Name: Nöritik plaklar Alzheimer Hastalığı Fare Modeli Algılama (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-07-26T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 2 s
Description: Öğrenin, Alzheimer hastalığı transgenik fare modellerinde nöritik plakları 4G8 antikoru ve DAB yöntemiyle immünohistokimyasal olarak ve thioflavin S ile floresan boyama ile nasıl tespit edeceğinizi.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışma, Kanada Sağlık Araştırma Enstitüsü (CIHR) Townsend, Aile, ve Jack Brown ve Aile Alzheimer Araştırma Vakfı (WAS) tarafından desteklenmiştir. WS Kanada Araştırma Başkanı Alzheimer Hastalığı sahibi. PTTL Doğal Bilimler ve Mühendislik Araştırma Danışma ve Sağlık Araştırma Bursu için Michael Smith Vakfı tarafından desteklenmektedir.

1. Fare beyinleri fiksasyonu ve cryosectioning <ol><li> Transgenik farelerin dekapitasyon ve çıkarılan beyin tarafından takip karbondioksit gazı kullanarak kurban. </li><li> Beynin merkezinde boydan boya disseke edilir. Beynin yarısı, biyokimyasal analiz için kuru buz dondurulmuş flaş olacaktır. Diğer 4% 4 paraformaldehid (PFA) en az 48 saat süreyle sular altında olacak ° C </li><li> En az 48 saat% 4 PFA fiksasyonu sonra% 30 sakaroz çözeltisini, hemi beyin direkt olarak aktarılabiliyor ve 4 ° C Noktada, hemi beyin sakaroz çözeltisini yüzen olmalıdır. Hemi beyin genellikle 48 saat gerektiren dibe battığı zaman, cryosectioning OCT gömülü olması için hazırdır. </li><li> Cryosectioning önce, OCT topuzu üzerinde ince bir tabaka montaj ve -20 ° C'de dondurmak için izin Hemi beyin ve yerin geri kalanından beyincik dondurulmuş OCT katman üzerine çıkarın. OCT ile hemi beyin hemen kapağı ve yavaş yavaş -20 ° C'de dondurmak için izin Beyin opak dönüşmüştür OCT gömme sonra kesitli olmak için hazırdır. </li><li> Her bölümün kalınlığı 30 mikron ayarlayın. D'Olomos çözümü ile bir kabın içine her dilim toplayın. </li></ol> 2. Nöritik plaklar İmmünohistokimya prosedürü (ücretsiz kayan bölümleri) <ol><li> 15 dakika boyunca% 88 formik asit her bölüm davranın. Formik asit tedavisinden sonra, bölüm geçici olarak opak dönecek ve büzüşmeli görünebilir. </li><li> Tx-PBS (% 0.3 PBS içinde Triton X-100) ile 5 dakika X 3 nazik sallayarak bir tabak ve yıkama her bir bölümü çıkarın. </li><li> Blok Endojen Peroksit% 0,5 Tx-PBS, RT H 2 O 2 ile 30 dakika nazik sallayarak engelliyor. </li><li> Tx-PBS bölümü ile 10 dakika X 3 nazik sallayarak yıkayın. </li><li> Nazik sallayarak ile 1 saat oda sıcaklığında Tx-PBS içinde çözünmüş% 5 yağsız yağsız süt Blok bölümü. </li><li> Tx-PBS 4% 5 süt içeren seyreltilmiş primer antikor bölümler (4G8 biotinlenmiş, 1:500-1:2000, Signet) ° C, nazik sallayarak bir gecede. Inkübe </li><li> Tx-PBS bölümü ile 10 dakika X 3 nazik sallayarak yıkayın. </li><li> ABC çözüm üretici protokolü (Elit ABC, vektör Laboratuvarları,) hazırlayın. ABC karışımı bölümleri nazik sallayarak 30 dakika inkübe edin. </li><li> Tx-PBS bölümü ile 10 dakika X 3 nazik sallayarak yıkayın. </li><li> 3,3 '-diaminobenzidin tetrahydrochloride (DAB) (Vektör Laboratories) aşağıdaki üretici protokol hazırlayın. Bölümleri DAB karışımı için 5-10 dakika inkübe edin. Bu noktada, kahverengimsi bir renk, her bölüm geliştirmek gözlemlemek olacaktır. </li><li> Tx-PBS bölümü ile 10 dakika X 3 nazik sallayarak yıkayın. </li><li> Serbest yüzen beyin bölümleri doku yapışması ile yardımcı olmak için, jelatin kaplı slaytlar