Name: Klinik öncesi Model İskemik Kalp Yetmezliği Gen Transferi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-05-15T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 35 s
Description: Öğrenin, domuz modelinde iskemik kalp yetmezliği için gen transferi yöntemini. Viral vektörlerle kalp kasına gen teslimi yaparak gen tedavisi uygulamalarını değerlendirin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma NIH R01 HL093183 HL088434, HL071763, HL080498, HL083156 ve P20HL100396 (RJH) tarafından, Caerus ağ (RJH) yoluyla Leducq Vakfı tarafından desteklenmektedir. DL Alman Araştırma Vakfı tarafından desteklenmiştir. Lauren Leonardson Biz bu projeye teknik destek için teşekkür etmek istiyorum.

1. Miyokard infarktüsü oluşturma <ol><li> Hayvan Biyoteknoloji Sanayi (Doylestown, PA) Kadın Yorkshire domuz (20kg) Telazol (tiletamine / zolazepam) (8.0 mg / kg) ve Buprenorfin (0.6 mg) kullanarak pre-ilaçlı. </li><li> Hayvanlar% 100 oksijen ile entübe ve sonra havalandırılan. Genel anestezi işlem boyunca Propofol (5-8mg/kg/hr) ile korunur. </li><li> Femur site povidon iyot,% 70 izopropil alkol ile hazırlanır. Bir perkütan ponksiyon arter erişim ve kılıf yerleşim için sağlar. Kılıf ekleme sonra, 3000-5000 IU heparin IV 250-300 saniye aktive edilmiş pıhtılaşma zamanında korumak için uygulanır. </li><li> Amiodaron (75 mg) bolus doz intramüsküler olarak uygulanır. Amiodaron (75 mg), Atropin (2 mg) ve potasyum asetat (20 mEq) ile 1000 ml serum fizyolojik çanta intravenöz enjeksiyon başladı ve işlem boyunca 150 ml / saat oranı kullanılarak korunur. </li><li> 7 Fr hokey sopası kateter (Cordis, Miami, FL), sol koroner arter için gelişmiş ve koroner anjiyografi uygulandı. 0.014 inç kılavuz tel (Abbott Park, IL), sol ön inen koroner arter (LAD) içine ilerletilir. 8 mm uzunluğunda, 4.0 mm VOYAGER üzerinden tel balon (Abbott Park, IL) gelişmiş ve konumlandırılmış proksimal LAD ve 3 atm koroner balon şişirilir. LAD Tıkanıklığı anjiyogram tarafından teyit edilir. </li><li> Sürekli elektrokardiyografi ve hemodinamik izleme, tıkanma, 90 dakika süreyle muhafaza edilir. Malign ventriküler aritmiler zaman zaman uygulanan bu durumda, 300 J, 200 J akım şokların hemen teslim, ilk 40 dakika içinde oluşabilir. Genellikle aritmi iki pik zaman dilimlerini, bir adet 2 ila 10 dakika ve balon şişirme sonra 25 ve 35 dakika arasında bulunmaktadır. Yılından bu yana% 95 den fazla kare belirtilen süre içinde ventriküler fibrilasyon girme insidansı vardır Diligent izleme ve acil defibrilasyon başarılı miyokard infarktüsü yaratılmasına önemli. Derhal ve uygun bir defibrilasyon yapılırsa, hayatta kalma oranı çok yüksektir. Kan basıncı 80 mmHg altına düşerse, hacim yükü hızlı intravenöz serum fizyolojik infüzyonu ile gerçekleştirilir. </li><li> Balon söndürülmeli ve tüm cihazlar kaldırılır. </li><li> Kılıf femoral arterden kaldırılır, anestezi tevkif edilen ve hayvan kurtarma sırasında izlenir. Amiodaron, atropin ve Potasyum Asetat infüzyonu ile intravenöz serum fizyolojik 50 ml / saat hızla azalır ve bir gecede verilir. Nitroglycerline ve Furoscemide intramüsküler enjeksiyonlar uygulanır. Sonra hayvan kurtarmak için izin verilir ve dikkatli EKG izlenmesi en az 3 saat boyunca devam eder. </li><li> Aspirin (200mg) PO beş gün verilecektir. </li></ol> Miyokard infarktüsü oluşturma işlemi sırasında ve sonrasında sık görülen komplikasyonlar, koroner diseksiyon, delinme sitesi hematom, aritmi ve kalp yetmezliği. Bir tekniği rafine ve kapsamlı izleme Bu komplikasyonları önlemek ve yönetmek için gereklidir. 