Name: Akrep Peg Sensilla elektrofizyolojisi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-04-13T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 50 s
Description: Öğrenin akrep pectin sensilla elektrofizyolojisini, mineral yağı altında ekstraselüler uç kayıtları ile bireysel sensilla izolasyonu yaparak. Bu yöntem kimyasal duyusal biyoloji araştırmalarında değerli bir araç sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Biz Life fonu, Oklahoma Üniversitesi Lisans Eğitim ve Araştırma Olanakları Programı, ve bu işi finanse etmek için Zooloji Bölümü teşekkür ederim. Ayrıca Dr. Marielle Hoefnagels editoryal yardım için teşekkür ederim.

1. Ön-kayıt, Canlı Hayvan Hazırlığı <ol><li> Kendi ev kavanoz akrep çıkarın ve önceden soğutulmuş bir cam kaba koyun; yanında, donmuş bir ortamda (-5 ° C) en az iki dakika akrep içeren kavanoza yerleştirin. Bu sefer yaşına göre değişebilir, boyut, çalışmanın altında özel akrep türleri, vb. Ama genelde hayvan hareketsiz bir kez, donma çevre aşaması tamamlandıktan. </li><li> İki dakika sonra, soğuk cam kap immobilize akrep kaldırmak ve bir mikroskop lamı üzerine ventral tarafta bir yerin. Stinger, kuyruk, bacak, ve moldable kil (yağ bazlı, Van Aken Plastalina) pedipalps sabitleyin. </li><li> Akrep pektinler koymak için bir platform olun. Platformu uzunluk ve genişlik Pecten boyutuna göre ayarlayın. Tipik olarak, bizim platformları mikroskop kapak camdan inşa edilmiş ve yaklaşık 10 (L) X 18 (W) mm. </li><li> Sığacak şekilde (gerekirse) bant kırparak Pecten platformu için çift taraflı yapışkan bant uyun. </li><li> Pectinal odasına yapmak için, önceden eritilmiş balmumu içine (% 100 balmumu yongaları kullanan), 3-4 mm derinliğe kadar platformun dört tarafı üç koymak. Biz sıcak bir plaka üzerinde bulunan bir cam petri içinde çipler yerleştirerek balmumu eritebilir. Pectinal odasının kenarlarında balmumu oda sıcaklığına kadar soğutulur sonra, bu yüksek yaklaşık 1 mm balmumu duvarları oluşturmanız gerekir. </li><li> Hayvan, pectinal ekleme noktasını bulun ve sadece arka platform un-mumlu kenarı (bant yan-up) yerleştirin. Daha sonra, hayvanın bacakları dizginlemek için kullanılan kil karşı sağ ve sol periferik kenarları hafifçe basarak platformu (daha sonra üzerinde hareket olmaz böylece) stabilize. </li><li> Odanın içinde Pecten veya pektinler dikkatli bir şekilde yerleştirmek için ince uçlu forseps kullanın. Özellikle, forseps kullanarak, pectinal omurga boyunca Pecten tutun ve yavaşça Pecten cam kapak altından çıkarmak ve yapışkan bir platform zemine daha düşük. Pectinal omurga dikkatlice basınç uygulayarak bir Pecten-kaset bağının kurulması. </li><li> Şimdi, platformun un-mumlu kenarına erimiş mum (önceden ısıtılmış bir metal spatula kullanın) geçerlidir. Pecten amacı güvenli ve tam geleceğin madeni yağ tanıtımı için oda içine iki yönlüdür. Çok sıcak balmumu ile Pecten zarar mümkün olduğu gibi, hayvanın Pecten üzerinde balmumu uygularken dikkatli kullanın. </li><li> Pecten odasının inşaat tamamlandı. Sonra, iki