Name: Yaşlı ve Parkinson Sıçanlar Ultrasonik seslenmelere Hedefe Yönelik Eğitim (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-08-08T12:00:00.000+00:00
Duration: 11 min
Description: Öğrenin Parkinson hastalığı ve yaşlanma modellerinde sıçanların ultrasonik vokalizasyonlarını artırmak için hedefe yönelik davranışsal eğitim protokolü. Pozitif pekiştirme ile ses karmaşıklığını ve sayısını artırma yöntemini keşfedin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Ulusal Sağlık Enstitüleri (NIDCD, P30-DC010754, T32-DC009401) tarafından desteklenir.

1. Pre / Post-öğretim kayıtları <ol><li> Şekil 2'de gösterildiği gibi yapılandırma kullanarak Avisoft Recorder ile ultrasonik izleme başlayın. </li><li> Ultrasonik seslenmelere görsel ya da gerçek zamanlı spektrogram izleyerek izlenir, ya da ultrason kayıt arabirimi kulak kulaklık takılı olabilir. </li><li> Konu erkek sıçan evde kafes içine bir cinsel alıcı (östrus) dişi sıçan yerleştirin. Östrus belirtileri lordoz, kıpır kıpır kulak, ve hızlı darting. Östrüs kadınlarda cinsel olmayan alıcı kadın oranla erkeklerde daha fazla seslenmelere ortaya çıkarmak. </li><li> Erkek kadın (örneğin, koklama, kovalayan, ve / veya montaj) ilgi gösterildiği sonra, kadın kaldırmak ve 1-2 dakika erkek seslenmelere kayıt. </li><li> Erkek hemen sesleri değilse, kısaca seslendirme uyarmak için erkek evine kafesine dişi sıçan dönmek. </li></ol> 2. Ses Eğitimi <ol><li> Şekil 2'de gösterildiği gibi aynı yapılandırma kullanarak Avisoft Recorder ile ultrasonik izleme başlayın. </li><li> Mikrofon altında evine kafes erkek sıçan yerleştirin. </li><li> Dişi sıçan erkek evde kafes içine koyun. Daha önce de belirtildiği gibi, dişi sıçan erkek seslendirme yanıtı en üst düzeye çıkarmak için östrus olmalıdır. </li><li> Bir kere kadın erkek kaldırmak kadın ilgi gösterdi. </li><li> Erkek hedef seslendirme üretir hemen sonra, aynı anda bir kalem su şişesi veya gıda tedavi tıklayın ve kısa bir sunum ile ödüllendirir. Başlangıçta, herhangi bir 50 kHz frekans modülasyonlu (Şekil 5B) çağrısı ödüllendirilir. Peş peşe 5 ila 10 çağrıları dizileri gibi aramaların sadece giderek daha karmaşık dizeleri, eğitim ilerledikçe takviye edilmiştir. </li><li> 30 takviye verilen eğitim toplantısına kadar devam edin. Bu genellikle 5 - 10 dakika arasında sürer. </li></ol> 3. Akustik Analizi için hazırlık <ol><li> Daima orijinal ses dosyaları arşiv ve analiz yapmak her dosyadan ses filtreleme ve silme ihtiyaç olarak, düzenlemeler ve bir çalışma kopyası ölçümleri. </li><li> Avisoft SASLab Pro toplu modu kullanarak, yüksek geçiren, ultrasonik seslenmelere altında istenmeyen gürültü kaldırmak için 25 kHz analiz edilecek tüm ses dosyalarını filtre. </li><li> SASLab Pro otomatik algılama özelliği kullanmak için, gürültü eşik ilk tespit edilmelidir. Bunu yapmak için, bir ses dosyasını açın ve Şekil 3'te gösterildiği gibi ayarları kullanarak bir spektrogram oluşturmak. </li><li> Otomatik Parametre Ölçümleri ekran Şekil 4'te gösterilen ayarlara göre kurulum olmalıdır. </li><li> Herhangi bir çağrı veya sesler vardır spektrogram bir alan bulun; bu arka plan gürültü. </li><li> "Otomatik olarak (tek eşik)" seçeneğini kullanarak, Otomatik Parametre Ölçümleri kurulum iletişim kutusunda, sadece siyah bir çizgi spektrogram üzerinde güç spektrumu penceresinde ayarlayarak arka plan gürültü üzerine Element ayırma bölümünde eşik ayarlayabilirsiniz. Şekil 4'te, eşik değeri -55 dB kurulmuştur. </li><li> Iletişim kutusunun alt kısmında, 1 dB önceki adımda bulunan eşik değerinin altında "tepe genlik değeri küçükse Reddet" olarak ayarlayın. Bu iki değer, artık tüm kayıt ayarları aynıydı varsayarak analiz tüm ses dosyaları için kullanılmalıdır. </li></ol> 4. Seslendirme Kimlik <ol><li> Yukarıda belirtilen otomatik eşik kullanarak seslenmelere etiketlemek için, ilk Yukarıdaki ayarlardan bir spektrogram oluşturun. </li><li> Aşağıdaki kriterlere uygun herhangi bir gürültü elle silmek: 1) yanlış bir seslendirme, 2) olarak tespit edilmiştir başında ve / veya seslendirme sonuna ayrımcılık etkileyen ve / veya 3) yanlış, en yüksek olarak tespit edilmiştir seslendirme en düşük frekans (sırasıyla, alt ve üst kırmızı çizgiler ile gösterilir). Alternatif olarak, aşağıdaki 