Fibröz Proteinler gerin ve Tedbir Roman Yerçekimi Kuvveti Spektrometresi kullanır gösterilmesi

Yerçekimi kuvveti düzeneği bir epi montajdan, standart bir ışık mikroskobundan, dijital kameradan ve bir bilgisayardan oluşur. Bunu tek molekül asit çalışmaları yapmak için kullanıyoruz. Kuvvet dengesini kaydedebilir veya damla yoluyla kademeli bir kuvvet sağlayabiliriz.

Başlamak için, bu tür işlemlerin gerçekleştirilebilmesi için bir cam mikro pipet hazırlamamız gerekir. Kullanacağınız fasulyelerden yaklaşık 10 miligram ölçmek için genellikle 2K hazırlarım. Burada, üç triloji için kullanacağımız beş mililitre örneğimiz bulunmaktadır.

İşte burada terminal Put One'ı alacağız. Bir transfer pipetiyle iyice karıştırın ve ardından karışımın 2 mL'sini bead cake'in üzerine aktarın. Bead cake'leri 2 dakika bekletin ve ardından 2 dakika boyunca iyice vorteksleyin.

Aşağıdaki ıslak ikisini yedi. Çift distile su içinde bir purin istersiniz. pH altı eşleşmesi.

Her bir boncuk grubuna beş mililitre kenetleme tamponu eklemeniz yeterlidir; bu kenetleme işlemi boncukların bağlanmasını sağlar. Ardından antikorlar tekrar yakından bağlanır, bir dakika boyunca vortekslenir. Beş dakika boyunca çöktürün ve dondurucudan çıkardığınız glutaralde, kenetleme tamponu kullanarak mevcut konsantrasyonu %5'e düşürün.

Ardından, bu çözeltiden iki mililitre alıp ekleyin; bu işlem, TER'in vorteks cihazımızda halihazırda bulunan terminallerle eşleşmesini sağlayacaktır. Bunu iki kez tekrarlayın, üç kez döndürün. Bağlama tamponu prosedürünüz tamamlanmıştır.

Besleme kekine tekrar beş mililitre kenetleme tamponu ekleyin. Tekrar karıştırın, santrifüjleyin ve süpernatantı çekin. Dördüncü seferde, antikorun serbestçe hareket edebilmesi için kekin üzerinde bir miktar süpernatant bırakın.

Antikorumuz burada. O hacmi mikro pipetle alın. Antikorları, çift distile su ile 1 M molariteye gelecek şekilde seyreltin ve karışımı uygun süre boyunca 30 dakika boyunca döndürün.

Tüm alt etkileşimli yapıştırıcıyı söndürmek için, göz göze. Döndürerek çöktüreceğiz, S'den kurtulacağız. Ardından içeriği protokol olan bir tane oluşturmak istersiniz. Beş mililitre alın, boncukları alın, işte boncuklar, dişle aşağıya indirin.

Bu adımı üç kez tekrarlayın ve ardından yaptığınız her türlü analiz için aynı işlemi uygulayın. Hazırlığımıza başlamak için öncelikle proteinimizi temin etmemiz gerekir. Bu durumda, -70 °C'de saklanan proteinlerin bulunduğu yere gidin; bu proteini almak ve ısıtmak önemlidir.

Bu, şu an mevcut halinden, analizimizde kullanmak isteyeceğimizden çok daha konsantre olacaktır. Bu nedenle, miktarı yaklaşık 15'e düşüreceğiz ve bunun bir kısmını uca koyacağız. Ancak bu, hacim doğru olduğu için gereklidir; hacim miktarını yaklaşık 5 µL'ye düşürdükten sonra, büyük boncuklar için daha büyük bir hacim alacağız, bu örnek boncuktan 10 µL alacağız.

Ve bu bize güzel bir sonuç verecek; burada, nihai konsantrasyonu elde etmek için mikro santrifüj tüpüne yaklaşık 350 µL daha assay tamponu ekliyoruz. Şimdi bunu, tıpkı vertexleyici ile yaptığımız gibi yapacağız; burada tüpü kelimenin tam anlamıyla döndüreceğiz ve bunu gerçekleştireceğiz. Artık boncuklarımızın yerleşeceği ve bulunacağı akış sistemini gerçekten oluşturma zamanı geldi.