üzerine monte edilir. Bölüm sonra hava, ksilen bir dizi ile takas takip ve Entellen içinde monte edilmiş kurutulmuş. </li><li> Plaklar, 40X büyütmeli ışık mikroskobu altında görüntülendi ve dilim her fare için başına ortalama plak sayımı değerlendirerek sayısal. </li></ol> 3. Thioflavin S nöritik plaklar tespit prosedürü boyama <ol><li> Fare fedakarlık ve beyin ekstraksiyon prosedürü gibi bölümlerde 1.1 1.5 gösterilir. </li><li> Mount 4 5 hemi beyin bir cam slayt üzerine bölümler ve tamamen boyamadan önce kurumaya izin verin. </li><li> 1 dakika boyunca% 70 Etanol slaytlar yıkayın. </li><li> 1 dakika boyunca% 80 Etanol slaytlar yıkayın. </li><li> Filtrelenmiş (0.2 mikron filtre) thioflavin S solüsyonu (% 80 Etanol% 1) slayt 15 dakika boyunca inkübe edin. (Thioflavin G çözüm, her kullanımdan önce filtre olması gerekir). Not: thioflavin S ışıktan korumak ve lekeli slaytlar ışıktan korumak. </li><li> 1 dakika boyunca% 80 Etanol slaytlar yıkayın. </li><li> Slaytlar% 70 Etanol 1 dakika ile yıkayın. </li><li> Iki kez distile su ile yıkayın. </li><li> Sulu montaj medya ve slaytlar açık bir oje ile sızdırmazlık lamel tarafından en az 2 saat, karanlıkta kurumasını bekleyin Mount slaytlar. Boyanan kesitler 4 karanlıkta saklanmalıdır ° C </li><li> Yeşil floresan lekeli plaklar floresan microscropy ile görüntülendi. Boyama zamanla kaybolacak, çünkü bir hafta içinde slaytlar analiz edin. </li></ol> 4. Temsilcisi Sonuçlar Anti-epileptik ilaç ve nöritik plak oluşumunu engellediğini duygudurum valproik asit (VPA) etkinliğini son çalışmada, yukarıda açıklanan immün kullanılan ve thioflavin G, AD model teşkil eden farelere (3) nöritik plaklar tanımlamak için prosedürler boyama. Şekil 1 anti-Aβ kullanarak biotinlenmiş 4G8 ile boyandı ve ABC yöntemi ile tespit edilen 9 aylık tipik bir eski APP23 transgenik fare, temsil eder. Nöritik plaklar antikor ile açıkça etiketlenir ve beyaz oklarla gösterilir. Thioflavin G boyama kullanarak, 2 aylık APP23xPS tra nöritik plak birikimi tespitnsgenic fareler (Şekil 2). Thioflavin G bağlı Aβ içeren nöritik plaklar floresan mikroskopi (beyaz oklar ile gösterilir) altında yeşil görünür. VPA tedavisi nöritik plak oluşumunu önemli derecede (3) azalır olduğunu gösterdi. Bir başka çalışmada, moleküler bağlantı altta yatan hipoksi ve AD patogenezinde okudu. Yine, hem de anti-Aβ 4G8 immünhistokimya boyama ve thioflavin G boyama kullanarak, biz o hipoksi nöritik plaklar (4) içeren Aβ oluşumunu kolaylaştırmıştır bulundu. <img src="/files/ftp_upload/2831/2831fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1. AD transgenik farelerin nöritik plak oluşumu immünohistokimyasal analizi, 9 ay yaşta APP23 fareler sakrifiye edildi ve diseke edildi, sabit ve kesitli. Hipokampal nöritik plaklar Aβ bir anti-antikor 4G8 kullanılarak tespit edildi ve ABC ve DAB yöntemler kullanılarak geliştirilmiştir. Plaklar 40X ile ışık mikroskobu ile görüntülendi. Beyaz oklar Aβ nöritik plaklar işaret. <img src="/files/ftp_upload/2831/2831fig2.jpg" alt="Şekil 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2. AD modellenen fareler nöritik plaklar Thioflavin G boyama eski 8 hafta APP23xPS45 çift transgenik fareler sakrifiye edildi ve diseke edildi, sabit ve kesitli. Hipokampal nöritik veba thioflavin S floresan boyama kullanılarak doğrulandı ve 40X büyütmede mikroskobu ile görüntülendi. Beyaz oklar thioflavin G lekeli nöritik plaklar göstermektedir.

