Name: Aseptik Laboratuvar Teknikleri: Serolojik Pipetler ve Micropipettors ile Cilt Transferler (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-05-31T12:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 43 s
Description: Öğrenin aseptik laboratuvar tekniklerini serolojik pipetler ve mikropipetörler kullanarak hacim transferleri için. Bu yöntem, kontaminasyonu en aza indirerek mikrobiyoloji deneylerinde başarı sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Rakamlar için örnek kültürleri kurmak için resimler hazırlamak ve UCLA Kris Reddi için IROC Tasarımları Cori Sanders özel teşekkürler. Bu proje için finansman HHMI (HHMI Hibe No 52.006.944) tarafından sağlandı.

<ol><li>Barker, K. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBarker%2C+K+%22At+the+Bench%3A+A+Laboratory+Navigator%22">At the Bench: A Laboratory Navigator</a>. , Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor. New York. (1998).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Biosafety+in+Microbiological+And+Biomedical+Laboratories+%28BMBL%29%22">Biosafety in Microbiological And Biomedical Laboratories (BMBL)</a>. , 5th Ed, US Department of Health and Human Services (DHHS), Centers for Disease Control and Prevention (CDC) and National Institutes of Health (NIH), U.S. Government Printing Office. Washington DC. Available from:
		
	 <a target="_blank" href="http://www.cdc.gov/biosafety/publications/bmbl5/index.htm">http://www.cdc.gov/biosafety/publications/bmbl5/index.htm</a> (2009).</li>
<li>Bykowski, T., Stevenson, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aseptic+Technique%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Microbiology%22%5BJournal%5D)">Aseptic Technique.</a> Current Protocols in Microbiology. Appendix 4, Appendix 4D(2008).</li>
<li>Coté, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aseptic+Technique+for+Cell+Culture%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Aseptic Technique for Cell Culture.</a> Current Protocols in Cell Biology. Chapter 1, Unit 1.3(2001).</li>
<li>Grimes, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+basic+laboratory+manual+for+the+small-scale+production+and+testing+of+I-2+Newcastle+disease+vaccine%5BTitle%5D)+AND+%22RAP+Publication%22%5BJournal%5D)">A basic laboratory manual for the small-scale production and testing of I-2 Newcastle disease vaccine.</a> RAP Publication. AC802/E, 12-13 (2002).</li>
<li>Guzman, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pipetting%3A+A+Practical+Guide%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Biology+Teacher%22%5BJournal%5D)">Pipetting: A Practical Guide.</a> The American Biology Teacher. 63 (2), 128-131 (2001).</li>
<li>Jordan, T., et al. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aJordan%2C+T+%22RESEARCH%3A+National+Genomics+Research+Initiative+Phage+Resource+Laboratory+Manual%22">RESEARCH: National Genomics Research Initiative Phage Resource Laboratory Manual</a>. , Howard Hughes Medical Institute. (2008).</li>
<li>Sambrook, J., Russell, D. W. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSambrook%2C+J+%22Molecular+Cloning+-+A+Laboratory+Manual%22">Molecular Cloning - A Laboratory Manual</a>. , 3rd Ed, Cold Spring Harbor Laboratory Press. Cold Spring Harbor, New York. 978-087969576 (2001).</li>
<li>Seidman, L. A., Moore, C. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSeidman%2C+LA+%22Basic+Laboratory+Methods+for+Biotechnology%3A+Textbook+and+Laboratory+Reference%22">Basic Laboratory Methods for Biotechnology: Textbook and Laboratory Reference</a>. , Prentice Hall, Inc. Upper Saddle River, New Jersey. (2000).</li>
<li>Pipettes, Calibration & Repair Service - Pipette.com [Internet]. , Available from:
		
	 <a target="_blank" href="http://pipette.com/public/staticpages/guidetopipetting.aspx">http://pipette.com/public/staticpages/guidetopipetting.aspx</a> (2012).</li>
<li>On-Line Resources for Biology: Table of Contents [Internet]. , Available from:
		
	 <a target="_blank" href="http://abacus.bates.edu/~ganderso/biology/resources/index.html">http://abacus.bates.edu/~ganderso/biology/resources/index.html</a> (2012).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22PIPETMAN+P+User%27s+Guide%22">PIPETMAN P User's Guide</a>. , Gilson Inc. Available from:
		
