Name: Enfarktüsü bir murin Model Koroner Arter ligasyon ve intramiyokardiyal Enjeksiyon (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-06-07T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 41 s
Description: Öğrenin geçici ve kalıcı koroner arter ligasyonu ile intramiyokardiyal enjeksiyon tekniklerini fare kalbinde. Bu mikrocerrahi yöntemler iskemi/reperfüzyon hasarını incelemek için kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Araştırma ve Lisansüstü Eğitimi Anabilim Dalı, uyanıklık ve yardım için benim araştırma ve Karşılaştırmalı Tıp Bölümü destek için fon sağlamak için kabul etmek istiyorum. Ben de onların yardım için verdikleri destek ve rehberlik için Fizyoloji Anabilim Dalı yanı sıra benim laboratuvarı öğrencilerin ve teknisyenler tanımak istiyorum. Son olarak, ben fare mikrocerrahi öğrendim bu süre zarfında eğitim fırsatı için post-doktora hocası Dr Charles E. Murry, teşekkür etmek istiyorum.

<ol><li> Steril cerrahi aletler (Tablo 1) ve 3 "pamuk uçlu aplikatörler steril bir underpad yerleştirilir. Boncuk sterilizatör (Germinator 500) açık. </li><li> Fare (yaş:&gt; 6 hafta ağırlık: 18g) bir ip tribromoethanol 20μl / g BW (süresi yaklaşık 40 dakika 250mg/kg) enjeksiyonu ile anestezi vardır. </li><li> Farelerin ayak tutam steril bir yağ (Tears Yenilendi) yanıt vermeyen gözlerde kuruma ve göğsünün sol tarafında onları korumak için uygulanan deri kürk kaldırmak için tüy dökücü (örneğin Nair) ile kaplanmıştır. </li><li> Tüy dökücü, ılık akan su ve betadin / alkol sürüntü cerrahi alanı dezenfekte etmek için kullanılır ile yıkanıp. </li><li> Fare bir pleksiglas tablo sabit bir sıcak deltaphase izotermal ped üzerine yerleştirilir. Her bacak bandı kullanılarak hareketsiz ve üst çene tutmak için kalın bir iplik üst dişlerin altında yatay olarak yerleştirilir. </li><li> Tablo dikey olarak yerleştirilmiş ve bir fiberoptik ışık transözofageal aydınlatma için boyun bölgesi üzerine doğrudan parlıyordu. Böylece trakea PE boru ekleme kolaylaştırmak için görüntülenebilmekte sağlayan, boğaz açma, iyi aydınlatılmış bir orifis olarak görülüyor böyle hassas bir şekilde yerleştirilmesi gerekir. </li><li> Hızı 125 solunum / dakika;; pik inspiratuar basınç 10-12 cmH2O * not tüp daha sonra sürekli pozitif basınçlı ventilasyon (TOPO ventilatör yönetmek için ventilatör (% 95 O 2 /% 5 CO 2 bağlı) bağlı olduğu ayarları) zorlanma ve cinsiyet 1-3 ile değişir. Havalandırma senkron göğüs hareketleri tarafından onaylandıktan sonra, bağlantı, ameliyat sırasında ekstübasyon önlemek için ped bant ile sabitlenir. </li><li> # 3 neşter kolu bağlı bir # 10 steril neşter bıçağı, göğüs cildi yukarı çekin dişli forseps kullanma ve uzak 1.5cm sternum için cilde paralel bir kesi yapmak için kullanılır. </li><li> Kavisli Vanna microscissors pektoralis kasları kesmek ve küçük bir delik interkostal kas yapmak için kullanılır. </li><li> Düz, künt microscissors 3 kaburga üzerinden kesmek için kullanılır. </li><li> 9mm pediatrik oftalmik spekulum göğüs kafesi geri çekmek için kullanılır. </li><li> Kavisli bir forseps kullanarak, kalp uzak perikard çekin ve hafifçe açık gözyaşı dişli forseps kullanabilir. </li><li> Castroviejo iğne tutucu, 6mm konik noktası 3 / 8 iğne konuları kullanarak, sol ön inen koroner arter (kalbin uzun ekseni boyunca) altında 8-0 polietilen dikiş dik. <ol><li> Zamanlı reperfüzyon için çıkarılabilir geçici bir ligatür için, PE90, steril bir 0.5-1cm adet paralel olarak koroner arter kalp