<ol><li>Glenner, G. G., Wong, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alzheimer%27s+disease%3A+initial+report+of+the+purification+and+characterization+of+a+novel+cerebrovascular+amyloid+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+Biophys+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">Alzheimer's disease: initial report of the purification and characterization of a novel cerebrovascular amyloid protein.</a> Biochem Biophys Res Commun. 120, 885-890 (1984).</li>
<li>Hardy, J., Selkoe, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+amyloid+hypothesis+of+Alzheimer%27s+disease%3A+progress+and+problems+on+the+road+to+therapeutics%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">The amyloid hypothesis of Alzheimer's disease: progress and problems on the road to therapeutics.</a> Science. 297, 353-356 (2002).</li>
<li>Qing, H., He, G., Ly, P. T., Fox, C. J., Staufenbiel, M., Cai, F., Zhang, Z., Wei, S., Sun, X., Chen, C. H., Zhou, W., Wang, K., Song, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Valproic+acid+inhibits+Abeta+production%2C+neuritic+plaque+formation%2C+and+behavioral+deficits+in+Alzheimer%27s+disease+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22J+Exp+Med%22%5BJournal%5D)">Valproic acid inhibits Abeta production, neuritic plaque formation, and behavioral deficits in Alzheimer's disease mouse models.</a> J Exp Med. 205, 2781-2789 (2008).</li>
<li>Sun, X., He, G., Qing, H., Zhou, W., Dobie, F., Cai, F., Staufenbiel, M., Huang, L. E., Song, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypoxia+facilitates+Alzheimer%27s+disease+pathogenesis+by+up-regulating+BACE1+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Hypoxia facilitates Alzheimer's disease pathogenesis by up-regulating BACE1 gene expression.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 103, 18727-18732 (2006).</li>
</ol>

Tüm deneyler, British Columbia Hayvan Bakım ve Kullanım komitesi ve CIHR kurallar Üniversitesi ile uygun olarak yapılmıştır.

Biotinlenmiş etiketli 4G8 antikor lekeleri AD nöritik plaklar kullanan İmmünohistokimya özgüllük ile modellenen fareler. Boyanması sonucu kantifikasyon ve farklı tedavi grupları arasında plak yükü karşılaştırılması sağlar. Sonucunu etkileyebilecek bazı önemli adımlar vardır. Hemi beyinleri kafatası çıkarma öncesinde perfüze olmadığından, bakım hemi beyin hasarları önlemek amacıyla çıkarma işlemi sırasında kullanılan olmalıdır. Dahası, hemi beyin pasif perfüze olduğundan, biz 4 en az 48 saat% 4 PFA kuluçka tavsiye ° C% 30 sakaroz çözeltisini dalarken önce. Alternatif olarak, transcardial perfüzyon beyin ayıklanması önce yapılması olabilir. Beyin düzgün sabit ise, bir lastik dokusu olmalıdır. Durumda beynin düzgün sabit değildir, bölümler kolayca D&#39;Olomos çözümü veya boyama işlemleri sırasında yırtılabilir. 4G8 monoklonal antikor reaktif amino asit artıkları Aβ, 17-24 ve çekirdek dizisi (VFFAE) epitop tanıdı. 4G8 fare türlerinin türetilmiş olduğundan, daha yüksek bir arka plan boyama vermek eğilimindedir. Bu nedenle, biz, arka plan boyama en aza indirerek hususlar ulaşmak için gerçek bir sinyal ile belirtilen seyreltme bölümleri inkübe seçti. 4G8 antikor kullanarak nöritik plaklar tespiti için immün yanı sıra, bir thioflavin S boyama yöntemi de plaklar tanımlamak için kullanılır. Thioflavin S homojen bir boya karışımı dehydrothiotoluidine metilasyonu sülfonik asit ile elde edilen sonuçlar. Thioflavin G-seçici olmayan beta amiloid oligomerler gibi protein sayfalık içeriği, bağlar. Bağlayıcı üzerine, thioflavin emisyon spektrum karakteristik bir mavi vardiya uğrar. Thioflavin G monomerik formları bağlanma Tersine mavi bir değişimi ortaya çıkarmak ve floresan mikroskop ile tespit edilememiştir. Floresan yoğunluğu amiloid mevduat küçük miktarlarda iyi bir görüntüleme sağlar Thioflavin G boyama amiloid için ekran hızlı bir alternatif sunuyor. Ancak, bir dezavantajı thioflavin G boyama hakkında özgüllük eksikliğidir. Fibrinoids, hiyalin, keratin, vb gibi içeren kapsamlı beta yaprak, dahil olmak üzere birçok diğer doku parçaları, bu boya için oldukça yakınlık var.