	 <a target="_blank" href="http://www.gilson.com/Resources/LT801120_a_eng_030209%20BD.pdf">http://www.gilson.com/Resources/LT801120_a_eng_030209%20BD.pdf</a> (2012).</li>
<li>Sterile Technique - Laboratory Wiki [Internet]. , Available from:
		
	 <a target="_blank" href="http://lab.wikia.com/wiki/Sterile_Technique">http://lab.wikia.com/wiki/Sterile_Technique</a> (2012).</li>
<li>Air displacement pipette - Wikipedia, the free encyclopedia [Internet]. , Available from:
		
	 <a target="_blank" href="http://en.wikipedia.org/wiki/Air_displacement_pipette">http://en.wikipedia.org/wiki/Air_displacement_pipette</a> (2012).</li>
<li>Disinfectant - Wikipedia, the free encyclopedia [Internet]. , Available from:
		
	 <a target="_blank" href="http://en.wikipedia.org/wiki/Disinfectant">http://en.wikipedia.org/wiki/Disinfectant</a> (2012).</li>
</ol>

Ben ifşa hiçbir şey yok.

Aseptik teknikle laboratuvar istenmeyen mikroorganizmalar tarafından kontamine olmasını steril çözümleri ve kültürleri önlemek için yapılan rutin bir dizi ifade eder. Bu tür teknikler büyüyen hücreleri gerektiren deneyler için çok önemlidir. Tamamen steril bir iş ortamında elde edilemez olsa da, bu, laboratuvar yüzeylerin dezenfekte Bir Bunsen beki kullanarak steril bir alan yaratarak, hava kapağını açıp kültür ve medya maruz sınırlandırılması, bu şişeler, tüpler ve cam pipetler gibi malzemelerin sterilizasyon gibi prosedürleri, ve steril olmayan yüzeyleri steril aletlerin temastan kaçınarak bir deneyde çözümleri ve kültür kirlenmesi olasılığı azaltır. Amaç ikinci doğa haline aşağıdaki önlem prosedürleri için; bir laboratuarda çalışırken, bu eğitim ve uygulama ile birlikte geliyor. Gibi serolojik pipet ve mikrofon gibi aletler kullanılarak steril çözümleri ve kültürler ile Cilt transferleriropipettors bir laboratuvarda yapılan rutin teknikler birçok türleri vardır. Farklı deneysel uygulamalar farklı, henüz kesin ve doğru cilt aktarabilen araçlar için arayın. Micropipettors çözümleri sadece mikrolitre miktarda ihtiyaç moleküler biyoloji deneyleri için gerekli olan süre Serolojik pipet, mililitre birimleri kapsayan medya hazırlıklar gerektiren hücre kültürleri hazırlamak için mikrobiyoloji laboratuvarlarında kullanılmaktadır. Aseptik teknik bu aletle uygulanan zaman, kirlenme sıvı veya deneme türü ve miktarı ne olursa olsun ses aktarımı sırasında en aza indirilmiştir. Bu protokol ele olmasa da, sık kirlenmeyi önlemek için kullanılan bir başka yollarla bir laminar akım kapağı (Şekil 10) içinde çalışmaktır. Bu cihaz, doku kültürü ve BLS-2 veya daha yüksek olarak sınıflandırılan mikroorganizmalar ile yapılan deneyler için önemlidir. A laminar akım kaput bir HEPA (yüksek verimlilik içerençalışma permeating gelen odasından filtresiz hava önlerken kaputun içine akan hava hava kirleticileri kaldırır partikül hava) filtresi. Alevden ısı kaput işlevselliği için gerekli hava akımını bozar, çünkü not, bir Bunsen beki laminar flow kaput içinde kullanılamaz. Bu deneyler sırasında aseptik teknik kalitesini kontrol etmek için genellikle yararlıdır. Çözümler teyit etmek ve kültür ortamı, deneysel manipülasyonlar sırasında kontamine alamadım, her zaman negatif kontrol hazırlamak. Örneğin, bakteriyel kültür büyümesi için çorbasının tüpler hazırlanması durumunda, tek tüp, sadece steril ortam terk aşılamak değildir. Böyle istemeden tüp içine istenmeyen hücrelerin büyüme bulanıklık gibi kirlilik belirtileri daha sonra kontrol aşılanmamış kontrol tüpü inoküle tüpü boyunca orta inkübe edin. Kontrol tüpü kirli ise, deney tüpübüyük olasılıkla da kontamine ve deneyi tekrarladı gerekecektir. Bu önlemler her deneyde ile yapılmalıdır.

