Name: Balb / C Beyin Dokusu Yüksek Hassasiyet 5-hydroxymethylcytosine Algılama (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-02-01T18:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 19 s
Description: Öğrenin, Balb/C beyin dokusunda 5-hidroksimetilsitozin ve 5-metilsitozin düzeylerini enzimatik yöntemlerle analiz edin. EpiMark kiti kullanılarak epigenetik modifikasyonlar hassasiyetle tespit edilir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Sriharsa Pradhan, Shannon Morey Kinney, Hang Gyeong Chin, Jurate Bitinaite, Yu Zheng, Pierre Olivier Esteve, Romualdas Vaisvila, Steven E. Jacobsen s laboratuar, UCLA. Bu çalışma kısmen NIH 1R44GM095209-01 tarafından desteklenmiştir.

1. DNA Glucosylation ve Kontrol Reaksiyonları <ol><li> Buz üzerinde 1.5 mililitre reaksiyon tüpü, genomik DNA 5-10 mikrogram (son bir konsantrasyon için 30 mikrogram / mililitre), UDP-Glukoz 12.4 mikrolitre (80 mikromolar son bir konsantrasyon için), NEBuffer 4 31 mikrolitre karıştırmak nükleaz içermeyen su ile 310 mikrolitre toplam hacmi 310 mikrolitre getirmek. </li><li> 155 mikrolitre her iki tüp içine Split bu reaksiyon karışımı. </li><li> Sonra bir tüp 30 adet, T4-β-glukoziltransferaz veya 3 mikrolitre, ekleyin. Hafifçe yukarı ve aşağı pipetleme iyi karıştırın. Ikinci tüp kontrol reaksiyon, bu nedenle T4 BGT yerine, 3 mikrolitre su ekleyin. </li><li> T4-BGT örnek bölgesindeki 5-hydroxymethylcytosine grupların hidroksil grubu şekeri ekleyin ve bu süre boyunca, her iki tüpte 12 ila 18 saat boyunca 37 derece santigrat inkübe edin. </li></ol> 2. Kısıtlama Enzim Sindirim <ol><li> Etiket üç 0.2 mililitre PCR-strip tüpleri numaraları 1'den 3'e kadar. Her birine reaksiyon karışımının kısım 50 ul. </li><li> Etiket üç 0.2 mililitre PCR-strip tüpleri numaraları ile 4 (6). Her kontrol karışımı kısım 50 ul. </li><li> MspI 100 birim, ya da 1 mikrolitrelik, 1 ve 4 tüpler içine ekleyin. Hafifçe yukarı ve aşağı pipetleme iyi karıştırın. </li><li> HpaII 50 ünite, ya da 1 mikrolitrelik, 2 ve 5 tüpler içine ekleyin. Hafifçe yukarı ve aşağı pipetleme iyi karıştırın. </li><li> Denetimleri gibi, 3 ve 6 tüpler bir şey eklemek değil. </li><li> 37 santigrat derece sıcaklıkta 6 tüpleri en az 4 saat süreyle inkübe edin. </li><li> Her tüpe 1 mikrolitrelik Proteinaz K ekleyin ve 30 dakika boyunca 40 dereceye inkübe. </li><li> 10 dakika boyunca 95 santigrat derece az kuluçka Proteinaz K inaktive. </li></ol> 3. PCR / qPCR DNA analiz Bu protokol son nokta iyi bir performans gösterilmiştir PCR NEB LongAmp Taq kullanır. Diğer PCR protokolleri ikame edilebilir. <ol><li> 5X LongAmp Taq Reaksiyon Tamponu, 10 millimolar dNTP, 10 mikromolar İleri Primer 1 mikrolitrelik, 10 mikromolar Ters Primer 1 mikrolitrelik, 3 mikrolitre şablon 1.5 mikrolitre 10 mikrolitre: buz üzerinde 0.2 mililitre PCR reaksiyonu tüp için aşağıdaki bileşenleri ekleme önceki adımları LongAmp Taq DNA Polimeraz 1 mikrolitrelik, ve nükleaz içermeyen su 50 mikrolitre DNA. Bu birimler kullanılan PCR protokolü göre değişebilir. </li><li> Yavaşça reaksiyon karışımı. Gerekirse, hızlı bir dönüş tüpün dibine tüm sıvı toplamak. </li><li> Isıtmalı bir kapaksız bir PCR kullanarak, mineral yağ ile örnek Yerleşimi. </li><li> Celsius 94 derece önceden ısıtılmış blok buz bir PCR PCR tüpleri transferi ve bisiklet programını başlatmak. 3-adım PCR rutin bir, 30 saniye, 15 saniye boyunca 94 derece santigrat denatürasyon 30 döngüleri,, 30 saniye için tavlama santigrat 55 ila 65 derece ve 65 derece santigrat uzantısı takip için 94 santigrat derece bir ilk denatürasyon adım olmalıdır 20 saniye, ya da kb ortalama 50 saniye. Bu 5 dakika boyunca 65 santigrat derece bir final uzantısı tarafından takip edilmelidir. Real-time PCR de 5-methylcytosine ve 5-hydroxymethylcytosine miktarları ölçmek için yapılabilir. Lütfen özel bilgiler için neb.com bulunan ürün kılavuzu, bakınız. </li></ol> 4. Temsilcisi Sonuçlar: <img src="/files/ftp_upload/2661/2661fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1 farklı fare Balb / C doku örnekleri lokus 12 5-hydroxymethylcytosine miktarların karşılaştırılması. (A), End-point PCR. (B) Gerçek zamanlı PCR. Dört fare dokulardan DNA analiz edildi. Karşılaştırmalı amaçlar için, gerçek zamanlı PCR veri kesilmemiş DNA normalize edildi. Standart eğri kopya sayısını belirlemek için kullanılmıştır. Örnekleri sindirilmemiş kontrol kopya sayısı (No 5), 1-6 örnekleri kopya sayısı bölerek normalize olabilir. Kutulu jel şeritli 5-HMC mevcut değişim gösterir.