<table border="1"><tbody><tr><th> Reaktif ve ekipman Adı </th><th> Şirket </th><th> Katalog numarası </th></tr><tr><td> Paraformaldehit </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> P6148-1KG </td></tr><tr><td> Polyvinylpyrrolidene </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> PVP40-100G </td></tr><tr><td> Sakaroz </td><td> Fisher Scientific </td><td> S5-3 </td></tr><tr><td> Etilen glikol </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 324.558-2L </td></tr><tr><td> Doku-Tek Ekim Bileşik </td><td> Sakura </td><td> 4583 </td></tr><tr><td> % 88 formik asit </td><td> Fisher Scientific </td><td> A118P-500 </td></tr><tr><td> Triton X-100 </td><td> ICN Biyomedikal </td><td> 807426 </td></tr><tr><td> H2O2 </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> H-1009 </td></tr><tr><td> Biotin 4G8 Antikor Etiketli </td><td> Cedarlane </td><td> SIG-39240-500 </td></tr><tr><td> Elite ABC kiti </td><td> Vektör </td><td> PK-6100 </td></tr><tr><td> Imm PACT DAB </td><td> Vektör </td><td> SK-4105 </td></tr><tr><td> Ksilen </td><td> Fisher Scientific </td><td> X4-4 </td></tr><tr><td> Entellan </td><td> EM bilim </td><td> 65037-71 </td></tr><tr><td> SuperFrost * Plus Mikroskop Slaytlar </td><td> Fisher Scientific </td><td> 12-550-15 </td></tr><tr><td> Kriyostat </td><td> Leica </td><td> CM-3050-S </td></tr><tr><td> MX35 Premier mikrotom bıçağı </td><td> Thermo Scientific </td><td> 3052835 </td></tr><tr><td> Thioflavin S </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> T1892-25G </td></tr></tbody></table>

nöritik plaklar alzheimer hastalığı fare modeli algılama

Detection of Neuritic Plaques in Alzheimer's Disease Mouse Model

Alzheimer hastalığı (AH), demansa neden olan en yaygın nörodejeneratif bir hastalıktır. Nöritik plak oluşumu, Alzheimer hastalığının patolojik işaretlerinden biridir. Nöritik plaklar merkezi bileşeni β-secretase ve γ-secretase beta-amiloid prekürsör protein (APP) sıralı proteolitik bölünme türetilmiş bir küçük ipliksi protein olarak adlandırılan amiloid β proteini (Aβ) 1,. Amiloid hipotezi AD patoloji 2, altta yatan toksik mekanizma olarak plaklar Aγ içeren gerektirir . Nöritik plak varlığı postmortem analiz AD tanısını doğrular. AD patogenezinde Aγ nörobiyoloji anlayışımızı ilerletmek için, AD-ilgili, insan APP genlerindeki mutasyonlar ifade çeşitli fare suşlarının üretildi. Hastalığın şiddetine bağlı olarak, bu farelerde farklı yaşlarda nöritik plaklar gelişecektir. Bu fareler APP işleme yolu ve nöritik plak oluşumunu etkileyebilecek patogenezi ve ilaç geliştirme eğitimi için paha biçilmez bir araç olarak hizmet vermektedir. Bu protokol, AD modeli farelerde nöritik plaklar belirli tespiti için bir immünohistokimyasal yöntem kullanırlar. ABC ve DAB yöntem ve floresan algılama kullanarak thiofalvin G boyama yöntemi kullanılarak immünohistokimyasal algılama: Biz özellikle yarım beyin, paraformaldehid fiksasyon, cryosectioning, ve AD transgenik farelerin nevrotik plaklar tespit etmek için iki yöntem açılan hazırlık tartışacağız.