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> LB Broth </td><td> Difco </td><td> 244620 </td><td> Referans 6 da mevcut reçete </td></tr><tr><td colspan="4"> TE Tamponu: </td></tr><tr><td> EDTA disodyum tuzu dihidrat </td><td> Sigma </td><td> E5134 </td><td></td></tr><tr><td> Trizma-HCl </td><td> Sigma </td><td> T-3253 </td><td></td></tr><tr><td> CiDecon </td><td> Temizlenme Laboratories, Inc </td><td> 8504 </td><td> Dezenfektan </td></tr><tr><td> Etanol </td><td> Fisher Scientific </td><td> A406 </td><td> Dezenfektan olarak kullanımı için, damıtılmış su ile% 70 (v / v) hazırlanması </td></tr></tbody></table>

aseptik laboratuvar teknikleri: serolojik pipetler ve micropipettors ile cilt transferler

Aseptic Laboratory Techniques: Volume Transfers with Serological Pipettes and Micropipettors

Mikroorganizmalar her yerde vardır - hava, toprak ve insan vücudunda yanı sıra laboratuar tezgahları ve bilgisayar klavyeleri gibi cansız yüzeyler üzerinde. Mikrop ubiquity bir laboratuvar potansiyel kirletici maddelerin bir bol kaynağı oluşturur. Deneysel başarı sağlamak için, ekipman ve iş yüzeyler bulaşanların sayısı en aza indirilmelidir. Mikrobiyoloji birçok deneyler arasında yaygın bakteri hücreleri veya viral partikülleri içeren kültürlerin ölçüm ve transferi ile ilgili teknikleri vardır. Steril bir çalışma alanı hazırlarken steril ortam gerektirir (1), (2) hassas ayar ve doğru sıvıların aseptik transferi için araçlar okuma, ve (3) düzgün, kültür şişeleri, şişe aletleri manipüle steril olmayan yüzeylere temas veya kontamine olmadan bunu yapmak ve steril bir alan içinde tüpler. Bu işlemler Öğrenme eğitim ve uygulama gerektirir. İlk başta, eylemler, yavaş, bilinçli ve aseptik t olma hedefi ile kontrol edilmelidirtezgah üzerinde çalışırken ikinci doğa haline Tekniğine Dayalı Görüşme. Burada bir Bunsen beki tarafından oluşturulan steril bir alan içinde serolojik pipet ve micropipettors kullanarak hacimleri ölçmek için adımları sunuyoruz. Hacimler mikrolitre (ul) ile kullanılan alet bağlı mililitre (ml) arasında değişir. Sık transfer Sıvılar steril suyu veya kimyasal çözümler yanı sıra bakteri kültürleri ve faj stokları bulunmaktadır. Bu işlemleri takiben, öğrenciler gerekir: <ul><li> Bunsen beki alevi tarafından oluşturulan steril alan içinde çalışır. </li><li> Enstrüman sterilite ödün vermeden serolojik pipet kullanın. </li><li> Serolojik pipet ile sıvı aspire, tam pipet üzerinde mezuniyet işaretleri sıvı oluşan menisküs hizalayarak kalibre hacimleri okuma. </li><li> Kültür şişeler, mataralar, tüpler ve sıvı aktarımı sırasında steril kendi kapakları tutun. </li><li> Plastik karşı cam serolojik pip için farklı uygulamalar tespitmak. </li><li> Micropipettors Devlet doğruluğu sınırlamalar. </li><li> Hassas ve doğru micropipettors birimler ayarlayın. </li><li> Doğru düzgün hacimleri aspire ve aktarmak için bir micropipettor üzerindeki birinci ve ikinci durağı nasıl kullanacağımı biliyorum. </li></ul>

Bir laboratuarda çalışırken, bulaşma kaynakları en aza indirmek için şarttır. Aseptik teknik Steril olmayan yüzeyler ile temas kaçınarak kültürler ve reaktifler transferi izin prosedürleri ifade eder. Serolojik pipet ile micropipettors Deneylerde kullanılan çözeltilerin sterilite bozmadan hassas cilt ölçmek için kullanılır.

Aseptik Laboratuvar Teknikleri: Serolojik Pipetler ve Micropipettors ile Cilt Transferler

Mikroorganizmalar; havada, toprakta ve insan vücudunun yanı sıra laboratuvar tezgahları ve bilgisayar klavyeleri gibi cansız yüzeylerde olmak üzere her yerdedir. ...