kuyruk segmentleri arasındaki gümüş tel takarak hayvan hemolimf kayıtsız bir elektrot bağlantı kurmak. </li></ol> 2. Eşzamanlı Ekstrasellüler Kayıt ve kimyasal stimülasyon <ol><li> Biz diğer nedenleri arasında (yani sabit bir pozisyonda hayvan ayarı), izin verir, ekstrasellüler, ucu kayıtları yapmak için hayvan 24 saat önce hazırlamak için zaman özel belirli bir (bağımlı sensillum) tip-çapı uyarıcı pipetler. Biz bu tür özellikleri elde etmek için bir mikropipet çektirmesi kullanın. İdeal olarak, pipetler çapı ≈ 2 mikron sensillar gözenek çapı daha büyüktür. Biz her bir hayvan için mikropipet özellikleri buna göre ayarlayın. </li><li> Kayıttan önce 1 saat, biz, petrol altında Pecten daldırarak pectinal odasına 5 ul mineral yağ ekleyin. Sonra, uzun mesafe hedefleri ve epi-aydınlatma çalışan bir yüksek güçlü mikroskop altında hayvan yerleştirin. </li><li> Kimyasal dübel sensilla teşvik etmek, sulu tastants (örneğin sitrik asit ve tuz) petrol aracılığıyla tanıtmak. İlk olarak, uyarıcı, uyarıcı pipet içine enjekte etmek için bir mikropipet dolgu kullanın. Not: Tüm uyarıcı çözümler elektriksel iletkenlik için bir elektrolit içermelidir. </li><li> Sonra, bir micromanipulator (kayıt teçhizat) uyarıcı pipet konumlandırma sonra kayıt elektrot uyarıcı pipet künt, açık ucunu yerleştirin. Metal elektrot arasındaki temas ve elektrolitik uyarıcı bir çözüm sağlamak için önemlidir. </li><li> Hazırlık elektriksel petrol aracılığıyla ve bir sensillar gözenek üzerine pipet, sadece düşük (kayıtsız elektrot aracılığıyla) topraklanmış. Pectinal sensillum başına kimyasal stimülasyon süresi kadar otuz dakika gibi kısa bir sürede ikinci değişebilir. Genellikle, pipet başına birden fazla mandalları (&gt; 30) tadabilirsiniz. Uyarıcı pipet dakika enkaz ile tıkanmış hale gelmesi durumunda, yeni, kullanılmamış bir pipet tıkanmış pipet değişimi. </li></ol> 3. Hayvan Deneyleri Çoklu Günler için hazırlanması <ol><li> Hayvan uzun bir süre boyunca kullanılmak üzere ise, pectinal odasının yeniden ve her kayıt oturumu için mineral yağ damla yerine öneririz. , Belirli bir günde kayıt işlemi tamamlandıktan sonra, kayıt set-up hayvan çıkarın ve bir madeni yağ yıkama yapın. </li><li> Specifically, mineral yağ, başka bir odaya açılan (5 ul) ekleyin ve tüm petrol çıkarmak. Bu kayıt oturumu sırasında pipetin dışarı sızdırılmış olabilir kalıntı uyarıcı, varlığı en aza indirmeye yardımcı olur. </li><li> Sonraki oturumda önce, daha önce açıklandığı gibi bir damla yağ ekleyebilirsiniz. </li></ol> 4. Temsilcisi Sonuçlar: N oranı en az 3:1 kayıt ekipmanları (özellikle amplifikatör gibi, sayısallaştırma donanım, vb.) Bağlı olarak, temsili bir sonuç S ile ekstraselüler kayıt. Başarılı yapım, mineral yağ haznesi, kimyasal uyarımı bireysel sensilla izole için gerekli olan polar (su bazlı) kimyasal tastants 8 sağlamak için bir ortam sağlar . Çok az yağ ya da hiç yoksa, uyarıcı bir çözüm, uzun bir kimyasal stimülasyon 8, kontrolsüz bir maçı neden olabilecek komşu sensilla kaydedilen sensillum yayılacaktır.