AD patolojik özelliklerinden biri Amiloid β proteini pozitif nöritik plakların oluşumu. Immünohistokimyasal algılama thioflavin G boyama yöntemi kullanılarak ABC ve DAB yöntem ve floresan tespiti: Bu protokolde, transgenik AD modeli fareler nöritik plaklar tespit etmek için iki yöntem açıklanmaktadır.

Nöritik plaklar Alzheimer Hastalığı Fare Modeli Algılama

Alzheimer hastalığı (AH), demansa yol açan en yaygın nörodejeneratif bozukluktur. Nevritik plak oluşumu, patolojik belirteçlerden biridir...

Bu prosedürün genel amacı, 4G8 immün boyama ve flavin S boyama yöntemlerini kullanarak AD model fare beyinlerinde amiloid plakların tespit edilmesini sağlamaktır. Bu işlem, öncelikle fare beyninin kafatasından çıkarılması ve %4 PFA ile pasif perfüzyon uygulanması, ardından %30 sükroz çözeltisinde bekletilmesi ve beynin boyuna 30 mikron kalınlığında kriyoseksiyonlarının alınmasıyla gerçekleştirilir. Daha sonra, 4G8 antikoru kullanılarak amiloid plaklar boyanır ve DAB yöntemiyle görüntülenir.Ek olarak, eritik plakları thioflavin S boyaması ile boyayın ve floresan mikroskobu kullanarak görüntüleyin. Nihayetinde, elde edilen sonuçlar, antikor tabanlı bir tespit ve thioflavin S boyası ile boyama yoluyla beyin dokularındaki eritik plak birikimini gösterebilir. Bu tekniklerin mevcut yöntemlere göre temel avantajı, 4G sekiz boyamasının ve thioflavin S'nin, beta proteinleri içeren eritik plaklar için yüksek derecede seçici olmasıdır.Burada gösterilen bu yöntem Alzheimer hastalığı transgenik farelerinde beta plaklarını tespit etmek için olsa da, bu yöntem Alzheimer hastalığındaki beta plaklarının tespitinde de kullanılabilir. İnsan beyni dokuları. Transgenik fareleri karbondioksit gazı kullanarak sakrifiye edin, ardından dekapitasyon uygulayın, beyni çıkarın ve merkezden boylamasına diseke edin. Biyokimyasal analiz için beynin yarısını kuru buz üzerinde hızla dondurun, diğer yarısını ise 4 °C'de en az 48 saat boyunca %4'lük paraformaldehit içinde bekletin.Hemi Brain'i dört °C'deki %30'luk sükroz çözeltisine aktarın. Başlangıçta Hemi brain sükroz çözeltisinde yüzecektir, ancak 24 ila 48 saat sonra kriyoseksiyonlama öncesinde dibe çökecektir; düğüm kısmına ince bir OCT tabakası sürün ve -20 °C'de donmaya bırakın. Serebellumu Hemi Brain'in geri kalanından ayırın.Kalan kısmı donmuş OCT tabakasının üzerine yerleştirin, hemen üzerini OCT ile kapatın ve -20 °C'de yavaşça donmaya bırakın. Kriyostatı 30 mikron kesit kalınlığına ayarlayın ve her bir kesiti Domo çözeltisi içeren bir kaba toplayın. Serbest yüzen her bir kesiti 15 dakika boyunca %88 formik asit ile işleyin.Kesitlerin büzüştüğü görülecektir. Ardından her bir kesiti bir plakaya aktarın ve hafifçe çalkalayarak beş dakika boyunca Triton XPBS ile üç kez yıkayın. Endojen aktiviteyi, oda sıcaklığında, hafifçe çalkalayarak 30 dakika boyunca Triton XPBS içindeki %0,5 hidrojen peroksit ile sönümleyin.Ardından, kesitleri hafifçe sallayarak Triton XPBS ile 10 dakika boyunca üç kez yıkayın; kesitleri Triton XPBS içinde çözülmüş %5 yağsız sütün bulunduğu ortamda, oda sıcaklığında hafifçe sallayarak bir saat boyunca bloke edin. Kesitleri, %5 süt içeren Triton XPBS ile seyreltilmiş birincil antikorda, dört derece santigrat sıcaklıkta hafifçe sallayarak gece boyunca inkübe etmeye devam edin. Numuneleri Triton XPBS ile 10 dakika boyunca üç kez yıkayın.