Bu demonstrasyon, laboratuvar tezgahında serolojik pipetler ve mikropipetler ile yapılan hacim transferlerinde aseptik laboratuvar tekniklerini sunmaktadır. Bek alevi tarafından oluşturulan steril alan içerisinde çalışın. Uygulama için uygun hacim transfer aracını seçin.Ardından, kültür reaktiflerinin ve malzemelerinin sterilitesini koruyarak, sıvıları hassasiyetle aspire ederken bunları sterilitelerini bozmadan uygun şekilde kullanın. Bu prosedürler, kontaminasyon kaynaklarını minimize etmek ve temel deneyler için hassasiyet sağlamak açısından esastır. Başlangıçta, transfer edilen sıvıların sterilitesini bozmadan aletleri hassas bir şekilde ayarlamak, doğru okumak ve hareketleri aletler ile laboratuvar malzemeleriyle koordine etmek zordur.Canlı örneklerle çalışırken, laboratuvarda septik tekniklerin uygulanması deneysel başarının temelidir; bu nedenle, bu prosedürlerin alışkanlık haline gelmesi için öğrenmeye zaman ayırın. Tezgah başında çalışırken, laboratuvar koordinatörüm Dr. Chris Reddy protokolleri uygulamalı olarak gösterecektir. Herhangi bir laboratuvar prosedürüne başlamadan önce ellerinizi her zaman antiseptik sabun ve ılık suyla iyice yıkayın. İlk olarak ellerinizi akan ılık suyla ıslatın.Ardından sabunu uygulayın ve kuvvetlice, her yere yayılacak şekilde dağıtın. Başparmaklar, parmakların sırtı, ellerin arkası ve tırnak altları da dahil olmak üzere tüm yüzeylerde sürtünme oluşturarak ellerinizi ovalayın. Daha sonra, kalıntı sabunu temizlemek için ellerinizi iyice durulayın ve bir tutucudan alınan kağıt havlularla kurulayın.Son olarak, temiz bir kağıt havlu ile musluğu kapatın ve laboratuvar tezgahındaki çalışma alanını boşaltın. Ardından, kutudan önceden nemlendirilmiş bir dezenfektan mendil çıkarın ve tüm alanı silin. Dezenfektanın bir ateşleyici ışık kullanarak buharlaşmasını sağlayın.Bunsen beki. Ortada mavi koni oluşacak şekilde alevi ayarlayın. Prosedür için gerekli tüm malzemeleri laboratuvar tezgahının steril alanının yakınına yerleştirin.Ayrıca, tüm malzemelerin uygun şekilde etiketlendiğinden emin olun. Plastik veya cam, tek kullanımlık veya yeniden kullanılabilir, tıpalı veya tıpasız olmak üzere birçok serolojik pipet seçeneği bulunmaktadır. Çeşitli boyutlar, pipetin aşırı doldurulmasını önleyen bir bariyer görevi gören tıpalarla kalibre edilmiştir.Serolojik pipetlerin de iki farklı şekilde kalibre edildiğine dikkat edin. Üst kısmında çift halka bulunan TD pipetleri, uçtaki hacmin boşaltılmaması şeklinde kalibre edilmiştir. Burada gösterilmemekle birlikte, TC pipetleri tüm hacmi boşaltacak şekilde kalibre edildikleri için üflenerek boşaltılmalıdır; bireysel olarak paketlenmiş steril plastik bir serolojik pipet ile aseptik teknik kullanarak, tıkalı uçtan başlayarak kağıdı dikkatlice soymaya başlayın.Kılıfın tamamını çıkarmayın. Bunun yerine, sadece mezür çizgilerinin üzerindeki pipet sapının uç kısmını koruyun ve serolojik pipetin üst ucuna balon pompa veya tabanca gibi bir pipet yardımcısı takın. Pipet yardımcısını bir elinizle tutarken, diğer elinizle plastik pipetin üzerindeki kağıt kılıfı çıkarın.Metal kutularda saklanan