Name: Nükleik Asitler, Proteinler ve Küçük Moleküller Reagentless Algılama Elektrokimyasal DNA Biyosensörler Fabrikasyon (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-06-01T13:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 15 s
Description: Öğrenin, elektrokimyasal DNA sensörlerinin üretimini ve nükleik asitler, proteinler ve küçük moleküllerin reagentless algılanmasını. Bu yöntem, karmaşık biyolojik matrislerde biyobelirteç tespiti için güvenilir bir araç sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışma, Büyük Zorluklar İncelemeler Girişimi ve GM062958-01 ve 2R01EB002046 hibe yoluyla NIH tarafından hibe (OPP1015402) Bill ve Melinda Gates Vakfı tarafından finanse edildi. Bu çalışma Sözleşme DE-AC52-07NA27344 altında kısmen ABD Enerji Bakanlığı&#39;nın Lawrence Livermore Ulusal Laboratuvarı tarafından himayesi altında yapıldı.

1. Sahne Ayarı <ol><li> Biosearch Teknolojileri (Novato, CA) veya Midland Sertifikalı (Midland, TX) gibi özel bir oligonükleotid sentez şirketi, kimyasal olarak değiştirilmemiş ilgili prob DNA satın alın. Prob, 3'-sonunda ek bir C6 tiyol ve 5'-sonunda bir redoks aktif metilen mavisi sentezi sırasında güncellenmiştir. </li><li> Fosfat prob DNA çözülür 200 mcM bir konsantrasyon tamponlu salin pH 7.4 ve bir spektrofotometre ile 260 nm dalga boyunda absorbans ölçümü ile konsantrasyon doğrulamak. DNA prob metilen mavisi benzer parçaları nedeniyle çözüm görünür bir mavi tonu olmalıdır. </li><li> Taze distile, deiyonize su (DI-su), 10 mM tris (2-carboxyethyl) fosfin TCEP çözüm 1 mL hazırlamak. 4 ° C'de karanlıkta saklandığında deneyimlerimiz, bu TCEP çözümleri, bir hafta süreyle taze kalır </li><li> Prob DNA çözümü mevcut olabilecek herhangi bir disülfür bağları azaltmak için, prob DNA stok solüsyonu 1 mcL TCEP çözüm 2 mcL ile birleştirmek ve bir pipet yardımıyla hafifçe karıştırın. Karışımı bir karanlık, buzdolabında bir kap içinde bir saat boyunca inkübe edin. TCEP geri dönüşümlü metilen mavisi azaltır başlangıçta mavi bir çözüm haline gelmelidir. Çözüm açık duruma değilse, oda sıcaklığında, büyük olasılıkla, taze bir TCEP çözümü kullanarak prosedürü tekrarlayın veya. </li><li> Bir saat sonra, 1 ml tampon ile azaltılmış DNA prob çözeltinin; 200nm bir konsantrasyon sulandırmak. Daha sonra, bu seyreltilmiş prob çözüm 200 mcL porsiyonlar halinde altın disk elektrotlar bir dizi inkübe olacaktır. </li><li> Taze 2mm mercaptohexanol en az 2 mL hazırlamak fosfat tamponlu salin. </li></ol> 2. Sensör Hazırlanması <ol><li> Ince bir polisaj bezi su ile 0.05 mikron alümina toz birleştirin. Elektrot başına yaklaşık üç dakika için sekiz desen altın yüzeyi ıslak bir bez içine sıkıca basarak, bir rakam taşıyarak bir dizi altın disk elektrotlar (CH Instruments, Austin, Teksas) Lehçe. </li><li> DI-su ile durulayın ve cilalı elektrotlar ile aynı dolu Eppendorf tüpleri içine batırmayın. Herhangi bir kalıntı alümina toz kaldırmak için beş dakika sonikasyon. </li><li> 0.5 M sülfürik asit çözeltisi içine elektrotlar yerleştirin, platin sayacı ve gümüş / gümüş klorür referans elektrot ile birlikte bir potansiyostat ekleyebilirsiniz ve voltamogramları okside azaltmak ve elektrokimyasal yüzeyleri temizlemek için bir dizi çalıştırın. Bu 0.01 M KCl çözeltisi 0,1 M sülfürik asit ikinci bir elektrokimyasal temizlik gerçekleştirmek ardından. Bu temizleme prosedürleri ince ayrıntıları Nature Protokolleri kağıt 1, ve bu video ekinde bulunabilir. </li><li> 2 ml Eppendorf tüpleri rafa bir dizi düzenleme ve 200 mcL prob DNA çözümü ile her doldurun. Bu çözüm prob DNA konsantrasyonu prob DNA'lar paketi sensör yüzeyinde yoğunluk tanımlamak olacaktır. Algılayıcı performansını optimum yoğunluğuna sahip