Name: Gerilim duyarlı Boyalar ile Yengeç Stomatogastric Ganglion Nöronlar Optik Görüntüleme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-03-23T13:45:00.000+00:00
Duration: 9 min 36 s
Description: Öğrenin, gerilim duyarlı boyalar kullanarak yengeç stomatogastrik ganglionunda sinir hücrelerinin optik görüntülenmesi ve sinaptik etkileşimlerin kaydedilmesi. Bu yöntem, nöronal ağ dinamiklerini anlamak için yeni fırsatlar sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Ulm Üniversitesi ve SciMedia Ltd (Tokyo, Japonya), Newcastle Üniversitesi, Fen Bilimleri, Tarım ve Mühendislik Fakültesi Bilgisayar Bilim ve School destek kabul etmiş sayılırsınız.

1. Yengeç Stomatogastric Sinir Sistemi Hazırlanması Yetişkin Kanser pagurus L. (10 - 12 ° C) yerel kaynaklardan elde edilen (Newcastle Üniversitesi, Deniz Laboratories Dove) ve filtrelenmiş gazlı deniz suyu tutuldu. Diseksiyonu 40 dakika önce - Hayvanlar 20 buz ambalaj anesteziye edildi. Biz izole stomatogastric sinir sistemi (STNS 1) kullanılır. Soğutulmuş tuzlu su (10-13 ° C) - STNS (12 mg / dak 7) silikon elastomer kaplı (Elastosil RT-601, Wacker, Münih, Almanya) Petri kabı tutturulmuş ve sürekli superfused oldu. MgCl 2, 26; CaCl 2, 13; KCl, 11, trisma baz, 10 maleik asit, 5 NaCl, 440: serum fizyolojik (mMol * L-1) oluşuyordu. 13 ° C ve pH 7.4 - 7.6 Saline 11, sabit bir sıcaklıkta tutuldu. STNS diseksiyon ve hazırlık stomatoastric ganglion (STG) desheathing dahil olmak üzere ayrıntılı adımlar, vallahi Guttierez ve Grashow 1 makalede sunulmuştur. Bütün deneyler, 24 Kasım 1986 (86/609/EEC) ve Avrupa Toplulukları Konseyi Direktifi uyarınca yürütülmüştür. Şekil 1A ve Şekil 1B STNS bir şema, nöronlar ganglion arka kısmı düz bir yarım daire olarak düzenlenmiş olan tipik bir desheathed STG gösterir. Modelleme kil ile; STNS Petri kabı görüntüleme mikroskobu (Olympus, Tokyo, Japonya BW51 WI) işletim platformu sabittir. Her ikisi de, mikroskop sahne ve mikroskop optik kayıt sırasında hareket eserler önlemek için (Scientifica, Uckfield, Birleşik Krallık) bir titreşim izole masanın üzerine monte edilir. Stomatogastric ganglion (STG) üretilen motor desenlerini ekstrasellüler kayıtları kullanarak 2-4 izlenmektedir. Bu aşağıdaki adımları izleyin aracılığıyla yapılır: <ol><li> Vazelin tabanlı bir silindirik bölmesi, ana motor sinir (LVN) banyo (Petri kabı görüntüleme mikroskop işletim platformu üzerinde yerleştirilmeden önce bu diseksiyon aşamada yapılır sinir elektriksel olarak izole etmek için bir bölüm etrafında inşa edilmiştir .) </li><li> Bir, iki paslanmaz çelik elektrot tellerin diğeri bir referans elektrot olarak banyo, bu bölmeye yerleştirilir. </li><li> Diferansiyel sinyali kaydedildi süzülmüş ve bir AC diferansiyel amplifikatör (Univ. Kaiserslautern, Almanya) ile yükseltilir. </li><li> Ganglion motor aktivite, bir osiloskop (DL708E; Yokogawa, Tokyo, Japonya) kullanılarak takip edilir ve ayrıca bir veri toplama kartı (CED Güç, 1401, Cambridge Elektronik Tasarım, Cambridge, Birleşik Krallık) ve Spike 2 6.10 kullanılarak kaydedilen yazılımı (Cambridge Elektronik Tasarım, Cambridge, UK). Files Spike 2 6.10 (Cambridge Elektronik Tasarım, Cambridge, UK) kullanılarak analiz edilmektedir. </li></ol> 2. Boya Çözüm hazırlanması Biz, olumlu akım darbeleri kullanarak Mikroelektronlar ile boya yükleme kolaylaştıran bir çift pozitif yüke sahip floresan, voltaj duyarlı boya Di-8-ANEPPQ (Bioscience Cambridge) 5, kullandı. Boya çözüm, mümkün olduğu kadar çok ışık korunmalıdır. Boya çözüm şu şekilde hazırlanır: <ol><li> Boya 5 mg 1 ml, DMSO (Invitrogen) çözümü F-127 Pluronic asit ile karıştırılır. </li><li> Çözünmüş boya içeren plastik flakon Sigma Mikrosantrifüj 1-14 devir / dakika (Sigma, Osterode, Almanya) mikroelektrot tıkayabilir büyük boya parçacıkları ayırmak için 12.000 'den az 20 dakika süreyle santrifüj. </li><li> Boya çözüm supernatant (üst 200 mcL) bir pipet ile ayrılmış ve ayrı bir plastik şişe içinde saklanır. Her ikisi de şişeleri Işığa maruz kalmasını önlemek için alüminyum folyo ile sarılır. </li><li> Boya çözüm -20 ° C'de dondurulmuş </li><li> Önce boya çözüm kapalı ve sarılı flakon 10-15 dakika süreyle sıcak (25 ° C) su koyarak eritilir. </li></ol> 3. Hücre içi enjeksiyon kullanarak Sharp Mikroelektronlar Boya Yükleme Biz boya ile nöronların yüklemek için keskin Mikroelektronlar kullandı. MiCAM02 görüntüleme sistemi (SciMedia, Tokyo, Japonya) 6 kullandığımız boya yükleme kontrol etmek için. HS kamera görüntüleme sistemi, iki adet CCD kamera: İK kamera 1,4 ms olan en iyi temporal çözünürlük ile daha iyi uzaysal çözünürlüğü sağlayarak, daha büyük bir sensör çipi (6,4 mm x 4,8 mm), küçük bir (2,9 mm x 2,1 mm), ancak iyi temporal çözünürlük olarak 0,7 ms daha hızlı görüntüleme sağlayan hızlı sensör çipi. Boya yükleme adımları aşağıdaki gibidir: <ol><li> Mikroelektronlar ile çekilmiş bir P-97 Flaming - Brown (Sutter Instruments, Novato, CA, USA), 10 cm uzunluğunda kullanarak elektrot çektirme, filament (GB100TF 8P, Bilim Ürünler, Hofheim, Almanya) ile 