Şimdi üreticinin protokolüne göre b, C çözeltisini hazırlayın ve kesitleri A B, C karışımında hafifçe çalkalayarak 30 dakika inkübe edin, ardından trite next PBS ile 10 dakika boyunca üç kez yıkayın. Kesitlerin her birinde kahverengimsi bir renk oluşana kadar, taze hazırlanmış DAB karışımında beş ila 10 dakika inkübe edin ve hafifçe çalkalayarak trite next PBS ile 10 dakika boyunca üç kez yıkayın. Serbestçe yüzen beyin kesitlerini jelatin kaplı lamlara monte edin, havada kurumaya bırakın ve bir dizi ksilen işlemiyle şeffaflaştırıp lin ile monte edin.Plakları ışık mikroskobu altında 40 x büyütmede görselleştirin ve her fare için dilim başına ortalama plak sayısını belirleyin; farelerden beyin dokusunu daha önce gösterildiği şekilde ekstrakte edin. Dört ila beş hemi beyin kesitini bir cam slayta monte edin ve havada tamamen kurutun; örnekleri önce bir dakika boyunca %70 Ethanol, ardından bir dakika boyunca %80 ethanol ile tamameny değidrate edin. Daha sonra, slaytları 15 dakika boyunca %0,1 filtrelenmiş THEOF Flavin S çözeltisinde inkübe edin.Theof Flavin S çözeltisini ve boyalı lamları ışıktan korumaya dikkat ederek, lamları bir dakika boyunca %80 ethanol, bir dakika boyunca %70 ethanol ve iki kez distile su ile yıkayın. Ardından lamları sulu montaj ortamına yerleştirin ve karanlıkta en az iki saat boyunca havada kurutun, sonrasında lamel kenarlarını şeffaf oje ile mühürleyin. Boyalı kesitleri dört derece Celsius'ta karanlıkta saklayın.Son olarak, bir hafta içinde floresan mikroskobu ile yeşil floresan boyalı plakları görüntüleyin. Antiepileptik ilaç ve duygudurum dengeleyici olan valproik asidin retik plak oluşumunu inhibe etme etkinliği üzerine yaptığımız güncel çalışmada, ad model farelerde retik plakları tanımlamak için yukarıda açıklanan immün boyama ve flavin s boyama prosedürlerini kullandık. Tipik dokuz aylık bir A PP 23 transgenik fare, BIOTINYLATED 4G eight kullanılarak anti A beta ile boyanmış ve A BC yöntemiyle tespit edilmiştir.Nöretik plaklar antikorla açıkça işaretlenmiştir ve beyaz oklarla gösterilmiştir. Burada, flavin S boyaması iki aylık APP 23 times PS transgenik farelerde retik plak birikimini saptamaktadır. Bu teknik bir kez kavrandığında, uygun şekilde uygulandığında üç günde tamamlanabilir. Bu prosedür gerçekleştirilirken, beynin %4 PFA içinde tamamen fikse edilmesi ve beynin %30 sükroz çözeltisinin tabanına tamamen çöktüğünden emin olunması önemlidir.Bu prosedürün ardından, tau hiperfosforilasyonu ve nöronal kaybı gibi ek soruları yanıtlamak amacıyla tau için immünostaining gibi diğer yöntemler uygulanabilir.