bir sensör mimarisi sonraki değişik prob yoğunluğuna kuvvetle bağlı Bu aşamada kullanılan prob konsantrasyon ve böylece her yeni tip sensör 2 için optimize edilmiş olmalıdır . Prob mimarileri için bugüne kadar araştıran, prob DNA konsantrasyonları tipik bir değeri olan 200 nM, bu adım aralığı 15 nM 2 mikron istihdam. </li><li> DI-su ile altın disk elektrotlar durulayın ve sonra bir saat için bir Eppendorf tüp ilgili prob DNA çözüm batırmayın. Bu noktada, prob DNA tiol-on altın kendini monte tek tabaka oluşumu yoluyla altın elektrot yüzeyine eklenecektir. </li><li> Elektrotlar DI-su ile durulayın, bir Eppendorf tüp 2mm mercaptohexanol onları batırmayın ve kendini monte monolayer oluşumunu sağlamak için oda sıcaklığında bir gecede 3 saat boyunca karanlık bir yerde saklayın. Bu adım, istikrarlı bir tek tabaka oluşumu sağlamak için karma bir tek tabaka parçası olarak mercaptohexanol içermektedir. Buharlaşmasını önlemek için parafilm Eppendorf tüp içine elektrod mühür isteyebilirsiniz. Sensörler, gerekirse birkaç gün boyunca bu çözüm saklanabilir. </li><li> Sensörü kullanmak için hazır olduğunuzda, DI-su ile yıkayın ve sonra en az on dakika boyunca tampon ıslatın. Antikor tespiti yönelik sensörler aynı zamanda son derece hızlı bir tampon ile durulayın takip kullanmadan önce ilgili tanıma iplikçik 100 nM çözüm dalmış olmalıdır. </li></ol> 3. Sensör Testi, DNA Algılama <ol><li> Bu protokol, 17 nükleotid prob iplikçik altın elektrot yapıştırılmıştır. 3'-sonunda bir metilen mavisi redoks muhabiri (Şekil 1). Prob molekülü bir yakalama iplikçik hybridizes, sensör devre üzerinden akım azalır. </li><li> DI-su ile durulayın ve taze bir sensör boş bir daldırmayınörnek ürettiği arka plan sinyalini kaydetmek için hedef eksik. Bir potansiyostat çalışma elektrot kurşun sensörü takın. Platin elektrot ve çözelti içine bir gümüş / gümüş klorür referans elektrot yerleştirin. </li><li> 0 ile 25 mV bir genlik ve 1mV bir adım boyutu -0.6 V kare dalga ölçümü çalıştırın. Optimal kare dalga frekansı prob mimarisi 2,3 ayrıntılarını bağlıdır; prob mimarileri için 600 Hz - 60 aralığında genellikle optimal değerleri istihdam var. Yaklaşık -0.35 V, metilen mavisi redoks potansiyeli (pik potansiyeli test çözümü kesin pH bağlı olarak biraz değişebilir) yuvarlak bir tepe göreceksiniz. Bu tepe akımı başlangıçtan itibaren yüksekliği, metilen mavisi ve altın elektrot (Şekil 2) arasındaki verimliliği elektron transferi ile doğru orantılıdır. Bu arka plan ölçüm kaydedin. </li><li> Ilgi hedef DNA molekülü içeren bir çözüm için elektrotlar Taşı, dengelenmesi (5 ila 120 dakika target4 5, büyüklüğü, yapısı ve konsantrasyonuna bağlı) ve ikinci bir kare dalga voltammagram toplamak. Başlangıç, arka plan ölçüm -0.35 V tepe yüksekliği değişecektir. Bu değişimin büyüklüğü analit konsantrasyonu ile ilgilidir. Bu sensörün asıl çıkış verileri (Şekil 3). </li><li> Ölçüm bağıl sinyal değişikliği, yüzde azalma veya artış arka plan zirvesine göre sinyal, elektrot yüzey alanı varyasyonları için bu düzeltir, genellikle akım mutlak değişim ölçüm daha tekrarlanabilir. Bunu yapmak için, mevcut arka plan tepe tepe ve arka tepe akımı arasındaki fark ayrılır. </li></ol> 4. Sensör Yenilenme <ol><li> Ölçümler tamamlandıktan sonra, DI-su akışı ile 30 saniye 30 saniye DI-suyla dolu bir kabın içine sensör taşımak, veya fışkırtma Taze deiyonize su ile bu iki kez daha tekrarlayın. Not: bazı analitler Bu yaklaşıma dirençli; onları 6 M guanidin hidroklorür veya% 70 etanol durulama agresif denemek için. </li><li> Sensör ölçümleri yapılacaktır bir çözüm içine geri koyun. Bir dakika içinde, zirve yüksekliği özgün değerine geri olmalıdır. Bu sensörler genellikle ilk test ve yenilenme