4.5 adımda kalıcı etiketler oluşturduktan sonra seslendirme etiket start / stop kez manuel olarak ayarlanabilir. Gürültü, yüksek ve düşük frekans ölçümleri etkileyen ancak elle silinebilir gerekir. </li><li> Bazı durumlarda bir seslendirme lokomosyon sırasında yataklar sesi olarak gürültüleri, ayrılması mümkün olmayacaktır. Bu gibi durumlarda, aramanın doğru bir şekilde analiz edilmesi ve silinmelidir. </li><li> Tüm seslenmelere tespit edilmiştir kalıcı ses dosyasını seçerek spektrogram silinmiş bölümleri siler "dalga şekli silinir spektrogram bölümleri çıkarın ..." Araçlar aşağı açılan menüden. Spektrogram kapatılmadan önce bu komut uygulanmaması durumunda, tüm silme işi kaybolur. </li><li> Parametre Ölçümleri Otomatik kurulum penceresinin Eleman Ayırma bölümünde 'düzenle' düğmesine tıklayarak ses dosyası kalıcı etiketler oluşturun. </li><li> Modüle basit, frekans (FM), veya harmonik: Görsel ve işitsel olarak etiketlenmiş seslendirme kategori belirlemek için her gözden. GötIGN, önceden tanımlanmış bir metin modülleri kullanarak uygun etiket. Her seslendirme kategorinin örnekleri Şekil 5'te gösterilmiştir. </li><li> Spektrogram kapatın, ses dosyasını kaydetmek ve analiz edilmesi gereken bir sonraki ses dosyası ile devam ediyor. </li></ol> 5. Akustik Ölçümler <ol><li> Tüm dosyaların otomatik olarak akustik parametreleri ölçmek için tüm ses dosyaları seslenmelere tespit edildikten sonra, (Toplu İşleme Araçları) toplu iş işleme aracı kullanabilirsiniz. </li><li> Toplu işleme iletişim kutusunda, açılan menüden "Otomatik Parametre Ölçümleri" seçeneğini seçin. </li><li> "Süreci seçilen klasördeki tüm dosyaları" onay kutusunu seçin, daha sonra "Klasör" düğmesini tıklayın ve ses dosyalarının kaydedileceği klasörü seçin. </li><li> "Başlat" ve her dosyanın en son Otomatik Parametre Ölçüm kurulum diyalog kutusu kullanılan ayarlara göre otomatik olarak analiz edilecektir. </li><li> Ölçümler, DDE Parametreler / Günlük Dosyası Ayarı komutunu kullanarak tanımlanabilir bir metin dosyasına kaydedilir. Bu metin dosyası, daha sonra istatistiksel analiz için bir program içine alınabilir. </li></ol> 6. Temsilcisi Sonuçlar: Sıçan Ultrasonik seslenmelere yaşlanma ve 6-OHDA Parkinson hastalığı modelleri ile ilişkili fizyolojik değişiklikler etkilenen 13 Genellikle, aşağıdaki kantitatif akustik parametreler bir azalma ile karakterize ultrasonik seslenmelere kalitesinde bir azalma görüyoruz: bant genişliği, pik frekans, süre ve yoğunluğu. Başlangıçta, PD indüksiyon, sonra ve seslendirme eğitimden sonra: Şekil 6 PD model bir sıçan üç farklı zaman noktalarında frekans modüle seslenmelere gösterir. PD durum, arama, bant genişliği, süresi ve yoğunluğu azalma göstermektedir. Ayrıca, frekans modülasyonu düzensiz hale gelmiştir. Özel akustik parametrelerinin bozulmasına ek olarak, biz de, yaşlı ve parkinsonizm sıçanlarda üretilen seslenmelere türleri daha genel anlamda gözlemliyoruz. Örneğin, PD indüksiyon sonrası bir sıçan basit aramalar ve daha az frekans modüle çağrıları daha büyük bir sayı üretir. Ardından seslendirme eğitimi, süresi ve yoğunluğu, yaklaşım başlangıç ​​düzeyleri ve karmaşık aramaları artar (Şekil 6) gibi pek çok akustik parametreler. Yaşlı sıçanlarda ultrasonik seslenmelere akustik parametreleri benzer bozulma tezahür eder. Şu anda yaşlı sıçanlarda vokal eğitimi etkilerini araştırıyorlar. <img src="/files/ftp_upload/2835/2835fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1. seans başına sesler çıkarma (Hedef her hafta tüm sıçanlar tarafından karşılanması) ve seslendirme oranı (ortalama ve standart hata gösterildiği gibi) hem genç (9 ay) ve eski bir grup, 6 haftalık bir eğitim süre içinde iki artış (32 sayısı ay) Fischer 344/Brown Norveç F1 sıçanlarda. <img src="/files/ftp_upload/2835/2835fig2.jpg" alt="Şekil 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2, her üç kategoride 50 kHz seslenmelere Temsilcisi seslenmelere; (A) basit, (B) frekans modülasyonlu ve (C) harmonik . <img src="/files/ftp_upload/2835/2835fig3.jpg" alt="Şekil 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 3"> Şekil 3, tek bir (A) başlangıçta sıçan, (B) post-PD indüksiyon, ve (C) sonra seslendirme eğitimi Temsilcisi frekans modülasyonlu seslenmelere .

