Aseptik Laboratuvar Teknikleri: Serolojik Pipetler ve Micropipettors ile Cilt Transferler

Bu demonstrasyon, laboratuvar tezgahında serolojik pipetler ve mikropipetler ile yapılan hacim transferlerinde aseptik laboratuvar tekniklerini sunmaktadır. Bek alevi tarafından oluşturulan steril alan içerisinde çalışın. Uygulama için uygun hacim transfer aracını seçin.

Ardından, kültür reaktiflerinin ve malzemelerinin sterilitesini koruyarak, sıvıları hassasiyetle aspire ederken bunları sterilitelerini bozmadan uygun şekilde kullanın. Bu prosedürler, kontaminasyon kaynaklarını minimize etmek ve temel deneyler için hassasiyet sağlamak açısından esastır. Başlangıçta, transfer edilen sıvıların sterilitesini bozmadan aletleri hassas bir şekilde ayarlamak, doğru okumak ve hareketleri aletler ile laboratuvar malzemeleriyle koordine etmek zordur.

Canlı örneklerle çalışırken, laboratuvarda septik tekniklerin uygulanması deneysel başarının temelidir; bu nedenle, bu prosedürlerin alışkanlık haline gelmesi için öğrenmeye zaman ayırın. Tezgah başında çalışırken, laboratuvar koordinatörüm Dr. Chris Reddy protokolleri uygulamalı olarak gösterecektir. Herhangi bir laboratuvar prosedürüne başlamadan önce ellerinizi her zaman antiseptik sabun ve ılık suyla iyice yıkayın. İlk olarak ellerinizi akan ılık suyla ıslatın.

Ardından sabunu uygulayın ve kuvvetlice, her yere yayılacak şekilde dağıtın. Başparmaklar, parmakların sırtı, ellerin arkası ve tırnak altları da dahil olmak üzere tüm yüzeylerde sürtünme oluşturarak ellerinizi ovalayın. Daha sonra, kalıntı sabunu temizlemek için ellerinizi iyice durulayın ve bir tutucudan alınan kağıt havlularla kurulayın.

Son olarak, temiz bir kağıt havlu ile musluğu kapatın ve laboratuvar tezgahındaki çalışma alanını boşaltın. Ardından, kutudan önceden nemlendirilmiş bir dezenfektan mendil çıkarın ve tüm alanı silin. Dezenfektanın bir ateşleyici ışık kullanarak buharlaşmasını sağlayın.

Bunsen beki. Ortada mavi koni oluşacak şekilde alevi ayarlayın. Prosedür için gerekli tüm malzemeleri laboratuvar tezgahının steril alanının yakınına yerleştirin.

Ayrıca, tüm malzemelerin uygun şekilde etiketlendiğinden emin olun. Plastik veya cam, tek kullanımlık veya yeniden kullanılabilir, tıpalı veya tıpasız olmak üzere birçok serolojik pipet seçeneği bulunmaktadır. Çeşitli boyutlar, pipetin aşırı doldurulmasını önleyen bir bariyer görevi gören tıpalarla kalibre edilmiştir.

Serolojik pipetlerin de iki farklı şekilde kalibre edildiğine dikkat edin. Üst kısmında çift halka bulunan TD pipetleri, uçtaki hacmin boşaltılmaması şeklinde kalibre edilmiştir. Burada gösterilmemekle birlikte, TC pipetleri tüm hacmi boşaltacak şekilde kalibre edildikleri için üflenerek boşaltılmalıdır; bireysel olarak paketlenmiş steril plastik bir serolojik pipet ile aseptik teknik kullanarak, tıkalı uçtan başlayarak kağıdı dikkatlice soymaya başlayın.

Kılıfın tamamını çıkarmayın. Bunun yerine, sadece mezür çizgilerinin üzerindeki pipet sapının uç kısmını koruyun ve serolojik pipetin üst ucuna balon pompa veya tabanca gibi bir pipet yardımcısı takın. Pipet yardımcısını bir elinizle tutarken, diğer elinizle plastik pipetin üzerindeki kağıt kılıfı çıkarın.

