Name: Belirlenmesi için 1.5 Saat Usulü Enterococcus Türler (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-02-10T20:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 2 s
Description: Öğrenin, pozitif kan kültürlerinden Enterococcus türlerini PNA FISH yöntemiyle hızlıca tanımlama protokolünü. Bu yöntem, sepsis tedavisinde hızlı tanı ve tedavi kararları alınmasına yardımcı olur.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Çalışmalar AdvanDx tarafından desteklenen edildi.

1. Örnek Toplama ve Hazırlama <ol><li> Sepsis şüphelenilen hastalarda venöz kan toplayın ve bir kan kültürü seti birlikte oluşan iki BACTEC (BD, Sparks, MD) kan kültürü şişeleri, bir aerobik ve anaerobik bir koymak. </li><li> BACTEC 9240 araç içine yerleştirin şişeler 35 ° C </li><li> Enstrüman kan kültürü şişesi organizmaların büyüme nedeniyle alarm tetiklenir kadar inkübe edin. </li><li> Kan kültürü aracı şişe çıkarın. </li></ol> 2. Boyama için önce Reaktiflerin Hazırlanması <ol><li> 4 ml, 240 ml taze deiyonize veya distile su Boyama Bulaşık doğrudan takip 60x Yıkama Çözeltisi ekleyerek yıkama solüsyonu hazırlayın. </li><li> Isıtmak için 55 ° C su banyosunda boyama kabına koyun. </li><li> 2-8 kalan konsantre ° C depolayın </li><li> Montaj Orta buzdolabından çıkartın ve oda sıcaklığında. </li></ol> 3. Gram Boyama <ol><li> Yavaşça girdap kan kültürü şişesi. </li><li> , Bir iğne ve şırınga ya da bir alt kültüre aparatları kullanarak, kan (yaklaşık 5 ml), steril vida kapaklı tüp içinde şişe ve yerden kaldırmak. </li><li> Steril bir pipet kullanarak, büyük bir damla kan bir cam mikroskop lamı üzerine yerleştirin. </li><li> Hava slayt kuru ve 10 saniye boyunca metanol düzeltmek. </li><li> Hava kuru kaydırın İzin. </li><li> Gram kan kültürü şişesi büyüyen organizmanın morfolojisini belirlemek için kan filmi leke gerçekleştirin. </li><li> Immersiyon yağı lens kullanarak, slayt görünümünde. Çiftleri ve Gram boyama gözlenen kısa zincirleri Gram pozitif koklar enterokok türleri ile en tutarlı. </li><li> Bu Gram boyama sonucu bakteriyel kimlik kullanmak için uygun PNA BALIK prob kiti seçimi sürücüler. Bu kan kültürü E. kullanılarak boyandı. faecalis / OE PNA BALIK leke. </li></ol> 4. Lekelere PNA BALIK <ol><li> Tüp kan içeren smear hazırlama önce dönen hafifçe karıştırın. </li><li> Fiksasyon Çözüm PNA BALIK Mikroskop Slayt iyi bir damla yerleştirin. </li><li> 10 mcL pozitif kan kültürü ile tüp ya da küçük bir damla Fixation Çözüm transferi ve emülsifiye hafifçe karıştırın. </li><li> 20 dakika ısıtarak smear sabitleyin. 55 ° C ısıtma plakası. </li></ol> 5. Kalite Kontrol Malzeme Bir pozitif ve bir negatif kalite kontrol slayt boyama slaytlar her parti ile test edilmelidir. <ol><li> E. kullanın. faecalis / OE Kontrol, bu amaç için AdvanDx satın alınan ya da E. referans suşları sıvı kültürlerden gelen smear hazırlamak Slaytlar faecalis ve E. faecium olarak ayrı slaytlar veya bir slayt ve Negatif Kontrol malzemesi olarak Staphylococcus spp Streptococcus spp karışık ya Pozitif Kontrol. </li></ol> PNA metodoloji hücre duvarı penetrasyon optimize etmek için tasarlanmış olduğundan QC sonuçları, uygun test koşullarında, özellikle hibridizasyon darlığı ve hücre duvarı penetrasyon etkileyen izlemek için gerekir 6. Melezleme <ol><li> E. bir damla ekleyin faecalis / OE PNA smear ile mikroskop lamı üzerine iyi. </li><li> Lamel ekleyin. Hava kabarcıkları kaçının. </li><li> 30 inkübe ± 5 dk. 55 ± 1 ° C ısıtma plakası </li><li> Slayt taşıyıcıya inkübasyon yer slaytlar ardından </li></ol> 7. Sıkı Yıkama <ol><li> Önceden ısıtılmış Yıkama Çözüm daldırın slayt taşıyıcı 55 ° C ve lamel dikkatlice çıkarın. Genellikle, lamel nazikçe yıkayın Çözüm slayt çalkalayarak slaytlar. Bazen, lamel forseps ile yavaşça itti olmalıdır. </li><li> 30 yıkama çözüm ± 5 dakika inkübe edin. 55 ± 1 ° C </li><li> Yıkama çözüm slaytları çıkarın </li><li> Hava kuru slayt izin ver </li></ol> 8. Montaj <ol><li> Her bir slayt için bir damla Montaj Orta ekle </li><li> Lamel ekleyin. Hava