döngüsü sırasında biraz daha büyük sinyal değişikliği ve sonraki 6 döngüleri sırasında oldukça tutarlı sonuçlar sergilediği fazlalaştı. </li></ol> 5. Sensör Test, Antikor Algılama <ol><li> Bu protokol, bu sensörlerin kullanılan metilen mavisi ve tiyol modifiye DNA prob, "çapa" iplikçik 7 olarak hizmet vermektedir . Altın elektrot doğrudan bağlı. Bu daha sonra ilgili antijen (Şekil 4) kovalent konjuge olan ikinci bir "tanıma" DNA iplikçik melezleşmiştir. Biz gerekli olan DNA-antijen kimeralar sentezi için Biosearch Teknolojileri ve Panagene gibi ticari sentez evler, iyi bir şans oldu. 1 saat süreyle PBS içinde ilgili tanıma DNA zincirinde 100 nM içeren bir Eppendorf tüp içine prefabriklerin sensörü transfer hibridizasyon adım tarafından yürütülmektedir. </li><li> Ilgili boş çözüm sensörü yerleştirin. Bir potansiyostat çalışma elektrot kurşun takın ve çözüm içine bir platin elektrot ve gümüş / gümüş klorür referans elektrot yerleştirmek. </li><li> Yukarıda açıklandığı gibi kare dalga voltametri gerçekleştirin. Özel bir prob mimarisi için en uygun kare dalga frekansı 60 Hz burada istihdam var. -0.35 Etrafında yuvarlak bir tepe görmek V. Bu arka plan ölçüm kaydet gerekir. </li><li> 5 ila 60 dakika süreyle inkübe hedef analit içeren bir çözüm için elektrotlar aktarın ve ikinci bir kare dalga voltammagram toplamak. Hedef antikor varsa -0.35 V tepe azalacaktır. Bu değişimin büyüklüğü antikor konsantrasyonu ile ilgili. </li></ol> 6. Sensör Test, Küçük Molekül Algılama <ol><li> Bu durumda, sensör yüzeyinde prob molekül (in vitro hedefine analit 8,9 bağlayıcı üzerine (kıvrım) yapısı değişiklikleri belirli bir moleküler analit bağlamak için seçilmiş olan bir DNA veya RNA molekülü bir aptamer Şekil 5). Burada Stojanovic 10,11 laboratuvarı tarafından geliştirilen bir kokain bağlayıcı DNA aptamer istihdam etmektedir. </li><li> DI-su ile durulayın ve taze bir sensör ürettiği arka plan sinyalini kaydetmek için hedef yoksun boş bir örnek batırmayın. Bir potansiyostat çalışma elektrot kurşun sensörü takın. , Platin sayacı ve gümüş / gümüş klorür referans çözelti içine yerleştirin. </li><li> Yukarıda açıklandığı gibi kare dalga voltametri gerçekleştirin. Biz burada istihdam prob mimarisi için en uygun kare dalga frekansı (200HzAma 60 Hz) çalışır. -0.35 Etrafında yuvarlak bir tepe görmek V. Bu arka plan ölçüm kaydet gerekir. </li><li> Hedef analit içeren bir çözüm için elektrotlar Transferi, yaklaşık 5 dakika boyunca inkübe ve ikinci bir kare dalga voltammagram toplamak. -0.35 V tepe yüksekliği değişecektir. Bu değişimin büyüklüğü hedef analit konsantrasyonu ile ilgili. Örnek bir kokain, prokain elde edemiyorsanız, düzensiz olduğu kullanımı, bir yedek olarak kullanılabilir olabilir. </li></ol> 7. Temsilcisi Sonuçlar: Ilk mimarisini kullanarak DNA tespit etmek için kullanılan, sinyal en az% 60 azalma 200 nM hedef az dengelenmiş. Deiyonize su üç kısa durular sonra, sinyal özgün değerine çok yakın (% 0,1-5 içinde) dönmelidir. Antikor sensörleri 40 ila% 80 arasında bir sinyal azalma yapılmalıdır. Kokain tespit Aptamer tabanlı sensörler faaliyet hangi frekansta ve yüzey kapsama bağlı olarak% 200 kadar bir sinyal artışı gösterirler. Kokain sensörü için, düşük yüzey kapsama en iyi 3. <img src="/files/ftp_upload/2922/2922fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1 bir elektrokimyasal DNA biyosensör ile DNA tespiti. <img src="/files/ftp_upload/2922/2922fig2.jpg" alt="Şekil 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2 kare dalga voltametri sırasında E-DNA biyosensör tarafından üretilen sinyal gösteren ekran görüntüsü. <img src="/files/ftp_upload/2922/2922fig3.jpg" alt="Şekil 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 