üzerine yerleştirilir. Ilk koroner arter altında döngüye olmuştur dikiş, sonra boru bağlıdır. Serbest bırakılmasını zamanda ligatür gevşetti. Istenen ve oklüzyon / reocclusion süresi 4 değiştirilebilir tekrar edilebilir. Protokol ve kullanılan anestezi türü uzunluğuna bağlı olarak, takviyesi gerekli olabilir. </li><li> Kalıcı bir oklüzyon için, koroner arter altında bağcıklı ligatür sadece bağlıdır. Beyazlaşma ve diskinezi belirgin ve uzun dikiş sonunda 5-10 kesilir. </li><li> Için intramiyokardiyal enjeksiyon (ler), Hamilton 30 gauge eğimli steril iğne ile steril bir şırınga ligatür sağ tarafında yaralanma alanının üstünde kalp üssü haline getirilmiştir. Iğne sonra yaralanma alana, gelişmiş ve biraz bu yüzden konik yaklaşık sınır bölgesi görülebilir içine kapanık. Bazı çözüm şırınga (2-3μl) kalp içine enjekte edilir ve iğne yerinde tutulur. Şırınga, başka bir 1-3mm geri çekilir ve çözüm geri kalanı enjekte edilir. Çözümü ile oluşan bleb çözülene kadar şırınga yerinde tutulur. İğne sonra kaldırılır. Herhangi bir kanama varsa kanama 5-7 durana kadar, bir pamuk uçlu bir aplikatör yavaşça iğne ekleme sitesi üzerine basıldığında. </li></ol></li><li> Miyokard manipülasyonlar tamamlandıktan sonra, kaburga retraktörlere kaldırılır ve göğüs boşluğu 6-0 surgipro sütür kullanarak 2-3 yatak dikişlerle kapatılır. </li><li> İki-üç yatak dikişlerle sonra 1-3 damla steril serum fizyolojik içinde% 0.25 marcaine 01:10 (0.1ml/25g fare), pektoral kaslar kapatmak için yapılır kas uygulanır ve daha sonra 2-3 yatak sütür yapılır cilt kapatın. </li><li> Fare ventilatör kaldırılır. Sığ, hızlı, bir kez ritmik nefes doğrulanır, fare ekstübe edilebilir. </li><li> 0.5 ml ılık steril serum fizyolojik dorsal subkutan alanı içine enjekte edilir ve bu hareketlilik (1 saat minimum) yeniden kazanıncaya kadar fareyi bir kafes içinde bir ısıtıcı yerleştirilir. </li><li> Hayatta kalma deneyler, farelerin kafesleri içine geri yerleştirilir ve kurban zamanına kadar vivaryum döndü. Ilk 2 gün boyunca, nemlendirilmiş bir besindir(bu yüzden, ağrıya neden olabilir ulaşmak zorunda değilsiniz) besleme kolaylaştırmak için kafes katta yerleştirilmiş ve buprenorfin her 6-12saat uygulanmalıdır. Post-operatif bakım yeterli hareketlilik, bakım ve beslenme alışkanlıkları da doğrulamak için ilk hafta için günlük izleme içerir. </li><li> Cerrahi aletler, etanol ile temiz sildi ve sonraki ameliyat öncesi boncuk sterilizatör içine eklenir. </li><li> Kurban zamanda, fare pentobarbital sodyum ile anestezi (55-65 mg / kg 65mg/ml). Anestezi yeterli bir düzlem elde edilir, göğüs boşluğu açıldı. </li><li> Kalp hala atıyor iken, 23 gauge soğuk potasyum klorür içeren iğne (KCl, 30mm) veya 2,3-butanedione ile bir şırınga monoxime (DGM; 10mM) ponksiyon ventrikül posterior bazal bölge ve çözüm için kullanılır. kalp diyastol tutuklandı kadar yavaşça odasına enjekte edildi. </li><li> Kalp kaldırıldıktan sonra, PBS içeren bir şırınga retrograd kalan kan kaldırmak için kalp durulama serpmek için kullanılır. Akut çalışmalar için, reperfüzyon dönemi sonunda, LAD oklüzyonu orijinal noktada yeniden bağlandı. % 1 Evan mavi içeren bir çözüm aort içine enjekte edilir. Kalp ayıklanır sonra, 2,3,5-triphenyltetrazolium klorür% 1 inkübe 3 bölüme eşit kalınlıkta enine kesilmiş ve morfometrik analizler 11 için görüntülü. Kronik çalışmalar için, kalp daha sonra daha sonra rutin prosedürlere göre işleme ve gömülü fikse. Slaytlar histolojik sonra lekeli ve 9,10,12 (filiz, NIH