Orta Serebral Arter Tıkanıklığı Fare Modeli
February 13th, 2011
Biz video intraluminal monofilament kullanarak yetişkin farelerde orta serebral arter oklüzyonu üretmek için bir yöntem ortaya koymaktadır. Ayrıca beyin enfarktüsü ölçüde 2,3,5-triphenyltetrazolium klorür (TTC) ile boyanarak tarafından nasıl değerlendirileceğini gösterir.
Merhaba, benim adım Terrence Jam. Benim adım Hai Joe. Bugün size orta al arter tıkanıklığının bir fare modelini nasıl gerçekleştireceğinizi göstereceğiz.
Öyleyse başlayalım. Bu deney sütürün hazırlanması ile başlar. Sütürü 20 milimetrelik parçalar halinde keserek başlayın.
Daha sonra dikişi bir koterizatöre doğru getirerek ucu yuvarlayın. Daha sonra dikişin ucunu ölçün. Artık sırtına takılan maske ile ameliyata başlamaya hazırız.
Orta hat boyunca bir kesi yapın. ECA'yı ortaya çıkarmak için forseps kullanın. ECA boyunca uzanan eksternal karotis arter birçok daldır.
Bu dallardan biri de superior tiroid arteri olan STA'dır. STA'nın bipolar forseps ile pıhtılaştırılması gerekir. Daha sonra ECA'nın daha iyi izole edilmesini sağlamak için STA'nın kesilmesi gerekir.
Daha sonra, ECA pıhtılaştırılır ve CCA'dan mümkün olduğunca uzak bir boyuttadır. Bu noktada, daha iyi erişim için ECA'yı izole etmek isteyebilirsiniz. Daha sonra ECAA'nın etrafına birkaç milimetre aralıklarla iki dikişi gevşek bir şekilde bağlayın.
CCA'nın dallanmasındaki kelepçeyi ECA ve ICA'ya uygulayın. Ardından ECA güdükünün ucunu klipslemeye devam edin. Ardından, ECA'yı ICA ile hizalanacak şekilde yeniden konumlandırın.
Bu, sütürün ECA'dan ICA'ya sürekli girişine sahip olmasını sağlar. Yerleştirmeden önce toplam sütür uzunluğunu ölçün. Sütürü, ECA güdüğünü kırparak yapılan açıklığa yerleştirin.
Dikiş distal düğümü geçerken, düğümü sıkarak sabitleyin. Ardından, kelepçeyi çıkarın ve ipliği ECA'ya daha fazla yerleştirin. Dikiş proksimal düğümü geçerken, düğümü sıkarak sabitleyin.
Her iki düğümü de sabitledikten sonra, dokuz ila 10 milimetre dikiş atılana kadar dikişi arter boyunca dikkatlice yerleştirin. Bifurkasyon noktası, bu, toplam sütür uzunluğundan bifurkasyon noktasına kadar olan sütürün uzunluğunun çıkarılmasıyla yapılabilir. Sütür MCA'nın orijinine ulaştığında.
MCA tıkalıdır. 24 saat sonra, kitleler fedakarlık yapar ve beyin izole edilir. TTC boyama için, izole edilen beyin bir kalıba yerleştirilir ve bir tıraş bıçağı ile dilimlenir.
Daha sonra beyin, oda sıcaklığında 20 dakika boyunca% 2 TTC'ye yerleştirilir. Son olarak, beyin sabittir, bir gecede ve nötrdür. Tamponlu formin.
Sütür hazırlama hassas bir işlemdir. İşte bazı yararlı ipuçları. Sütürü ve koterizatörü bu şekilde konumlandırın.
Daha sonra koterizatörü sabit tutarken dikişi yavaşça yaklaştırın. Ardından, doğru boyutta olduğundan emin olmak için dikişi ölçün. Bu deneyde kullandığımız sütürün boyutu 0.21 ila 0.22 Milimetre civarındadır.