3"> Şekil 3 kare dalga voltametri sırasında E-DNA biyosensör tarafından üretilen sinyalleri gösteren bir analit ile hibridizasyon öncesi ve sonrası ekran görüntüsü. <img src="/files/ftp_upload/2922/2922fig4.jpg" alt="Şekil 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 4"> Şekil 4 bir iskele biyosensör antikorların tespiti. <img src="/files/ftp_upload/2922/2922fig5.jpg" alt="Şekil 5" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 5"> Şekil 5, bir elektrokimyasal aptamer biyosensör ile kokain ya da prokain Algılama . <table border="1"><tbody><tr><td> Özel Oligo </td><td> Dizi </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> Lineer Prob DNA (LP17) </td><td> 5'-HS-(CH2) 6-TGGATCGGCGTTTTATT-(CH2) 7-NH-MB-3 ' </td><td> HPLC Saflaştırılmış, SS ile sipariş edilebilir </td></tr><tr><td> Hedef analit DNA </td><td> AATAAAACGCCGATCCA </td><td> Değiştirilmemiş </td></tr><tr><td> Tanıma Strand </td><td> 5'-Antijen-TEG-CAGTGGCGTTTTATTCTTGTTACTG-3 ' </td><td></td></tr><tr><td> İskele Anchor </td><td> 5'-HS (CH 2) 6-GCAGTAACAAGAATAAAACGC CACTGC (CH 2) 7 MB </td><td> HPLC Saflaştırılmış, SS ile sipariş edilebilir </td></tr><tr><td> A4 Kokain Aptamer </td><td> 5'-HS-AGACAAGGAAAATCCTTCAATGAAGTGGGTCG MethyleneBlue-3 ' </td><td> HPLC Saflaştırılmış, SS ile sipariş edilebilir </td></tr></tbody></table> Tablo 1. Probe ve Hedef DNA dizileri.

<ol><li>Xiao, Y., Lai, R. Y., Plaxco, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+electrode-immobilized%2C+redox-modified+oligonucleotides+for+electrochemical+DNA+and+aptamer-based+sensing%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Protocols%22%5BJournal%5D)">Preparation of electrode-immobilized, redox-modified oligonucleotides for electrochemical DNA and aptamer-based sensing.</a> Nat. Protocols. 2, 2875-2880 (2007).</li>
<li>Ricci, F., Lai, R. Y., Heeger, A. J., Plaxco, K. W., Sumner, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+Molecular+Crowding+on+the+Response+of+an+Electrochemical+DNA+Sensor%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Effect of Molecular Crowding on the Response of an Electrochemical DNA Sensor.</a> Langmuir. 23, 6827-6834 (2007).</li>
<li>White, R. J., Phares, N., Lubin, A. A., Xiao, Y., Plaxco, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+Electrochemical+Aptamer-Based+Sensors+via+Optimization+of+Probe+Packing+Density+and+Surface+Chemistry%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Optimization of Electrochemical Aptamer-Based Sensors via Optimization of Probe Packing Density and Surface Chemistry.</a> Langmuir. 24, 10513-10518 (2008).</li>
<li>Lubin, A. A., Vander Stoep Hunt, B., White, R. J., Plaxco, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Probe+Length%2C+Probe+Geometry%2C+and+Redox-Tag+Placement+on+the+Performance+of+the+Electrochemical+E-DNA+Sensor%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Effects of Probe Length, Probe Geometry, and Redox-Tag Placement on the Performance of the Electrochemical E-DNA Sensor.</a> Analytical Chemistry. 81, 2150-2158 (2009).</li>
<li>Lubin, A. A., Plaxco, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Folding-Based+Electrochemical+Biosensors%3A+The+Case+for+Responsive+Nucleic+Acid+Architectures%5BTitle%5D)+AND+%22Accounts+of+Chemical+Research%22%5BJournal%5D)">Folding-Based Electrochemical Biosensors: The Case for Responsive Nucleic Acid Architectures.</a> Accounts of Chemical Research. 43, 496-505 (2010).</li>