Image J veya Image Pro Plus kullanarak) morfometrik analizler için görüntülü olabilir. </li></ol> Temsilcisi Sonuçlar: doğru bir şekilde yapılırsa, farelerde sağkalım oranları (erkek yaşı 8-10 hafta, 22-28g; kadın: yaşı 10-12 hafta, 20-26g):% 90 üzerinde akut iskemi / reperfüzyon ve iskemik ön deneyler, üzerinde % 85, kalıcı arter ligasyonu çalışmaları ve intramiyokardiyal enjeksiyonlar için yaklaşık% 80. Erken yaralanma olduğundan daha kolay görünür metabolik değişiklikler, iskemi / reperfüzyon ziyade yapısal, infarkt büyüklüğü ve iskemik ön deneyler LAD tarafından sağlanan kalp serpmek aort içine% 1 Evan mavi boya beslerken tarafından yapılır ( Şekil 1A). Kalp yarısında kaldırılır ve enine kesilmiş sonra, doku infarkt (Şekil 1B) ölçmek için 2,3,5-triphenyltetrazolium klorür% 1 çözüm inkübe edilir. Alanları filiz veya aynı büyütme görüntülü bir mikrometre kullanarak kalibre edilebilir NIH görüntüleme yazılımı kullanılarak ölçülür. Bu numaralar, risk / sol ventrikül ve infarkt riski 11 / alan boyutu alanı hesaplamak için kullanılır . Gerilme farklılıklar, kalp ağırlığı, vücut ağırlığı ya da karşılaştırma amaçlı tibia uzunluğu bu önlemleri normalleştirmek için bakım alınmalıdır vücut ağırlığı ve kalp boyutu ve bu nedenle varyasyonlar neden olabilir. Böyle bir nekroz olarak brüt yapısal değişiklikler kalıcı arter ligasyonu, duvar incelmesi ve oda dilatasyon. Infarkt ve kalıcı oklüzyon modeli (Şekil 2A) sol ventrikül, oda alanı, septal duvar ve sol ventrikül serbest duvar kalınlığı göre nekroz tedavi ve / veya zaman etkilerinin karşılaştırılması da filiz veya NIH görüntüleme kullanılarak ölçülebilir yazılım. Picrosirius, kırmızı / hızlı yeşil (Şekil 2B) Kollajen boyama duvar sertleşme 8-10 fonksiyonel indeksleri ilişkilidir insterstitial fibrozis ölçmek için kullanılabilir . Şekil 3'te görüntü dağıtım kalıcı arter ligasyonu sonrası kalp sınır bölgesine enjekte 6ul çözüm (Evan mavi) temsil eder. Yanı sıra temel doğru olarak ve aynı zamanda transmurally yaralanma yönde ilerler dikkat edin. <img src="/files/ftp_upload/2581/2581fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1. A. Evan 'in Blue önce eksizyon aort enjekte Bu görüntü kalp (lekeli) ve tıkalı alanı (lekesiz) perfüze bölgeleri gösterir. B. Evan' akut iskemi / reperfüzyon hasarı Mavi ve TTC boyama. Bu unoccluded bölgelerinde metabolik canlı doku TTC boyama (kırmızı) gibi boyanmış mavi boya dağılımını gösteren temsili resim (20x). Nekrotik alanlar leke yoktur ve bu yüzden (ana hatları) soluk kalır. <img src="/files/ftp_upload/2581/2581fig2.jpg" alt="Şekil 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2. A. Hematoksilen ve eosin boyası Bu post-MI (20x), 4 gün infarkt bölgenin boyunca enine kesilmiş bir fare kalp H &amp; E boyama temsil eden bir görüntü (20x) . * Doku nekrozu gösterir, oklar granülasyon dokusu, RV = sağ ventrikül ve LV = sol ventrikül B. Picrosirius kırmızı ve yeşil hızlı leke Bu birpicrosirius kırmızı / 4 hafta post-MI fare kalp bir kesit hızlı yeşil boyama temsilcisi görüntü (20x). Sitoplazma lekeler yeşil ve kollajen lifleri kırmızı. <img src="/files/ftp_upload/2581/2581fig3.jpg" alt="Şekil 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 3"> 6ul intramiyokardiyal enjeksiyon aşağıdaki Şekil 3. Evan Mavi boya leke dağılımı. Bu kalp koroner arter ligasyonu (12x) hemen ardından sınır bölgesi 6ul intramiyokardiyal enjeksiyon boyunca küresel ve transmural Evan Mavi boya dağılımını gösteren temsili bir resim.