kabarcıkları kaçının. </li><li> 2 saat içinde bir floresan mikroskop, slayt inceleyin. </li><li> Slaytları floresan soğutulması için yol olarak güneş ışığı veya diğer güçlü ışık kaynaklarına doğrudan maruz bırakmayın. </li></ol> 9 - Sonuçların Yorumlanması Slayt inceleme için kullanılan floresan mikroskop AdvanDx Dual Band Filtresi ve 60x veya 100x petrol amacı ile donatılmış olmalıdır. QC slaytlar bu hibridizasyon meydana geldi onaylamak için ilk incelenmiş olmalıdır E. faecalis bakış birden fazla alanlarda parlak yeşil floresan koklar gibi görünmelidir ve E. faecium parlak kırmızı koklar gibi görünecektir . Sigara enterokok kontrol slayt nonfluorescent görünmelidir. Kontroller sistem onayladıktan sonra, hasta slaytlar incelenebilir. İlk kan film kırmızımsı görünür ama parlak kırmızı ve yeşil koklar oldukça belirgin olacaktır. <img src="/files/ftp_upload/2616/2616fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Şekil 1"> Yeşil-pozitif E. Şekil 1 Temsilcisi örnekler faecalis (solda), kırmızı pozitif E. faecium (orta) ve negatif (sağ) test sonuçları. 10 Temsilcisi Sonuçlar Üç kurum, bu PNA BALIK leke değerlendirilmesi ve gözden geçirilmiştir kısaltılmış 1.5 saat protokol 2.5 saat protokol karşılaştıran bir çok merkezli bir klinik araştırmaya dahil edildi. 152 rutin Gram pozitif koklar çiftleri ve zincirleri olmak üzere toplam (GPC) pozitif kan kültürü şişeleri çalışmalar dahil edildi. % 100 (152/152) modifiye sonuçları arasındaki anlaşma ve E. için orijinal deneyi prosedürü vardı faecalis / OE PNA BALIK: 41/41 E. faecalis; 33/33 Diğer enterokoklar ve 78/78 Diğer GPC (Tablo 1). Bu boyama yöntemi bu klinik çalışma sırasında (Tablo 2) enfes bir duyarlılık ve özgüllük vardı. <table border="1"><tbody><tr><td></td><td> Rutin Yöntemleri </td><td> E. faecalis / OE PNA BALIK Prosedürü </td><td> E. faecalis / OE PNA BALIK Kısa Prosedürü </td></tr><tr><td> E. faecalis </td><td> 41 </td><td> 41 (Yeşil Pozitif) </td><td> 41 (Yeşil Pozitif) </td></tr><tr><td> E. faecium </td><td> 27 </td><td> 27 (Pozitif Kırmızı) </td><td> 27 (Pozitif Kırmızı) </td></tr><tr><td> E. casseliflavus </td><td> 2 </td><td> 2 (Pozitif Kırmızı) </td><td> 2 (Pozitif Kırmızı) </td></tr><tr><td> E. gallinarum </td><td> 2 </td><td> 2 (Pozitif Kırmızı) </td><td> 2 (Pozitif Kırmızı) </td></tr><tr><td> Diğer Enterococcus spp. </td><td> 2 </td><td> 2 (Pozitif Kırmızı) </td><td> 2 (Pozitif Kırmızı) </td></tr><tr><td> S. pneumoniae </td><td> 17 </td><td> 17 (Negatif) </td><td> 17 (Negatif) </td></tr><tr><td> S. viridans </td><td> 33 </td><td> 33 (Negatif) </td><td> 33 (Negatif) </td></tr><tr><td> S. mitis </td><td> 1 </td><td> 1 (Negatif) </td><td> 1 (Negatif) </td></tr><tr><td> S. pyogenes </td><td> 3 </td><td> 3 (Negatif) </td><td> 3 (Negatif) </td></tr><tr><td> S. bovis </td><td> 2 </td><td> 2 (Negatif) </td><td> 2 (Negatif) </td></tr><tr><td> S. salivarius </td><td> 1 </td><td> 1 (Negatif) </td><td> 1 (Negatif) </td></tr><tr><td> S. sanguinis </td><td> 2 </td><td> 2 (Negatif) </td><td> 2 (Negatif) </td></tr><tr><td> S. agalagtae </td><td> 7 </td><td> 7 (Negatif) </td><td> 7 (Negatif) </td></tr><tr><td> Diğer Streptococcus spp. </td><td> 7 </td><td> 7 (Negatif) </td><td> 7 (Negatif) </td></tr><tr><td> Abiotrophia spp. </td><td> 3 </td><td> 3 (Negatif) </td><td> 3 (Negatif) </td></tr><tr><td> Peptostrepococcus spp. </td><td> 2 </td><td> 2 (Negatif) </td><td> 2 (Negatif) </td></tr><tr><td> Toplam </td><td> 152 </td><td> 152/152 100% Anlaşması </td><td> 152/152 100% Anlaşması </td></tr></tbody></table> Tablo 1. bakteri Listeleme standart (2.5hr) ve hızlı (1,5 saat) protokolü kullanılarak test edilmiştir. <table border="1"><tbody><tr><td> Hassasiyet E.faecalis </td><td> Hassasiyet Diğer Enterococcus spp. </td><td> Özgüllük </td></tr><tr><td> % 100 (41/41) % 95 CI (93,0-100) </td><td> % 100 (33/33) 33 / 33 % 95 CI (91,3-100) </td><td> % 100 (78/78) % 95 CI (96,2-100) </td></tr></tbody></table> Tablo 2 - 1.5 saat PNA BALIK protokol duyarlılığı ve özgüllüğü .