Bu standart mikroskop lamını %1'lik, yüzeye tutunmayı sağlamak için yapıştırıcı ile hazırlanmış bir çözeltiye yerleştiriyorum; böylece lam ve lamel yüzeyine sabitlenebilirler. Kenarları zaten belirledim ve daha ince olan bu cam parçasını daha kalın olan lamelin üzerine yerleştireceğim. Bu oda nispeten küçük olacaktır.

İşte burada küçük bir tane var ve hasarlı konumda. Her gün karşılaşılan durumlardan biri daha. Ajan beni daha iyiye, daha iyi bir eksikliğe götürüyor.

Burada, kraker ve peynir eklemeye başlamadan önce, son iki adet 25 yıllık olanları muhtemelen tadacağız. Ve güneş kaçırdınız. Sadece birkaçı tadıldı, sadece birkaçı.

Ve burada yakından bakarsanız boncuğu gerçekten görebilirsiniz. Pipet ucuyla yaptığım şey, öncelikle boncuğun olduğu bölgeye hafifçe vurmakla başlamaktır ve bunu yaptıktan sonra, slayt yüzeyinin geri kalanını yaklaşık 40 derece eğimle tutarım; böylece slaytı farklı yönlendirmelerde kullanabiliriz ve boncukların aşağı kayması konusunda endişelenmeyiz. Numunemi almak için herhangi bir vidalı kapak kullanmanıza gerek yok, hattın arkasından biraz alırım ve slaytı monte ederim; her şeyin daha stabil kalması için ek bir klips kullanırım. Ve objektifi yerleştirebiliriz.

Bu, lamın konumunu ayarlamak için kullandığımız bir uzaktan kumandadır ve kamera da dahil olmak üzere her şey açık durumdadır. Video ekranını izleyerek potansiyel boncukların takibine başlayabiliriz. Soldakinin daha küçük bir boncuğu vardır ve bu küçük boncuk, lamın yüzeyinde öylece duran diğer küçük boncuklara benzer.

Ancak, boncuk çiftinde, LOP'un odak dışı boncuk yüzeyinde odaklanan bir boncuk vardır; bu durum, söz konusu boncuğun diğer boncuktan farklı bir odak düzleminde yer aldığını gösterir. Ayrıca, sağdaki A örneği, boncuk çiftlerinin bir lam üzerinde nasıl çalışabileceğini göstermektedir. Böylece, farklı açılarla rotasyon gerçekleştirdikçe lamı yerleştiriyoruz ve bu bize farklı uzunluklar vermektedir; ardından rotasyonu kullanıyoruz. Bilgisayar kullanarak bir besleme parametresinin nasıl görünebileceğine dair bir görüntü görüyoruz.

Her ikisini de buluyoruz. Bu durumda, verilen ölçümü çıkarabileceğimizi hesaplayabiliriz; burada F'yi ve ayrıca diğerini de çıkardık. İzlediğiniz için teşekkürler.

Rahatsızlığınızla ilgili size iyi şanslar dilerim. Dans etmenin bir zamanı vardır. Ayrıca, kimsenin benimkini kazanamayacağını düşünmeyin.

Arkadaşlarım onu kapmaya çalışmakla meşgul. Her şey benim arkamda kaldı. Birlikte geldiğim kız nerede?

Arkadaşımla birlikte gidiyor. Gerçekten öyle olduğunu düşünüyor. Gerçek bir adamı tanımıyor mu.

Yeniden bin, yeniden sağa, mekanik boğa. Bırak gitsin. Sağ, sağ, ta Meksika'nın derinliklerinde.

Bu geceki turların tarzına bayıldım. Mekanik boğa. Sakın yavaşlama.

Sol elimle işim bittiğinde beni rahatlatmak için 5 saniye ver. Sadece sağ elimi kullanacağım. Evet, sol elimle sadece sağımı kullanacağım.