1 mm dış çaplı cam tüpler. Elektrotlar, bir direnç çekti25 aralık - 40 MOhm 3M KCl (elektrot çektirmenin üreticisi tarafından sağlanan uygun çekerek parametre ayarları pipet yemek kitabı takip için). </li><li> Dondurulmuş boya çözüm erimiş ve bunun çok küçük bir miktar Microfil iğne (Microfil - 34g, Dünya Hassas Aletler, Sarasota, FL, USA) - emdi emdi boya 2 / 3 'üncü Microfil iğne etrafında doldurur . </li><li> Boya çözüm Microfil iğne, bir mikroelektrot ucu içine enjekte edilir. Mikroelektrot 15 dakika boyunca karanlık bir kutu yerleştirilir. </li><li> Mikroelektrot 3M KCl çözeltisi ile yeniden toprakla. Elektrot, başka bir 10-20 dakika sonra boya çözüm mikroelektrot hareket kılcal kuvvet emme elektrot ince ucu ulaşmak için izin karanlık bir elektrot saklama kutusu içine yerleştirilir. </li><li> Hazır mikroelektrot, bir elektrot tutucu yerleştirilir ve hücre içi amplifikatör (IA-251A, Warner Instruments Corporation, Hamden, CT, ABD) üzerine headstage sabittir. </li><li> Intrasellüler amplifikatör mikroelektrot akım darbeleri sürücüye bir darbe sinyali sağlar veri toplama kuruluna bağlıdır. </li><li> Mikroelektrot mikroelektrot manipülatör (PatchStar Scientifica Ltd Uckfield, İngiltere) kullanarak bir STG nöronun membran içine yavaşça yerleştirilir. 10x objektif çalışma mesafesi (UMPLFL10XW, NA 0.30, WD 3.3mm; Olympus Corporation, Tokyo, Japonya) bu yana görüntüleme mikroskop çok küçük mikroelektrot, eğik bir pozisyonda konumlandırılmış (yaklaşık 30 °) ve hareket edilmelidir doğru pozisyonda içine mikroelektrot mikroskop amacı yeniden odaklanma ve hareketli mikroelektrot birkaç adım gerektirir. Mikroelektrot başlatmak için ucu STG üzerinde olduğu gibi bir konuma taşınır. Mikroskop objektif, elektrot ucu odak görünene kadar indirilir. Sonra daha da düşürdü ama mikroelektrot dokunmak kadar değil. Mikroelektrot objektif odak yeniden görünene kadar indirilir. Bu adımlar, nöronlar objektif odak düzlemi açıkça ortaya çıkıncaya kadar tekrarlanır. Sonra bu dokunuşlar ve nazik bir şekilde seçilen STG nöron membranı deler kadar mikroelektrot indirilir. Bu osiloskop kullanılarak izlenebilir. </li><li> Intrasellüler elektrot nöron verilen faaliyet profili ve faaliyet ve ekstrasellüler elektrot 2,3,7 kaydedilen STG aktivite arasındaki ilişkiyi belirlemek amacıyla seçilen STG nöron aktivitesini kaydetmek için kullanılır. </li><li> Intrasellüler amplifikatör mevcut enjeksiyon moduna açıldığında ve 30 dakika 1 saniye için son mikroelektrot içine enjekte 1 saniye boşluklar ile ayrılmış olduğunu mikroelektrot içine pozitif geçerli adımları nA 10 enjekte etmek için kullanılır. Kaydedilen nöron içine enjekte güncel sürücüler, pozitif yüklü boya molekülleri. Donanımları mevcut ise aynı anda birden fazla nöron enjekte edilebilir. </li><li> Enjeksiyon dönemi içine enjeksiyon bitiminden sonra on dakika nöron içinde boya yayılmasını kontrol edilir. Filtre küp MSWG2 aracılığıyla, (Bunu yapmak için ultra-düşük dalgalanma halojen ışık kaynağı (Moritex, Tokyo, Japonya HL-151), 10x objektif ve aydınlatma MiCAM02 görüntüleme sistemi (SciMedia Ltd, Tokyo, Japonya) 480-550 nm eksitasyon filtresi; Olympus Corporation, Tokyo, Japonya). Görüntüleme sistemi, 192 x 128 piksel çözünürlük, 40 ms görüntüleme zaman, 'hbin' modu ve görüntü oturum başına 10 kare ile İK kamera kullanmak üzere ayarlayabilirsiniz. Boya dolum başarılı olursa, mikroelektrot konum etrafında nöron görüntüleme boyalı yama göstermeli ve bu boyalı yama ve 30 dakika sonra 10 dakika sonra çekilen görüntüler arasında büyümek gerekir. 30 dakika sonra boyanın yayılması yeterli değilse, daha fazla enjeksiyon süresi verilir. Alternatif olarak, yeni bir boya elektrodu kullanılıyor olabilir. </li><li> Elektrot nöron çıkardı ve nöron en az 20-30 dakika dinlenmek için bırakılır. Bu süre içinde, bir sonraki nörona boya ile enjekte edilebilir. </li></ol> 4. Boyalı Nöronlar görüntüleme Tek nöron aktivitesini boya dolum işlemden sonra görüntülü olabilir. Alternatif olarak iki veya daha fazla nöron görüntü birkaç STG nöronların eş zamanlı aktivite dolu olabilir. Prensip olarak, çok sayıda ve büyük olasılıkla tüm STG nöronlar boya ile dolu olabilir. Nöron görüntüleme İK kamera kullanarak MICAM 02 görüntüleme sistemi ile yapılır. Görüntüleme prosedürü aşağıdaki gibidir: <ol><li> Mikroskop amacı değişti ve yüksek ışık iletim verimliliği 20x objektif (XLUMPLFL20XW/0.95, NA 0.95, WD 2.0mm; Olympus Corporation, Tokyo, Japonya) görüntüleme veri toplama için kullanılır. Bu hedef, 10x objektif ve de nöronların daha ayrıntılı görüntü sağlayan yüksek büyütme veren çok daha fazla ışık toplar. Bein küçük miktarda boya yükleme zaten biz görüntüleme boya ile nöronların neden olabilecek potansiyel fotoğraf hasarı azaltmak için daha düşük ışık yoğunluğu da bu amaç ve görünür olduğunu g daha verimli ışık anlamına gelir. </li><li> Mikroskop işletim aşaması görüntülü olması gerekiyordu nöronların objektif görüş alanında olan ve amacı üzerine odaklanmıştır böyle bir konuma