<ol><li>Rapid identification and differentiation of Enterococcus faecalis and other Enterococcus species directly from positive blood cultures by dual color fluorescence in situ hybridization using PNA probes. Oliveira, K., Chapin, K. C., Musgnug, M. C., Haase, G., Weber-Heynemann, J., DeGirolami, P. C., Dakos, J., Stender, H. 42rd Interscience Conference on Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 2002, San Diego, , (2002).</li>
<li>Multicenter evaluation of E. faecalis PNA FISH for rapid identification and differentiation of Enterococcus faecalis and other Enterococcus species directly from positive blood cultures. Chapin, K. C., Musgnug, M. C., Oliveira, K., DeGirolami, P. C., Dakos, J., Johansen, J. T., Procop, G. W., Wilson, D., Padilla, E., Gonzalez, V., Stender, H. 103rd Annual Meeting of American Society, 2003, Washington DC, , (2003).</li>
<li>Direct identification of Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis, and Candida albicans from blood cultures using fluorescence in situ hybridization with nucleic acid probes. Rausei, V., Youssef, E., Morgan, M. 104th Annual Meeting of American Society for Microbiology, 2005, New Orleans, LA, , (2005).</li>
<li>Validation of S. aureus PNA FISH, E. faecalis PNA FISH & C. albicans PNA FISH for Rapid Identification of Positive Blood Culture Bottles. Novak-Weekley, S. M., LaForga, M., Carey, L., Frazier, L. 106th Annual Meeting of American Society for Microbiology, 2006, Orlando, FL, , (2006).</li>
<li>Rapid Identification of Enterococcus Species in Positive Blood Cultures with Therapeutic Implications. Johnson, J. K., Roberts, A. A., Forrest, G. N., Lincalis, D. P., Venezia, R. A. 106th Annual Meeting of American Society for Microbiology, 2006, Orlando, FL, , (2006).</li>
</ol>