<li>Lubin, A. A., Lai, R. Y., Baker, B. R., Heeger, A. J., Plaxco, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sequence-Specific%2C+Electronic+Detection+of+Oligonucleotides+in+Blood%2C+Soil%2C+and+Foodstuffs+with+the+Reagentless%2C+Reusable+E-DNA+Sensor%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Sequence-Specific, Electronic Detection of Oligonucleotides in Blood, Soil, and Foodstuffs with the Reagentless, Reusable E-DNA Sensor.</a> Analytical Chemistry. 78, 5671-5677 (2006).</li>
<li>Cash, K. J., Ricci, F., Plaxco, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Electrochemical+Sensor+for+the+Detection+of+Protein%3FSmall+Molecule+Interactions+Directly+in+Serum+and+Other+Complex+Matrices%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">An Electrochemical Sensor for the Detection of Protein?Small Molecule Interactions Directly in Serum and Other Complex Matrices.</a> Journal of the American Chemical Society. 131, 6955-6957 (2009).</li>
<li>Baker, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Electronic%2C+Aptamer-Based+Small-Molecule+Sensor+for+the+Rapid%2C+Label-Free+Detection+of+Cocaine+in+Adulterated+Samples+and+Biological+Fluids%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">An Electronic, Aptamer-Based Small-Molecule Sensor for the Rapid, Label-Free Detection of Cocaine in Adulterated Samples and Biological Fluids.</a> Journal of the American Chemical Society. 128, 3138-3139 (2006).</li>
<li>Ferapontova, E. E., Olsen, E. M., Gothelf, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+RNA+Aptamer-Based+Electrochemical+Biosensor+for+Detection+of+Theophylline+in+Serum%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">An RNA Aptamer-Based Electrochemical Biosensor for Detection of Theophylline in Serum.</a> Journal of the American Chemical Society. 130, 4256-4258 (2008).</li>
<li>Stojanovic, M. N., Landry, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aptamer-Based+Colorimetric+Probe+for+Cocaine%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">Aptamer-Based Colorimetric Probe for Cocaine.</a> Journal of the American Chemical Society. 124, 9678-9679 (2002).</li>
<li>Stojanovic, M. N., Prada, P. de, Landry, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aptamer-Based+Folding+Fluorescent+Sensor+for+Cocaine%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">Aptamer-Based Folding Fluorescent Sensor for Cocaine.</a> Journal of the American Chemical Society. 123, 4928-4931 (2001).</li>
<li>Cash, K. J., Heeger, A. J., Plaxco, K. W., Xiao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimization+of+a+Reusable%2C+DNA+Pseudoknot-Based+Electrochemical+Sensor+for+Sequence-Specific+DNA+Detection+in+Blood+Serum%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Optimization of a Reusable, DNA Pseudoknot-Based Electrochemical Sensor for Sequence-Specific DNA Detection in Blood Serum.</a> Analytical Chemistry. 81, 656-661 (2009).</li>
<li>Xiao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Electrochemical+Sensor+for+Single+Nucleotide+Polymorphism+Detection+in+Serum+Based+on+a+Triple-Stem+DNA+Probe%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">An Electrochemical Sensor for Single Nucleotide Polymorphism Detection in Serum Based on a Triple-Stem DNA Probe.</a> Journal of the American Chemical Society. 131, 15311-15316 (2009).</li>
<li>Zuo, X., Xiao, Y., Plaxco, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+Specificity%2C+Electrochemical+Sandwich+Assays+Based+on+Single+Aptamer+Sequences+and+Suitable+for+the+Direct+Detection+of+Small-Molecule+Targets+in+Blood+and+Other+Complex+Matrices%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">High Specificity, Electrochemical Sandwich Assays Based on Single Aptamer Sequences and Suitable for the Direct Detection of Small-Molecule Targets in Blood and Other Complex Matrices.</a> Journal of the American Chemical Society. 131, 6944-6945 (2009).</li>