<ol><li>Hodgson, E. S., Lettvin, J. Y., Roeder, K. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Physiology+of+a+Primary+Chemoreceptor+unit%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Physiology of a Primary Chemoreceptor unit.</a> Science. 12, 417-418 (1955).</li>
<li>Newland, P. L. Taste processing in the insect nervous system. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aNewland%2C+PL+%22Methods+in+Insect+Sensory+Neuroscience%22">Methods in Insect Sensory Neuroscience</a>. Christensen, T. A. , CRC Press. Boca Raton. 289-318 (2005).</li>
<li>Foelix, R. F., Müller-Vorholt, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+fine+structure+of+scorpion+sensory+organs+II.+Pecten+sensilla%5BTitle%5D)+AND+%22Bull.+Br.+Arachnol.+Soc%22%5BJournal%5D)">The fine structure of scorpion sensory organs II. Pecten sensilla.</a> Bull. Br. Arachnol. Soc. 6, 68-74 (1983).</li>
<li>Carthy, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fine+structure+and+function+of+the+sensory+pegs+on+the+scorpion+pecten%5BTitle%5D)+AND+%22Experientia%22%5BJournal%5D)">Fine structure and function of the sensory pegs on the scorpion pecten.</a> Experientia. 22, 89-91 (1966).</li>
<li>Gaffin, D. D., Brownell, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Response+properties+of+chemosensory+peg+sensilla+on+the+pectines+of+scorpions%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol.+A%22%5BJournal%5D)">Response properties of chemosensory peg sensilla on the pectines of scorpions.</a> J. Comp. Physiol. A. 181, 291-300 (1997).</li>
<li>Wolf, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+pectine+organs+of+the+scorpion%2C+Vaejovis+spinigerus%3A+Structure+and+%28glomerular%29+central+projections%5BTitle%5D)+AND+%22Arthropod+Struct.+Dev%22%5BJournal%5D)">The pectine organs of the scorpion, Vaejovis spinigerus: Structure and (glomerular) central projections.</a> Arthropod Struct. Dev. 37, 67-80 (2008).</li>
<li>Gaffin, D. D., Brownell, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrophysiological+evidence+of+synaptic+interactions+within+chemosensory+sensilla+of+scorpion+pectines%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol.+A%22%5BJournal%5D)">Electrophysiological evidence of synaptic interactions within chemosensory sensilla of scorpion pectines.</a> J. Comp. Physiol. A. 181, 301-307 (1997).</li>
<li>Knowlton, E. D., Gaffin, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+approach+to+examining+scorpion+peg+sensilla%3A+the+mineral+oil+flood+technique%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Arachnol%22%5BJournal%5D)">A new approach to examining scorpion peg sensilla: the mineral oil flood technique.</a> J. Arachnol. 37, 379-382 (2009).</li>
<li>Knowlton, E. D., Gaffin, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+tip-recording+method+to+test+scorpion+pecten+chemoresponses+to+water-soluble+stimulants%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">A new tip-recording method to test scorpion pecten chemoresponses to water-soluble stimulants.</a> J. Neurosci Methods. , Forthcoming Forthcoming.</li>
<li>Haupt, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antennal+sucrose+perception+in+the+honey+bee+%28Apis+mellifera+L.%29%3A+behaviour+and+electrophysiology%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Physiol.+A%22%5BJournal%5D)">Antennal sucrose perception in the honey bee (Apis mellifera L.): behaviour and electrophysiology.</a> J. Comp. Physiol. A. 190, 735-745 (2004).</li>
<li>Bland, R. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sensilla+on+the+antennae%2C+mouthparts%2C+and+body+of+the+larva+of+the+alfalfa+weevil%2C+hypera+postica+%28gyllenhal%29+%28Coleoptera+%3A+Curculionidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Insect+Morphol.+Embryol%22%5BJournal%5D)">Sensilla on the antennae, mouthparts, and body of the larva of the alfalfa weevil, hypera postica (gyllenhal) (Coleoptera : Curculionidae).</a> Int. J. Insect Morphol. Embryol. 12, 261-272 (1983).</li>
<li>Cate, H. S., Derby, C. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hooded+Sensilla+Homologues%3A+Structural+Variations+of+a+Widely+Distributed+Bimodal+Chemomechanosensillum%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Comp.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Hooded Sensilla Homologues: Structural Variations of a Widely Distributed Bimodal Chemomechanosensillum.</a> J. Comp. Neurol. 444, 345-357 (2002).</li>
</ol>

Biz daha önce iki dergi, Knowlton ve Gaffin (2009) ve Knowlton ve Gaffin (baskıda) bu yöntemlerin yayınlandı.