Bu video-makale üretim AdvanDx sponsor oldu. Benjamin Kristal, bu makalede kullanılan araçlar ve reaktifler yapar AdvanDx, bir çalışanın.

E. enterococcus faecalis / OE PNA FISH testinin standart kültür yöntemleri daha 2-3 gün önce kimlik sağlayabilir. Tayini için kısaltılmış bir prosedür (1.5 hourr), antimikrobiyal tedavi ve hasta sonucu daha iyi bir yaklaşım için kullanılabilecek hızlı bir şekilde tespit sağlar. Bunu desteklemek için bir çalışmada Forrest ve ark. (6) tarafından yapıldı. 2005 yılından itibaren birbirini takip eden iki yıl içinde mikrobiyoloji laboratuvarına konvansiyonel mikrobiyolojik yöntemlerle kan kültürü şişeleri büyüyen ve 2006 yılında E. ekleyerek çiftleri ve zincirleri Gram pozitif koklar tespit faecalis / OE PNA BALIK. Buna ek olarak kurumları antimikrobiyal ekibi (AMT) tarafından geliştirilen bir tedavi algoritması zamanında laboratuvar tarafından oluşturulan PNA BALIK verileri etkin bir şekilde kullanmak. Değerlendirilir Primer sonuç, kan kültürü zaman önce etkili antimikrobiyal tedavi uygulanması çizmek ve PNA BALIK laboratuarlar iş akışı içine tesis sonra oldu. Hastalık, hasta konumu ve ampirik antimikrobiyal tedavi şiddeti ölçüldü. Bakteriyemi enterokok elde edilen 224 hasta hastane ile toplam 129 ve 95 PNA BALIK dönemde müdahale öncesi dönemde değerlendirildi. PNA BALIK E. tespit geleneksel kültürlerin (1.1 vs 4.1 gün, p &lt;0.001) daha önce faecalis 3 gün. PNA BALIK medyan 2.3 gün önce E. faecium tespit (1.1 vs 3.4 gün, p &lt;0.001) ve etkili bir tedavi (1.3 ve 3.1 gün, p &lt;0.001) başlatarak için zaman içinde istatistiksel olarak anlamlı bir azalma ile ilişkili ve 30 gün azaldı mortalite (% 26 vs% 45, p = 0.04). Bu grup sonucuna E. AMT bir tedavi algoritması ile birlikte faecalis / OE PNA FISH testinin elde edilen hastane ile bakteriyemi E. faecium hastalar için uygun ampirik antimikrobiyal tedavinin erken başlamasına yol açmıştır . <ol><li> Etiketleri ve reaktifler üzerinde yazılı olan son kullanma tarihleri, herhangi bir şekilde değiştirilmiş olmamalıdır sonra Reaktifler kullanılmamalıdır. Bunlar kullanılmadığı zaman buzdolabında kalmalıdır veya onlar potens kaybedebilirsiniz. </li><li> Kan kültürü şişeleri örnekleme önce karıştırılması gerekmektedir. </li><li> Bu malzeme slaytlar arasındaki çapraz kontaminasyon neden, ya da reaktif kontaminasyona neden olabilir çünkü kan yaymasında damlalıklı şişe ucu dokunmak için izin vermemesi için önemlidir. </li><li> Su banyosu ve ısıtma bloğu sabit bir 55 ° C&#39;de muhafaza edilir emin olun. </li><li> Dual Band Filtresi veya renkler açıkça ayırt olmayacaktır dışında filtre kullanmayın. </li><li> Mikroskop Slaytlar veya hibridizasyon olmayacağına dışında mikroskop lamı kullanmayın. </li><li> Mikroskop düzgün çalıştığını önemlidir. Mikroskop ampul kullanımı için saat onaylanmış sayısı içinde olduğundan emin olun. </li></ol><ul><li> Bazı nadir meydana gelen Enterococcus türleri, E. asinii, E.dispar, E. haemoperoxidus, E. cecorum, E. columbae, E. saccharolyticus, E. solitariusa ve E gibi diğer Enterococcus türleri, literatürde PNA probu tarafından tespit edilmez . kükürtlü. </li><li> E. moraviensis E. olarak tanımlanır dizisi benzerlikleri nedeniyle faecalis. </li><li> Streptococcus anginosus bazı suşları dizisi benzerlikleri nedeniyle, sahte bir yeşil olumlu floresan üretir . </li><li> VersaTREK kan kültürü şişeleri klinik çalışmalar sırasında değerlendirilir değildi. E. algılamak için performans faecalis ve diğer Enterococcus spp. VersaTREK kan kültürü şişeleri ile bilinmemektedir. </li><li> Yanlış pozitif yeşil otofloresans standart bir FITC filtresi Dual Band Filtresi yerine kullanılması durumunda ortaya çıkabilir. </li><li> Yanlış negatif sonuçlar nadiren karışık büyüme nedeniyle veya tahlil tekniği hata nedeniyle oluşabilir. </li><li> Kullanılan enstrümantasyon tipine ve durumuna, elde edilen görüntünün görünümünü etkiler. Floresan kullanılan mikroskop, ışık kaynağı ve hücrelerde rRNA düzeyi varydue olabilir </li><li> Katı ortam izolasyonu, diğer organizmalar ile karışık bir büyüme ayırt etmek ve negatif sonuç veren pozitif kan kültürleri tanımlamak için ihtiyaç vardır. </li><li> Ürün, kan kültürlerinden başka örnekler ile geçerli olmamıştır. </li></ul>