<ol><li>Sadri, R. Nucleic Acids Res. 24, 4987-4989 (1996).</li>
<li>Mathur, E. J. Gene. 108, 1-6 (1991).</li>
<li>Butkus, V., Petrauskiene, L., Maneliene, Z., Klimasaukas, S., Laucys, V., Janulaitis, A. Nucleic Acids Res. 15, 7091-7102 (1987).</li>
<li>Kriaucionis, S., Heintz, N. Science. 324, 929-930 (2009).</li>
<li>Tahiliani, M., Koh, K. P., Shen, Y., Pastor, W. A., Bandukwala, H., Brudno, Y., Agarwal, S., Lyer, L. M., Liu, D. R. Science. 324, 930-935 (2009).</li>
<li>Huang, Y., Pastor, W. A., Shen, Y., Tahiliani, M., Liu, D. R., Rao, A. PLoS One. 5 (1), e8888-e8888 (2010).</li>
</ol>

Ted ve Romanlar her ikisi de, bu makalenin yazarları, NEB çalışanları; Ted bu kit geliştirme nezaret Uygulamalar &amp; Geliştirme Bölümü Direktörü olan, Romanlar kiti ana geliştiricisi.

Bu deneyde kurarken pek çok kritik şeyler var. İlk olarak, genomik DNA glucosylation tamamlanması için devam eder önemlidir. T4 BGT dizisi özgüllüğü bilinen ve substrat dizisi için başka seçeneğimiz yok gibi görünüyor. Bu nedenle, bazı durumlarda, daha uzun inkübasyon sürelerinde gerekli olabilir. İkincisi, MspI ve HpaII sindirim arka plan sinyal önlemek için tam olmalıdır. Bu kısıtlama enzimler için, 4 saatlik bir inkübasyon süresi tavsiye, ama eksik bölünme görülmektedir uzun inkubasyon yapılabilir. Üçüncü, giriş DNA miktarı 20 NGS DNA son nokta PCR için kullanılan bu yana, yer olup olmamasına bağlı olarak ayarlanabilir. Son olarak, 5-mC ve 5-HMC kantifikasyon genomik DNA ile paralel olarak çalıştırmak olabilir sağlanan kontrol DNA kullanmanızı öneririz.