Bu hayvan protokolü tarafından onaylanmış ve East Carolina Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından belirlenen kurallara ve yönetmeliklere uygun olarak.

Koroner kalp hastalığı, epidemiyolojik ve mali açıdan önemli bir halk sağlığı problemi olmaya devam etmektedir. Halen önemli bir temel araştırma, yaralanma ve yeniden yapılanma devam hangi mekanizmalar ve klinik kullanım için geliştirilen isteniyorsa potansiyel terapötikler bu süreçleri modüle anlamak için gerekli. Kemirgenler en sık kullanılan ve genetik olarak değiştirilmiş fareler geniş bu türün daha cazip bir model kılar. Fare ve diğer türler arasında farklılıklar olmasına rağmen, bir fare modeli pek çok avantajı vardır. Basit bir diseksiyon kapsamı veya büyüteç kullanın ve iyi aydınlatılmış koşullarda damar kolayca görülebilir (damarsal detaylı brüt anatomisi, Salto-Tellez ve ark., 2004 13). 25g bir fare toplam kan hacminin 2ml 14 daha az olduğundan post-operatif mortalite riski azaltmak için, büyük damarların kesilmesinin önlemek için çok önemlidir. , Aşırı kanama oluşur durumunda, basınç veya belirlemekte koterizasyon nazik uygulama, kanamayı durdurmak için kullanılabilir. Bu işlem aynı zamanda çeşitli şekillerde değiştirilebilir. Örneğin, fare, izofluran, ketamin / xylazine veya sodyum pentobarbital ve uygun seçimi protokol 15-18 süresi tarafından belirlenir kullanarak narkoz olabilir . Toe-tutam refleks anestezi derinliği en yaygın olarak kullanılan bir endeks. Ayrıca, uzun vadede hayatta kalma olasılığını artırmak için, bazı araştırmacılar, öldürücü aritmi 19,20 ancak, bu son zamanlarda akut antiapoptotik özellikleri olduğu gösterilmiştir edildiğini dikkate alınması gerekir insidansını azaltmak için, lidokain gibi antiaritmik ilaçlar modeli 21. Ayrıca, ameliyat sonrası ağrıyı azaltmak için analjezikler, buprenorfin gibi cerrahi 3,16,17,22,23 sonra ilk 48 saat boyunca uygulanmalıdır. Ameliyat sırasında vücut ısısı (özellikle uzun protokoller için) korumak için, bir ısıtma yastığı ile seri bir rektal prob izotermal ped yerine sık sık kullanılır. Kalıcı oklüzyon, infarkt boyutunu ligatür yerini ayarlayarak değişiklik olabilir; tıkanıklığı (ler) ve reperfüzyon (ler) süresi değişmiş olabilir: iskemi / reperfüzyon ve / veya iskemik ön veya postconditioning intramiyokardiyal enjeksiyonları (örn. hücreleri, proteinler), 1-3 enjeksiyon yerlerde olması ve enjeksiyon başına hacmi 15 ul 24 kadar olabilir. Hücreleri enjekte ediliyor, iğne gauge iğnenin iç çapı Sheering önlemek için yeterince büyük 5,25,26 hücrelerin büyüklüğüne göre seçilmelidir (genellikle 26-30). Cerrahi ile tetiklenen inflamatuvar süreçler nedeniyle boşa önlemek için, bazı araştırmacılar, 27-29 ameliyat sonrası herhangi bir noktada kapalı göğüs fare kalpleri kapamak ve reperfuse ex vivo manipüle bir tuzak kullanılarak bildirdin . Daha yakın zamanlarda, Gao ve ark. 30 geçici ve kalıcı oklüzyon havalandırma için gerek kalmadan yapılabilir ve bir kaç laboratuarları, kapalı göğüs intramiyokardiyal enjeksiyonları 25,31 gerçekleştirmek için ultrason kullanmaya başlamışlardır olduğunu göstermiştir . Farelerde koroner arter ligating fizibilite gösteren ilk çalışma 1954 32 Johns ve Olson tarafından yayımlanan bu yana, diğerleri bu model kabul edilen ve miyokard hasarı ve remodeling 3,33-45 çeşitli yönlerini incelemek amacıyla bir değişiklik. Büyüklüğü, üreme kapasitesi, satın alma ve bakım için nispeten daha az harcama açısından fareler doğası bu türün geniş bir yelpazede fizyolojik ve patofizyolojik çalışmalar için cazip bir araç haline getirmektedir. In vivo gelişmeler 46-49 görüntüleme teknolojisinin yanı sıra minyatür, gerçekleştirmek ve büyük ölçekli genomik ve proteomik, uyuşturucu taraması, hücre-bazlı ve / veya protein tedavilerin etkinliği yanı sıra kombine biyomalzemeler 50-64, analiz etmek anlamına gelir. giderek daha geniş, her yerde veya doku özel transgenik veya mutant / nakavt fareler tarafından sağlanan genetik manipülasyon, miyokard infarktüsü fare modeli şüphesiz, akut kardiyak yaralanma ve uzun vadeli remodeling değerlendirilmesinde çok değerli bir araç olmaya devam edecektir. Bu nedenle, bu deneyler gerçekleştirmek için güvenilir ve tekrarlanabilir olması tartışılmaz bir değeri yoktur.