Reaktifler E. faecalis / OE PNA BALIK aşağıdaki kit bileşenleri oluşmaktadır: <ul><li> Fiksasyon Çözüm Fixation Çözüm deterjan ile tuzlu fosfat tamponlu 3 ml. </li><li> E. faecalis / OE PNA E. faecalis / OE PNA 1.5 mL PNA hibridizasyon probları. çözüm. 30% formamid içerir. </li><li> Deterjan ile 60x Yıkama Çözüm 60x Yıkama Çözeltisi 50 ml Tris tamponlu salin </li><li> Orta gliserol olarak Orta 3 mL photobleaching inhibitörü Montaj Montaj </li><li> Kalite kontrol slaytları </li><li> <a href="http://www.advandx.com">AdvanDX</a> </li></ul>

belirlenmesi için 1.5 saat usulü enterococcus</emdoğrudan kan kültürleri> türler

A 1.5 Hour Procedure for Identification of Enterococcus Species Directly from Blood Cultures

Enterokoklar E. ile bakteriyemi yaygın bir nedenidir. faecalis, E. faecium baskın tür . Çünkü E. ampisilin ve vankomisine direnç faecalis, E. faecium direnci hala yaygın karşılaştırıldığında, enterokok türler arasındaki farklılaşmayı sağlayan hızlı testlerin geliştirilmesi, uygun tedavi ve direnç gözetim için önemlidir. E. faecalis OE PNA FISH testinin (AdvanDx, Woburn, MA) in situ hibridizasyon formatında türe özgü bir floresan peptid nükleik asit (PNA) problar kullanır ve 1,5 saat ve türe özgü önemli bilgiler veren potansiyel sonuçlarını bir süre sunuyor tedavi. Çok Merkezli 1.5 saatlik E. performansını değerlendirmek için çalışmalar yapıldı faecalis / OE PNA BALIK prosedürü orijinal 2,5 saat metodlara ve pozitif kan kültürü şişesi doğrudan enterokokların belirlenmesi için standart bakteriyoloji yöntemlerine göre.