<table><tbody><tr><td>EpiMark&amp;#8482; 5-hmC ve 5-mC Analiz Kiti</td><td>New England Biolabs</td><td>E3317</td><td></td></tr><tr><td>İlgilenilen bir CCGG bölgesini çevreleyen lokusa özgü primerler</td><td></td><td></td><td>Deney bazlı özel; kullanıcı tarafından sağlanır</td></tr><tr><td>LongAmp&amp;#174; &lt;em&gt;Taq&lt;/em&gt; DNA Polimeraz</td><td>New England Biolabs</td><td>M0323</td><td></td></tr><tr><td>dNTP'ler</td><td>New England Biolabs</td><td>N0447</td><td></td></tr><tr><td>moleküler biyoloji saflığında su</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

balb / c beyin dokusu yüksek hassasiyet 5-hydroxymethylcytosine algılama

High Sensitivity 5-hydroxymethylcytosine Detection in Balb/C Brain Tissue

DNA hydroxymethylation DNA bilinen uzun bir değişiklik, ancak son zamanlarda bir epigenetik araştırma odağı haline gelmiştir. Memeli DNA enzimatik CpG dinükleotidleri bağlamda ağırlıklı olarak, 5-mC sitozin (C) kalıntılarının 5. karbon pozisyonunda değiştirilmiş. 5-mC, geliştirme ve hastalık yer olduğuna inanılan enzimlerin Tet aile, 5-HMC enzimatik oksidasyon için uygun. Şu anda, 5-HMC biyolojik rolü tam olarak anlaşılmış değildir, fakat bir biyolojik belirteç olarak potansiyeli nedeniyle ilgi bir sürü oluşturuyor. Bu fare embriyonik kök (ES) ve nöronal hücrelerin 5-hydroxymethylcytosine tespit birçok çığır açan çalışmaları nedeniyle. Bisülfit sıralama yöntemleri de dahil olmak üzere, Araştırma Teknikleri, 5-mC ve 5-HMC kolayca ayırt etmek mümkün değildir. Birkaç protokoller sıvı kromatografisi kütle spektrometresi analizi veya genomik DNA sindirilmiş tek nükleosidlerin ince tabaka kromatografisi ile birleştiğinde de dahil olmak üzere, genom küresel miktarda 5-hydroxymethylcytosine ölçebilirsiniz var. Dot blot analizi, immünofloresan, ya da hydroxymethylated DNA yağış için kullanılabilir, ancak bu antikorlar tek baz resolution.In Ayrıca zorunda değilsiniz Antikorlar, hedef 5-hydroxymethylcytosine de var olduğunu, çözünürlük immunoprecipitated DNA ve büyüklüğüne göre değişir mikroarray deneyler, prob tasarımı bağlıdır. 5-hydroxymethylcytosine epigenetik düzenleme genom ya da rolünü tam olarak nerede var bilinmediğinden, bu yeni teknikler, lokus spesifik hydroxymethylation belirlemek için gereklidir. EpiMark 5-HMC ve 5-mC Analiz Kiti, bu iki özel lokusların değişiklikler arasında ayrım için bir çözüm sağlar. EpiMark 5-HMC ve 5-mC Analiz Kiti, 5-methylcytosine ve belirli bir DNA lokus içinde 5-hydroxymethylcytosine tanımlanması ve kantitatif için basit ve sağlam bir yöntem. Bu enzimatik yaklaşım, basit 3 adım protokol isoschizomers MspI ve HpaII diferansiyel metilasyon duyarlılığı kullanır. 5-hydroxymethylcytosine glukoz moeity ekleyerek, ilgi Genomik DNA T4 BGT ile tedavi edilir. Bu reaksiyon dizisi bağımsız, bu nedenle 5-HMC glucosylated olacak; değiştirilmemiş veya 5-mC içeren DNA etkilenmeyecektir. Bu glucosylation sonra kısıtlama endonükleaz sindirim tarafından takip edilmektedir. MspI ve HpaII aynı sıra (CCGG) farkındayız ama farklı metilasyon devletlere duyarlıdır. Sitozin blokları bölünme ya da herhangi bir değişiklik (5-mC, 5-HMC veya 5-ghmC): HpaII sadece bir sitenin tamamen değiştirilmemiş parçalayarak. MspI 5-mC ve 5-HMC, ama 5-ghmC tanır ve keser. Protokol üçüncü bölümü PCR ile odağı sorgulama. Giriş DNA az 20 ng kullanılabilir. Deneysel (glucosylated ve sindirilmiş) ve kontrol (alay glucosylated ve sindirilmiş) bir ilgi CCGG sitesi (100-200 bp) yan primerler ile hedef DNA amplifikasyonu yapılır. CpG sitesi 5-hydroxymethylcytosine içeriyorsa, bir grup glucosylation ve sindirim sonra tespit, ancak olmayan glucosylated bir tepki olarak değil. Gerçek zamanlı PCR hydroxymethylcytosine bu özel site ne kadar bir yaklaşım verecektir. Bu deneyde, bir fare Babl / C beyin örnek 5-hydroxymethylcytosine miktarı bitiş noktası PCR ile analiz eder.