<ol><li>Fox, C. M., Morrison, C. E., Ramig, L. O., Sapir, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+perspectives+on+the+Lee+Silverman+Voice+Treatment+%28LSVT%29+for+individuals+with+idiopathic+Parkinson+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Speech+Lang+Pathol%22%5BJournal%5D)">Current perspectives on the Lee Silverman Voice Treatment (LSVT) for individuals with idiopathic Parkinson disease.</a> Am J Speech Lang Pathol. 11, 111-123 (2002).</li>
<li>Roy, N., Stemple, J., Merrill, R. M., Thomas, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+of+voice+disorders+in+the+elderly%3A+preliminary+findings%5BTitle%5D)+AND+%22Laryngoscope%22%5BJournal%5D)">Epidemiology of voice disorders in the elderly: preliminary findings.</a> Laryngoscope. 117, 628-633 (2007).</li>
<li>Ramig, L. O., Sapir, S., Fox, C., Countryman, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Changes+in+vocal+loudness+following+intensive+voice+treatment+%28LSVT%29+in+individuals+with+Parkinson%27s+disease%3A+a+comparison+with+untreated+patients+and+normal+age-matched+controls%5BTitle%5D)+AND+%22Mov.+Disord%22%5BJournal%5D)">Changes in vocal loudness following intensive voice treatment (LSVT) in individuals with Parkinson's disease: a comparison with untreated patients and normal age-matched controls.</a> Mov. Disord. 16, 79-83 (2001).</li>
<li>Sapir, S., Ramig, L. O., Fox, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Lee+Silverman+Voice+Treatment%C2%AE+for+voice%2C+speech+and+other+orofacial+disorders+in+patients+with+Parkinson%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Future+Neurology%22%5BJournal%5D)">The Lee Silverman Voice Treatment® for voice, speech and other orofacial disorders in patients with Parkinson's disease.</a> Future Neurology. 1, 563-570 (2006).</li>
<li>Panksepp, J., Burgdorf, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((50-kHz+chirping+%28laughter%3F%29+in+response+to+conditioned+and+unconditioned+tickle-induced+reward+in+rats%3A+effects+of+social+housing+and+genetic+variables%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">50-kHz chirping (laughter?) in response to conditioned and unconditioned tickle-induced reward in rats: effects of social housing and genetic variables.</a> Behav. Brain Res. 115, 25-38 (2000).</li>
<li>Scattoni, M. L., Gandhy, S. U., Ricceri, L., Crawley, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Unusual+repertoire+of+vocalizations+in+the+BTBR+T%2Btf%2FJ+mouse+model+of+autism%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Unusual repertoire of vocalizations in the BTBR T+tf/J mouse model of autism.</a> PLoS One. 3, e3067-e3067 (2008).</li>
<li>Wohr, M., Houx, B., Schwarting, R. K., Spruijt, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+experience+and+context+on+50-kHz+vocalizations+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol.+Behav%22%5BJournal%5D)">Effects of experience and context on 50-kHz vocalizations in rats.</a> Physiol. Behav. 93, 766-776 (2008).</li>
<li>Lahvis, G. P., Alleva, E., Scattoni, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Translating+mouse+vocalizations%3A+prosody+and+frequency+modulation%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Brain+Behav%22%5BJournal%5D)">Translating mouse vocalizations: prosody and frequency modulation.</a> Genes Brain Behav. 10, 4-16 (2011).</li>
<li>Brudzynski, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Communication+of+adult+rats+by+ultrasonic+vocalization%3A+biological%2C+sociobiological%2C+and+neuroscience+approaches%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+J%22%5BJournal%5D)">Communication of adult rats by ultrasonic vocalization: biological, sociobiological, and neuroscience approaches.</a> ILAR J. 50, 43-50 (2009).</li>
<li>Johnson, A. M., Ciucci, M. R., Russell, J. A., Hammer, M. J., Connor, N. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasonic+output+from+the+excised+rat+larynx%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Acoust.+Soc.+Am%22%5BJournal%5D)">Ultrasonic output from the excised rat larynx.</a> J. Acoust. Soc. Am. 128, EL75-EL79 (2010).</li>
<li>Fulceri, F., Biagioni, F., Lenzi, P., Falleni, A., Gesi, M., Ruggieri, S., Fornai, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nigrostriatal+damage+with+6-OHDA%3A+validation+of+routinely+applied+procedures%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+N+Y+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Nigrostriatal damage with 6-OHDA: validation of routinely applied procedures.</a> Ann N Y Acad Sci. 1074, 344-348 (2006).</li>
<li>Ciucci, M. R., Vinney, L., Wahoske, E. J., Connor, N. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+translational+approach+to+vocalization+deficits+and+neural+recovery+after+behavioral+treatment+in+Parkinson+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Commun.+Disord%22%5BJournal%5D)">A translational approach to vocalization deficits and neural recovery after behavioral treatment in Parkinson disease.</a> J. Commun. Disord. 43, 319-326 (2010).</li>
<li>Ciucci, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduction+of+dopamine+synaptic+activity%3A+degradation+of+50-kHz+ultrasonic+vocalization+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Behav.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Reduction of dopamine synaptic activity: degradation of 50-kHz ultrasonic vocalization in rats.</a> Behav. Neurosci. 123, 328-336 (2009).</li>
<li>Wright, J. M., Gourdon, J. C., Clarke, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+multiple+call+categories+within+the+rich+repertoire+of+adult+rat+50-kHz+ultrasonic+vocalizations%3A+effects+of+amphetamine+and+social+context%5BTitle%5D)+AND+%22Psychopharmacology+%28Berl%29%22%5BJournal%5D)">Identification of multiple call categories within the rich repertoire of adult rat 50-kHz ultrasonic vocalizations: effects of amphetamine and social context.</a> Psychopharmacology (Berl). 211, 1-13 (2010).</li>
<li>Burgdorf, J., Kroes, R. A., Beinfeld, M. C., Panksepp, J., Moskal, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Uncovering+the+molecular+basis+of+positive+affect+using+rough-and-tumble+play+in+rats%3A+a+role+for+insulin-like+growth+factor+I%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Uncovering the molecular basis of positive affect using rough-and-tumble play in rats: a role for insulin-like growth factor I.</a> Neuroscience. 168, 769-777 (2010).</li>
<li>Wöhr, M., Schwarting, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ultrasonic+communication+in+rats%3A+effects+of+morphine+and+naloxone+on+vocal+and+behavioral+responses+to+playback+of+50-kHz+vocalizations%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Biochem+Behav%22%5BJournal%5D)">Ultrasonic communication in rats: effects of morphine and naloxone on vocal and behavioral responses to playback of 50-kHz vocalizations.</a> Pharmacol Biochem Behav. 94, 285-295 (2009).</li>
</ol>