<table><tbody><tr><td>Uzun Vanna Makası</td><td>George Tiemann &amp;amp; Co.</td><td>160-159</td><td></td></tr><tr><td>Mikro Diseksiyon Makası</td><td>George Tiemann &amp;amp; Co.</td><td>160-161</td><td></td></tr><tr><td>Pens &amp;#8211; düz, 1x2 dişli</td><td>George Tiemann &amp;amp; Co.</td><td>105-205</td><td></td></tr><tr><td>Neşter sapı #3</td><td>George Tiemann &amp;amp; Co.</td><td>105-64</td><td>#10 steril uç</td></tr><tr><td>Pens &amp;#8211; yarı eğri tırtıklı</td><td>George Tiemann &amp;amp; Co.</td><td>160-19</td><td></td></tr><tr><td>Doku Makası</td><td>George Tiemann &amp;amp; Co.</td><td>105-410</td><td></td></tr><tr><td>Castroviejo İğne Tutucu</td><td>Miltex Inc.</td><td>18-1828</td><td></td></tr><tr><td>Cook Göz Spekulumu</td><td>Miltex Inc.</td><td>18-63</td><td></td></tr><tr><td>Surgipro II 8-0</td><td>Suture Express</td><td>VP-900-X</td><td></td></tr><tr><td>Prolene 6-0</td><td>Suture Express</td><td>8776</td><td></td></tr><tr><td>Germinator 500 Boncuk Sterilizatörü</td><td>Cellpoint Scientific</td><td>65369-1</td><td></td></tr><tr><td>Deltaphase izotermal ped</td><td>Braintree Scientific, Inc.</td><td>39DP</td><td></td></tr><tr><td>Hamilton şırınga - 25&amp;mu;l</td><td>Hamilton Co</td><td>80430</td><td></td></tr><tr><td>30 gauge eğimli iğne</td><td>Hamilton Co</td><td>7803-07</td><td></td></tr><tr><td>Ventilatör</td><td>Kent Scientific</td><td>TOPO</td><td></td></tr></tbody></table>

enfarktüsü bir murin model koroner arter ligasyon ve intramiyokardiyal enjeksiyon

Coronary Artery Ligation and Intramyocardial Injection in a Murine Model of Infarction

Fare modelleri, miyokardın in vivo akut yaralanmalarını ve kronik yeniden şekillenmesini incelemek için değerli bir araçtır. Tüm organizmaya veya miyokarda uygulanan genetik modifikasyonların ve bir dizi biyolojik ve/veya sentetik malzemenin ortaya çıkışıyla, bunların herhangi bir kombinasyonunun akut iskemik yaralanmanın boyutunu hafifletme ve miyokardiyal yeniden şekillenmeyi takiben gelişen kalp yetmezliğinin başlangıcını engelleme konusunda büyük bir potansiyeli vardır.
Burada, bu mikrocerrahinin güvenilir bir şekilde gerçekleştirilmesi için kullanılan yöntem ve malzemelerin yanı sıra, geçici (reperfüzyon ile) veya kalıcı koroner arter oklüzyon çalışmaları ile intramyokardiyal enjeksiyonlar için gereken modifikasyonları sunuyoruz. Prosedür sırasında ve deneyin sonunda gözlemlenebilen kalp üzerindeki etkiler, histolojik değerlendirmeye ek olarak etkinliği doğrulayacaktır.
Kısaca, cerrahi hazırlık farelerin anestezi altına alınmasını, göğüs bölgesindeki tüylerin temizlenmesini ve ardından cerrahi alanın dezenfekte edilmesini içerir. İntratrakeal entübasyon, fiber optik ışık kullanılarak transözofageal aydınlatma ile gerçekleştirilir. Ardından tüpler bir ventilatöre bağlanır. Göğüs üzerine yapılan bir insizyonla, kaburgaların görünür olması için kesilecek olan pektoral kaslar açığa çıkarılır. İskemi/reperfüzyon çalışmaları için, oklüzyon/reperfüzyonun özelleştirilebilmesi amacıyla kalbin üzerine yerleştirilen 1 cm'lik bir PE tüp parçası, ligatürün bağlanması için kullanılır. İntramiyokardiyal enjeksiyonlar için, steril 30gauge eğimli iğneye sahip bir Hamilton şırıngası kullanılır. Miyokardiyal manipülasyonlar tamamlandığında, kaburga kafesi, pektoral kaslar ve deri sırasıyla kapatılır. Hat blok analjezisi, derinin kapatılmasından önce kas tabakasına uygulanan steril salin içindeki %0,25'lik markain ile sağlanır. Farelere subkutan salin enjeksiyonu yapılır ve sternal rekumbent pozisyona gelene kadar bir ısıtma odasına yerleştirilirler. Daha sonra vivaryuma geri götürülürler ve doku toplama zamanına kadar standart koşullar altında barındırılırlar. Sakrifiye edilme sırasında fareler anestezi altına alınır, kalp KCl veya BDM ile diyastolde durdurulur, salin ile durulanır ve fiksatif içine daldırılır. Ardından rutin işlemleme, gömme, kesit alma ve histolojik boyama prosedürleri uygulanır.
Bir farenin cerrahi olmayan entübasyonu ve açıklanan mikrocerrahi manipülasyonlar, bu modeli öğrenilmesi ve tekrarlanabilirliğinin sağlanması açısından teknik olarak zorlu bir hale getirmektedir. Zamanlı oklüzyon(lar) ve reperfüzyon veya intramiyokardiyal enjeksiyonlar için ligatürün tutarlı manipülasyonlarını gerçekleştirmedeki zorluklarla birleşen bu prosedürler, sağkalım oranını da etkileyebildiğinden optimizasyon ve tutarlılık kritik öneme sahiptir.