<li>Xia, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Electrochemical+Supersandwich+Assay+for+Sensitive+and+Selective+DNA+Detection+in+Complex+Matrices%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">An Electrochemical Supersandwich Assay for Sensitive and Selective DNA Detection in Complex Matrices.</a> Journal of the American Chemical Society. 132, 14346-14348 (2010).</li>
<li>Patterson, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+Triplex-Forming+Oligonucleotide+Probes+for+the+Reagentless%2C+Electrochemical+Detection+of+Double-Stranded+DNA%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Using Triplex-Forming Oligonucleotide Probes for the Reagentless, Electrochemical Detection of Double-Stranded DNA.</a> Analytical Chemistry. 82, 9109-9115 (2010).</li>
<li>Ferguson, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrated+Microfluidic+Electrochemical+DNA+Sensor%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Integrated Microfluidic Electrochemical DNA Sensor.</a> Analytical Chemistry. 81, 6503-6508 (2009).</li>
<li>Swensen, J. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Continuous%2C+Real-Time+Monitoring+of+Cocaine+in+Undiluted+Blood+Serum+via+a+Microfluidic%2C+Electrochemical+Aptamer-Based+Sensor%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Chemical+Society%22%5BJournal%5D)">Continuous, Real-Time Monitoring of Cocaine in Undiluted Blood Serum via a Microfluidic, Electrochemical Aptamer-Based Sensor.</a> Journal of the American Chemical Society. 131, 4262-4266 (2009).</li>
</ol>

Önemli bir not bu elektrotlar düzgün bir şekilde temizlenir sürece yukarıda açıklanan deneyler hiçbiri düzgün çalışması. Burada, bizim elektrokimyasal temizleme prosedürü için bir rehber. CH Instruments potentiostats ile çalışırken, bir dizi üç makro programları kullanarak bu temizleme adımları çalıştırın. Faz Sıfır (E temiz O) 0.5MH 2 SO 4 elektrotlar bırakın ve bir potansiyostat çalışma elektrotlara bağlayın. Ayrıca bir Ag / AgCl referans ve platin elektrot takın ve bırakın. Sonra bir oksidasyon adım (5 saniye 2 V) ve bir azalma adım (10 s için 0,35 V) ile başlayın. Phase One (E-temiz 1) 0,35 ila 1,5 V (20 tarama hızı az dört tarama takip 4 V / s tarama hızı 0.01 V tarar ve bir örnekleme aralığı, aynı asidik şartlar altında (0.5MH 2 SO 4), oksidasyon ve redüksiyon taramaları başlatın 0,1 V / s ve 0.01 V bir örnek aralığı). Aşama (E-temiz 2) Dört farklı potansiyel aralıkları (0.1 V s 1 tarama hızı ve 0.01 V örnek aralığı 10 segmentleri için yapılan kapsayan asidik şartlar altında (0,01 M KCl/0.1 MH 2 SO 4) elektrokimyasal oksidasyon ve redüksiyon taramaları başka bir set Davranış ): (i) 0.2 ila 0.75 V potansiyel aralığı, (ii) 0.2 ila 1.0 V potansiyel aralığı, (iii) 0.2 &#39;den 1.25 V potansiyel aralığı, 0.2 ila 1.5 (iv) potansiyel aralık V. Birçok altın elektrot tipleri, bu deneyler için kullanılabilir. Burada istihdam edilenler gibi altın disk elektrotlar ek olarak, biz microfabricated altın yüzeyler, altın tel, baskılı devre kartları üzerinde yer alan altın ve başarılı oldu. Bu yazıda anlatılan sensörleri ile birlikte, diğer pek çok elektrokimyasal DNA biyosensör mimarileri bildirilmiştir. Bu pseudoknot 12 ile sensörler, üçlü iplikçik 13, sandviç 14, süper sandviç 15 veya tripleks 16 mimarisi içerir. Gelecekte, biz bu sensörler bakım tıbbi teşhis noktası olacağını bekliyoruz. Onlar birkaç mikroakışkan cihazlar 17,18 içine başarıyla entegre optik analit algılama sistemleri üzerinden pek çok avantajı sunan edilmiştir. Özellikle, bu sensörlerin optik yoğun ve yüksek oto-floresan örnekleri, bulanık işlev görebilir.