Ameliyata başlamak için maskeyi sırtına yerleştirin ve %30 oksijen ve %70 nitrojen ile anestezi uygulayın. Orta hat boyunca bir kesi yapın ve ardından bölgeye erişimi açmak için ekartörler uygulayın. Böyle görünmeli.
Dokuyu forseps ile dikkatlice ayırın. Daha sonra ECA'yı izole etme sürecinde ECA'yı forseps ile açığa çıkarın ve izole edin, STA'nın pıhtılaştırılması ve kesilmesi gerekir. Bu, daha uzun bir ECA Parçasının izole edilmesine izin verir.
Daha sonra, ECA'nın bipolar forseps yardımıyla pıhtılaştırılması gerekir Pıhtılaşmadan sonra ECA'nın kesilmesi gerekir. Ardından, ECA'yı izole edin ve ECAA'nın etrafına birkaç milimetre aralıklarla iki sütür gevşek bir şekilde bağlayın. Sonuç şöyle görünmelidir.
Şimdi CCA'nın ICA ve ECA'ya çatallanmasındaki kelepçeyi uygulayın. İstiridye'nin ECA'ya kan akışını tamamen engellediğinden emin olun. Ardından ECA güdükünün ucunu kırpın.
ECA üzerinde bir açıklık yapıldıktan sonra yerleştirmeden önce sütürü ölçün. Dikişi ve açıklığı distal düğümü geçecek şekilde yerleştirin. Dikiş distal düğüm geçtikten sonra düğümü sıkın.
Ardından, kelepçeyi çıkarın. Distal düğümün sağlam olduğunu doğruladıktan sonra, sütürü proksimal düğümü ECA Geçmişi boyunca daha fazla yerleştirin. Sonra, proksimal düğümü sıkın.
Şimdi sütürü ECA boyunca dikkatlice ICA'ya yerleştirin. Sütür bifurkasyon noktasını geçene kadar dokuz ila 10 milimetre olana kadar Sütürü ICA boyunca yerleştirmeye devam edin. Bu, toplam sütür uzunluğundan çatallanma noktasına kadar olan sütür uzunluğunun çıkarılmasıyla yapılabilir.
Daha sonra, sütürü çevredeki dokuya zarar vermeyecek şekilde kesin. Ardından kesiği dikin ve Farenin iyileşmesine izin verin. Ameliyattan 24 saat sonra TTC boyaması için hazırlanın.
Servikal çıkık olan fareyi feda ederek başlayın. Sonra beyni kafatasından izole edin ve bir kalıba yerleştirin. Daha sonra jiletle dilimleyin, beyni oda sıcaklığında 20 dakika boyunca %2 TTC'de boyayın.
Daha sonra gece boyunca sabitleyin ve melin için %10 nötr tamponlayın. İşte bu kadar. İzlediğiniz için teşekkürler ve deneylerinizde iyi şanslar.
Genel Bakış
Bu video, yetişkin farelerde intraluminal monofilament kullanarak orta serebral arter oklüzyonu (MCAO) üretme yöntemini gösterir. Ayrıca, serebral enfarktüs derecesini 2,3,5-trifeniltetrazolyum klorür (TTC) boyaması aracılığıyla nasıl değerlendireceğinizi de gösterir.
Çalışmanın Temel Bileşenleri
Bilim Alanı
- Nörobilim
- Deneysel Cerrahi
- İnme Modelleri
Arka Plan
- Orta serebral arter oklüzyonu, inmeyi incelemek için kullanılan yaygın bir modeldir.
- TTC boyaması, beyin enfarktüsünü değerlendirmek için kullanılan bir yöntemdir.
- MCAO tekniklerini anlamak nörobilimciler için çok önemlidir.
- Bu yöntem, inmede terapötik müdahalelerin değerlendirilmesini sağlar.
Çalışmanın Amacı
- Fareleri kullanarak MCAO için cerrahi tekniği göstermek.
- Serebral enfarktüsü değerlendirmek için bir protokol sağlamak.
- İnme araştırmalarında tekrarlanabilirliği artırmak.