EpiMark 5-HMC ve 5-mC Analiz Kiti, analiz etmek ve SPE larındaki lokus içinde 5-methylcytosine ve 5-hydroxymethylcytosine ölçmek için kullanılabilir. Kiti, 5-HMC hidroksil grubu β-glukoziltransferaz (T4-BGT) kullanan bir enzimatik reaksiyon ile glikoz eklenmesiyle 5-5-HMC mC ayırır. 5-HMC CCGG bağlamında oluştuğunda, bu değişikliği olmayan bir cleavable sitesine cleavable MspI sitesi dönüştürür.

Balb / C Beyin Dokusu Yüksek Hassasiyet 5-hydroxymethylcytosine Algılama

DNA hidroksimetilasyonu, uzun zamandır bilinen bir DNA modifikasyonudur ancak son zamanlarda epigenetik araştırmaların odak noktası haline gelmiştir. Memeli DNA'sı enzimatik olarak...

Aşağıdaki deneyin genel amacı, genomik DNA'nın belirli bir lokusu içindeki beş metil sitozin ve beş hidroksietil sitozini analiz etmek ve miktarını belirlemektir. Bu işlem, bir MSP one bölgesini kesilemez bir bölgeye dönüştüren beş Hidroksietil Aine'nin hidroksil grubunun kaplanmasıyla gerçekleştirilir. İkinci adımda, genomik DNA, glikozla ilişkili beş hidroksietil sitozin bölgelerini tanımlamak için farklı metilasyon hassasiyetlerini kullanan MSP one ve HPA two restriksiyon enzimleri ile sindirilir.Lokusun sorgulanması için bir sonraki PCR işlemi uygulanır. Belirli bir lokusta beş hidroksietil sitozin bulunduğunu gösteren sonuçlar elde edilir. Beş metil sitozin ve beş hidroksietil sitozin miktarını belirlemek için QPCR kullanılabilir.Bu tekniğin bisülfit sekanslama gibi diğer yöntemlere göre temel avantajı, 5-metilsitozin ile 5-hidroksietilsitozin arasında ayrım yapabilmenizdir. Bugün gerçekleştirilecek deneyler, New England Biolabs'ta bu kitin ana geliştiricilerinden biri olan Romas Vice Villa tarafından yürütülecektir. Bu protokole başlamadan önce, yazılı prosedürde açıklandığı şekilde B Sea beyin dokusundan genomik DNA saflaştırılmıştır. 1,5 mL'lik bir reaksiyon tüpünde; genomik DNA, UDP-glikoz, NEB tamponu 4 ve toplam hacmi 310 µL'ye tamamlayacak kadar nükleaz içermeyen suyu karıştırın.Bu reaksiyon karışımını, her biri 155 µL olacak şekilde iki tüpe bölün. Ardından, tüplerden birine 30 ünite veya üç µL T dört beta glukoziltransferaz ekleyin. Pipetle nazikçe yukarı aşağı çekerek iyice karıştırın.Kontrol reaksiyonu olduğu için ikinci tüpe T four BGT eklemeyin, ancak üç microliters su eklediğinizden emin olun. Her iki tüpü 37 degrees Celsius'ta 12 ila 18 saat boyunca inkübe edin; bu süre zarfında BGT, örnekteki beş hydroxyethyl cytosine gruplarının hidroksil grubuna glikoz ekleyecektir. Restriksiyon enzimi sindirimine başlamak için, reaksiyon karışımından 50 microliters'ı birden üçe kadar etiketlenmiş üç adet 0.2 milliliter PCR şerit tüpünün her birine paylaştırın.Ardından, kontrol karışımından 50 µL'lik porsiyonları dörtten altıya kadar etiketlenmiş üç PCR şerit tüpünün her birine paylaştırın. Birinci ve dördüncü tüplere 100 unit msp ekleyin. Sonra, ikinci ve beşinci tüplere 50 unit HPA iki ekleyin ve hafifçe pipetleyerek iyice karıştırın.