Hayvanlar üzerinde yapılan deneyler, Laboratuvar Hayvanları, laboratuvar hayvanlarının bakımı ve kullanımı kılavuzu, NIH ve hayvan refahı hareket İnsani Bakım ve Kullanım Halk Sağlığı Hizmetleri Politikası tarafından belirlenen kurallara ve yönetmeliklere uygun olarak yapıldı. Hayvan kullanımını protokolü, Wisconsin-Madison Tıp ve Halk Sağlığı Okulu Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu (IACUC) tarafından onaylandı.

Sıçanlarda Ultrasonik seslenmelere, Parkinson hastalığı gibi yaşlanma ve hastalık süreçleri, savunmasız görünür. Bu ultrasonik seslenmelere, hastalığı ve yaşlanmaya bağlı fizyolojik değişiklikler eşlik açıkları da dahil olmak üzere, vokal fonksiyon, bir davranış modeli sağlar. Buna ek olarak, ultrasonik seslenmelere akustik değişiklikleri kolaylıkla ölçülebilir ve rakamsal. Ayrıca, ultrasonik seslenmelere davranışsal müdahaleler yoluyla değiştirilebilir. Bu nedenle, sıçan ultrasonik seslenmelere yaşlanma, hastalık üzerindeki etkilerini incelemek için faydalı model ve terapötik müdahaleler hem davranış ve altta yatan nörobiyolojik mekanizmalar sağlar. Vokal eğitimi yöntemi olumlu bir takviye (bir su veya gıda tedavi ödül) ile ilişkili bir şartlı uyaran (tıklayın) kullanır. Ödül artan karmaşıklığı seslenmelere güçlendirmek için tıklayın kullanılır. Biz bu &quot;düz&quot; ve tek bir frekans (Şekil 5A) korumak karşı bir &quot;ses titremesi&quot; (frekans modülasyonlu) bileşen (Şekil 5B) içeren bu gibi karmaşık seslenmelere tanımlar. Bu frekans modüle bileşeni kolayca sinüzoidal bir görünüm ile tanımlanır. 50 kHz seslenmelere tamamen sinüzoidal (Şekil 5B) olsa da, kısmen bu frekans modüle bileşeni frekans yanı sıra büyük atlar ya da ya da kısa bir düz bileşeni oluşan daha karmaşık bir 50 kHz seslenmelere sıkça rastlanır. Bu daha karmaşık seslenmelere bileşenler arasında 10 ms&#39;den kısa molalar olabilir ama tek bir seslendirme olarak kabul edilir. Bu seslenmelere daha ayrıntılı bir alt sınıflandırma, 14, çevrimdışı mümkün olmasına rağmen, online subjektif sınıflandırma ihtiyacını azaltmak ve takviye değişkenliği azaltmak için karmaşık bir frekans modüle bileşen içeren tüm 50 kHz seslenmelere sınıflandırmak. Kendi laboratuvar veriler çalışmanın amacına uygun bir çalışma tasarımı göre sınıflandırılmış ve analiz nasıl seçmek önemlidir. Bu protokolü kullanarak göz önünde bulundurulması gereken birçok faktör vardır. Her şeyden önce, genetik homojenlik ve usul tutarlılık rağmen, sıçanlarda eğitim değişken bir tepki var. Bazı fareler doğal diğerleri, 5 daha fazla sesleri ya da bir gıda ya da su ödül yerine bir kadın daha fazla maruz kalma ile motive. Bu değişkenliği dikkate yolu bireysel sıçanlarda bazal seslenişlerden sonrası lezyon ve eğitim sonrası seslenmelere akustik parametreler değişiklik inceleyerek. Bu protokol tartışılan olmasa da, biz de monte etmek için gecikme gibi, kadın ilgi ölçmek için davranış testleri var. Ayrıca, bireysel bir sıçan yaş ve aktivite düzeyi bağlı olarak, bir tel üst, kaçmasını önlemek için eğitim sırasında evde kafes gerekli olabilir. Bireysel değişkenliği rağmen, çeşitli suşları ve yaşları göre seslenmelere, her bireyin sıçan temel geliştirmek için bu protokolü başarıyla kullanmıştır. Sıçanlar gibi kokular, sıcaklık ve personel olarak çevre görünüşte küçük değişiklikler için duyarlıdır. Bir çaba, losyonlar, saç ürünleri, ve parfüm gibi kokulu kişisel bakım ürünleri, önlemek için yapılmalıdır. Eğitim girişmeden önce, bir birey ile etkileşim ve sıçanlarda ele rahat olmalıdır. Ayrıca, personel ya da ortamda herhangi bir tutarsızlık farelerin seslendirme yanıt etkileyebilir. Sıçanlarda noktürnal olduğundan, en aktif, kendi döngüsü karanlık kısmı sırasında gerçekleştirilecek eğitim için izin verecek bir ters ışık döngüsü muhafaza edilmelidir. Biz eğitim odası kırmızı ışık ile aydınlatıyor. Ayrıca, eğitim sırasında kullanılan su ödülü ise sıçanlarda su kısıtlı erişime sahip olmalıdır. Sıçanlarda 21 saat önce eğitim oturumu sınırlı su. Üç saat suyla temas Kurumsal Hayvan Bakım tarafından belirlenir ve su, hayvan sağlığı ve iyi olmak için önemli bir uzlaşma sunmadan davranış çalışmalarında takviye olarak yararlı olabilmesi için en az kısıtlayıcı süre Komitesi kullanın. Sıçanlar rasgele zamanlarda eğitimden sonra (30 dakika 10 dakika) suya erişimi ve daha sonra kendi ışık döngüsü karanlık bir bölümü sırasında, üç saat süreyle su ücretsiz erişim var. Sıçanlar her gün dehidratasyon bulguları denetlenir ve anlamlı (% 10 daha fazla) kilo kaybı olmadığından emin olmak için her gün tartılır olmalıdır. Bir ödül olarak bir gıda tedavi kullanılıyorsa bir gıda kısıtlaması gerekli değildir. Sıçanlara davranır özel ticari olarak kullanılabilir, ancak etkili bir ödül şekerli tahıl küçük bir parça bulduk. Yukarıda da belirtildiği gibi, dişi sıçanlarda östrus olmayan cinsel alıcı kadın oranla erkeklerde daha yüksek bir seslendirme cevabı ortaya. Büyük bir koloni kadın sayısını koruyarak, yüksek bir olasılık var ki azen az bir kadın, herhangi bir gün östrus olacak. Ancak, östrüs farmakolojik subkutan 0.1 cc steril susam yağı eğitim 4 saat önce 500 mg progesteron takip eğitim için 0.1 cc steril susam yağı 48 saat önce β-östradiol 10 mikrogram enjekte dişi sıçanlarda indüklenen olabilir. Ayrıca, dişi sıçanlarda naif erkek sıçanlarda cinsel vokal eğitimi öncesinde deneyimli olmalıdır. Bu erkek bağlar ve cinsel ilişki kadar erkek ev kafese cinsel alıcılığı (darting, lordoz, kulak kıpır kıpır) belirtileri gösteren bir dişi fare koyarak yapılır. Erkekler ilk birkaç seans içinde monte olmayabilir ve kadın kadın erkek gösterileri ilgi koklama ve / veya kafes etrafında, kadın peşinde sonra kaldırılmış olabilir. Cinsel yaşıyor, iki hafta boyunca günde bir kez yapılır. Bu süre de, sıçanlar için deneyci (ler) ve kayıt odası alışmakta bir fırsat sağlar. Bu yöntemin bir sınırlama seslendirme türü öznel belirlenmesi. Her çağrı bağımsız olarak incelenmiş ve manuel olarak sınıflandırılır olmalıdır Buna ek olarak, bu faktör, veri toplama hızını sınırlar. Bu, tutarlı bir seslendirme kimlik eğitim almış deneyimli puanlayıcı sahip önemi. Her ikisi de, içi ve hakemlerarası güvenilirlik kendi laboratuvar içinde değerlendirilmesi gerekir. Özetle, kemirgenler ultrasonik seslenmelere duygusal durumlar, ödül ve bağımlılık ve hastalık durumlarında, bu tür otizm gibi beyin-davranış ilişkileri de dahil olmak üzere, çalışma pek çok farklı model kullanılmaktadır. 6,14-16 Bu yeni yöntem, çalışmak için bir yoldur vokal eğitimi, yaşlanma ve Parkinson Hastalığı ses açıklarının tedavi için hedef altında yatan mekanizmalar. Bu yöntem, haberleşme ve ses etkileyen diğer hastalık modellerinde uygulanmak üzere bir potansiyele sahiptir.