Yukarıdaki protokol elektrofizyolojik çalışma için bir çöl otlak akrep (Paruroctonus utahensis) nasıl hazırlanacağını açıklar. Özellikle, biz altında pectinal yağ kimyasal-duyusal nöronların kontrollü ekstrasellüler ucu kayıtları için nasıl bir oda inşa göstermektedir. Yağ ve su karışmaz, çünkü kimyasal stimülasyon (su bazlı uyarıcılar ile) tek sensilla izole etmek mümkündür. Vurgulamak gerekir ki, P. utahensis, görece küçük bir hayvan (≈ 2.5-5 cm) ve büyük hayvanların bu protokolü uygulayarak hayvanın platformu, odanın boyutu gibi birçok boyutu ayarlamaları ve uygulanan yağ miktarı gerekebilir. Biz su bazlı kimyasal uyarıcıların kontrollü teslimat için gerekli minimum miktarda yağ test etmek için pilot çalışmalar yapmanızı öneririz. Ayrıca, yağ içinde pectinal sensilla 8 temel sinir aktivitesi üzerinde herhangi bir etkisi bulundu. Bu önce chemoresponsiveness değerlendirirken, aynı zamanda diğer model sistemler için teyit edilmelidir. Bu yöntem chemoresponse duyusal alanında sensilla arasında etkileşim etkileri test etmek için başka bir yöntem ile birlikte kullanılabilir. Örneğin, bir sensillum ucu-record (yağ altında) mümkün olduğu gibi biz komşu bir sensillum 9 baz kayıt (tungsten elektrod aracılığıyla). Böyle bir kayıt yapılandırma tabanına kaydedilmiş sensillum nöral aktivitenin etkiler olsun ya da kimyasal bir sensillum uyarıcı değerlendirmek için kullanılıyor olabilir. Bugüne kadar hiç kimse bu akrep pectinal sensilla test etmiş ve bunun yanı sıra diğer kimyasal-duyusal sistemleri için açık bir soru kalır. Özetlemek gerekirse, biz, petrol gelişmeler eklembacaklı tadında nöral temeli haline elektrofizyolojik araştırmalar kapsamı altında ucu-kayıt yöntemi düşünüyorum. Bu yazıda, biz bu yöntem için hayvan hazırlamak için bir protokol sağlamak ve periferik duyusal sinir sistemi daha fazla çalışma için sağlam bir temel sağlar umuyoruz.

<table><tbody><tr><td>Lift-N-Press sekmesi</td><td>Ted Pella, Inc.</td><td>16082</td><td>Çift taraflı yapıştırıcı</td></tr><tr><td>MicroFil</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>MF34G</td><td>Mikropipet doldurucu</td></tr><tr><td>Standart Cam Kılcal Borular</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>1B100F-6</td><td>Cam pipetler</td></tr><tr><td>Mikro&amp;#8211;elektrot Tutucu</td><td>World Precision Instruments, Inc.</td><td>MEH3SBW10</td><td></td></tr></tbody></table>