sahiptir. </li><li> Ekstraselüler kayıt verileri de MICAM 02 görüntüleme sistemi, analog giriş kanalı yoluyla beslenir. Bu analiz aşaması optik sinyalleri ve buna karşılık gelen motor desen veya ekstraselüler kaydedilen ani nispeten kolay ilişkin sağlar. </li><li> MICAM 02 sistemi, 2.2 ms görüntüleme süresi ya da 1,5 ms görüntüleme süresi ile 48 x 32 piksel çözünürlük ile 96 x 64 piksel çözünürlük kullanmak üzere ayarlayabilirsiniz. Her iki durumda da nöronların boyama çok güçlü değilse 'hbin' ayarı kullanılabilir. </li><li> Işık seviyesi fotoğraf modülasyon ve kaydedilen nöronların foto hasarı önlemek için mümkün olduğu kadar düşük (yani nöronların boya hala görüntüleme için yeterli floresan oluşturmak gerekir) olarak ayarlanır. </li><li> Oda aydınlatma ve geriye kalan tüm ışık kaynakları kapatılır. Buna ek olarak, dış kaynaklardan gelen ışığa maruz önlemek için kayıt teçhizat etrafında siyah bir perde kapatılır. </li><li> 16 saniye uzunluğunda - görüntüleme oturumları 4 arasında ayarlanır. </li><li> Çeşitli görüntüleme oturumda boyalı nöronların spontan aktivitesi kaydedilir. </li></ol> 5. Optik Görüntü Veri Analizi MICAM 02 görüntüleme sistemi ile ilgili; görüntüleme verileri analiz etmek BVAna yazılımı (SciMedia Ltd, Tokyo, Japonya sürüm 10.08). Görüntüleme veri görselleştirme yazılımları destekler ve analiz araçlarının yanı sıra bir dizi sağlar. Veri analizi ve yorumlama adımları aşağıdaki gibidir: <ol><li> Kaydedilen her nöron ilgi uygun bir dairesel bölge seçilir. Genelde biz 2 - 3 nöronlar, 48 x 32 piksel çözünürlükte ve 6 araştırmak için ilgi piksel yarıçapı bölgeler - 96 x 64 çözünürlükte nöronlar soruşturma ilgi 8 piksel yarıçapı bölgelerde. </li><li> Verilerin geçici yumuşatma boya veri floresan (düşük arka plan değeri nispeten düşük miktarda üretir Bu durum, özellikle gerekli olabilir; kullanılan ışık seviyesi düşük ya da düşük seviyede boya yükleme nedeniyle olabilir, örneğin neurite kaydedilen nöron). Genellikle bu gibi durumlarda biz 3 zamansal yumuşatma - 5 zaman birimi. </li><li> Optik kayıtların yanı sıra biz de ekstraselüler kayıt ekranını görüntüleme sistemi analog giriş görüntülemek için seçerek. </li><li> Bilgisayar ekranında tüm kayıtları görmek için, optik veri ve analog giriş görselleştirme için parametreler uygun şekilde ayarlanması gerekir. </li><li> Nöronlar, LVN ekstraselüler kayıt ve önceki hücre içi kayıt dayalı nöron sınıflandırma optik kayıtları göz önüne alındığında, nöron kimliğini belirlemek ve kaydedilen sinirsel faaliyetleri için faaliyet ilişkilendirmek mümkün. sinir. </li><li> Optik kayıtları açıkça gösteriyor ki, beklenen ve gerek kalmadan çok benzer olaylar, ekstraselüler kaydedilen ani ve aynı zamanda, diğer nöronların aktivitesi ile oluşan inhibitör post-sinaptik potansiyeller gibi eşik altı olaylar karşılık gelen sinirsel faaliyetleri üzerinde ortalama. </li><li> BVAna yazılım veri ihracat özellikleri, ilgi seçilen bölge ve aynı zamanda LVN kayıt içeren analog giriş için hesaplanan optik kayıtları ihracat kullanılabilir. Ihraç veri işleme ve diğer veri analiz yazılımı (örneğin basit durumda, Microsoft Excel (Microsoft, Redmond, WA, ABD) ek görselleştirme ve veri işleme için kullanılan olabilir) kullanılarak analiz edilebilir. </li></ol> 6. Temsilcisi Sonuçlar Şekil 2 iki nöron (PD, pilorik dilatör nöron LP, lateral pilorik nöron) eş zamanlı kayıt LVN kayıt ile birlikte STG bir yengeç pilorik merkezi desen jeneratör gösterir. Intrasellüler kayıtları esas alınarak belirlenen LP ve PD nöronların optik kayıtları gösteriyor ki, LP ve PD nöronların ilgili ekstrasellüler kayıtları ile de gerçekten bu maç. Ganglion ve ekstraselüler kayıt sitesi arasında aksonal iletim gecikmesi nedeniyle tutarlı bir başak zirvelerinden optik ve LVN kayıtları arasında 12 ms gecikme (bkz. Şekil 2 iç) vardır. Sunulan veriler de açıkça saptanabilir kaydedilen nöronların ani karşılık soma nöral aktivitenin olduğunu gösterir. s/ftp_upload/2567/2567fig1.jpg "alt =" Şekil 1 "/&gt; Şekil 1 A) stomatogastric sinir sistemi (STNS) şematik. Cog, commissural ganglion, RG, özofagus ganglion; STG stomatogastric ganglion; stn, stomatogastric sinir; LVN, lateral ventriküler sinir. B) yengeç stomatogastric ganglion (STG) - görüntü STG nöronların posterior semisirküler düzenleme gösterir. <img src="/files/ftp_upload/2567/2567fig2.jpg" alt="Şekil 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2 LVN kayıt ile birlikte PD tek bir süpürme Eşzamanlı kayıt ve LP nöron. Veri ve optik sinir kayıtları çok iyi maç olduğunu ve sinir forma kaydedildi ani gelen sinirsel faaliyetleri belirlemek olduğunu gösterir. Optik ve elektriksel olarak kaydedilerek faaliyetler arasındaki maç gösteren ve ortalama hem optik ve elektriksel olarak kaydedilen içerlek bir bindirme LP aksiyon potansiyelleri çeşitli tarama gösterir. Optik kayıt yöntemi biz de 14 PD ve LP nöronlar için karakteristik yavaş membran potansiyel değişiklikleri kaydetmek için veri düşük frekanslı bileşenlerini süzmek olmadığı gerçeği nedeniyle.