<table border="1"><tbody><tr><th> Isim </th><th> Şirket </th><th> Katalog numarası </th></tr><tr><td> Kondenser ultrason mikrofon CM16/CMPA </td><td> Avisoft Bioacoustics </td><td> 40011 </td></tr><tr><td> UltraSoundGate 116Hb </td><td> Avisoft Bioacoustics </td><td> 41161 </td></tr><tr><td> Avisoft-Kaydedici </td><td> Avisoft Bioacoustics </td><td> 10201 </td></tr><tr><td> Avisoft-SASLab Pro </td><td> Avisoft Bioacoustics </td><td> 10101 </td></tr></tbody></table>

yaşlı ve parkinson sıçanlar ultrasonik seslenmelere hedefe yönelik eğitim

Targeted Training of Ultrasonic Vocalizations in Aged and Parkinsonian Rats

Ses açıkları Parkinson hastalığı (PH) ve yaşlanma hem de ortak bir komplikasyon; iletişim yeteneklerini etkileyen, yaşam kalitesini önemli ölçüde azaltabilir rağmen 1, 2 Hedeflenen eğitim (konuşma / ses terapisi) özel ses açıkları, 3, 4 artırabilir . davranışsal müdahaleler altında yatan mekanizmalar tam olarak anlaşılmış değildir. Sesli açıkları ve tedavinin sistematik bir araştırma, yaş, ev ortamında, yaş hastalığı sonrası başlangıçlı, hastalığın şiddeti, ve ilaçlar gibi insanlar, kontrolü zor olan birçok faktör göz önünde bulundurmalısınız. Bu yöntem, burada sunulan hedeflenen ses eğitimi ile sensorimotor mekanizmaları değişimin altında yatan nasıl sistematik bir çalışma sağlar seslendirme bir hayvan modeli kullanır. Bu protokolde belirtilen ultrasonik kayıt ve analiz prosedürleri kemirgen ultrasonik seslenmelere herhangi bir soruşturma için geçerli. Kemirgenler ultrasonik seslenmelere davranış nöral substratlar araştırmak için değerli bir model olarak ortaya çıkmaktadır. 5-8 kemirgen ve insan seslenmelere göstergebilimsel değeri taşıyan ve larinks bir daralma ile egressive hava akımını değiştirerek üretilmektedir. 9, 10 Böylece, kemirgen seslenmelere sensorimotor bağlamında ses açıkları incelemek için yararlı bir model olabilir. Ayrıca, sıçan modelleri bize hedefli eğitim açıklarının iyileşme nörobiyolojik temellerinin çalışma izin verir. Modeli PD için Long-Evans ratları (Charles River Laboratuvarları International, Inc) ve 6-hydroxydopamine (6-OHDA) 7 mg tek taraflı bir infüzyon orta presinaptik ciddi dejenerasyona neden olan medial ön beyin demeti içine Parkinsonizm neden striatal nöron (detaylar için Ciucci, 2010) 11, 12 bizim yaşlanma modeli için Fischer 344/Brown Norveç F1 (Ulusal Yaşlanma Enstitüsü) kullanın. Eliciting seslenmelere için birincil yöntem cinsel deneyimli erkek sıçanlarda cinsel alıcı dişi sıçanlarda ortaya çıkarmak için. Erkek, kadın ilgilenen hale geldiğinde, kadın kaldırılır ve erkek sesleri devam ediyor. Yiyecek ya da su, karmaşık seslenmelere sayısı iki ve seslenmelere oranı ile ödüllendirme karmaşık seslenmelere artmış olabilir (Şekil 1). Erkek ev kafes üzerine monte ultrasonik mikrofon seslenmelere kaydeder. Kaldırıldıktan sonra, sıçan kadın erkek aramaları izole etmek için kayıt başlar. Seslenmelere eğitim ya da kaydedildi ve çevrimdışı analiz için gerçek zamanlı olarak görülebilir. Seslenmelere vokal eğitimi öncesi ve sonrasında kayıt ve akustik analiz, hastalık ve eğitim ile normal işlev restorasyon etkileri değerlendirilebilir. Bu model aynı zamanda beyin ve nöromüsküler sistem değişiklikleri bize gözlenen davranış (vokal) geliştirmeleri ilişki sağlar.