akrep peg sensilla elektrofizyolojisi

Electrophysiology of Scorpion Peg Sensilla

Biz, kısa, duyusal sensilla 3,4 tahta gibi elektrofizyolojik araştırmak için, mevcut bir ucu kayıt tekniği 1,2 bir değişiklik açıklar. Bütün akrepler orta-ventral yüzey üzerinde yoğun alanlar var pektinler olarak adlandırılan iki ekleri, mekanik ve kimyasal-duyusal peg sensilla 5,6 . Bu sensilla chemoresponsiveness değerlendirilmesi için bir yöntem uçucu odorant duyusal alanında 5,7 olarak ekstraselüler sensillum içinde nöral aktiviteyi kayıt için bir tungsten elektrot kullanır. Bu yöntemin sınırlarını yavaş veri toplama ve kontrolsüz uyarıcı giriş ve Hazır Giyim alanında, kaldırılması içerir. Bu sınırlamaları aşmak için, biz, bireysel peg sensilla 8,9 su bazlı tastants sunmak için bir araç olarak apolar madeni yağ kullanan yeni bir ucu kayıt tekniği geliştirdi . Biz başarıyla sensillar chemoresponses, sitrik asit, etanol, ve tuz elde etmek için bu yöntemi uyguladık. Burada, böyle bir çalışma 9 için deney protokolünde açıklar . Biz bu yeni yöntem, bu böcekler 10, 11 ve 12 kabuklular de dahil olmak üzere diğer eklembacaklı kimyasal-duyusal sistemleri, tepki özelliklerini inceleyerek için yararlı olabilir düşünüyorum .

Bu makale, mineral yağ altında ekstrasellüler, ucu kayıtları üzerinden bireysel sensilla kimyasal stimülasyon izole bir elektrofizyolojik yöntem açıklanır.

Akrep Peg Sensilla elektrofizyolojisi

Kısa, çivi benzeri duyusal sensillaların elektrofyizyolojik olarak incelenmesi için mevcut bir uç-kayıt tekniğinin modifikasyonunu tanımlıyoruz. ...