2. Virüs Enjeksiyon <ol><li> Hayvanlar, miyokard infarktüsü oluşturma steps1-3, yukarıda belirtildiği gibi hazırlanır. Aynı doz heparin, virüs enjeksiyonu sırasında tromboz önlemek için verilmelidir. </li><li> 5Fr bir hokey sopa kateter (Cordis, Miami, FL), sol koroner arterin ileri düzeydedir. Anjiyogram sonra 0.014 inç kılavuz tellerin iki, içine bir LAD ve içine bir kateter pozisyonunu düzeltmek için sol sirkumfleks koroner arter (LCX) gelişmiş. </li><li> Arteryel kan (-20 ml) kateter çekilir. Infüzyon sırasında iskemi önlemek için, yarım seyreltilmiş kan çözümü için kullanılır. Virüs, 10 ml kan ile karışık ve 20 ml serum fizyolojik ile seyreltilir. Kalan 10 ml, 20 ml seyreltilmiş ve kateter lümeni içinde kalan virüs teslim. </li><li> İntravenöz nitrogliserin (20 mikrogram / dk) kulak damar yoluyla başlatılır. </li><li> Kateter ucu proksimal sol ana yolu yer almaktadır. Kateter yoluyla basınç kateteri wedging olmadığından emin olmak için takip edilmektedir. </li><li> Virüs karışık kan (15 ml), sol koroner arter içine bir infüzyon pompası kullanarak 15 dakika içinde kateter aracılığı ile enjekte edilir. 15 dakika sonra şırıngayı temizlemek için değiştirilir ve infüzyon, 10 dakika boyunca devam eder. </li><li> Bir tel ve kateter sağ koroner arter, sol koroner arter aynı şekilde sabittir. </li><li> Virüs ile karışık kan kalan 5 ml floş 10 dakika 5 dakika boyunca sağ koroner arter içine enjekte edilir. </li></ol> 3. Temsilcisi Vaka Şekil 1, miyokard infarktüsü oluşturma sonrası 1 ay sol ventrikül gösterir. Sol ventrikül duvar hareket ejeksiyon fraksiyonu (EF) ile önemli ölçüde bozulur% 31. Şekil 2'de, 1 ay sonra sol ventrikül kesitlerini göstermektedir. Ön duvar tabanından zirvesine büyük bir yara görülmektedir. Bu modelde 1 ay sonra miyokard infarktüsü ortalama EF% 36 ve miyokard infarktüsü olmadan aynı büyüklükte hayvan olanların ortalama sırasıyla% 68 ve 42 ml ise ortalama diyastol sonu hacmi, 83 ml. Şekil 3 beta-gal ifade adeno-ilişkili virüs enjeksiyonu (2 x 10 12 rAAV1 CMV Lac-Z DNAz durabileceğiniz parçacıklar) 1 ay sonra sol ventrikül sınır bölgesi alanda gösterir. Gelişmiş bir ifade virüs enjekte alanda bulundu. <img src="/files/ftp_upload/2778/2778fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1. Ejeksiyon fraksiyonu, miyokard infarktüsü oluşturma 1 ay sonra sol ventrikül ölçülür . Sol ventrikül 92.5 ml dilate ve anterior duvar hareket önemli ölçüde bozulur. <img src="/files/ftp_upload/2778/2778fig2.jpg" alt="Şekil 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2 miyokard infarktüsü oluşturulduktan sonra 1 ay sonra sol ventrikül, Trifenil tetrazolium klorür ile boyanan kesitler skar alanı tanımlamak için. Ön duvar tabanından zirvesine büyük bir yara görülmektedir. <img src="/files/ftp_upload/2778/2778fig3.jpg" alt="Şekil 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 3"> Şekil 3. Beta-gal adeno-ilişkili virüs (2 x 10 12 rAAV1 CMV Lac-Z DNAz dayanıklı parçacıklar) ile indüklenen ifadesi. Gelişmiş bir ifadenin, enfarktüsü ve intrakoroner virüs enjeksiyondan sonra, 1 ay normal doku arasındaki sınır bölge bulunur. Sağ alt resim, negatif kontrol, sadece serum fizyolojik aynı protokol kullanılarak koroner arterlerde enjekte edildi gösterir.