<ol><li>Gutierrez, G. J., Grashow, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cancer+borealis+stomatogastric+nervous+system+dissection%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Cancer borealis stomatogastric nervous system dissection.</a> J Vis Exp. , (2009).</li>
<li>Bartos, M., Nusbaum, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intercircuit+control+of+motor+pattern+modulation+by+presynaptic+inhibition%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Intercircuit control of motor pattern modulation by presynaptic inhibition.</a> J. Neurosci. 17, 2247-2256 (1997).</li>
<li>Blitz, D. M., Nusbaum, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Motor+pattern+selection+via+inhibition+of+parallel+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Motor pattern selection via inhibition of parallel pathways.</a> J Neurosci. 17, 4965-4975 (1997).</li>
<li>Stein, W., Smarandache, C. R., Nickmann, M., Hedrich, U. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+consequences+of+activity-dependent+synaptic+enhancement+at+a+crustacean+neuromuscular+junction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Biol%22%5BJournal%5D)">Functional consequences of activity-dependent synaptic enhancement at a crustacean neuromuscular junction.</a> J Exp Biol. 209, 1285-12300 (2006).</li>
<li>Loew, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potentiometric+dyes%3A+Imaging+electrical+activity+of+cell+membranes%5BTitle%5D)+AND+%22Pure+%26+Appl+Chem%22%5BJournal%5D)">Potentiometric dyes: Imaging electrical activity of cell membranes.</a> Pure & Appl Chem. 68, 1405-1409 (1996).</li>
<li>Tominaga, T., Tominaga, Y., Yamada, H., Matsumoto, G., Ichikawa, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+optical+signals+with+electrophysiological+signals+in+neural+activities+of+Di-4-ANEPPS+stained+rat+hippocampal+slices%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Meth%22%5BJournal%5D)">Quantification of optical signals with electrophysiological signals in neural activities of Di-4-ANEPPS stained rat hippocampal slices.</a> J Neurosci Meth. 102, 11-23 (2000).</li>
<li>Heinzel, H. G., Weimann, J. M., Marder, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+behavioral+repertoire+of+the+gastric+mill+in+the+crab%2C+Cancer+pagurus%3A+an+in+situ+endoscopic+and+electrophysiological+examination%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The behavioral repertoire of the gastric mill in the crab, Cancer pagurus: an in situ endoscopic and electrophysiological examination.</a> J Neurosci. 13, 1793-1803 (1993).</li>
<li>Zecevic, D., Wu, J. -Y., Cohen, L. B., London, J. A., Höpp, H. P., Falk, C. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hundreds+of+neurons+in+the+Aplysia+abdominal+ganglion+are+active+during+the+gill-withdrawal+reflex%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Hundreds of neurons in the Aplysia abdominal ganglion are active during the gill-withdrawal reflex.</a> J Neurosci. 9, 3681-3689 (1989).</li>
<li>Briggman, K. L., Kristan, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+dedicated+and+multifunctional+neural+circuits+generating+distinct+behaviors%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Imaging dedicated and multifunctional neural circuits generating distinct behaviors.</a> J Neurosci. 26, 10925-10933 (2006).</li>
<li>Nusbaum, M. P., Beenhakker, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+small-systems+approach+to+motor+pattern+generation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A small-systems approach to motor pattern generation.</a> Nature. 417, 343-350 (2002).</li>
<li>Marder, E., Bucher, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Understanding+circuit+dynamics+using+the+stomatogastric+nervous+system+of+lobsters+and+crabs%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Rev+Physiol%22%5BJournal%5D)">Understanding circuit dynamics using the stomatogastric nervous system of lobsters and crabs.</a> Ann Rev Physiol. 69, 291-316 (2007).</li>
<li>Grillner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biological+pattern+generation%3A+the+cellular+and+computational+logic+of+networks+in+motion%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Biological pattern generation: the cellular and computational logic of networks in motion.</a> Neuron. 52, 751-766 (2006).</li>
<li>Yuste, R., MacLean, J. N., Smith, J., Lansner, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+cortex+as+a+central+pattern+generator%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">The cortex as a central pattern generator.</a> Nat Rev Neurosci. 6, 477-483 (2005).</li>
<li>Stein, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+stomatogastric+rhythms%5BTitle%5D)+AND+%22J+Comp+Physiol+A%22%5BJournal%5D)">Modulation of stomatogastric rhythms.</a> J Comp Physiol A. 195, 989-1009 (2009).</li>
</ol>