Bu prosedürün genel amacı, bir akrep pektenindeki münferit pegilla'ların kemosensoriyel fizyolojisini incelemektir. Bu işlem, öncelikle anestezi uygulanmış bir akrebin ventral tarafı yukarı bakacak şekilde bir cam lam üzerine sabitlenmesiyle gerçekleştirilir. Kurulum için modelleme kili kullanmak, pektenlerin özel yapım yağ dolu bir hazneye daldırılmasını ve kimyasal bir uyarıcı ile doldurulmuş elektrotların hazırlanmasını gerektirir.Kemosensoriyel yanıtlar, sulu kemostimülanlara nihayetinde benzer yanıt profilleri üreten pektin üzerindeki bireysel illa'larda kaydedilir. Volatil stimülanlar gözeneklerin üzerinden üflenirken illa'ların tabanından kayıt aldık. Uç kayıt tekniğinin temel avantajı, stimülasyonun komşularının aktivitesini etkilemeden tek bir pig centum ile izole edilmesine olanak sağlamasıdır.Bu yöntem, kemosensoriyel biyoloji alanındaki temel soruları yanıtlamamıza yardımcı olabilir; örneğin, hayvanlar kimyasal tespit ve algılama süreçlerinde neden bu kadar çok tekrarlayan silla kullanırlar? Akrepler çalışmak için en güvenli hayvanlar gibi görünmeyebilir ancak tüm türler tehlikeli veya başa çıkılması zor değildir. Örneğin, uzunlukları sadece dört ila beş santimetre olan çöl otlağı akreplerinin laboratuvar ortamında bakımı kolaydır ve uygun şekilde tutulduklarında nadiren sokarlar.Sokulma durumunda, zehir duyusal nöronlarınızı yapay olarak tetikler ve bunlardan bazıları ağrı bilgisini iletir. Bu his genellikle yaklaşık 15 dakika içinde hafifler. Akrepler dayanıklı deneklerdir ve genellikle yaşam alanlarına geri döndürülerek günlerce süren deneylere tabi tutulabilirler.Akrebi immobilize etmek için deney tamamlandığında, hayvanı önceden soğutulmuş cam bir kaba yerleştirin. Ardından, akrebin bulunduğu kavanozu en az iki dakika boyunca dondurucu bir ortama koyun ve hayvan hareketsiz kaldığında dondurucudan çıkarın. Şimdi, immobilize edilmiş akrebi ventral tarafı yukarı gelecek şekilde bir mikroskop lamı üzerine yerleştirin.İğne kuyruk bacaklarını ve pedi pal'leri şekillendirilebilir kil ile sabitleyin. Akrebin pektinleri, cinsiyet organlarının yakınında bulunan tarak benzeri çift yapılardır ve bu hayvanlara özgüdür. Pektini hayvandan ayırmadan, onu içine alacak tek bir bölme oluşturulmalıdır.İlk olarak, pektinin yerleşebileceği bir platform oluşturmak için yaklaşık beş milimetre çarpı 18 milimetre boyutlarında kesilmiş bir cam lamelle kullanın. Bu genellikle yeterli olur. İkinci olarak, platforma çift taraflı yapışkan bant yapıştırın ve gerekirse bandı uygun boyuta göre kesin.Üçüncü olarak, bir ısıtıcı tabla kullanarak cam bir kapta bir miktar %100 balmumu granülünü eritin. Ardından, platformun dört kenarından üçünü, üç ila dört milimetre derinliğe gelecek şekilde eritilmiş balmumuna daldırın. Soğuyan balmumu, bir hazne oluşturmak için duvar görevi görür.Şimdi, platformun yapıştırılmamış kenarını hayvan üzerindeki pektal insersiyon noktasının hemen posterioruna yerleştirin. İnce uçlu pensler kullanarak, platformun sağ ve sol çevre kenarlarını hayvanın bacaklarını sabitlemek için kullanılan kilin üzerine hafifçe bastırarak platformu stabilize edin. Pektinlerden birini pektal spinal boyunca dikkatlice tutun, onu lam camının altından nazikçe çıkarın ve yapışkan platform tabanına indirin.Pektal dikene dikkatlice basınç uygulayarak pektini sabitleyin. Platformun birleşmemiş kenarına önceden ısıtılmış metal bir spatula ile eritilmiş balmumu uygulayarak hücreyi tamamlayın. Hayvan artık elektrofizyolojik kayıtlar yapmak için neredeyse hazırdır.