Çok sayıda genetik manipülasyonlar ve / veya genler, proteinler, hücre ve / veya biyomalzemeler intramiyokardiyal enjeksiyonu, akut iskemi / reperfüzyon hasarı ve farelerde kronik remodeling çalışmaları zaman boyutu üzerine bindirilmiş. Bu video iskemi / reperfüzyon için mikrocerrahi prosedürleri, kalıcı koroner arter ligasyonu ve intramiyokardiyal enjeksiyon çalışmaları göstermektedir.

Enfarktüsü bir murin Model Koroner Arter ligasyon ve intramiyokardiyal Enjeksiyon

Fare modelleri, miyokardın in vivo ortamda akut yaralanmasını ve kronik yeniden şekillenmesini incelemek için değerli bir araçtır. ... ile gelen genetik modifikasyonlar sayesinde...

Aşağıdaki deneyin genel amacı, fare kalbinde geçici veya kalıcı koroner arter ligasyonu ile intramiyokardiyal enjeksiyonu gerçekleştirmek için kullanılan mikrocerrahi yöntemleri göstermektir. Bu işlem, öncelikle cerrahi alanın hazırlanması ve sterilizasyonu ile gerçekleştirilir. Ardından, torakotomi sırasında pozitif basınçlı ventilasyon sağlamak amacıyla fareye PE 90 tüp ile entübasyon yapılır.İzole edilen koroner arter, geçici veya kalıcı olarak oklüde edilebilir. Ayrıca kalbe bir madde enjekte edilebilir. Histolojik ve morfometrik sonlanım noktaları, doku ve serum protein belirteçlerinin yanı sıra fonksiyonel indekslere dayanarak kalbe verilen hasarın derecesini gösteren sonuçlar elde edilir.Benim adım TKA Rag ve East Carolina Üniversitesi'ndeki Brody Tıp Fakültesi Fizyoloji Bölümü'ndeyim. Bu videonun amacı, geçici ve kalıcı koroner arter ligasyonu için kullanılan mikrocerrahi prosedürlerin yanı sıra fare kalbine intramiyokardiyal enjeksiyonun nasıl yapılacağını göstermektir. Başlamak için, steril cerrahi aletleri ve üç inçlik pamuk uçlu aplikatörleri steril bir emici pedin üzerine yerleştirin.Ardından, bireysel ameliyatlar arasında aletleri sterilize edebilmek için bir boncuk sterilizatörü açın. Hayvanı ameliyata hazırlamak için, anestezi altındaki bir farenin gözlerine steril bir kaydırıcı uygulayın. Sonra, göğsün sol tarafındaki tüyleri nare gibi bir tüy dökücü ajan ile temizleyin.Kimyasal yanıkları veya dermatiti önlemek için epilasyon kremini tamamen silin. Fareyi pleksiglas bir masaya sabitlenmiş delta fazlı izotermal bir pedin üzerine yerleştirin. Her bir uzvu bantla sabitleyin ve üst çeneyi yerinde tutmak için üst dişlerin altına kalın bir ip yerleştirin.Cerrahi bölgeyi önce Betadine ve ardından alkol ile toplam üç kez silin. PE tüpünün yerleştirilmesi sırasında trakenin görünürlüğünü artırmak için boyun bölgesini aydınlatmak üzere fiber optik bir ışık kullanın. Aydınlatma sağlandıktan sonra, tüpü ağız yoluyla dikkatlice yerleştirin.Pozitif basınçlı ventilasyon uygulamak için tüpü bir ventilatöre bağlayın. Senkronize göğüs hareketleriyle ventilasyon doğrulandıktan sonra, bağlantıyı yerinde tutmak için bantla ped üzerine sabitleyin. Cerrahi işlem sırasında, dişli penset kullanarak cildi yukarıya ve göğüsten uzağa doğru çekin ve sternuma paralel olarak ciltte 1,5 santimetre uzunluğunda bir insizyon yapın.Ardından, pektoral kasları kesmek ve interkostal kasta küçük bir delik açmak için kavisli Vana mikro makasları kullanın. Kası geri çektikten sonra, üç kaburgayı kesmek için düz küt uçlu mikro makaslar kullanın. Göğüs kafesini geri çekmek için bir spekulum kullanın.Bir TRO Viejo iğne tutucu ve konik uçlu iğne ipi kullanarak kalbi görüntülemek için perikard kesesini nazikçe açın, geçici bir ligasyon oluşturmak amacıyla sol ön descending koroner arterin altına polietilen bir sütur yerleştirin; bu ligasyon zamanlanmış reperfüzyon için daha sonra kaldırılabilir. 