Kullanılan Yöntemler
- Oklüzyon için sütür hazırlanması.
- Eksternel karotid arterin (ECA) cerrahi izole edilmesi.
- Orta serebral arteri (MCA) tıkamak için sütür yerleştirilmesi.
- Ameliyat sonrası enfarktüsün TTC boyaması kullanılarak değerlendirilmesi.
Ana Sonuçlar
- Teknik, yetişkin farelerde MCA'yı başarıyla tıkadı.
- TTC boyaması, serebral enfarktüs bölgelerini etkili bir şekilde vurguladı.
- Protokol, inme üzerine yapılacak diğer çalışmalar için tekrarlanabilir.
- Ayrıntılı adımlar, prosedürü gerçekleştiren araştırmacılar için netliği sağlar.
Sonuçlar
- MCAO modeli, inme araştırmaları için değerli bir araçtır.
- Doğru sonuçlar için uygun teknik ve değerlendirme yöntemleri esastır.
- Bu video, araştırmacılar için kapsamlı bir rehber olarak hizmet vermektedir.
Sıkça Sorulan Sorular
Executive Industry Relevance
The mouse model of middle cerebral artery occlusion (MCAO) provides a robust, reproducible platform for evaluating ischemic stroke mechanisms and potential therapeutic interventions in preclinical research. This model enables quantitative assessment of infarct size and supports translational continuity from early discovery through preclinical validation. Its widespread adoption in neuroscience R&D reflects its value for mechanistic de-risking and predictive confidence in cerebrovascular target validation.
Strategic Applications in Biopharma R&D
Early Discovery & Target Validation
- Enables interrogation of cerebrovascular injury pathways relevant to ischemic stroke.
- Supports functional validation of neuroprotective targets in a disease-relevant system.
- Facilitates mechanistic de-risking by modeling both permanent and transient ischemic events.
- Provides quantitative endpoints for hypothesis-driven target triage.
Screening & Assay Development
- Establishes a validated in vivo system for evaluating candidate compounds' efficacy in reducing infarct size.
- Standardizes assessment through TTC staining, enabling reproducible and quantitative readouts.
- Prepares a scalable workflow for screening neuroprotective agents in a controlled ischemic context.
- Enables reliable comparison of intervention effects across experimental cohorts.
Translational & Preclinical Research
- Aligns with human stroke pathology by targeting the MCA territory, enhancing translational relevance.
- Supports biomarker discovery and validation through quantifiable infarct measurements.
- Facilitates risk-adjusted advancement of neuroprotective strategies into later-stage studies.
- Provides continuity from mechanistic discovery to preclinical efficacy evaluation.
Pipeline & Workflow Integration
This MCAO model bridges early discovery, lead identification, and preclinical validation for cerebrovascular targets and interventions.
- Discovery Biology: Enables hypothesis testing and pathway clarification in ischemic stroke models.
- Screening: Delivers reproducible, quantitative infarct size measurements for compound evaluation.
- Analytics: Provides standardized TTC staining outputs for cross-condition statistical analysis.
- Translational Research: Maintains disease relevance and supports biomarker alignment for preclinical studies.
- Enterprise Reuse: Functions as a reusable platform for diverse neurovascular research and therapeutic screening.
Operational & Enterprise Impact
- Scientific Value: Increases predictive confidence and reduces mechanistic ambiguity in stroke research.
- Operational Value: Promotes standardization, reproducibility, and scalability in preclinical workflows.
- Strategic Value: Informs go/no-go decisions and enhances capital efficiency by providing robust efficacy data.
- Portfolio Impact: Supports risk-adjusted prioritization and advancement of neuroprotective candidates.
Implementation Considerations
- Requires surgical expertise in vascular occlusion and animal handling.
- Needs access to precise instrumentation for suture preparation and brain slicing.
- Demands cross-team standardization of TTC staining and infarct quantification protocols.
- Adaptable to both permanent and transient occlusion models for broader research utility.
- Potential limitations include variability in infarct size and technical complexity of the procedure.