Elektrofizyoloji geleneksel yöntemler (hücre içi ve dışı elektrot kayıtları) ile birlikte nöronlar STG voltaj duyarlı boya görüntüleme 8,9, bu küçük, çok iyi bilinen ve hala karmaşık sinir sistemi çalışır gelişmiş bir anlayış sağlar . STG merkezi desen jeneratör (CPG) nöron ağları 10, 11, böylece daha iyi bir anlayış STG ortaya çıkan fonksiyonel özellikleri aynı zamanda genel olarak nasıl anlamak için yardımcı olacaktır (pilorik ve mide değirmen ritim ağları dahil olmak üzere) bir prototip . CPG ağları ağ seviyesi işlevselliği oluşturur. CPG ağlar ve aynı zamanda yüksek bilişsel işlevler 13 motor kontrolü 12 kritik bir rol oynamaktadır, dolayısıyla onların acil özelliklerinin daha iyi anlaşılması sinirbilimin birçok alanda önemli bir etkisi olabilir.

<table><tbody><tr><td>MiCAM02</td><td>SciMedia</td><td></td><td>Görüntüleme sistemi</td></tr><tr><td>BVAna v.10.08</td><td>SciMedia</td><td></td><td>MiCAM 02 görüntüleme sistemi için veri analiz yazılımı</td></tr><tr><td>HL-151</td><td>Moritex, Tokyo, Japonya</td><td></td><td>Ultra düşük dalgalanmalı halojen ışık kaynağı</td></tr><tr><td>BX51 WI</td><td>Olympus Corporation</td><td></td><td>Epifloresans görüntüleme için dik mikroskop</td></tr><tr><td>20x görüntüleme objektifi </td><td>Olympus Corporation</td><td>XLUMPLFL20XW/0.95</td><td>NA 0.95, WD 2.0mm</td></tr><tr><td>10x görüntüleme objektifi </td><td>Olympus Corporation</td><td>Söz konusu metin sağlanmamıştır. Lütfen çevrilmesini istediğiniz İngilizce kaynağı iletiniz.</td><td>NA 0,30, WD 3,3 mm</td></tr><tr><td>480-550 nm uyarılma filtresi ve 590 nm emisyon filtresine sahip filtre küpü </td><td>Olympus Corporation</td><td>MSWG2</td><td></td></tr><tr><td>Titreşim önleyici masa</td><td>Scientifica Ltd</td><td>63-534</td><td></td></tr><tr><td>PatchStar elektrot manipülatörü</td><td>Scientifica Ltd</td><td>PS-7000C</td><td>Mikroelektrot manipülatörü</td></tr><tr><td>CED Power 1401</td><td>Cambridge Electronic Design</td><td></td><td>Veri toplama kartı</td></tr><tr><td>DL708E Osiloskop</td><td>Yokogawa</td><td></td><td>Hücre içi amplifikatör</td></tr><tr><td>AC diferansiyel amplifikatör</td><td>Kaiserslautern Üniversitesi, Almanya</td><td></td><td>Hücre dışı amplifikatör</td></tr><tr><td>P-97 Alevlenme &amp;#8211; Brown tipi elektrot çekici</td><td>Sutter Instrument Co.</td><td></td><td>Elektrot çekici</td></tr><tr><td>Sigma Mikro Santrifüj 1-14</td><td>Sigma-Aldrich</td><td></td><td>Santrifüj</td></tr><tr><td>Genex Pipettors Mline</td><td>Scientific Laboratory Supplies LTD</td><td>PIP7774</td><td>PIP7774</td></tr><tr><td>Filamanlı cam mikropipet</td><td>Bilimsel Ürünler</td><td>GB100TF 8P</td><td>mikro için cam&amp;#8211;elektrotlar</td></tr><tr><td>MicroFil &amp;#8211; 34G</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td></td><td>Microfil iğnesi</td></tr><tr><td>Spike 2 v6.10</td><td>Cambridge Electronic Design</td><td></td><td>Elektrofizyoloji yazılımı</td></tr><tr><td>Di-8-ANEPPQ</td><td>Cambridge BioScience</td><td>BT61014</td><td>Floresan voltaj duyarlı boya</td></tr><tr><td>F-127 Pluronic Asit, DMSO</td><td>Invitrogen</td><td>P-3000MP</td><td>Çözücü</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9888</td><td>Yengeç salini bileşeni</td></tr><tr><td>CaCl₂&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; 2H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C3881</td><td>Yengeç salin bileşeni</td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3911</td><td>Yengeç salin bileşeni, elektrolit çözeltisi</td></tr><tr><td>MgCl₂&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt; 6H&lt;sub&gt;2&lt;/sub&gt;O</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M9272</td><td>Yengeç salin bileşeni</td></tr><tr><td>Trizma baz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T1503</td><td>Yengeç salin bileşeni</td></tr><tr><td>Maleik asit</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M0375</td><td>Yengeç salini bileşeni</td></tr><tr><td>Elastosil RT-601</td><td>Wacker, Münih, Almanya</td><td></td><td>Petri kaplarının kaplanması</td></tr></tbody></table>

gerilim duyarlı boyalar ile yengeç stomatogastric ganglion nöronlar optik görüntüleme

Optical Imaging of Neurons in the Crab Stomatogastric Ganglion with Voltage-sensitive Dyes

Gerilim duyarlı boya görüntüleme nöron nöron ağları nasıl organize edilir anlamak için anahtar bir metodoloji ve katılan nöronların eş zamanlı aktivite nasıl ayrılmaz bir ağ işlevselliğini ortaya çıkmasına yol açar. Burada tespit desen üreten nöronların yengeç stomatogastric ganglion bu tekniğin uygulama metodoloji mevcut. Biz gerilim duyarlı floresan boya Di-8-ANEPPQ ile bu nöronların yükleme göstermek ve nasıl görüntü MiCAM02 yüksek hız ve yüksek çözünürlüklü CCD kamera görüntüleme sistemi kullanarak boya yüklü nöronların faaliyet göstermektedir. Biz MiCAM02 görüntüleme sistemi ile ilişkili BVAna görüntüleme yazılımı kullanarak kaydedilen görüntüleme verileri analiz göstermektedir. Yengeç stomatogastric ganglion birden fazla nöron detaylı bir faaliyetin eşzamanlı voltaj duyarlı boya görüntüleme ile birlikte geleneksel elektrofizyoloji teknikleri (hücre içi ve hücre dışı kayıtları) merkezi desen nasıl jeneratör sinir ağları çalıştığını anlamak için radikal yeni fırsatlar açar uygulanır.