0,5 ila 1 cm uzunluğunda bir PE 90 parçası kesin ve bunu kalbin üzerine yerleştirin. Koroner artere paralel olacak şekilde, koroner arterin altına dolanan süturu tübe bağlayın. Belirlenen süre sonunda, reperfüzyonun gerçekleşmesini sağlamak için ligasyonu gevşetin ve kalıcı bir oklüzyon gerçekleştirin.Koroner arterin altına yerleştirilen ligatür bağlanır. Soluklaşma ve diskinezi belirgin olmalıdır. İntramiyokardiyal enjeksiyonlar için sütürün uzun ucu kesilir, 30 gauge steril bir iğne, ligatürün sağındaki hasar bölgesinin üzerinde kalan kalp tabanına yerleştirilir.İğneyi yaralanma bölgesine doğru ilerletin ve eğimli uç yaklaşık olarak sınır bölgesinde görülecek şekilde hafifçe geri çekin. Solüsyondan küçük bir miktar enjekte edin ve iğneyi sabit tutun. Şırıngayı bir ila üç milimetre daha geri çekin ve solüsyonun geri kalanını enjekte edin.Çözelti tarafından oluşturulan kan dağılana kadar şırıngayı sabit tutun. Kan dağıldığında iğneyi çıkarın. Kanama meydana gelirse, kanama durana kadar bölgeye pamuk uçlu bir aplikatörle hafifçe bastırın.Miyokard manipülasyonları tamamlandıktan sonra, kostal ekartörleri çıkarın ve göğüs boşluğunu iki ila üç matris dikişiyle kapatın. Ardından, pektoral kasları iki ila üç matris dikişiyle kapatın. Kas üzerine steril salin içinde 0,25% işaretleyici maddeden bir ila üç damla uygulayın ve cildi kapatmak için ek olarak iki ila üç matris dikişi kullanın.Fareyi ventilatörden çıkarın ve ritmik, hızlı ve yüzeysel solunum gerçekleştiğinden emin olun. Dorsal subkütan boşluğa 0,5 mililitre sıcak steril salin enjekte edin ve fare, hareketliliğini geri kazanana kadar ısıtıcı ped içeren bir kafese yerleştirin. Sağkalım deneyleri için fareler tekrar kendi kafeslerine konulur ve sakrifiye edilme zamanına kadar vivaryuma geri döndürülür.Cerrahi aletleri etanol ile temizleyin ve boncuklu sterilizatöre yerleştirin. Analiz için örnekler toplanacak bir sonraki cerrahi işleme hazırlanmak için kalbi izole edin ve ventrikülün posterior bazal bölgesini, soğuk potasyum klorür veya iki üç bütan Diyon Monoksit çözeltisi içeren bir iğne ile puncture edin. Kalp diyastolde durana kadar çözeltiyi yavaşça boşluğa enjekte edin. Kalbi çıkarın ve kalan kanı temizlemek için PBS ile perfüzyon yapın.Perfüzyon tamamlandıktan sonra kalbi fiksatif içerisine daldırın; ardından kalp, rutin prosedürlere göre işlenir ve gömülür. Geçici ligasyonun neden olduğu akut hasar, boyama yoluyla görselleştirilebilir. Bu görüntüde, mavi boya kalbin tıkalı bölgelerine yayılmış olup TTC boyaması metabolik olarak canlı dokuyu işaretlemektedir.Kırmızı renkte, nekrotik alanlar boyanmaz ve bu nedenle soluk kalır. Risk altındaki alanın sol ventriküle oranı ve enfarkt alanının risk altındaki alana oranı hesaplamak için görüntüleme yazılımı kullanılabilir. Bu örnekte, MI sonrası dördüncü günde, hasarlı bir kalp enfarkt bölgesinden transvers kesilmiş ve hematoksilin ve eozin ile boyanmıştır.Yıldız doku nekrozunu belirtirken, oklar ise prose ile granülasyon dokusu kolajen boyamasını göstermektedir. İnterstisyel fibrozisi ölçmek için ciddi kırmızı ve hızlı yeşil kullanılabilir; bu durum, duvar sertleşmesinin fonksiyonel indeksleri ile ilişkilidir. Miyokard enfarktüsü sonrası dördüncü haftadaki bir fare kalbinin bu görüntüsünde sitoplazma yeşil, kolajen lifler ise kırmızı renkte görülmektedir.Bu görüntü serisi, kalıcı arter ligasyonunun ardından kalbin sınır bölgesine enjekte edilen altı mikrolitre Evans mavisi boya solüsyonunun dağılımını temsil etmektedir. Boyanın hem yaralanma yönünde hem de tabana doğru ve ayrıca transmural olarak ilerlediğine dikkat edin. Koroner arteri görselleştirmek ve güvenilir bir şekilde oklüde etmek oldukça zordur ve uzmanlaşmak için çok fazla pratik gerektirir.Prosedür sırasında akciğerlerin delinmesinden kaçınmak ve ayrıca cerrahi manipülasyonlar sırasında hayvanın ekstübe olmasını önlemek çok önemlidir.I.

coronary-artery-ligation-intramyocardial-injection-murine-model

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Bu video, miyokard iskemisi pathobiological ve patofizyolojik süreçleri incelemek için hızlı ve güvenilir bir model nasıl kullanılacağını gösterir.