In situ hibridizasyon tayininde floresan bir Peptid Nükleik Asit (PNA BALIK) kullanarak bir pozitif kan kültürü, Enterococcus faecalis ve diğer Enterococcus türleri doğrudan tanımlanması için hızlı bir protokoldür.

Belirlenmesi için 1.5 Saat Usulü Enterococcus</emDoğrudan Kan Kültürleri> Türler

Enterokoklar, baktereminin yaygın bir nedenidir ve E. faecalis baskın türdür, bunu E. faecium takip eder. Ampisilin direnci ve ... nedeniyle

Bu prosedürün genel amacı, peptid nükleik asit floresan ve C two hibridizasyonu kullanarak pozitif kan kültürü şişelerindeki enterococcus türlerini hızla tanımlamaktır. Kan kültürleri hazırlandıktan ve Enterococci kültürü varlığını doğrulamak için gram testi yapıldıktan sonra, örnekler PNA fish mikroskop lamlarına sabitlenir. Lamlar daha sonra ilgilenilen organizmalara özgü PNA probları ile inkübe edilir.Problar hibridize olduktan sonra, hibridize olmamış fazla probları uzaklaştırmak için stringent yıkamalar gerçekleştirilir. Lamlara bağlama medyumu eklenir ve ardından lamlar kapatma lamlarıyla mühürlenir. Numunede bulunan enterococcus türleri floresan mikroskobu ile tanımlanabilir.Bu PNA Fish tanımlama protokolü, sepsis şüphesi olan hastadan alınan venöz kan içeren bir aerobik ve bir anaerobik olmak üzere iki kan kültürü şişesinin 35 °C'de otomatik bir kan kültürü cihazında inkübe edilmesiyle enterococcus'un tanımlanması için hızlı ve spesifik bir yöntem sunması bakımından benzersizdir. Cihaz mikrobiyal büyüme tespit ettiğini bildirdiğinde, şişeyi çıkarın ve bakterileri eşit şekilde yeniden süspande etmek için kan kültürü şişelerini nazikçe çalkalayın.Ardından, steril bir şırınga ve iğne kullanarak her şişeden yaklaşık beş mililitre kanı aseptik olarak ayrı bir vidalı kapaklı tüpe aktarın. Tüm örnekler paylaştırıldıktan sonra, steril bir pipet yardımıyla her tüpten bir damla kanı ayrı bir cam mikroskop lamı üzerine aktarın. Lamın yaklaşık 15 dakika boyunca havada kurumasına izin verin.Ardından lam tamamen kuruduktan sonra, örneği tespit etmek için lamı metanole daldırın. Lamlar tespit edildikten sonra, bunları yıkayın ve her bir kan kültüründe bulunan organizmaların morfolojisini belirlemek için standart bir gram boyama gerçekleştirin. Boyanmış lamları, yağ daldırma objektifli bir mikroskop kullanarak inceleyin.Girilen bir kaktüs türü, tipik olarak çiftler veya kısa zincirler halinde kümelenmiş gram-pozitif koklar olarak görünecektir. Bir p ve bir balık mikroskop lamının kuyucuğuna bir damla fikse edici solüsyon yerleştirin. Test edilecek kan kültürü tüpünü nazikçe karıştırın.Ardından, kültürden 10 µL'yi fiksasyon çözeltisi damlası üzerine aktarın ve örneği emülsifiye etmek için pipetle yukarı aşağı çekerek karıştırın. Her testteki yaymaları fikse etmek için lamları 55 °C'de 20 dakika boyunca ısıtıcı tabla üzerine yerleştirin. Analiz kalite değerlendirmesi için pozitif ve negatif kontrol lamlarını dahil ettiğinizden emin olun.Nasır kontrol lamları Van DX'den satın alınabilir veya referans kültürler kullanılarak hazırlanabilir. Yayma hazır olduğunda, kan kültürü örneğini içeren kuyucuğa ve ayrıca pozitif ve negatif kontrol kuyucuklarına bir damla EFI nasır O-E-P-N-A yerleştirin. Prob stok çözeltisinin kontamine olmasını önlemek için, damlalık şişesinin ucunun kan yaymasına temas etmediğinden emin olun.Hava kabarcığı oluşmamasına dikkat ederek numunenin üzerine bir lamella yerleştirin. Ardından lamı, bir ısıtma bloğunda 55 °C'de 30 dakika boyunca inkübe edin. İnkübasyon sonrası PNA'nın hibridize olmasını sağlamak için lamları bir lam taşıyıcıya yerleştirin.Yüklü lam taşıyıcıyı, önceden 55 °C'ye ısıtılmış Yıkama Solüsyonu içeren bir boyama kabına daldırın. Örnek üzerindeki fazla PNA'yı uzaklaştırmak için lamı tampon içerisinde çalkalayarak veya pens kullanarak lamelini nazikçe kaydırarak çıkarın. Lamı yıkama solüsyonu içerisinde 55 °C'de 30 dakika boyunca inkübe edin.Ardından slaytı boyama kabından çıkarın ve havada kurumaya bırakın. Slayt kuruduktan sonra, üzerine bir damla oda sıcaklığında montaj medyumu ekleyin ve örneğin üzerine dikkatlice bir kapatma lamı yerleştirin. Slaytları, hazırlamadan sonraki iki saat içinde çift bantlı bir filtre kullanan floresan mikroskobunda inceleyin.Bu yöntem kullanılarak, solda yeşil renkle gösterilen iffy ve callous, kırmızı renkteki eum'dan ayırt edilebilir. En sağdaki orta panelde negatif bir sonuç yer almaktadır. Başarılı sonuçlar elde etmek için hatırlanması gereken üç husustan biri, cihaz sıcaklıklarının ayarlanan değerlerde tutulması gerekliliğidir.Paket ekinde belirtilen boyama prosedürünü çok dikkatli bir şekilde takip etmeniz gerekir. Son olarak, lamların detaylı incelemesini gerçekleştirebilecek deneyimli bir okuyucuya ihtiyacınız vardır. Bu protokol, enterococcus kaynaklı sepsis tedavisine yönelik terapi kararlarının verilmesinde faydalıdır.İzlediğiniz için teşekkür eder, deneylerinizde başarılar dileriz.