<ol><li>Perez de Prado, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Closed-chest+experimental+porcine+model+of+acute+myocardial+infarction-reperfusion%5BTitle%5D)+AND+%22J+Pharmacol+Toxicol+Methods%22%5BJournal%5D)">Closed-chest experimental porcine model of acute myocardial infarction-reperfusion.</a> J Pharmacol Toxicol Methods. 60, 301-306 (2009).</li>
<li>Angeli, F. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Left+ventricular+remodeling+after+myocardial+infarction%3A+characterization+of+a+swine+model+on+beta-blocker+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Comp+Med%22%5BJournal%5D)">Left ventricular remodeling after myocardial infarction: characterization of a swine model on beta-blocker therapy.</a> Comp Med. 59, 272-279 (2009).</li>
<li>Urdaneta, F., Lobato, E. B., Kirby, D. S. &amp, Sidi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treating+myocardial+stunning+randomly%2C+with+either+propofol+or+isoflurane+following+transient+coronary+occlusion+and+reperfusion+in+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Card+Anaesth%22%5BJournal%5D)">Treating myocardial stunning randomly, with either propofol or isoflurane following transient coronary occlusion and reperfusion in pigs.</a> Ann Card Anaesth. 12, 113-121 (2009).</li>
<li>Jaski, B. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+upregulation+by+percutaneous+administration+of+gene+therapy+in+cardiac+disease+%28CUPID+Trial%29%2C+a+first-in-human+phase+1%2F2+clinical+trial%5BTitle%5D)+AND+%22J+Card+Fail%22%5BJournal%5D)">Calcium upregulation by percutaneous administration of gene therapy in cardiac disease (CUPID Trial), a first-in-human phase 1/2 clinical trial.</a> J Card Fail. 15, 171-181 (2009).</li>
</ol>

Tüm yazarlar, el yazması ile bağlantılı olarak bir çıkar çatışması doğurabilecek herhangi bir ticari dernekler var.

Çeşitli nedenleri arasında kalp yetmezliği, iskemi etiyolojisinde en sık uzak. Bu ciddi bir hastalıktır aşmak için, çeşitli tedavi yaklaşımları geliştirilmektedir. Bu umut verici bir tedavi kliniklerinde uygulanabilir önce terapiler dikkatli değerlendirilmesi gereklidir. Bu nedenle, hastaların klinik koşulları temsil eden bir iskemik kalp yetmezliği modeli kurulması kalp yetmezliği tedavilerin geliştirilmesi için kritik öneme sahiptir. Bizim domuz miyokard infarktüsü modeli bu translasyonel gereksinimlerini karşılamakta...

<table><tbody><tr><td>Telazol</td><td>Fort Dodge Animal Health</td><td>0856-9050-49</td><td></td></tr><tr><td>Propofol</td><td>APP Pharmaceuticals</td><td>63323-270-20</td><td></td></tr><tr><td>Heparin</td><td>APP Pharmaceuticals</td><td>63323-540-11</td><td></td></tr><tr><td>Amiodarone</td><td>APP Pharmaceuticals</td><td>63323-616-03</td><td></td></tr><tr><td>Atropin Sülfat</td><td>Med-Pharmex</td><td>54925-063-10</td><td></td></tr><tr><td>Potasyum asetat</td><td>American Regent Inc.</td><td>2053-25</td><td></td></tr><tr><td>Nitrogliserin</td><td>American Regent Inc.</td><td>4810-25</td><td></td></tr><tr><td>Salix (Furosemid)</td><td>Intervet Inc.</td><td>710461</td><td></td></tr><tr><td>5 Fr Hockey stick kateter</td><td>Cordis</td><td>556-278-0L</td><td></td></tr><tr><td>7 Fr Hockey stick kateter</td><td>Cordis</td><td>778-278-00</td><td></td></tr><tr><td>Koroner tel</td><td>Abbott Laboratories</td><td>1044588</td><td></td></tr><tr><td>Koroner balon</td><td>Abbott Laboratories</td><td>1009447-08</td><td></td></tr><tr><td>8Fr kılıf</td><td>Terumo Medical Corp.</td><td>RSS801</td><td></td></tr></tbody></table>