Metal kutularda saklanan cam serolojik pipetler için, kutunun üst kısmını gevşetin ve kapağı çıkarıp hem kapağın hem de kutunun açık uçlarını alevle sterilize edin. Ardından kapağı dezenfekte edilmiş tezgahın üzerine yan şekilde yerleştirin. Kutuyu yatay tutun ve bir veya iki pipetin ucu çıkana kadar sallayın.

Yaklaşık bir inç kadar dışarıda bırakın. Kanisteri yan yatırın ve diğer pipetlere dokunmadan bir pipeti çıkarın. Pipetin alt ucunun ellerle ve steril olmayan yüzeylerle temas etmemesini sağlayın.

Pipet yardımcısını takın. Ardından, bir cam pipetin alt üçte birlik kısmını Bunsen beki alevinde bir ila üç saniye boyunca mavi koni içinden geçirin. Şimdi steril besiyeri içeren şişenin kapağını çıkarın.

Pipet yardımcısını aynı elin baş, işaret ve orta parmaklarıyla yönetirken, şişeyi yüzük parmağı ve avuç içi arasında tutun; diğer elinizle şişeyi 45 derecelik bir açıyla tutun ve şişenin ağzını bunsen bek alevinden geçirin. Steril pipet ucunu besiyerine yerleştirin. Ardından, dereceli işaretlerle akışı kontrol ederek pipet yardımcısıyla aspirasyon yapın.

Hacmi kesin olarak okumak için pipete çekilen sıvı miktarını izleyin. Pipeti dikey tutun ve sıvı menisküsüne tam göz hizasında bakın. Şişenin ağzını bir kez daha bunsen beki alevinden geçirin.

Ardından kapağını kapatın. Besiyeri şişesini kenara alın. Sonra steril bir tüp alın ve aseptik olarak.

Kapağı daha önce açıklandığı şekilde çıkarın. Tüpün ağzını alevle yakarak steril bir alan oluşturun. Örnek akışını sıçramayacak şekilde kontrol ederek, pipetteki besiyerini tüpe aktarın.

Ağız kısmını alevden geçirin. Tekrar kapağı kapatın ve tüpü kenara koyun. Şimdi pipet pompasını çıkarın, plastik pipetleri belirlenmiş bir kesici-delici alet konteynerine atın ve cam pipetleri %10'luk çamaşır suyu çözeltisine daldırın.

Bir mikro pipet, belirli hacim aralıkları için farklı boyutlardaki uçlar aracılığıyla çok küçük hacimlerin hassas bir şekilde ölçülmesini ve dağıtılmasını sağlar. Önceden sterilize edilmiş tüpler ve plastik uçlar kullanın. Ayrıca, mikro pipetleri silmek için önceden nemlendirilmiş bir dezenfektan mendil kullanın. Not.

Volter, en küçük bölüntüde hassasiyeti yansıtacak şekilde, mikro pipetleyici türüne göre yorumlanması gereken üç sayı gösterir. Örneğin, P 20'nin 2.0 ile 20.0 mikrolitre arasındaki hacimler için kullanıldığını belirtelim. Siyah renkli üstteki sayı, mikrolitrenin onluk basamağı içindir.

İkinci siyah sayı, mikrolitre cinsinden hacmi belirtir. Kırmızı sayı mikrolitrenin onda birlerini işaret eder, dolayısıyla her bir bölme çizgisi 0,02 mikrolitrelik bir artışa eşittir. İlk olarak, dispenser hacmini sayısal göstergede belirtildiği şekilde ayarlamak için ayar düğmesini çevirin.

Mikropipetteki hacim ayarı düşürülürken, başparmak tekerleğini yavaşça döndürerek derece çizgisine getirin. Hacim ayarı artırılırken, tekerleği istenen derece çizgesini bir turun üçte biri kadar geçecek şekilde yukarı döndürün. Ardından, hedeflenen hacme ulaşmak için başparmak tekerleğini yavaşça aşağı döndürün.

Her zaman steril plastik tek kullanımlık uçlar kullanın. Bir ucu, mikro pipet ucuna sıkıca yerleştirin. Hava sızdırmaz bir mühürleme sağlamak için aşağıya doğru bastırın ve hafifçe döndürün.

