><tr><td>DMEM</td><td>University of California - San Francisco</td><td>CCFDA003</td><td></td></tr><tr><td>BSA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7906</td><td></td></tr><tr><td>Dispase</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>17105-041</td><td></td></tr><tr><td>35x10 mm Petri kabı</td><td>Falcon BD</td><td>1008</td><td></td></tr><tr><td>No. 5 Dumont pens</td><td>Fine Science Tools</td><td>11252-20</td><td></td></tr><tr><td>Makas</td><td>Fine Science Tools</td><td>14058-11</td><td></td></tr><tr><td>Yaylı Makas</td><td>Fine Science Tools</td><td>15010-11</td><td></td></tr><tr><td>İğne tutucu</td><td>Fine Science Tools</td><td>26016-12</td><td></td></tr><tr><td>Tungsten İğne</td><td>Fine Science Tools</td><td>26000</td><td></td></tr><tr><td>Mikrokapiler tüp</td><td>Drummond Scientific</td><td>3-000-225-G</td><td></td></tr><tr><td>Pasteur Pipetleri</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-6B</td><td></td></tr><tr><td>Yaylı makas</td><td>Fine Science Tools</td><td>15010-11</td><td></td></tr><tr><td>Bıçak tutucu</td><td>Fine Science Tools</td><td>10052-11</td><td></td></tr><tr><td>Jilet</td><td>Fine Science Tools</td><td>10050-00</td><td></td></tr></tbody></table>

kraniofasial geliştirme sırasında ektodermal epiteli sinyal Özellikleri değerlendirilmesi

Assessing Signaling Properties of Ectodermal Epithelia During Craniofacial Development

Erişilebilirlik kuş embriyoların deneysel embriyologlar kalkınma ve desenlendirme ve omurgalıların morfolojilerinden (örneğin, 1, 2, 3, 4) düzenleyen doku etkileşimleri rol sırasında hücre kaderi anlamaya yardımcı olmuştur. Burada, yüz gelişimi sırasında ektodermal dokuların sinyalizasyon ve desenlendirme özelliklerini test etmek için bu erişilebilirlik yararlanan bir yöntem göstermektedir. Bu deneylerde, aynı bölgede ya da bir civciv embriyo ektopik bölge üzerine, bıldırcın ya da fare üst çene kapsayan yüzey sefalik ektoderm nakli bıldırcın-chick 5 veya fare civciv 6 kimeralar oluşturmak. Civciv içine nakli için donör doku olarak bıldırcın kullanımı, böylece araştırmacılar host ve donör dokuları 7 ayırt etmek için izin, bıldırcın içinde mevcut değil civciv hücreleri nucleolar marker yararlanmak için geliştirilmiştir . Aynı şekilde, bize fare civciv kuruntulardan 8 host ve donör dokuları ayırt etmek için izin verir, tekrarlayan bir unsur fare genomunda mevcut ve yayg ifade edilir. Bu bize çeşitli mutant embriyolardan elde edilen ektoderm sinyalizasyon özellikleri test etmek için izin verecek, çünkü donör doku olarak fare ektoderm kullanımı büyük ölçüde, bu doku etkileşimleri anlayışımızı uzatacaktır.

Bu makale, kraniyofasiyal gelişimi sırasında sinyalizasyon ve yüzey sefalik ektoderm desenlendirme özellikleri test etmek için tasarlanmış bir doku nakli tekniği açıklar.

Kraniofasial Geliştirme sırasında Ektodermal Epiteli Sinyal Özellikleri değerlendirilmesi

Kuş embriyolarının erişilebilirliği, deneysel embriyologların gelişim sırasında hücrelerin kaderini ve dokuların rolünü anlamalarına yardımcı olmuştur...

Bu prosedürün genel amacı, donör embriyolardan alınan ektodermin civciv embriyolarının gelişmekte olan üst çenesine nakledilmesiyle kimera embriyolar oluşturmaktır. Bu işlem, öncelikle nakil için donör dermin çıkarılmasıyla gerçekleştirilir. Ardından, konakçı bölge greftleme işlemi için hazırlanır.Prosedürün son adımı, donör dokunun konak bölgeye yerleştirilmesi ve greftin konumuna sabitlenmesidir. Nihayetinde, yalnızca donör ektoderminin tutunduğunu gösteren sonuçlar elde edilebilir ve moleküler ile morfolojik analizler yoluyla, donör yeniden kodlanmış dermisin işlevi belirlenebilir. Bu yöntem, morfojenez sırasında çeşitli dokuların rolünün tanımlanması gibi gelişimsel biyolojideki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir.Prosedür, laboratuvarımızdan kıdemli bir araştırmacı olan Dr. Diane tarafından gösterilecektir. Bu prosedüre başlamadan önce, besiyerlerini hazırlayın ve gerekli tüm çözeltilerin erişilebilir ve doğru sıcaklıkta olduğundan emin olun. Ardından, uygun göz koruyucu ekipman takarken, mikro kılcal tüpleri bir alkol alevi üzerinde ince bir uç oluşturacak şekilde çekin.Propan pürmüzü alevinde tutarak tungsten iğneleri keskinleştirmek için cam pinler hazırlayın.

assessing-signaling-properties-ectodermal-epithelia-during

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Kraniofasial kıkırdaklar diğer dokuları ile yakın temas içinde gelişir ve canlı hayvan işlemek için zordur. Elektroporasyon erken embriyonik etkileri atlayarak kraniyofasiyal iskeletin büyüme sırasında moleküler araçlar sunmak için kullanıyor. Bu yaklaşım, aday moleküllerin etkin bir şekilde test etmek için bize izin...