klinik öncesi model İskemik kalp yetmezliği gen transferi

Gene Transfer for Ischemic Heart Failure in a Preclinical Model

Kalp yetmezliği olan hastalar için Çeşitli gelişmekte olan teknolojiler geliştirilmektedir. Köklü preklinik değerlendirmeler için gerekli etkinlik ve emniyetini belirlemek. Viral vektörler kullanılarak Gen tedavisi, kalp hastalıklarının tedavisi için en umut verici yaklaşımlar biridir. Taşıyıcı geni değiştirerek farklı genler Viral teslim ölçülemez tedavi potansiyeline sahiptir. Bu video, kalp yetmezliği oluşturma, gen transferi bir hayvan modeli tam süreci domuz modeli kullanılarak sunulmaktadır. İlk olarak, miyokard enfarktüsü, proksimal sol ön inen koroner arter oklüzyonu ile oluşturulur. Kronik kalp yetmezliği, kalp remodeling sonuçlanır. Model Benzersiz gerçekten olumlu sonuçlar elde etmek için agresif tedavi gerektiren ağır kalp yetmezliği olan hastalarda yansıtan oldukça büyük bir yara. Sonra miyokard infarktüsü skar dokusu oluşturma ve geliştirme, bir virüs intrakoroner enjeksiyon eş zamanlı nitrogliserin infüzyonu ile gösterilmiştir. Bizim enjeksiyon yöntemi, gelişmiş gen ekspresyonu ile basit ve etkili bir gen transferi sağlar. Intrakoroner virüs teslimat ile miyokard infarktüsü domuz modeli Bu kombinasyon, tutarlı ve tekrarlanabilir bir metodoloji, bireysel gen etkisini test etmek için değil, sadece yardımcı olduğu kanıtlanmış, ama aynı zamanda terapötik aday olarak birçok genlerin etkinliğini karşılaştırmak.

Iskemik kalp yetmezliği tedavisi için gen transferi yöntemi miyokard infarktüsü domuz modeli kullanılarak açıklanmıştır. Basit ve tekrarlanabilir bir yöntem bize kolayca çeşitli gen transferlerinin etkinliğini değerlendirmek için çok basit ve tekrarlanabilir bir yol sağlar.

Klinik öncesi Model İskemik Kalp Yetmezliği Gen Transferi

Kalp yetmezliği olan hastalar için çeşitli yeni teknolojiler geliştirilmektedir. ... belirlemek için iyi yapılandırılmış preklinik değerlendirmeler gereklidir.

Gen tedavisi. Viral vektörlerin kullanımı, kalp hastalıklarının tedavisi için en gelecek vadeden yaklaşımlardan biridir. Bu videoda, iskemik kalp yetmezliği modelinin oluşturulması ve viral vektör aracılığıyla gen iletimi prosedürleri sunulmaktadır.İlk adım, bir domuz modelinde miyokard enfarktüsü oluşturmaktır. Bunu gerçekleştirmek için, koroner artere önce bir koroner tel, ardından bir tıkayıcı balon ilerletilir. Endovasküler erişim kullanılarak, koroner arteri tamamen tıkamak için balon şişirilir.Sonuç olarak, ön bölgede geniş bir infarkt oluşturulur ve domuzlarda kronik kalp yetmezliği gelişir. Bir sonraki adım virüs enjeksiyonudur. Viral vektörler koroner artere yavaşça enjekte edilir.Kan dolaşımıyla taşınacak ve miyokarda dağılacaktır. Virüs, kardiyomiyositlere, ardından çekirdeğe girecek ve protein üretimi için sinyaller gönderecektir. Eksprese edilen proteinler, kardiyak performansı güçlendirecek ve genel fonksiyonu artıracaktır.Bu videoda, swine model kullanılarak iskemik kalp yetmezliği için gen tedavisi prosedürlerini sunuyoruz. İlk olarak, bir pig modelinde miyokardiyal enfarktüsün nasıl oluşturulacağını göstereceğiz ve ardından bir viral vektörün koroner teslimatını uy

gene-transfer-for-ischemic-heart-failure-in-a-preclinical-model

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Onlar insanlar kullanmak için kabul edilebilir önce kardiyak rejeneratif tıp roman tedavi stratejileri kapsamlı ve detaylı çalışmalar büyük preklinik hayvan modellerinde gerektirir. Burada, biz perkütan kontrast Ekokardiyografi güdümlü intramyocardial enjeksiyon tekniği Tavşanlarda, roman böyle tedavilerin etkinliğini test hipotez için değerli olan göstermek.

Perkütan kontrast Ekokardiyografi güdümlü Intramyocardial enjeksiyon ve hücre teslim büyük preklinik modeli

Burada fareler bir protokol kalp özel gen manipülasyon için mevcut. Anestezi altında fare kalpler dördüncü interkostal uzayda externalized. Daha sonra kodlama belirli genler bir şırınga vivo içinde görüntüleme ve Batı ile protein ifade ölçü tarafından takip Miyokardiyum içine enjekte edildi adenovirüse bakın analiz leke.