Şimdi indiferent elektrot bağlantısını yapmak için uygun bir zamandır. Akrebin hemolenfine, iki kuyruk segmenti arasından gümüş bir tel yerleştirin. Teli sabitlemek için hayvanın dışına çıkan kısmının bir bölümünü kile bastırın ve amplifikatöre ulaşacak kadar uzunluk bırakın.Kayıtların yapılmasına izin vermek için örneğin çökelmesini sağlamak amacıyla, kayıt yapmadan önce hazırlığı en az bir saat boyunca kenara alın. Hayvanlar arasında farklılık gösteren sensör gözenek çapından yaklaşık iki mikron daha büyük iç çaplı pipetler hazırlamak için bir mikro pipet çekici kullanın. Kayıttan bir saat önce, pektin haznesini beş µL mineral yağ ile doldurun.Ardından, peg illa'ları kimyasal olarak uyarmak için hayvanı, uzun çalışma mesafeli objektiflere ve epi aydınlatmaya sahip yüksek güçlü mikroskobun altına yerleştirin. Uyarıcı pipetini, elektrolitik bir çözelti ile karıştırılmış sulu tatlar ile doldurun. Bir mikro pipet doldurucu kullanarak, ardından doldurulmuş uyarıcı pipetini bir mikro manipülatöre bağlayın.Şimdi kayıt elektrodunu stimülan pipetinin açık ucuna yerleştirin. Metal elektrot ile elektrolitik stimülan çözeltisi arasında temas olduğundan emin olmak önemlidir. Kayıt ve indiferent elektrotların iletkenlerini diferansiyel bir amplifikatöre bağlayın.Amplifikatör, elektriksel aktiviteyi görselleştirmek için bir osiloskoba ve elektriksel değişimi duyulabilir şekilde tespit etmek için bir hoparlöre bağlanır. Düzenek artık kayıt almaya hazırdır. Mikro manipülatörü kullanarak pipeti dikkatlice bir sensör gözenek üzerine indirin.Pipet elektroliti ile peg sens içindeki sıvı arasında elektriksel temas kurulduğunda, daha yüksek frekanslara doğru bir değişim duyulacaktır. Bu sırada nöral aksiyon potansiyellerinin belirgin patlamaları da duyulabilir. Her bir perpetual sens başına kimyasal stimülasyon süresi, 30 dakika kadar uzun veya bir saniye kadar kısa olabilir.Genel olarak, bir pipet 30'dan fazla pimi örnekleyebilir. Tıkanmış pipetleri temiz pipetlerle değiştirin. Pipetlerin hazırlanması kolaydır ve tıkanmalar sık rastlanan bir durumdur, bu nedenle her zaman yedek pipetleri hazır bulundurun.Mineral yağı değiştirmeden önce, tek bir kayıt oturumunda tek bir hayvandan birkaç saat boyunca kayıt almak mümkündür. Tek bir hayvan, birbirini takip eden birkaç gün boyunca birden fazla kayıt oturumu için kayıt düzeneğinde sabit tutulabilir. Sonraki oturumlar için pektal hücreyi yeniden kullanın ancak mineral yağını değiştirin.Eski yağın tamamını bir pipet yardımıyla uzaklaştırın ve taze bir damla ekleyin. Bu işlem, kayıt oturumu sırasında stimülan pipetinden sızmış olabilecek kalıntı stimülanların varlığını en aza indirmeye yardımcı olur. Farklı stimülanlara verilen temsili uç kayıtları aşağıda yer almaktadır.Bu iz, 0,01 molar potasyum klorüre karşı nispeten tutarlı bir yanıt göstermektedir. Bu peg, 0,1 molar sitrik aside karşı çok daha yoğun başlayan ve saniyenin küçük bir kesri içinde şiddeti azalan, ardından frekansta bazı düşüşlerin gerçekleştiği bir yanıt vermektedir. %30 etanol ile verilen tipik bir yanıtta, 0,1 molar sitrik asit gibi aynı stimülanla elde edilen farklı sensör yanıtlarının uç kayıtları karşılaştırıldığında, iz kısa inaktivite aralıkları arasında çoklu spike'lar içeren patlamalar göstermektedir.Yanıtlar birbirine çok benzerdir. Bu prosedürü uygularken, yağ ortamıyla karışmayan ve her seferinde tek bir lum'u kimyasal olarak stimüle etmenize olanak tanıyan su bazlı bir stimülan ile pipeti doldurmayı hatırlamak önemlidir. Bu videoyu izledikten sonra, mineral yağı ortam olarak kullanarak bir akrep pektinindeki bireysel CIN'leri nasıl kontrollü bir şekilde stimüle edeceğiniz konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.