Burada yengeç stomatogastric ganglion nöronlar detaylı aktivite, hızlı ve yüksek çözünürlüklü floresan voltaj duyarlı boya görüntüleme için bir metodoloji mevcut.

Gerilim duyarlı Boyalar ile Yengeç Stomatogastric Ganglion Nöronlar Optik Görüntüleme

Nöronların voltaj duyarlı boya görüntülemesi, nöronal ağların nasıl organize olduğunu ve eş zamanlı olarak...'nın nasıl gerçekleştiğini anlamak için temel bir metodolojidir.

Aşağıdaki deneyin amacı, kabuklu deniz canlısı St Somatic asterisk ganglionunun merkezi patern jeneratörlerindeki nöronlar arasındaki membran potansiyeli değişimlerini ve sinaptik etkileşimleri optik olarak kaydetmek için voltaj duyarlı boyalar kullanmaktır. Bu işlem, belirlenen nöronların keskin mikroelektrotlar kullanılarak DD sekiz ve at PQ ile yüklenmesi ve ikinci bir adım olarak motor sinir aktivitesinin eş zamanlı hücre dışı kaydıyla gerçekleştirilir; ardından voltaj duyarlı boyanın floresansı, hücre membran potansiyelindeki değişimlere karşılık gelen floresans değişimlerinin görüntülenmesini sağlayan yeşil ışıkla uyarılır. Sonrasında, aksiyon potansiyellerini ve sinaptik potansiyelleri tanımlamak amacıyla, nöron membranında bir ilgi alanı seçilerek görüntü verileri analiz edilir ve optik sinyal, kaydedilen hücre dışı bike aktivitesi ile karşılaştırılır.Görüntü nöronları sonuçları, sinaptik olarak etkileşen örüntü oluşturucu nöronların optik kaydının, geleneksel kayıt tekniklerini tamamlayabildiğini ve merkezi örüntü oluşturucu sinir ağlarının nasıl çalıştığını anlamak için yeni fırsatlar sunduğunu göstermektedir. Bu tekniğin ekstrasellüler ve hücre içi kayıtlar gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, boya dolumundan sonra, elektrot yerleşiminin getirdiği sterik kısıtlamalar olmadan ve uzun süreli kayıtlar sırasında nöronlara daha fazla zarar vermeden, membran potansiyeli değişikliklerinin ve sinaptik etkileşimlerin optik kayıtlarının gerçekleştirilebilmesidir. Bu yöntem, kabuklu deniz canlısı mide gastrik ganglionundaki örüntü oluşumuna dair ek bilgiler sağlayabilir.Bu yöntem ayrıca omurgalılardaki lokomosyon ve solunum gibi diğer sistemlere de uygulanabilir. Genellikle, bu yöntemde yeni olan kişiler, D seçimi enjeksiyonu ve hazırlığının zor olması ve membran potansiyeli değişimlerini tespit etmek için görüntü verilerinin analiz parametrelerinin yeterli şekilde ayarlanması gerektiği için zorluk yaşayacaklardır. Hazırlıklara, plastik bir vial içerisinde beş miligram floresan voltaj duyarlı boya D eight ve FPQ'yu bir mililitre DMSO çözeltisi içindeki F1 27 onic acid ile karıştırarak floresan boya çözeltisini hazırlayarak başlayın.Ardından, çözünmüş boyayı 12.000 rpm'de 20 dakika boyunca santrifüjleyin. Mikro elektrodu tıkayabilecek daha büyük D partiküllerini ayırmak için santrifüj işleminin ardından kullanıcı, süpernatantın üstten 200 µL kısmını aspire etmeye hazır hale gelir ve süpernatantı ayrı bir plastik tüpe aktarır. Işığa maruz kalmasını önlemek için tüpü alüminyum folyoya sarın.D çözeltisini deney gününde -20 °C dondurucuda saklayın. Sarılı tüpü 10 ila 15 dakika boyunca 25 °C suya yerleştirerek boya çözeltisini çözdürün. Kayıtlara hazırlanmak için, önce bir yengecin STS somatik gastrik sinir sistemini izole ederek başlayın ve somatik gastrik ganglionun kılıfını soyun.Elektriksel olarak izole bir bölme oluşturmak için lateral ventriküler sinirin (LVN) bir bölümünün çevresine vazelin uygulayın. Petri kabını görüntüleme mikroskobunun operasyon platformuna sabitlemek için modelleme kili kullanın. LVN bölgesinden kayıt almak için vazelin bölmesine paslanmaz çelik bir elektrot teli yerleştirin, referans elektrot olarak banyoya başka bir paslanmaz çelik elektrot yerleştirin.D çözeltisi çözündürüldüğünde, bir mikro dolum iğnesinin yaklaşık üçte ikisini dolduracak kadar D çözeltisi çekin. D çözeltisini mikro dolum iğnesiyle bir cam mikro elektrotun ucuna enjekte edin. Boya ile doldurulmuş elektrodu bir kutuyla kapatın ve 15 dakika bekleyin.Ardından mikro elektrodu üç molar potasyum klorür çözeltisi ile geri doldurun. Kılcal hareketin çözeltiyi elektrodun ince ucuna çekmesini sağlamak için mikro elektrodu 10 ila 20 dakika boyunca karanlık bir elektrot saklama kutusuna yerleştirin. 