Ses bozuklukları, yaşlanma ve Parkinson hastalığı zayıflatıcı. Ayrıca bu koşulları etkilenen sıçan ultrasonik seslenmelere, bu ses bozuklukları, nöral substratlar ve davranışsal müdahale ile fonksiyonel iyileşme doğasını incelemek için kullanılabilir.

Yaşlı ve Parkinson Sıçanlar Ultrasonik seslenmelere Hedefe Yönelik Eğitim

Ses bozuklukları, hem Parkinson hastalığının (PH) hem de yaşlanmanın yaygın bir komplikasyonudur; ... etkileyerek yaşam kalitesini önemli ölçüde azaltabilirler.

Bu prosedürün genel amacı, sıçanların ultrasonik vokalizasyonlarının (USV) sayısını ve karmaşıklığını artırmak üzere eğitilmesidir. Bu süreç, öncelikle bazal vokalizasyonların kaydedilmesiyle gerçekleştirilir. Bir sonraki adım ise pozitif pekiştirme yoluyla hedeflenen vokalizasyonlar için eğitim vermektir.Eğitimden sonra, eğitim sonrası vokalizasyonlar kaydedilir. Prosedürün son adımı, bazal vokalizasyonlar ile eğitim sonrası vokalizasyonların akustik analizi ve karşılaştırılmasıdır. Nihayetinde, sonuçlar elde edilebilir.Bu durum, bant genişliği, tepe frekansı ve süre gibi akustik parametrelerdeki artışlar aracılığıyla eğitimin ultrasonik vokalizasyonların sayısını ve karmaşıklığını artırdığını göstermektedir. Bu yöntem, vokal egzersizin temel nöral mekanizmaları nasıl modüle ettiği gibi iletişim bozuklukları alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Ayrıca bu yöntem, Parkinson hastalığı ve yaşlanma ile ilişkili kranial duyusal motor eksikliklere dair içgörü sağlayabilir.Bu yöntem, davranışsal bir gösterge olarak ultrasonik vokalizasyonların kullanıldığı diğer hastalık modellerine ve durumlarına da uygulanabilir. Vokalizasyon eğitimini Emerald Dahl ve laboratuvarımın üyelerinden Jamie Shire gerçekleştirecektir. Ultrasonik izlemeye başlamak için Avis Soft Recorder yazılımını yükleyin; kayıtların manuel olarak başlatılıp durdurulabilmesi için tetikleyici kısmından "permanent unlimited" seçeneğini belirleyin. Ardından, yakalanan ses dosyalarının kaydedileceği yeri kök dizin içerisinde tanımlayın.En yüksek vokalizasyon frekansını yakalamak için örnekleme hızı en az 200,000 hertz olmalıdır. Bu parametreler ayarlandıktan sonra, erkeğin ev kafesinin üst kısmını çıkarın ve kafesi doğrudan mikrofonun altına yerleştirin. Ardından, lordoz, kulak oynatma ve hızlı ileri-geri hareketlerin varlığına bakarak östrus dönemindeki cinsel olarak alıcı bir dişi sıçan belirleyin.Reseptif dişiyi, denek erkek sıçanın ev kafesine yerleştirin. Erkek sıçan; koklama, kovalama veya üzerine çıkma yoluyla dişiye ilgi gösterdiğinde, dişiyi kafesten çıkarın ve erkeğin vokalleşmelerini bir ila iki dakika boyunca kaydedin. Ultrasonik vokalleşmeleri, gerçek zamanlı spektrogramı izleyerek görsel olarak takip edin.Eğer erkek rat ses çıkarmıyorsa, vokalizasyonu uyarmak için dişi ratı hemen ve kısa süreliğine erkeğin kafesine geri döndürün. Başlamak için, eğitim odasına tek bir erkek rat getirin. Diğer tüm erkekler, eğitim seanslarına kadar bitişik bir odada tutulmalıdır.Suyun bir ödül olarak kullanılmasını kolaylaştırmak için sıçanın su erişimi önceden kısıtlanmalıdır. Eğitim sırasında, Avis soft recorder'ı daha önce gösterildiği gibi kurun. Ardından, ana kafesi mikrofonun altına yerleştirin.Erkek fare konumlandığında, kafese reseptif bir dişi sıçan yerleştirin. Erkek fare dişiye ilgi gösterdiğinde dişiyi çıkarın ve hedef vokalizasyonları izleyin. Başlangıçta, herhangi bir 50 kilohertz frekans modülasyonlu çağrı ödüllendirilir.Bir kaleme basarak ve aynı anda kısa süreliğine bir su şişesi veya yiyecek sunarak ödülü verin. Eğitim ilerledikçe, yalnızca artan karmaşıklıktaki çağrı dizileri, örneğin hızlı ardışık beş veya 10 çağrılık diziler pekiştirilmelidir. 30 pekiştirme verilene kadar eğitime devam edin.Bazal ve eğitim sonrası kayıtların analiz edilmesi genellikle beş ila 10 dakika sürer. İlk olarak, orijinal ses dosyasının bir arşivini oluşturun ve ultrasonik vokalizasyonların altındaki gürültü frekanslarını temizlemek için bir çalışma kopyası üzerinde düzenlemeler yapın. Ses dosyalarını 25 kilohertz değerinde yüksek geçiren filtrelemek için AVI Soft SaaS Lab Pro'nun toplu işlem modunu kullanın.SaaS Lab Pro'nun otomatik element tespit özelliğini kullanmak için gereken gürültü eşiğini belirlemek amacıyla bir ses dosyası açın ve bir spektrogram oluşturun. FFT uzunluğunu 512, çerçeve boyutunu %75 ve zamansal örtüşmeyi %93,75 olarak ayarlayın. Spektrogramdan silinen gürültülerin dalga formundan da kaldırılabilmesi için dalga formu düzenlemeyi etkinleştirin. Otomatik parametre ölçümlerini burada gösterildiği gibi kurun.