a-15-hour-procedure-for-identification-enterococcus-species-directly

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Bakteriyel patojen teşhis için basit bir günlük akışı düzeninin tasarım enfeksiyonu kan hızlı tanıma sağlar. Sekiz klinik bakteriyel hedefleri ve antibiyotik direnç profilleri dahil olması daha uygun tedaviye yol açabilir aynı gün klinisyen bir ilk fikir sunuyor.

Kan örneklerinden Bakteriyel Patojen Algılama ve Antimikrobiyal Direnç Testi için bir günlük iş akışı şeması

Biz son zamanlarda basit bir bakteriyel tespiti için floresan assay "mix-ve-okuma" kurmak için uygulanabilir Flourogenik DNAzyme probları üretmek için yeni bir yaklaşım bildirdin. Bu özel DNA sondaları böylece floresans sinyali kuşağa bakteriyel algılama çevirme belirli bakteri tarafından üretilen ham hücre dışı karışımı (CEM) varlığında, bir kromofor-değiştirilmiş-DNA RNA kimerik substratın bölünme katalize. Bu yazıda, "RFD-EC1" ifade belirli bir DNAzyme prob modeli bakterinin tespiti için...

Flourogenik DNAzymes kullanarak Bakterilerin Tespiti

Uçuşu (MALDI-TOF) kütle spektrometresi (MS), doğrudan kan kültür çorbasına matris destekli lazer desorpsiyon / iyonizasyon zaman uygulanması bakteri tanımlanmasını hızlandırır. Sunulan yöntemi doğrudan kan kültür besi yerinden, Gram negatif bakterilerin tanımlanması için hızlı ve güvenilir bir yöntemdir.