cam serolojik pipetler için, kutunun üst kısmını gevşetin ve kapağı çıkarıp hem kapağın hem de kutunun açık uçlarını alevle sterilize edin. Ardından kapağı dezenfekte edilmiş tezgahın üzerine yan şekilde yerleştirin. Kutuyu yatay tutun ve bir veya iki pipetin ucu çıkana kadar sallayın.Yaklaşık bir inç kadar dışarıda bırakın. Kanisteri yan yatırın ve diğer pipetlere dokunmadan bir pipeti çıkarın. Pipetin alt ucunun ellerle ve steril olmayan yüzeylerle temas etmemesini sağlayın.Pipet yardımcısını takın. Ardından, bir cam pipetin alt üçte birlik kısmını Bunsen beki alevinde bir ila üç saniye boyunca mavi koni içinden geçirin. Şimdi steril besiyeri içeren şişenin kapağını çıkarın.Pipet yardımcısını aynı elin baş, işaret ve orta parmaklarıyla yönetirken, şişeyi yüzük parmağı ve avuç içi arasında tutun; diğer elinizle şişeyi 45 derecelik bir açıyla tutun ve şişenin ağzını bunsen bek alevinden geçirin. Steril pipet ucunu besiyerine yerleştirin. Ardından, dereceli işaretlerle akışı kontrol ederek pipet yardımcısıyla aspirasyon yapın.Hacmi kesin olarak okumak için pipete çekilen sıvı miktarını izleyin. Pipeti dikey tutun ve sıvı menisküsüne tam göz hizasında bakın. Şişenin ağzını bir kez daha bunsen beki alevinden geçirin.Ardından kapağını kapatın. Besiyeri şişesini kenara alın. Sonra steril bir tüp alın ve aseptik olarak.Kapağı daha önce açıklandığı şekilde çıkarın. Tüpün ağzını alevle yakarak steril bir alan oluşturun. Örnek akışını sıçramayacak şekilde kontrol ederek, pipetteki besiyerini tüpe aktarın.Ağız kısmını alevden geçirin. Tekrar kapağı kapatın ve tüpü kenara koyun. Şimdi pipet pompasını çıkarın, plastik pipetleri belirlenmiş bir kesici-delici alet konteynerine atın ve cam pipetleri %10'luk çamaşır suyu çözeltisine daldırın.Bir mikro pipet, belirli hacim aralıkları için farklı boyutlardaki uçlar aracılığıyla çok küçük hacimlerin hassas bir şekilde ölçülmesini ve dağıtılmasını sağlar. Önceden sterilize edilmiş tüpler ve plastik uçlar kullanın. Ayrıca, mikro pipetleri silmek için önceden nemlendirilmiş bir dezenfektan mendil kullanın. Not.Volter, en küçük bölüntüde hassasiyeti yansıtacak şekilde, mikro pipetleyici türüne göre yorumlanması gereken üç sayı gösterir. Örneğin, P 20'nin 2.0 ile 20.0 mikrolitre arasındaki hacimler için kullanıldığını belirtelim. Siyah renkli üstteki sayı, mikrolitrenin onluk basamağı içindir.İkinci siyah sayı, mikrolitre cinsinden hacmi belirtir. Kırmızı sayı mikrolitrenin onda birlerini işaret eder, dolayısıyla her bir bölme çizgisi 0,02 mikrolitrelik bir artışa eşittir. İlk olarak, dispenser hacmini sayısal göstergede belirtildiği şekilde ayarlamak için ayar düğmesini çevirin.Mikropipetteki hacim ayarı düşürülürken, başparmak tekerleğini yavaşça döndürerek derece çizgisine getirin. Hacim ayarı artırılırken, tekerleği istenen derece çizgesini bir turun üçte biri kadar geçecek şekilde yukarı döndürün. Ardından, hedeflenen hacme ulaşmak için başparmak tekerleğini yavaşça aşağı döndürün.Her zaman steril plastik tek kullanımlık uçlar kullanın. Bir ucu, mikro pipet ucuna sıkıca yerleştirin. Hava sızdırmaz bir mühürleme