Üç ve altı numaralı tüpler kontrol olduğu için bunlara hiçbir şey eklemeyin. Altı tüpün tamamını 37 °C'de en az dört saat inkübe edin. Ardından, her tüpe 1 µL proteinaz K ekleyin ve 40 °C'de 30 dakika inkübe edin.Son olarak, 95 °C'de 10 dakika inkübe ederek proteinaz K'yı inaktive edin. Bu prosedür, endpoint PCR için NE B'S long amp TAC kullanılarak gösterilmiştir. Bununla birlikte, buz üzerinde 0,2 mL'lik bir PCR reaksiyon tüpünde diğer PCR reaktifleri ve prosedürleri de kullanılabilir.Beş x long amp TAC reaksiyon tamponu, dNTP'ler, ileri ve geri primerler, önceden elde edilen kalıp DNA, long AMP TDNA polimeraz ve final hacmi 50 µL olacak şekilde yeterli nükleazdan arındırılmış su ekleyin. Reaksiyonu nazikçe karıştırın ve gerekirse kısa bir santrifüj ile tüm sıvıyı tüpün dibine toplayın. PCR tüplerini buzdan, bloğu 94 °C'ye önceden ısıtılmış bir termosikletöre aktarın ve rutin üç aşamalı PCR için döngü programını başlatın.94 °C'de 30 saniye süren bir başlangıç denatürasyon adımının ardından; 94 °C'de 15 saniye denatürasyon, 55 ila 65 °C'de 30 saniye bağlanma (annealing) ve 65 °C'de 20 saniye veya kb başına 50 saniye uzama şeklinde 30 döngü uygulanmalıdır. Bunu, 65 °C'de beş dakika süren bir final uzama adımı takip etmelidir. 5-metilsitozin ve 5-hidroksimetilürasin miktarlarını nicelleştirmek için gerçek zamanlı PCR da gerçekleştirilebilir.Belirli bilgiler için lütfen nb. com adresinde bulunan ürün kılavuzuna bakın. Locus 12'deki beş hidroksietil ain miktarı, son nokta PCR ve gerçek zamanlı PCR kullanılarak karşılaştırılmıştır; beyin, karaciğer, kalp ve dalak dahil olmak üzere dört farklı fare BSY doku örneği analiz edilmiştir.Beş hidroksietil sitozindeki varyasyon, karşılaştırma amacıyla uç nokta PCR örneklerinin kutulu jel şeridinde açıkça görülmektedir. Gerçek zamanlı PCR verileri kesilmemiş DNA'ya göre normalize edilmiş ve kopya sayısını belirlemek için standart bir eğri kullanılmıştır. Örnekler, örneklerin kopya sayısının sindirilmemiş kontrolün kopya sayısına bölünmesiyle normalize edilmiştir.Burada, beş hidroksietil sitozindeki varyasyon sarı çubuklar karşılaştırılarak görülebilir. Tekniğin uygulanmasına dair birkaç not: Tüm enzimatik reaksiyonların tamamlanması kritik öneme sahiptir. BGT için, MspI ve HpaII için tüm DNA bölgelerini izole edebilmek adına işlemin gece boyunca sürdürülmesi önemlidir; bu reaksiyonların tamamlandığından emin olmak için en az dört saat boyunca devam ettirilmesi gerekir.Son olarak, kontrol reaksiyonlarını yan yana gerçekleştirebilmeniz için DNA kontrolleri ve primer kontrolleri sağlıyoruz.

high-sensitivity-5-hydroxymethylcytosine-detection-balbc-brain

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Açıklanan kolay ve yoğunluk bağımsız zenginleştirme için bir biyotin bağlayıcının aktarmak tıkırtı kimya ve ardından, 5-HMC için bir azit-glikoz aktarmak için β-glukoziltransferaz (β-GT) ile iki aşamalı bir etiketleme bir işlemdir. Bu etkili ve spesifik bir etiketleme yöntemi nesil dizileme ile son derece düşük arka plan ve yüksek verimlilik epigenomic haritalama ile 5-HMC zenginleşmesine olanak sağlar.

Genomik DNA 5-hydroxymethylcytosine seçici Yakalama

Bu videoda, DNA örneklerinin bir naylon zar üzerinde lekelenmesi ve ardından monoklonal antikorlar kullanılarak görselleştirme yoluyla insan kondrositlerindeki DNA metilasyon seviyesini in vitro olarak belirlemek için nokta lekeleme tekniği açıklanmaktadır. Bu, kültürün çeşitli aşamalarında kondrositlerin fenotipini belirlemeye yardımcı olur.