10 ila 20 dakika sonra, mikro elektrodu bir elektrot tutucuya yerleştirin ve hücre içi amplifikatörün baş aşamasına bağlayın.Hücre içi amplifikatör, mikro elektrota akım darbeleri iletmek için darbe sinyali sağlayan veri toplama kartına bağlanır. Ardından, mikro elektrot eğik bir açıya ayarlanır ve ucu somatik mide ganglionunun üzerine konumlandırılır. Elektrot ucu odaklanana kadar mikroskop objektifi aşağı indirilir.Ardından, mikro elektroda değdirmemeye dikkat ederek objektifi indirin. Daha sonra, mikro elektrot tekrar görünene kadar aşağı indirin. İlerlemeyi osiloskop üzerinden takip ederek, objektif odağında, seçilen somatik gastrik ganglion nöronunun membranını nazikçe delin.Bu noktada, kaydedilen hücre içi ve hücre dışı aksiyon potansiyellerini karşılaştırın. Delinen nöronu tanımlamak için, hücre içi amplifikatörü akım enjeksiyon moduna getirip mikroelektroda 10 nano pozitif akım basamakları enjekte ederek boya enjeksiyonuna başlayın. Akım basamakları bir saniye sürmeli ve aralarında bir saniyelik akımsız boşluklar olmalıdır.Bu enjeksiyona 30 dakika boyunca devam edin. Boya enjeksiyonunun 10. dakikasından sonra, nöron içindeki boya yayılımını kontrol etmek için MYCA zero two görüntüleme sistemini kullanın. Bu işlemi, 30 dakika sonra tekrar kontrol ederek tekrarlayın.Boya dolumu başarılıysa, mikro elektrodun etrafındaki boyalı alan 10. ve 30. dakika görüntüleri arasında genişlemelidir. Elektrodu nörondan çıkarın ve boyanın hücre içinde daha fazla yayılmasına izin vermek için nöronun en az 20 ila 30 dakika boyunca dinlenmesini sağlayın. Bu süre zarfında, bir başka nörona boya enjekte edilebilir.MYAM zero two görüntüleme sisteminde, yüksek iletim verimliliğine sahip 20x objektife geçiş yapın. Mikroskobun çalışma tablasını gerektiği şekilde yeniden konumlandırın ve D alan nöronuna odaklanın. Hücre dışı kayıt verilerini, sistemin analog giriş kanalı üzerinden görüntüleme sistemine aktarın.Oda aydınlatmasını ve kalan tüm ışık kaynaklarını kapatın. Ayrıca, dış kaynaklardan gelen ışık maruziyetini önlemek için kayıt düzeneğinin etrafındaki siyah perdeyi kapatın. Görüntüleme sistemini, tabloda gösterilen uygun piksel çözünürlüğüne ve görüntüleme süresine ayarlayın.Nörondaki boyama çok güçlü değilse, H bin ayarını kullanın. Kaydedilen nöronların fotomodülasyonuna ve fotohasarına yol açmamak için mikroskobun ışık seviyesini mümkün olduğunca düşük tutun. Görüntüleme oturumlarını dört ile 16 saniye arasında olacak şekilde ayarlayın.Ardından, DY nöronlarının spontan aktivitesini birkaç görüntüleme seansında kaydedin. BV A NA görüntüleme yazılımını kullanarak optik yanıtların analizine başlamak için, verilerin zamansal yumuşatılması gerekiyorsa kaydedilen her nöron üzerinde uygun bir dairesel bölge seçin. Örneğin, D nispeten düşük miktarda floresans üretiyorsa, yazılımı kullanarak üç ila beş zaman birimiyle zamansal yumuşatma uygulayın.Bu şeklin sol üst kısmındaki boya enjekte edilmiş iki nöron, hücre içi kayıtlarına dayanarak bir PD nöronu ve bir LP nöronu olarak tanımlanmıştır. Sağlarındaki voltaj izleri, her bir nöronun spontan optik yanıtlarını göstermektedir. LVN'nin hücre dışı kaydı ise şeklin alt kısmında gösterilmiştir.LP ve PD nöronları, bir yengeç somatik gastrik ganglionunun pilorik merkezi patern jeneratörünün bir parçasıdır ve karşılıklı inhibitördürler. Bunların optik kayıtları, LVN'nin hücre dışı kayıtlarıyla iyi bir şekilde eşleşebilir. Alttaki ek, optik ve elektriksel olarak kaydedilen aktiviteler arasındaki uyumu gösteren, LP aksiyon potansiyellerinin birkaç taramasının ve bunların ortalamasının üst üste binmiş halini göstermektedir.Bu teknik üzerinde uzmanlaşıldığında ve uygun şekilde uygulandığında, bir buçuk saat içinde tamamlanabilir. Gözlemlenen membran potansiyeli değişimlerinin tetiklenmesinde hangi sinaps tipinin rol oynadığı gibi ek soruları yanıtlamak için, bu prosedürü takiben immünboyama gibi diğer yöntemler uygulanabilir. Bu videoyu izledikten sonra, mide gastrik ganglionlarındaki tanımlanmış ve birbirleriyle etkileşim halindeki birden fazla nöronun optik olarak nasıl kaydedileceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.

optical-imaging-neurons-crab-stomatogastric-ganglion-with-voltage

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Bu protokol, boyalar, ayarlanabilir bir çözünürlüğe sahip, sağlam sinir ağları gibi kobay enterik sinir sistemi plexuses gibi optik kayıt sağlayan elektriksel aktivitenin ne kadar voltaj duyarlı göstermektedir ki, tek hücrelerden çok ganglion devre arasında değişmektedir.

Gerilim duyarlı Boyalar kullanarak Gine domuzu Enterik Ağları Elektrik Faaliyet Optik Kayıt

Bu video, voltaja duyarlı bir boya ile boyanmış bir beyin dilimindeki nöronal aktivitedeki değişiklikleri gözlemlemek için bir prosedürü göstermektedir. Boya, floresan yoğunluğunu değiştirerek nöronun zar potansiyelindeki değişiklikleri yansıtır. Elektriksel uyaranların ve gelişmiş görüntüleme tekniklerinin uygulanması yoluyla bu işlem, VSD floresansına dayalı olarak nöronal membran potansiyelindeki gerçek zamanlı değişikliklerin görsel olarak izlenmesini sağlar.