sağlamak için aşağıya doğru bastırın ve hafifçe döndürün.Mikropipeti dikey konumda tutun. Mikropipetin üç konumu olduğunu unutmayın: Dinlenme, birinci durdurucu ve ikinci durdurucu.Ayarlanan hacme eşit miktarda havayı tahliye etmek için piston üzerindeki basma düğmesini dinlenme konumundan birinci durağa kadar bastırın. Şimdi, basma düğmesini birinci durakta tutarak ucu sıvının içine daldırın. Sıvıyı ucun içine aspire etmek için basma düğmesini yavaşça bırakın.Basma düğmesi dinlenme konumuna geldiğinde, sıvının uca çekilmesi için süre tanıyın. Ardından ucu sıvıdan çıkarın. Uca çekilen sıvının miktarını görsel olarak doğrulayın ve hava kabarcığı olmadığından emin olun.Ucu, sıvının alındığı tüpün duvarına 10 ila 45 derecelik bir açıyla yerleştirin. Şimdi, piston üzerindeki basma düğmesine birinci durağa kadar yavaşça basın. Sıvıyı boşaltın.Bir an bekledikten sonra, kalan sıvıyı dışarı atmak için itme düğmesine ikinci durdurucuya kadar basın. Pipet ucunu sıvıdan çıkarın ve ardından pistonu dinlenme konumuna geri bırakın. Son olarak, mikropipetteki çıkarma düğmesine basarak uçları belirlenmiş kesici-delici atık konteynerine atın.Öncelikle bunzen bekini kapatın. Tüm malzemeleri ve reaktifleri kaldırdıktan sonra, LabWare'leri saklama yerlerine taşımadan önce dış yüzeylerini dezenfektan mendille silin. Ardından, kontamine cam malzemeleri ve tehlikeli atık maddeleri uygun atık kutularına yerleştirin.Dezenfektanın buharlaşmasını sağlayarak tüm çalışma alanını bir kez daha silin. Son olarak, ellerinizi antiseptik sabun ve ılık suyla iyice yıkayın. Aseptik teknik uygulanmadığında, kültürler kontamine olabilir ve deney sürecini geciktirebilir.Serolojik pipetler kullanarak sıvıların aseptik transferi, bu 25 milliliter e coli hazırlığı gibi saf bakteri kültürlerinin çoğaltılmasında temel bir öneme sahiptir. Ayrıca serolojik pipetler, sıvıların steril test tüplerine aseptik şekilde transferini kolaylaştırır. Bu örnek, besiyerinin tüplere nokta atışı transferi sırasında saf ve kontamine olmuş e coli kültürlerini karşılaştırmalı olarak göstermektedir.Bazen hassas hacimler gereklidir. Bu durumda, besiyerinin aktarımının hatalı olduğu açıkça görülmektedir. Bu örnek, aktarılan tampon çözeltinin yanlış hacmini göstermektedir.Öğrenci, 12.5 µL yerine 125 µL dağıtmıştır. Volter üzerindeki sayılar aynı şekilde ayarlanmış olsa da, işlem için yanlış mikro pipet seçilmiştir. Bu videoyu izledikten sonra, serolojik pipetler ve mikro pipetler kullanarak çözelti ve kültür transferi gibi rutin laboratuvar prosedürlerinde, steriliteyi bozmadan septik tekniğin nasıl uygulanacağı konusunda temel bir bilgiye sahip olmalısınız.Amaç; cam malzemelerin, pipet uçlarının, kültür tüplerinin ve erlenlerin yakılması gibi önleyici prosedürlerin yanı sıra laboratuvar tezgahında steril alan sınırları içerisinde çalışmanın her deneyde alışkanlık haline gelmesidir. Deneyler gerçekleştirilirken hacimlerin kesin ve doğru şekilde ölçülmesi ve dağıtılması da büyük önem taşımaktadır. Bu hacim aktarım araçlarının nasıl doğru kullanılacağının öğrenilmesi, deneysel sonuçların güvenilirliğini artıracaktır.