Vivo içinde kalp özel gen manipülasyon farelerde Intramyocardial enjeksiyonla için basit ve etkili bir yöntem

Burada insan IPS-hücre cardiomyocytes eskiden şiling şimdi domuz modelinde türetilmiş bir kalp kası yama implantasyonu ve ardından sol ventrikül cryoinjury indüksiyon için bir iletişim kuralı mevcut.

HiPSC elde edilen kalp kası yamalar implantasyonu eskiden şiling şimdi domuz modelinde miyokardiyal yaralanma sonra

Burada, yeni kardiyokoruyucu stratejileri araştırmak için sıkı bir şekilde kurulan ve kullanılan ortootopik kalp transplantasyonunun klinik öncesi büyük hayvan (porcine) modelini tarif ediyoruz.

Ortootopik kalp transplantasyonunun klinik öncesi porcine modeli

Biz hücre tabanlı tedaviler için kök hücrelerin intramiyokardiyal uygulama etkisini ve güvenliğini test etmek için sol circumflex arter tıkanıklığı ve hızlı pacing tarafından indüklenen kalp yetmezliği bir domuz modeli kurmak için çalıştı.

Kök Hücre Tedavisi Için Post-miyokard Enfarktüsü Kalp Yetmezliği Domuz Modeli Oluşturma

Bu protokol, farelerde miyokard enfarktüsü sonrası modRNA kullanarak ilgi genini geçici olarak düzenlemenin basit ve tutarlı bir yolunu sunar.

Miyokard Enfarktüsü Fare Modelinde Modifiye mRNA Teslimi

İskemiye neden olan doku hasarının kantitatif değerlendirilmesi için bir yöntem le birlikte, insan kaynaklı pluripotent kök hücrelerden elde edilen kardiyomiyositler kullanılarak iskemik kalp hastalığı nın bir modelini saklı atıyoruz. Bu model ilaç tarama ve iskemik kalp hastalığı üzerinde daha fazla araştırma için yararlı bir platform sağlayabilir.

HiPSC Türetilmiş Kardiyomiyosit Kullanarak İskemik Kalp Hastalığı Modeli ve Kardiyomiyosit Kontraksiyonunun Video Tabanlı Karşılaştırılması

Bu protokol, kalp yetmezliği ni modelleyen enfarktan farelerin epikardiyumuna 3Boyutlu biyobaskılı bir yama naklini amaçlamaktadır. Anestezi, cerrahi göğüs açıklığı, sol anterior inen kalıcı ligasyon (LAD) koroner arter ve kalbin enfarktüs bölgesine biyobbaskılı bir yama uygulaması ile ilgili ayrıntıları içerir.

Miyokard Enfarktüsü'nün Murine Modelinde 3Boyutlu Biyobaskılı Yama Transplantasyonu

İskemik kalp hastalığı için miyokard gen tedavisi, gelecekteki terapötikler için büyük umut vaat etmektedir. Burada, iskemik kalpte gen tedavisinin etkinliğini değerlendirmek için büyük bir hayvan modeli sunuyoruz.

İskemik Kalpte Gen Tedavisinin Etkinliğini Değerlendirmek İçin Büyük Hayvan Modeli

Domuz heterotopik kalp nakli modelinde terapötiklerin tüm kardiyak allogreftlere verilmesi için normotermik ex vivo sanguinöz perfüzyon sisteminin kullanılması için bir protokol sunuyoruz.

Terapötiklerin Kardiyak Allogrefte Verilmesi için Domuz Heterotopik Kalp Transplantasyonu Protokolü

Bu protokol, ekokardiyografi rehberliğinde virüsün doğrudan intramiyokard enjeksiyonu ile sıçan ve fare kalplerinde transgen ekspresyonu yöntemlerini açıklamaktadır. İzole, Langendorff perfüze edilmiş kalplerin programlanmış elektriksel stimülasyonu ile kalplerin ventriküler aritmilere duyarlılığının değerlendirilmesi için yöntemler de burada açıklanmaktadır.

Kemirgen Kalplerde Viral Transgen Ekspresyonu ve Kardiyak Aritmi Riskinin Değerlendirilmesi

Öğrenin, domuz modelinde iskemik kalp yetmezliği için gen transferi yöntemini. Viral vektörlerle kalp kasına gen teslimi yaparak gen tedavisi uygulamalarını değerlendirin.

Klinik öncesi Model İskemik Kalp Yetmezliği Gen Transferi

Daha fazla video keşfet