Belirlenmesi için 1.5 Saat Usulü Enterococcus Türler

Bu prosedürün genel amacı, peptid nükleik asit floresan ve C two hibridizasyonu kullanarak pozitif kan kültürü şişelerindeki enterococcus türlerini hızla tanımlamaktır. Kan kültürleri hazırlandıktan ve Enterococci kültürü varlığını doğrulamak için gram testi yapıldıktan sonra, örnekler PNA fish mikroskop lamlarına sabitlenir. Lamlar daha sonra ilgilenilen organizmalara özgü PNA probları ile inkübe edilir.

Problar hibridize olduktan sonra, hibridize olmamış fazla probları uzaklaştırmak için stringent yıkamalar gerçekleştirilir. Lamlara bağlama medyumu eklenir ve ardından lamlar kapatma lamlarıyla mühürlenir. Numunede bulunan enterococcus türleri floresan mikroskobu ile tanımlanabilir.

Bu PNA Fish tanımlama protokolü, sepsis şüphesi olan hastadan alınan venöz kan içeren bir aerobik ve bir anaerobik olmak üzere iki kan kültürü şişesinin 35 °C'de otomatik bir kan kültürü cihazında inkübe edilmesiyle enterococcus'un tanımlanması için hızlı ve spesifik bir yöntem sunması bakımından benzersizdir. Cihaz mikrobiyal büyüme tespit ettiğini bildirdiğinde, şişeyi çıkarın ve bakterileri eşit şekilde yeniden süspande etmek için kan kültürü şişelerini nazikçe çalkalayın.

Ardından, steril bir şırınga ve iğne kullanarak her şişeden yaklaşık beş mililitre kanı aseptik olarak ayrı bir vidalı kapaklı tüpe aktarın. Tüm örnekler paylaştırıldıktan sonra, steril bir pipet yardımıyla her tüpten bir damla kanı ayrı bir cam mikroskop lamı üzerine aktarın. Lamın yaklaşık 15 dakika boyunca havada kurumasına izin verin.

Ardından lam tamamen kuruduktan sonra, örneği tespit etmek için lamı metanole daldırın. Lamlar tespit edildikten sonra, bunları yıkayın ve her bir kan kültüründe bulunan organizmaların morfolojisini belirlemek için standart bir gram boyama gerçekleştirin. Boyanmış lamları, yağ daldırma objektifli bir mikroskop kullanarak inceleyin.

Girilen bir kaktüs türü, tipik olarak çiftler veya kısa zincirler halinde kümelenmiş gram-pozitif koklar olarak görünecektir. Bir p ve bir balık mikroskop lamının kuyucuğuna bir damla fikse edici solüsyon yerleştirin. Test edilecek kan kültürü tüpünü nazikçe karıştırın.

Ardından, kültürden 10 µL'yi fiksasyon çözeltisi damlası üzerine aktarın ve örneği emülsifiye etmek için pipetle yukarı aşağı çekerek karıştırın. Her testteki yaymaları fikse etmek için lamları 55 °C'de 20 dakika boyunca ısıtıcı tabla üzerine yerleştirin. Analiz kalite değerlendirmesi için pozitif ve negatif kontrol lamlarını dahil ettiğinizden emin olun.

Nasır kontrol lamları Van DX'den satın alınabilir veya referans kültürler kullanılarak hazırlanabilir. Yayma hazır olduğunda, kan kültürü örneğini içeren kuyucuğa ve ayrıca pozitif ve negatif kontrol kuyucuklarına bir damla EFI nasır O-E-P-N-A yerleştirin. Prob stok çözeltisinin kontamine olmasını önlemek için, damlalık şişesinin ucunun kan yaymasına temas etmediğinden emin olun.

Hava kabarcığı oluşmamasına dikkat ederek numunenin üzerine bir lamella yerleştirin. Ardından lamı, bir ısıtma bloğunda 55 °C'de 30 dakika boyunca inkübe edin. İnkübasyon sonrası PNA'nın hibridize olmasını sağlamak için lamları bir lam taşıyıcıya yerleştirin.

Yüklü lam taşıyıcıyı, önceden 55 °C'ye ısıtılmış Yıkama Solüsyonu içeren bir boyama kabına daldırın. Örnek üzerindeki fazla PNA'yı uzaklaştırmak için lamı tampon içerisinde çalkalayarak veya pens kullanarak lamelini nazikçe kaydırarak çıkarın. Lamı yıkama solüsyonu içerisinde 55 °C'de 30 dakika boyunca inkübe edin.

Ardından slaytı boyama kabından çıkarın ve havada kurumaya bırakın. Slayt kuruduktan sonra, üzerine bir damla oda sıcaklığında montaj medyumu ekleyin ve örneğin üzerine dikkatlice bir kapatma lamı yerleştirin. Slaytları, hazırlamadan sonraki iki saat içinde çift bantlı bir filtre kullanan floresan mikroskobunda inceleyin.

Bu yöntem kullanılarak, solda yeşil renkle gösterilen iffy ve callous, kırmızı renkteki eum'dan ayırt edilebilir. En sağdaki orta panelde negatif bir sonuç yer almaktadır. Başarılı sonuçlar elde etmek için hatırlanması gereken üç husustan biri, cihaz sıcaklıklarının ayarlanan değerlerde tutulması gerekliliğidir.

Paket ekinde belirtilen boyama prosedürünü çok dikkatli bir şekilde takip etmeniz gerekir. Son olarak, lamların detaylı incelemesini gerçekleştirebilecek deneyimli bir okuyucuya ihtiyacınız vardır. Bu protokol, enterococcus kaynaklı sepsis tedavisine yönelik terapi kararlarının verilmesinde faydalıdır.

İzlediğiniz için teşekkür eder, deneylerinizde başarılar dileriz.