Gerilime Duyarlı Bir Boya ile Boyanmış Beyin Dilimlerinde Nöronal Aktivitenin Optik Kaydı

Kaynak: Shannonhouse, J.,  et al. İn Vivo Sağlam dorsal kök gangliyonlarındaki primer duyusal nöron ağlarındaki nöronal toplulukların kalsiyum görüntülemesi. J. Vis. Uzm. (2023). Video, transgenik bir farenin dorsal kök gangliyonlarındaki (DRG) nöronal aktiviteyi izlemek için in vivo bir kalsiyum görüntüleme tekniğini göstermektedir. DRG nöronları, kalsiyuma bağlandıktan sonra floresan yoğunluğunu artıran bir kalsiyum indikatörünü ifade eder. Bir arka pençeye uygulanan mekanik veya termal...

Bir farenin sağlam dorsal kök gangliyonlarındaki nöronal toplulukların in vivo kalsiyum görüntülemesi

Burada kerevit abdominal sinir kordonunun diseksiyonunu tarif ediyoruz. Ayrıca, yüzücü motor nöronlarından hayali hareketi kaydetmek için elektrofizyolojik bir teknik de gösteriyoruz.

Kerevit ve yüzgeç Sistemi: Sinir Kordon ve Motorlu Pattern Extracellular Recordings ve Diseksiyon için Pratik Kılavuzu

Enterik sinir sistemi (ENS), bağırsak duvarında bulunan ve bağırsak reflekslerini kontrol eden bir nöron ve glia ağıdır. Bu protokol, Ca2+ görüntüleme kullanılarak ENS'nin canlı preparatlarında enterik nöronların ve glia'nın aktivitesini kaydetme yöntemlerini açıklar.

Enterik Sinir Sistemi Yerinde Ca 2+ Görüntüleme

Burada, sinir uçlarına kurbağa sinir kütüğünden kalsiyuma duyarlı bir boya yüklemek için bir yöntem açıklıyoruz. Ayrıca, periferik sinir uçlarında hızlı kalsiyum geçişlerinin kaydedilmesi ve analizi için bir protokol de sunuyoruz.

Kurbağa Sinir Uçlarına Sinir Kütüğü Vasıtasıyla Kalsiyum Boyası Yükleme: Kurbağa Nöromüsküler Kavşağında Kalsiyum Geçici Kayıt

Bu protokol, transgenik olmayan omurgasız türlerde, absorbans voltajı duyarlı boyalar ve bir fotodiyot dizisi kullanılarak nöronal popülasyon aktivitesini tek hücreli çözünürlükle görüntüleme için bir yöntem sunar. Bu yaklaşım, görüntüleme ve analizin tek bir gün boyunca takip edilebildiği hızlı bir iş akışı sağlar.

Transgenik Olmayan Omurgasızlarda Tek Nöron Çözünürlüğü ile Ağ Dinamiklerini Kaydetmek için Fotodiyot Tabanlı Optik Görüntüleme

Burada canlı, uyuşturuldulu bir laboratuvar faresinin genikül ganglionunun nasıl ortaya çıkarılacağını ve bu nöronların topluluklarının uyaranları tatmak için tepkilerini ölçmek için kalsiyum görüntülemenin nasıl kullanılacağını ve farklı uyarıcılarla birden fazla denemeye izin vermeyi sunuyoruz. Bu, hangi nöronların hangi şok tabancalarına yanıt verdiğine derinlemesine karşılaştırmalar sağlar.

Tadı Uyaranlara Fare Genikül Ganglion Nöron Yanıtlarının In vivo Kalsiyum Görüntülemesi

Bu protokol, dorsal kök ganglionunun (DRG) cerrahi maruziyetini ve ardından GCaMP3'ü (genetik olarak kodlanmış Ca2+ göstergesi; Yeşil Floresan Protein-Kalmodulin-M13 Protein 3) İpsilateral arka pençeye çeşitli uyaranlar uygularken Pirt-GCaMP3 fareleri kullanılarak nöronal toplulukların Ca2+ görüntülenmesi.

İn Vivo Bozulmamış Dorsal Kök Ganglialarında Primer Duyusal Nöronların Ağlarında Nöronal Toplulukların Kalsiyum Görüntülenmesi

Genetik olarak kodlanmış kalsiyum göstergeleri (GECI), duyusal nöron sinyalinin sağlam, popülasyon düzeyinde bir analizini sağlar. Burada, sıçan trigeminal gangliyon nöron aktivitesinin in vivo GECI görselleştirmesine izin veren yeni bir yaklaşım geliştirdik.

Canlı Olarak Taşınabilir Sıçan Trigeminal Ganglionundaki Duyusal Nöronların Kalsiyum Görüntülemesi

Bu protokol, sağlam trigeminal ganglion (TG) nöronlarının in vivo GCaMP kalsiyum görüntülemesini tanımlar. Bu tanım, TG maruziyet cerrahisini, TG nöronlarının in vivo konfokal mikroskopi görüntülemesini, TG nöronlarının mikroskobik görüntülemesi sırasında somatik uyaranların uygulanmasını ve in vivo GCaMP kalsiyum görüntüleme verilerinin analizini içerir.

In vivo (İn canlı) İntakt Trigeminal Gangliyonlarda Primer Duyusal Nöron Ağlarında Nöronal Toplulukların Kalsiyum Görüntülemesi

Öğrenin, gerilim duyarlı boyalar kullanarak yengeç stomatogastrik ganglionunda sinir hücrelerinin optik görüntülenmesi ve sinaptik etkileşimlerin kaydedilmesi. Bu yöntem, nöronal ağ dinamiklerini anlamak için yeni fırsatlar sunar.

Gerilim duyarlı Boyalar ile Yengeç Stomatogastric Ganglion Nöronlar Optik Görüntüleme

Daha fazla video keşfet