MALDI-TOF kütle spektrometrisi kullanılarak kan kültür besi yerinden, Gram negatif bakterilerin hızlı belirlenmesi

Pozitif kan kültürü hızlı bir Bakteri taneleri bir preparasyon, MALDI-TOF ile tanımlama, Gram boyama antibiyotik duyarlılık testi ve PCR-esaslı testi gibi uygulamalar için bir numune olarak kullanılabilir. Sonuçlar hızla kan dolaşımı enfeksiyonlarından muzdarip hastaların sonuçlarını iyileştirmek için klinisyenler için tebliğ edilebilir.

Hızlı Bakteriyel Teşhis ve Antibiyotik Duyarlılık Testi için bir Kan Kültürü Peleti hazırlanması

EUCAST, otomatik kan kültürleri için doğrudan bir antimikrobiyal duyarlılık testi (AST) protokolü geliştirmiştir. Bununla birlikte, kütle spektrometresi tabanlı mikrobiyal tanımlamaya bağımlılığı, otomatik bir mikrobiyal tanımlama sisteminde doğrudan bir aşı hazırlama protokolü kullanılarak ortadan kaldırılabilir. Bu yaklaşım, numune alındıktan sonraki 24 saat içinde AST raporları sağlayabilir.

Kütle Spektrometresi Olmadan EUCAST RAST Yöntemini Kolaylaştırmak için Otomatik Bir Mikrobiyal Tanımlama Sistemi Kullanarak Doğrudan Mikrobiyal Tanımlama

Enfeksiyon süreci boyunca, önemli bir adım patojenlerin konak hücrelerine yapışma. Çoğu durumda bu yapışma adım akan sıvı tarafından üretilen mekanik stres varlığında oluşur. Biz kayma gerilmesi bakteriyel yapışma çalışmada önemli bir parametre olarak tanıtan bir tekniktir açıklar.

Bakteriyel Yapışma Çalışma Kesme Stres Tanıtımı

Burada göbek kordon kanı habercisi alt B-hücreleri izole etmek için bir protokol açıklar. Nükleik asitlerin yeterli bir miktarı ve kalitesi hücrelerinden çıkarılır ve DNA ya da RNA kullanılarak daha sonraki deneylerde kullanılabilir.

Kordon Kanı gelen Prekürsör B-hücreli altkümeleri İzolasyonu

Burkholderia cinsin üyeleri klinik önemi patojenlerdir. Bu, mekanik bozulma ve daha sonraki analiz için proteomik 2-D jel elektroforezi kullanılarak, toplam bakteri protein çıkarımı için bir yöntem tarif eder.

Toplam Protein Ekstraksiyon ve 2-D Jel Elektroforez Yöntemleri<em&gt; Burkholderia</em&gt; Türler

Süpürücüleri hastalıksız bölgelere kendi dışkılarıyla bulaşıcı bulaşıcı süngerimsi ensefalopati prionları translokasyonunda potansiyele sahiptir. Biz fare adapte skrapi prıonlar Amerikan kargalar sindirim sisteminde (Corvus brachyrhynchos), ölü hayvanların ortak bir tüketici olsa geçtikten sonra bulaşıcı kalırsa belirlemek için kullanılan ayrıntı yöntemleri.

Bir Kuş Türlerinin Sindirim Sistemi geçtikten sonra Bulaşıcı prions belirlenmesi için prosedürler

Burada izolasyonu, tanımlanması ve fare timik epitelial hücreler üzerinde (Tecs) saflaştırılması için etkili bir yöntem tarif eder. Bu protokol, normal T-hücresi gelişimi, timus disfonksiyon ve T hücresi sulandırılacak timus fonksiyonunun çalışmaları için kullanılabilir.

İzolasyon, tanımlama ve Murin Thymic Epitel Hücreleri saflaştırılması

Öğrenin, pozitif kan kültürlerinden Enterococcus türlerini PNA FISH yöntemiyle hızlıca tanımlama protokolünü. Bu yöntem, sepsis tedavisinde hızlı tanı ve tedavi kararları alınmasına yardımcı olur.

Belirlenmesi için 1.5 Saat Usulü Enterococcus Türler

Daha fazla video keşfet