Ölçülecek üç parametre element süresi, tepe frekansı ve tepe genliğidir. Ölçüm konumunda, maksimum genliği ve tüm elementin minimum ve maksimum parametresini etkinleştiren bölümü seçin. Element ayırımı altında, otomatik tek eşik değerini ve eşik değerini göster seçeneğini belirleyin.Spektrogramda çağrı veya gürültü bulunmayan bir alan bulunuz. Bu, arka plan gürültüsüdür. Eşiği, arka plan gürültüsünün hemen üzerine ayarlayınız.Spektrogramın üzerindeki güç spektrumu penceresinde bulunan siyah çizgi ayarlanarak, önceki adımda belirlenen eşiğin desibel seviyesi buradan bulunabilir. "Reddedilecek genlik şu değerden küçük olsun" (rejective amplitude is less than value) seçeneğini eşiğin bir desibel altına ayarlayın. Bu iki değer artık analiz edilen tüm ses dosyaları için kullanılmalıdır.Tüm kayıt ayarlarının aynı olduğu varsayılarak, vokalizasyonları etiketlemek için daha önce belirlenen otomatik eşiği ve önceden gösterilen aynı ayarları kullanarak bir spektrogram oluşturun. Aşağıdaki kriterleri karşılayan ve vokalizasyon olarak yanlış tanımlanmış her türlü gürültüyü manuel olarak silin: birincisi, vokalizasyon olarak yanlış tanımlanmış olanlar; ikincisi, vokalizasyonun başlangıcının ve/veya sonunun ayırt edilmesini etkileyenler; üçüncüsü ise vokalizasyondaki en yüksek veya en düşük frekans olarak yanlış tanımlanmış olanlar (bunlar sırasıyla üst ve alt kırmızı çizgilerle belirtilmiştir).Bazı durumlarda, bir vokalizasyon, hareket sırasındaki altlık sesi gibi çevre gürültülerinden ayrılamayabilir. Bu çağrı doğru şekilde analiz edilemez ve tüm vokalizasyonlar tanımlandıktan sonra silinmelidir; spektrogramın silinen bölümleri ses dosyasından kalıcı olarak silinmelidir. Ses dosyasında kalıcı etiketler oluşturmak için araçlar açılır menüsünden "spektrogram bölümlerini dalga formundan kaldır" (remove spectrogram sections from waveform) seçeneğini belirleyerek silme işlemini gerçekleştirin.Otomatik parametre ölçüm kurulum penceresini açın ve element ayrımı bölümündeki düzenle düğmesine hem görsel hem de sözlü olarak tıklayın. Her bir etiketli vokalizasyonu, kategorisini belirlemek için inceleyin ve önceden tanımlanmış metin modüllerini kullanarak uygun etiketi atayın. Analizimizde kullandığımız kategoriler basit frekans, modüle ve harmoniktir.Spektrogramı kapatın, ses dosyasını kaydedin ve analiz edilecek bir sonraki ses dosyasıyla devam edin. Tüm ses dosyalarındaki vokalizasyonlar tanımlandıktan sonra, tüm dosyaların akustik parametrelerini otomatik olarak ölçmek için toplu işlem aracını kullanın. Toplu işlem iletişim kutusundaki açılır menüden otomatik parametre ölçümlerini seçin.Seçili klasördeki tüm dosyaları işle onay kutusunu seçin. Ardından klasör düğmesine tıklayın ve ses dosyalarının kaydedildiği klasörü seçin. Başlat'a tıklayın; her dosya, en son kullanılan ayarlara göre otomatik olarak analiz edilecektir.Otomatik parametre ölçüm kurulumu iletişim kutusunda, ölçümler DDE parametreleri eğik çizgi günlük dosyası ayar komutu kullanılarak tanımlanabilen bir metin dosyasına kaydedilecektir. Bu metin dosyası daha sonra istatistiksel analiz için bir Programa aktarılabilir. Bu Grafikler, seans başına vokalizasyon sayısının ve dakika başına vokalizasyon hızının altı haftalık eğitim süresi boyunca arttığını göstermektedir.Kullandığımız 50 kilohertz vokalizasyonların üç kategorisinin her birine ait temsili vokalizasyonlar burada soldan sağa doğru görülmektedir. Bunlar basit frekans, modüle ve armonik vokalizasyonlardır. Bu örnekte, aynı sıçandan alınan frekans modüle vokalizasyonlar Parkinsonizm indüksiyonu öncesinde, Parkinsonizm indüksiyonu sonrasında ve vokalizasyon eğitiminden sonra gösterilmiştir.Panel A'daki bazal vokalizasyonla karşılaştırıldığında, Panel B'deki Parkinsonizm durumundaki vokalizasyon, bant genişliğinde, sürede ve yoğunlukta bir azalma göstermektedir. Panel C'de gösterilen eğitim sonrası vokalizasyon; süre, yoğunluk, bant genişliği ve frekans modülasyonunun vokalizasyon eğitimi sonrası bazal seviyelere nasıl döndüğünü kanıtlamaktadır. Bu videoyu izledikten sonra, sıçanların ultrasonik vokalizasyonlarının nasıl eğitileceği, kaydedileceği ve analiz edileceği konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.

targeted-training-ultrasonic-vocalizations-aged-parkinsonian

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

İlaç öz-yönetim ve ultrasonik seslenmelere (USV) hayvanlar üzerinde yapılan araştırmalar davranış değerlendirmeler olarak kullanılan, ancak nadiren kombinasyonu. Bu makalenin amacı, duygusal tepkilerin ilaç deneyimi değerlendirmek için ilaç öz-yönetim işlemleri sırasında kayıt USVs avantajlarını anlatmak için.