LAD-ligasyon murin Model: Miyokard Enfarktüsü

Farelerde Deneysel miyokardiyal enfarktüs indüklemek için kullanılan cerrahi prosedür kalp ve akciğer sol ön yüzeyine görselleştirmek için üçüncü ve dördüncü kaburgalar arasındaki sol torakotomi ile başlar. Sol koroner arter ligasyonu olduğu, göğüs kapalı ve fare kendiliğinden kurtarmak için izin verilir.

Fare Koroner Arter Ligasyonu için Modifiye Tekniği

Bu videoda, sol ön inen koroner arteri kalıcı olarak bağlayarak miyokard enfarktüsünün bir fare modelini oluşturmak için cerrahi bir prosedürü açıklıyoruz.

Miyokard Enfarktüsünün Murin Modelinin Oluşturulması: Fare Modelinde Sol Ön İnen Koroner Arterin Kalıcı Ligasyonu İçin Cerrahi Bir İşlem

Biz tekrar elde edilebilirliğini arttırmak için, sol ön inen arter (LAD) üzerine ligasyon konumlandırma daha fazla netlik sağlar fare modellerinde miyokard infarktüsü (MI) simüle etmek için deneysel iskemi / reperfüzyon (I / R) hasarı ikna etmek için bir cerrahi yöntemi tanıtmak Farelerde MI deneyler.

Sol ön inen arter ligasyonu ile Miyokard İskemi-reperfüzyon Hasarı bir fare modeli

Minimal invaziv manipülasyonlara sahip farelerde miyokard enfarktüsü için yüksek oranda tekrarlanabilir bir model tanımlanmıştır. Model kolayca gerçekleştirilebilir, bu da yüksek tekrarlanabilirlik ve hayatta kalma oranı ile sonuçlanır. Bu nedenle, açıklanan model, 3R ilkesinin (Değiştirme, İyileştirme ve İndirgeme) talep ettiği gibi gerekli hayvan sayısını azaltacaktır.

Farelerde Miyokard İnfarktüsü Oluşturan Minimal İnvaziv Cerrahi Prosedür

Kalp yetersizliği hastaneye yatışların önde gelen nedeni ve mortalitenin önemli bir nedenidir. Miyokard enfarktüsü sonrası ventriküler yeniden şekillenme ve kardiyak disfonksiyonu araştırmak için farelerde sol ön inen koroner arterin kalıcı ligasyonu modeli uygulanır. Farelerde invaziv hemodinamik ölçüm tekniği sunulmuştur.

Farelerde Sol Ön İnen Koroner Arter Daimi ligasyonu: Post-miyokard Enfarktüs Remodelling ve Kalp Yetmezliği Bir Model

Bir fare modelinde sol ön inen arter (LAD) ligasyonu için güvenilir bir yöntem sunuyoruz. Bu yöntem, endotrakeal entübasyon, sol taraflı torakotomi yaklaşımı ve torasentezi içeren diğer yöntemlere göre nispeten daha az invazivdir. Bu yöntem hem akut hem de kronik miyokard enfarktüsü (MI) için bir model olarak kullanılabilir.

Kemirgen Sol Ön İnen (LAD) koroner arter ligasyonu: Miyokard İnfarktüsü Yönelik Gelişmiş ve Basitleştirilmiş Modeli

Burada farelerde sol anterior inen koroner arterin kalıcı ligasyonunun nasıl elde edilebildiğini gösteren bir cerrahi prosedürü açıklıyoruz. Bu model miyokard enfarktüsü ve eşlik eden biyolojik süreçlerin patofizyolojisini araştırmak için yüksek öneme hemşilir.

Sol Anterior İnen Koroner Arterin Kalıcı Ligasyonu ile Murine Miyokard Enfarktüsü Modeli

Bu makalede farelerde miyokardiyal kriyoyaralanma sonrası kardiyak remodeling çalışma modeli göstermektedir.

Farede Miyokard Enfarktüsü Çalışması İçin Kriyoyaralanma Modeli

Burada sunulan, farelerde sol koroner arterin kalıcı olarak bağlanması için cerrahi bir prosedürdür. Bu model, miyokard enfarktüsü sonrası patofizyolojiyi ve ilişkili inflamatuar yanıtı araştırmak için kullanılabilir.

Sol Koroner Arter Ligasyonu: Miyokard Enfarktüsünün Cerrahi Murin Modeli

Öğrenin geçici ve kalıcı koroner arter ligasyonu ile intramiyokardiyal enjeksiyon tekniklerini fare kalbinde. Bu mikrocerrahi yöntemler iskemi/reperfüzyon hasarını incelemek için kullanılır.

Enfarktüsü bir murin Model Koroner Arter ligasyon ve intramiyokardiyal Enjeksiyon

Daha fazla video keşfet