aseptic-laboratory-techniques-volume-transfers-with-serological

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Kültür mikroorganizmalar için kullanılan medya ve reaktifler ile çalışırken, aseptik tekniği kontaminasyonu minimize edilmiştir sağlamak için uygulanan olmalıdır. Kaplama yöntemleri çeşitli rutin bir şekilde, izole yaymak veya numaralandırma bakteri ve faj, deney malzemelerinin steriliteyi korumaya işlemleri dahil, her biri için kullanılır.

Aseptik Laboratuvar Teknikleri: Kaplama Yöntemleri

Listeria monocytogenes farelerde bağışıklık yanıtlarını ve genetik yatkınlık bakterilerin hücre içi eğitim için bir model organizmadır. Bu yöntem, bakteri yükü ölçmek ve Listeria enfeksiyonu nedeniyle bağışıklık hücreleri değişiklikleri belirlemek için FACS analiz için farelerin karaciğer ve dalak tek hücre süspansiyonları oluşturmak için bir olanak sağlar.

Ile Enfekte Fare Bakteriyel Yük ve Bağışıklık Yanıtları Ölçüm Listeria monocytogenes</em

Protein agregatlarının veya proteopatik tohumların hücreden hücreye transferi, nörodejeneratif hastalıklarda patolojinin ilerlemesinin altında yatıyor olabilir. Burada, rekombinant veya biyolojik numunelerden tohumlama aktivitesinin spesifik ve hassas bir şekilde tespit edilmesini sağlayan yeni bir FRET akış sitometrisi testi açıklanmaktadır.

FRET Akım Sitometrisi ile Proteopathic Tohumculuk Faaliyet duyarlı Algılama

Bu protokol, Listeria monocytogenes EGD suşu ile (L. monocytogenes) C57BL / 6J fareleri aşılamak için ve doğal öldürücü (NK) hücreleri, doğal katil T (NKT) hücreler tarafından interferon-y (IFN-γ) tepkilerini ölçmek açıklamaktadır ve adaptif T sonrası enfeksiyon lenfosit. Bu protokol ayrıca patojen modifiye LD 50 dozu ile enfeksiyondan sonra farelerde hayatta kalma çalışmaları yürütmek açıklamaktadır.

Deneysel Enfeksiyon<em&gt; Listeria monocytogenes</em&gt; Ana İnterferon-γ Yanıtları incelenmesi için Bir Model Olarak

Bu iletişim kuralının amacı lenfatik endotel hücre popülasyonlarının içinde açıklanan işaretçileri kullanarak karaciğer belirlemektir. Biz collagenase IV ve DNaz ve yumuşak dokusu, lenfatik endotel hücreleri farklı nüfusu tanımlamak için akış sitometresi ile birlikte kıyma kullanmaktadır.

Lenfatik endotel hücreleri akış sitometrik çözümlenmesi için fare karaciğer sindirim

Bakteriyel nüfus kapsül üretim temel alarak ayırmak için kesintili yoğunluk gradyanlar kullanımını göstermektedir. Bu yöntem kapsül kültürler arası karşılaştırmak, belirli bir kapsül fenotip mutantlarla yalıtmak veya kapsül düzenleyiciler belirlemek için kullanılır. Burada açıklanan en iyi duruma getirme ve tahlil çalıştırılmasını olduğunu.

Kapsül tutarı kesintili yoğunluk Gradient kullanarak bakterilerin ayıran

İn vitro kültür, canlı bakterilerin varlığı için doğrudan bir tespit yöntemidir. Bu protokol, Borrelia burgdorferi sensu lato kompleksi, tekrarlayan ateş Borrelia türleri ve Borrelia miyamotoi dahil olmak üzere çeşitli Borrelia spiroketlerinin kültürü için yöntemleri açıklamaktadır. Bu türler titiz ve yavaş büyür, ancak kültürlenebilir.

Borrelia burgdorferi Sensu Lato Kompleksi ve Tekrarlayan Ateş Borrelia'dan Spiroketlerin Yetiştirme Yöntemleri

Mevcut protokol, Zika virüsünün (ZIKV) Vero Afrika yeşil maymun böbrek hücrelerinde yayılımını ve 24 oyuklu ve 96 oyuklu (yüksek verimli) formatlarda hücre bazlı kolorimetrik immüno-tespit yöntemleri kullanılarak ZIKV'nin miktar tayinini açıklamaktadır.

Virüs Yayılımı ve Hücre Bazlı Kolorimetrik Miktar Tayini

Doğa ve Laboratuvar Mikrobiyal Toplulukları - Röportaj

Bu video elektrofizyoloji için yama pipetler ve keskin elektrotlar yapmak için programlanabilir çektirmenin nasıl kullanılacağını gösterir. Aynı prosedürü enjeksiyon iğneleri de dahil olmak üzere, çeşitli cam aletleri yapmak için kullanılan olabilir.

Programlanabilir Çektirme Patch-pipetler ve Sharp Elektrotlar

Öğrenin aseptik laboratuvar tekniklerini serolojik pipetler ve mikropipetörler kullanarak hacim transferleri için. Bu yöntem, kontaminasyonu en aza indirerek mikrobiyoloji deneylerinde başarı sağlar.

Aseptik Laboratuvar Teknikleri: Serolojik Pipetler ve Micropipettors ile Cilt Transferler

Daha fazla video keşfet