Kraniofasial mezenşimin, Elektroporasyon

Kranial mezenşimi muhtemel nöral kıvrımların yükselmesi için bir itici güç sağlar dramatik morfojenik hareketleri...

Kranial mesenchyme Hücresel Davranış Değerlendirme için bir Eksplantasyon Assay

Embriyo yüz ektoderm ve mezenşimi ayrılması için bir protokol tanımlanmıştır. Biz, ilk bütün embriyolar tedavisinde tüm yüz çıkıntıları üzerinden incelemek dispase II kullanın ve sonra yüz ektoderm ve mezenşimi ayırın.

Fare Embriyonik Yüz Ektoderm ve mesenchyme ayrılması

Xenopus arasında yüz doku "Extreme Anterior Etki" nakli için bir tekniktir embriyolar geliştirilmiştir laevis'den. Doku kraniofasial gelişimi için ve yüz bölgeleri arasındaki etkileşimleri sinyalizasyon için yerel gereksinimleri çalışma izin, başka içine bir gen ekspresyon kökenli taşınmış olabilir.

Yüz Nakli<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Embriyolar

Bu protokol Xenopus laevis neurulas gelen premigratory kranial sinir kret (NC) teşrih nasıl açıklanır. Bu eksplantlar, fibronektin ve in vitro kültürlenmiş üzerine kaplanır, ya da arka ana embriyolara aşılanabilirler. Bu teknik NC epitel-to-mezenşimin geçiş, göç, ve farklılaşma mekanizmaları eğitim veriyor.

Diseksiyonu<em&gt; Xenopus laevis</em&gt; Sinir Crest için<em&gt; In vitro</em&gt; Eksplantasyon Kültür veya<em&gt; In vivo</em&gt; Transplantasyon

Zaman atlamalı konfokal görüntüleme embriyo gelişimini karakterize etmek için yararlı olan bir güçlü bir tekniktir. Burada, yöntemini açıklar ve iskeletsel vahşi tür morfolojilerinden yanı sıra, PDGFRA, smad5 ve smo mutant embriyolar karakterize eder.

4D konfokal mikroskopi kullanılarak Zebra balığı Kranyofasiyel morfogenez Analizi

Bu makalede, kraniofasiyal gelişimine nöral ve / veya diğer dokuların türe özgü katkılar test etmek için tasarlanmıştır kimerik embriyolar oluşturmak için bir yöntemi tarif etmektedir.

Bıldırcın-ördek Chimeras kullanma Kraniyofasiyal Kalkınma için Türlere özgü Katılımlar değerlendirilmesi

Ekstremite oluşumu için gerekli olan civciv embriyosunda ana gövde ekseni ve yan dokuları arasındaki indüksiyon olaylarını engellemek için geçirimsiz bariyerler kullanan protokoller anlatılmaktadır. Aday indüktif sinyallere batırılmış boncuklar, bariyer yerleşiminin etkisinin üstesinden gelmek için kullanılır ve gen ekspresyonunun analizi bunu doğrular.

Aday Faktörü Soaked Boncuk ile birlikte Geçirimsiz Engelleri Uygulama Chick Endüktif Sinyalleri Eğitim için

Burada, kraniyofasiyal morphogenesis/patogenezi sırasında protein düzeylerini algılamak ve ölçmek için ayrıntılı bir protokol sunuyoruz Buna ek olarak, immünostasyon için genç farelerden undecalcified Sert dokularda hazırlama ve donuk kesit için bir yöntem açıklanmaktadır.

Fare Kraniyofacial dokularda ve Undecalcified kemik doku hazırlama ve Immünostasyon

Bu makalede, kraniyofasiyal gelişim sırasında bazal ön beynin sinyal ve paternleme özelliklerini test etmek için tasarlanmış bir doku nakli tekniği anlatılmaktadır.

Yüz Gelişimini Değerlendirmek için Kuş Ön Beyin Kimeraları Oluşturmak

Protokol, disseke edilmiş fare embriyo yüz süreçlerinden veya kültürlenmiş fare embriyonik palatal mezenkim hücrelerinden tüm hücre protein lizatlarını izole etmek ve fosforile protein seviyelerini değerlendirmek için müteakip batı lekelemesini gerçekleştirmek için bir yöntem sunar.

Fosfoprotein Analizi için Fare Yüz İşlemleri ve Kültürlenmiş Palatal Mezenkim Hücrelerinden Tüm Hücre Protein Lisatlarının İzolasyonu

Keşfedin kraniyofasiyal gelişim sırasında yüzey sefalik ektodermin sinyal ve desenleme özelliklerini incelemek için doku nakli tekniğini. Bu yöntem, kimerik embriyolar oluşturarak gelişim biyolojisinde doku etkileşimlerini anlamaya yardımcı olur.

Kraniofasial Geliştirme sırasında Ektodermal Epiteli Sinyal Özellikleri değerlendirilmesi

Daha fazla video keşfet