Sıçanlar İlaç Öz-yönetim sırasında Ultrasonik seslenmelere Değerlendirilmesi

Farelerde ultrasonik seslendirmeler (USV'ler) yaşa, cinsiyete, duruma ve genetik geçmişe bağlı olarak farklılık gösterir. Farklı konumlarda aynı anda yayın yapan iki ultrason yayıcı kullanan bu iki seçenekli test, USV'lerin farklı özelliklerine göre murin tanıma ve tercih yanıtlarını değerlendirebilir.

Bir iki seçim Oynatma Testi kullanarak Fare Ultrasonik Seslendirme Tercihleri ​​belirlenmesi

Burada, sıçanlarda Pavlovian koşullu yaklaşım davranışını ortaya çıkarmak için bir protokol sunuyoruz. Bu prosedür, ödülle ilgili ipuçlarına yaklaşma ve teşvik belirginliği atfetme eğilimindeki bireysel farklılıkları ölçmek ve bağımlılık savunmasızlığını araştırmak için kullanılabilir.

Sıçanlar Pavlovyan Koúullanmıú Yaklaşım Eğitimi

Fare ultrasonik seslendirmeleri, nöropsikiyatrik bozukluklar için fare modellerinde sesli iletişim eksikliklerinin genetik temellerini modellemek için vekil olarak kullanılır. Mevcut protokol, yavrulardan (gelişim boyunca) ve yetişkin farelerden (aynı cinsiyetten etkileşimler, erkek-kızgınlık dişi etkileşimleri) ultrasonik seslendirmeleri güvenilir bir şekilde ortaya çıkaran üç deneysel bağlamı açıklamaktadır.

Fare Ultrasonik seslenmelere kayıt Sosyal İletişim değerlendirin

Fareler, ultrasonik vokalizasyonlar (USV'ler) gibi karmaşık bir multisylabic repertuar üretirler. Bu USV'ler, nöropsikiyatrik bozukluklar için okundu olarak yaygın olarak kullanılmaktadır. Bu protokol, fare şarkılarının akustik özelliklerini ve sözdizimini sürekli olarak teşvik etmek, toplamak ve analiz etmek için öğrendiğimiz ve geliştirdiğimiz bazı uygulamaları anlatmaktadır.

Erkek Fare Ultrasonik Seslendirme (USV) Şarkılarından Yararlanma ve Analiz Etme

Burada, sistemik olarak ve direkt olarak sıçan yaşlanmasına bağlı laringeal kasların yeniden şekillendirilmesi için nevrotropin 4'ü (NTF4) tanımlamak için bir protokol sunuyoruz.

Osmotik Pompalar veya Doğrudan Kas Enjeksiyonu Kullanılarak Subkutanöz Neurotrophin 4 İnfüzyonu, Yaşlanan Farenin Larinks Kaslarını Arttırır

Bu protokol, histokimyasal nöromüsküler çalışma için sıçan vokal kıvrımları hazırlamak için kullanılan yöntemleri açıklar.

Nöromüsküler Analizler için Sıçan Vokal Kıvrımının Hazırlanması

Bu protokol, olayla ilgili potansiyel tekniği uygulayarak sesli-dokunsal duyusal ikamede kısa bir eğitim süresinden sonra derin sağırlığı olan deneklerde öğrenmeyle ilgili elektrofizyolojik değişikliklerin altında yatan değişiklikleri araştırmak için tasarlanmıştır.

Derin Sağırlığı Olan Katılımcılarda Sesli Dokunsal Duyusal İkame Eğitiminin Olayla İlgili Potansiyel Tekniği Kullanılarak Değerlendirilmesi

Laboratuvar fare ve fare ultrasonik seslendirmeleri (USV'ler), ses ve sinir fonksiyonlarını incelemek için faydalıdır. Bu protokol, çiftleşme ile ilgili sorunlar olmadan iştah açıcı USV'leri güvenilir şekilde ortaya çıkaran bir gıda-ödül paradigmasını tanımlar. Hayvan koşullandırma, uyarıcı sunum, kayıt ve akustik analizleri detaylandırarak, duygusal motivasyonel ve kafatası sensorimotor fonksiyonlarını incelemek için tekrarlanabilir bir yöntem sunar.

Laboratuvar sıçanları ve farelerde iştah açıcı ultrasonik seslendirmelerin önleyici gıda-ödül çıkarılması

Locomotion genellikle, nöroloji ve ortopedi gibi alanlarda çeşitli hastalık modellerinde bir davranış sonucu olarak incelenir. Bu video kağıt dizginlenmemiş lokomosyon sırasında sıçan zemin reaksiyon kuvvetleri ve kinematik toplamak için bir yöntem tarif etmek niyetindedir.

Kinematik ve Zemin Mukabele Gücü&#39;nün Belirlenmesi: Genç Yetişkin, Orta yaşlı ve Geriatrik Sıçanlar, bir gösteri miktarının Lokomotor Yetenekler

Öğrenin Parkinson hastalığı ve yaşlanma modellerinde sıçanların ultrasonik vokalizasyonlarını artırmak için hedefe yönelik davranışsal eğitim protokolü. Pozitif pekiştirme ile ses karmaşıklığını ve sayısını artırma yöntemini keşfedin.

Yaşlı ve Parkinson Sıçanlar Ultrasonik seslenmelere Hedefe Yönelik Eğitim

Daha fazla video keşfet