DNA metilasyonunun derecesini belirlemek için 5-metilsitozin nokta lekesi

Bu protokol, formalinle sabitlenmiş, parafine gömülü biyopsi dokusunda sitomegalovirüsün qPCR tespitini tanımlar, bu da hızlı, hassas, spesifik ve belirsiz hematoksilen ve eozin veya immünohistokimyasal boyama paternlerini yorumlamak için yararlıdır.

QPCR Formalinle sabit, Parafin-gömülü Biyopsi Doku sitomegaloviral DNA tespiti için bir Hassas ve Hızlı Yöntem mi

Burada, peroksidaz konjuge ikincil antikorların ve tiramid sinyal amplifikasyonunun kullanımına dayalı olarak 5mC oksidasyon türevlerinin uzamsal dağılımını haritalamak için hassas bir immünokimyasal yöntemi açıklıyoruz.

Hassas immünohistokimyasal sitozin Modifiye Formlar Algılama

Yeni 5-metilsitozin (oksi-mCs), 5-arasında bakterilerde görülen (5hmC), 5-formylcytosine (5 fC) oksitlenmiş formları bulunan ve 5-carboxylcytosine (5caC) farklı DNA değişiklikleri benzersiz işlevsel roller ile temsil edebilir. Yarı nicel bir iş akışı görselleştirme oksi-mCs kayma dağıtım, sinyal şiddeti profil oluşturma ve colocalization için burada kullanılmıştır.

DNA değişiklikler için Immunostaining: Confocal görüntülerin sayısal analiz

Bu rapor amacı sağlam immunohistokimyasal algılama epigenetik işaretleri için iletişim kuralı tanımlamak için fare retina 5-metilsitozin (5mC) ve 5 arasında bakterilerde görülen (5hmC) gelişmekte olan ve postmitotic.

5-metilsitozin ve gelişmekte olan 5-arasında bakterilerde görülen immunohistokimyasal tespiti ve Postmitotic fare Retina

Burada, immünororesans boyama ve DNA nokta-leke yöntemleri kullanarak, hücre ve beyin dokularında 5-hidroksimetilitozin tespit etmek için bir protokol salıyoruz.

Farelerin Nöral Kök Hücreleri ve Beyinlerinde 5-Hidroksimetilsitozozin Insaptama

Bu yazıda, bozulmamış zebra balığı embriyolarında normal ve anormal sitozin metilasyonunun hızlı ve verimli spatiotemporal izlenmesi için bir protokol açıklanmaktadır.

Bozulmamış Zebra Balığı Embriyolarında Normal ve Anormal Sitozin Metilasyonunun Hızlı ve Verimli Mekansal Zamansal İzlenmesi

Proteinlere palmitat arasında reversibl Ayrıca hücre içi protein ticaretinin önemli bir düzenleyicisidir. Bu birçok sinaptik proteinlerin palmitoylated edilir nöronların özel bir ilgi alanıdır. Biz birden fazla hücre tipleri ve dokuları için adapte edilebilir kültürü nöronlar içinde palmitoylated proteinleri tespit etmek için basit bir biyokimyasal yöntem kullanmaktadır.

Immünopresipitasyon ve Açil-Biotin Borsası (ABE) tarafından Yetiştirilmiş Hipokampal Nöronlar Protein Palmitoylation tespiti

Memeli beyninin nörokimyası birçok nörolojik ve sistemik hastalıkta değişmiştir. Serebral metabolitlerin karakteristik profilleri, beyin dokusunun ham ekstraktlarına dayalı olarak verimli bir şekilde elde edilebilir. Bu amaçla, metabolit konsantrasyonlarının (metabolomikler) ayrıntılı kantitatif analizini sağlayan yüksek çözünürlüklü NMR spektroskopisi kullanılır.

Doku Esansı Yüksek Çözünürlük Nükleer Manyetik Rezonans Spektroskopisi ile Sıçan Beyin metabolomic Analizi

Öğrenin, Balb/C beyin dokusunda 5-hidroksimetilsitozin ve 5-metilsitozin düzeylerini enzimatik yöntemlerle analiz edin. EpiMark kiti kullanılarak epigenetik modifikasyonlar hassasiyetle tespit edilir.

Balb / C Beyin Dokusu Yüksek Hassasiyet 5-hydroxymethylcytosine Algılama

Daha fazla video keşfet