electrophysiology-of-scorpion-peg-sensilla

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Koku için koku alma duyu nöronlarının elektrofizyolojik yanıtlar tek sensillum kayıtları kullanarak böcekleri ölçülebilir. Bu video makalede, sirke sineği antenler tek sensillum kayıtları nasıl gerçekleştirileceği gösterecektir...

Böcekler Tek Sensillum Kayıtlar Drosophila melanogaster Ve Anofel gambiae</em

Böcek koku alma sistemleri electroantennograms (EAG) ve anteni bulunan tüm odorant reseptör nöronları (ORNs) ve bireysel ev sahipliği bu yanıtları toplanır tek sensillum kayıtları (SSR), formları kayıt odorant indüklenen yanıtları için eşsiz fırsatlar sunmaya sırasıyla sensilla.

Güve Koku Sistemi Elektrofizyolojik Ölçümler

Biz deniz deniz tavşan sinir sisteminin diseksiyonu...

Duyusal nöronlar izolasyonu<em&gt; Aplysia californica</em&gt; Glutamaterjik Akımlar Patch Kelepçe Kayıtlar için

Bu makalede, hamamböceği ventral sinir kablosu diseksiyonu ve Cercal sinir ve bağlaçlar hücre dışı kayıtları açıklar. Uyarılmış tepkiler Cercal sinir veya cerci doğrudan mekanik uyarma elektriksel stimülasyon tarafından oluşturulur.

Sinir Devre Kaydı bir Bozulmamış Hamamböceği Sinir Sistemi

Bu makale sülükler kullanılarak üç sinir sistemi hazırlıkları anlatmaktadır: Hücre içi kayıt ventral gangliada nöronların, ventral ganglionlar nöronları kültüre ve duyusal alanları haritaya innerve deri bir yama kayıt.

Hücre içi Kaydı, Duyu Alan Haritalama ve Sülük de Kültüre Belirlenen Nöronlar Hirudo medicinalis</i

Bu protokol Drosophila labellar tat nöronlar tarafından ateş aksiyon potansiyel yanıtları hücre dışı kayıt açıklar.

Elektrofizyolojik Kayıt<em&gt; Drosophila</em&gt; Labellar Sensilla Taste

Elektrik Penetrasyon Grafiği (EPG), stile taşıyan böceklerin beslenme davranışını incelemek için iyi bilinen bir tekniktir. Burada, bitkilerde floem vaskülatürünü oluşturan hücreler olan elek elemanlarının (SE'ler) hücre içi elektrofizyoloji kayıtlarının elde edilmesi için invaziv olmayan bir araç olarak EPG'nin yeni bir uygulamasını gösteriyoruz.

Floem Elek Elements Elektrik Sinyallerini Edinme ve Ölçüm Elektrik Penetrasyon Grafik (EPG) Yeni Bir Uygulama

Tahtakuruları, ortamdaki semiyokimyasalları tespit etmek için anten koku alma duyularında bulunan koku alma reseptörü nöronlarına güvenir. Tek sensillum kaydını kullanarak, tahtakurusunun semiokimyasallara tepkisini değerlendirmek ve ilgili kodlama sürecini keşfetmek için bir yöntem gösteriyoruz.

Semiokimyasallar için yatak hataların Koku Nöron Cevapları Algılama Tek Sensillum Kaydı Kullanma

Bu kağıt sensilla basiconica tek sensillum kayıtları için detaylı ve son derece etkili iletişim kuralı böcek ağız dokunacı üzerinde açıklar.

Tek Sensillum kayıtları Locust Palp Sensilla Basiconica için

Çalışmada böcek sensillasının ultrayapısını gözlemlemek amacıyla tarama ve iletim elektron mikroskobu (sırasıyla SEM ve TEM) örnek hazırlama protokolü sunulmuştur. SEM.Floresan mikroskopide örnek deformasyonu önlemek için fiksatife ara 20 eklenmiştir.

Woodboring Böceği uzantıları için Tarama ve İletim Elektron Mikroskobu Örnek Hazırlama Yöntemi

Bu çalışma, senkron EKG kayıtları ile birlikte in vivo kalsiyum görüntüleme için anestezi uygulanmış farelerde T-DRG'yi ortaya çıkarmak için cerrahi bir manipülasyon sunmaktadır. Bu yöntem, periferik elektriksel sinir stimülasyonu ve torasik viseral organ girdilerinin yanı sıra bunların birincil duyusal düzeydeki etkileşimlerini incelemek için son teknoloji bir araçtır.

Periferik Sinir Stimülasyonunu İncelemek için İn Vivo Torasik Dorsal Kök Gangliyonları (DRG) Kalsiyum Görüntüleme ve EKG Kaydı

Öğrenin akrep pectin sensilla elektrofizyolojisini, mineral yağı altında ekstraselüler uç kayıtları ile bireysel sensilla izolasyonu yaparak. Bu yöntem kimyasal duyusal biyoloji araştırmalarında değerli bir araç sunar.

Akrep Peg Sensilla elektrofizyolojisi

Daha fazla video keşfet