Mikropipeti dikey konumda tutun. Mikropipetin üç konumu olduğunu unutmayın: Dinlenme, birinci durdurucu ve ikinci durdurucu.

Ayarlanan hacme eşit miktarda havayı tahliye etmek için piston üzerindeki basma düğmesini dinlenme konumundan birinci durağa kadar bastırın. Şimdi, basma düğmesini birinci durakta tutarak ucu sıvının içine daldırın. Sıvıyı ucun içine aspire etmek için basma düğmesini yavaşça bırakın.

Basma düğmesi dinlenme konumuna geldiğinde, sıvının uca çekilmesi için süre tanıyın. Ardından ucu sıvıdan çıkarın. Uca çekilen sıvının miktarını görsel olarak doğrulayın ve hava kabarcığı olmadığından emin olun.

Ucu, sıvının alındığı tüpün duvarına 10 ila 45 derecelik bir açıyla yerleştirin. Şimdi, piston üzerindeki basma düğmesine birinci durağa kadar yavaşça basın. Sıvıyı boşaltın.

Bir an bekledikten sonra, kalan sıvıyı dışarı atmak için itme düğmesine ikinci durdurucuya kadar basın. Pipet ucunu sıvıdan çıkarın ve ardından pistonu dinlenme konumuna geri bırakın. Son olarak, mikropipetteki çıkarma düğmesine basarak uçları belirlenmiş kesici-delici atık konteynerine atın.

Öncelikle bunzen bekini kapatın. Tüm malzemeleri ve reaktifleri kaldırdıktan sonra, LabWare'leri saklama yerlerine taşımadan önce dış yüzeylerini dezenfektan mendille silin. Ardından, kontamine cam malzemeleri ve tehlikeli atık maddeleri uygun atık kutularına yerleştirin.

Dezenfektanın buharlaşmasını sağlayarak tüm çalışma alanını bir kez daha silin. Son olarak, ellerinizi antiseptik sabun ve ılık suyla iyice yıkayın. Aseptik teknik uygulanmadığında, kültürler kontamine olabilir ve deney sürecini geciktirebilir.

Serolojik pipetler kullanarak sıvıların aseptik transferi, bu 25 milliliter e coli hazırlığı gibi saf bakteri kültürlerinin çoğaltılmasında temel bir öneme sahiptir. Ayrıca serolojik pipetler, sıvıların steril test tüplerine aseptik şekilde transferini kolaylaştırır. Bu örnek, besiyerinin tüplere nokta atışı transferi sırasında saf ve kontamine olmuş e coli kültürlerini karşılaştırmalı olarak göstermektedir.

Bazen hassas hacimler gereklidir. Bu durumda, besiyerinin aktarımının hatalı olduğu açıkça görülmektedir. Bu örnek, aktarılan tampon çözeltinin yanlış hacmini göstermektedir.

Öğrenci, 12.5 µL yerine 125 µL dağıtmıştır. Volter üzerindeki sayılar aynı şekilde ayarlanmış olsa da, işlem için yanlış mikro pipet seçilmiştir. Bu videoyu izledikten sonra, serolojik pipetler ve mikro pipetler kullanarak çözelti ve kültür transferi gibi rutin laboratuvar prosedürlerinde, steriliteyi bozmadan septik tekniğin nasıl uygulanacağı konusunda temel bir bilgiye sahip olmalısınız.

Amaç; cam malzemelerin, pipet uçlarının, kültür tüplerinin ve erlenlerin yakılması gibi önleyici prosedürlerin yanı sıra laboratuvar tezgahında steril alan sınırları içerisinde çalışmanın her deneyde alışkanlık haline gelmesidir. Deneyler gerçekleştirilirken hacimlerin kesin ve doğru şekilde ölçülmesi ve dağıtılması da büyük önem taşımaktadır. Bu hacim aktarım araçlarının nasıl doğru kullanılacağının öğrenilmesi, deneysel sonuçların güvenilirliğini artıracaktır.