detection-of-neuritic-plaques-in-alzheimer-s-disease-mouse-model

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

(Tg) AD transgenik fare modelleri, nasıl ve neden Aβ veya tau düzeyleri BOS değişikliği insan hastalarda hastalık ilerledikçe araştırmak için mükemmel bir fırsat sağlar. Burada, fare seri BOS örnekleme için rafine bir sisterna magna ponksiyonu tekniği göstermektedir.

Cisterna Magna Fare Beyin Omurilik Sıvısı Seri Toplama Tekniği

Kaynak: Bisht, K., et. al. β-Amiloid Plaklarla Mikroglial Etkileşimleri İncelemek için İlişkili Işık ve Elektron Mikroskobu. J. Vis. Uzm.  (2016) Bu video, Alzheimer hastalığı fare beynindeki Metoksi-X04 etiketli amiloid plaklarının görselleştirilmesini ve haritalanmasını göstermektedir. Alzheimer patolojisini incelemek için plakların anatomik yapılarla hassas korelasyonunu sağlayan floresan ve parlak alan mikroskobu kullanan bölümler.

Alzheimer Hastalığı Fare Beyni Bölümünde Metoksi-X04 İşaretli Amiloid Plaklarının Görselleştirilmesi ve Haritalanması

Kaynak: Arango-Lievano, M. et. al., Serebrovasküler Sistemin Uzunlamasına İn Vivo Görüntülemesi: CNS Hastalıklarıyla İlgisi. J. Vis. Uzm. (2016)Bu video, floresan etiketli amiloid plaklarını ve serebral vaskülatürü görselleştirmek için in vivo iki fotonlu görüntülemeyi göstermektedir. Mavi floresan plakları işaretlerken, yeşil floresan serebral kan damarlarını vurgular. İlgilenilen bölgenin 3 boyutlu haritası ve yüksek çözünürlüklü mozaik görüntüleme, amiloid plaklarının beyin damarları ile...

Alzheimer Hastalığı Fare Modelinde Serebral Damarların ve Amiloid Plaklarının İn Vivo Görüntülenmesi

Burada, amiloid-beta'nın doğrudan stereotaksik beyin infüzyonu için bir protokol sunuyoruz. Bu metodoloji, amiloid-beta'nın beyin nöronları üzerindeki kısa vadeli etkilerini ele almak için alternatif bir in vivo fare modeli sağlar.

Fare Hippocampus içine Oligomerik Amiloid-beta Stereotaksik İnfüzyon

Amiloid-β (Aβ) hayvan modeli tanımlanmış bir miktar ve Aβ parçalarının türlerinin yönetimini sağlayan ve her çalışma grubu içinde bireysel farklılıkları azaltır -injected. Bu protokol, normal farelerde Alzheimer-benzeri davranış bozukluğu üretimini sağlayan, stereotaktik araçlar olmaksızın Aβ intraserebroventriküler (ICV) enjeksiyonu anlatılmaktadır.

Normal Farelerde Amiloid-β Peptitler intraserebroventriküler enjeksiyon Akut Alzheimer gibi Bilişsel Açıkları tetikleyebilecek

Burada, tonik ve enzim-bağlı mikroelektrot dizileri (MEA) kullanılarak in vivo olarak fazik hücre dışı glutamat değişiklikleri ölçmek için bir uzamsal ve zamansal hassas bir yöntem için kurulum, yazılım navigasyon ve veri analizi tarif eder.

Enzim bazlı biyosensörlerin kullanılması Alzheimer Fare Modellerinde Tonik ve Fazik glutamat Ölçmek için

Burada, β-amiloidoz ve tauopatinin transgenik fare modellerinde bilişsel ve fonksiyonel motor davranışlarda in vivo etkinlik gösteren bileşiklerin taranması için kullanılabilen aşamalı, davranışsal tarama yaklaşımı anlatılmaktadır. Bu yöntemler, bileşikleri kısa süreli ve hafızadaki işlerde etkinlik açısından taramak için optimize edilmiştir.

Amiloid-β ve Tau Nöropatolojisinin Transgenik Fare Modellerinde Spontan Dalgalanmanın Değerlendirilmesi, Yeni Nesne Tanıma ve Limb Klapması

Mevcut protokol, Alzheimer hastalığının APP / PS1 transgenik fare modelinde amiloid-beta yükünü ölçmek için sagital fare beyin bölümlerinin tam bölge veya alt bölge analizini gerçekleştirme prosedürünü açıklar ve karşılaştırır.

Fare Beyin Bölümlerinde Amiloid-Beta Yükünün Tam ve Alt Bölgesel Nicelleştirilmesi

Alzheimer hastalığının bir özelliği Aβ yükseklik.

Β-amiloid Oligomerik hazırlanması 1-42</subHipokampal Dilimleri Sinaptik Plastisite değer düşüklüğü> İndüksiyon

Amiloid beta-Protein, Alzheimer hastalığının etkeni Aptamers Seçimi

Öğrenin, Alzheimer hastalığı transgenik fare modellerinde nöritik plakları 4G8 antikoru ve DAB yöntemiyle immünohistokimyasal olarak ve thioflavin S ile floresan boyama ile nasıl tespit edeceğinizi.

Nöritik plaklar Alzheimer Hastalığı Fare Modeli Algılama

Daha fazla video keşfet