<table border="1"><tbody><tr><th> Reaktifin Adı </th><th> Şirket </th><th> Katalog numarası </th><th> Yorumlar (isteğe bağlı) </th></tr><tr><td> Altın Disk Elektrotları </td><td> CH Aletleri </td><td> CHI101 </td><td> Yeniden kullanılabilir </td></tr><tr><td> Sentetik koruyucu Probe DNA </td><td> Biosearch Teknolojileri </td><td> Özel </td><td></td></tr><tr><td> Sentetik Hedef DNA </td><td> Sigma Genosys </td><td> Özel </td><td></td></tr><tr><td> Mercaptohexanol </td><td> Sigma Aldrich </td><td> 725.226-1G </td><td> Serin karanlık bir yerde saklayın </td></tr><tr><td> Platin Elektrot </td><td> Basi </td><td> MW-1032 </td><td> Yeniden kullanılabilir </td></tr><tr><td> Ag / AgCl Referans </td><td> Basi </td><td> MF-2052 </td><td> Yeniden kullanılabilir </td></tr><tr><td> Kumaş Parlatma </td><td> Buehler </td><td> 40-7212 </td><td></td></tr><tr><td> Alümina Lehçe </td><td> Buehler </td><td> 40-6325-016 </td><td></td></tr><tr><td> Fosfat tamponlu salin Tampon, pH 7.4 </td><td> Sigma Aldrich </td><td> P7059-1L </td><td></td></tr><tr><td> CH Aletleri 605A </td><td> CH Aletleri </td><td> 605A </td><td> Herhangi bir potansiyostat kullanın. </td></tr><tr><td> Yenidoğan Buzağı Serumu </td><td> Sigma Aldrich </td><td> N4637-500ML </td><td> Dondurularak saklanmalıdır </td></tr><tr><td> NanoDrop </td><td> Fisher Scientific </td><td> ND-2000 </td><td> UV-Vis kullanın </td></tr><tr><td> PCR Mix </td><td> Bio-Rad </td><td> 170-8862 </td><td> Dondurularak saklanmalıdır </td></tr><tr><td> Kokain </td><td> Sigma Aldrich </td><td> C5776 </td><td> Gerekli DEA Lisans </td></tr><tr><td> Prokain </td><td> Sigma Aldrich </td><td> P9879 </td><td> Kokain yerine </td></tr><tr><td> Anti-Bayrak Antikor </td><td> Sigma Aldrich </td><td> F1804-1mg </td><td></td></tr></tbody></table>

nükleik asitler, proteinler ve küçük moleküller reagentless algılama elektrokimyasal dna biyosensörler fabrikasyon

Fabrication of Electrochemical-DNA Biosensors for the Reagentless Detection of Nucleic Acids, Proteins and Small Molecules

Tıp şu an uygulandığı şekliyle, doktorlar örneklerin test etmek için bir merkez laboratuara göndermek ve böylece sonuç almak için saat veya gün beklemeniz gerekir. Birçok hasta, daha iyi, hızlı, başucu testleri ile hizmet olacaktır. Bu amaçla laboratuar ve diğerleri, nükleik asitler (DNA, RNA), proteinler (antikorlar dahil) ve küçük moleküller analitler doğrudan işlenmemiş klinik ve çevre örneklerinde kantitatif, reagentless, elektrokimyasal algılama destekleyen çok yönlü, reagentless bir biyosensör platformu geliştirdi. Bu video, biz, bu &quot;E-DNA&quot; sınıfı birkaç biyosensörler hazırlanması ve kullanımını göstermek. Özellikle, biz imal ve polimeraz zincir reaksiyon karışımının bir HIV spesifik antikor ve uyuşturucu kokain bir hedef DNA dizisi tespiti için sensörler göstermek. Hazırlık prosedürü hakkında uygulamalı bir gecelik inkübasyon tarafından takip çaba sadece üç saat gerektirir ve bunların kullanımı, sadece birkaç dakika gerektirir.

&quot;E-DNA&quot; sensörleri, reagentless, kan ve diğer karmaşık matrisler doğrudan meydan bile iyi bir performans elektrokimyasal biyosensörler, nükleik asit, protein ve küçük molekül analitler geniş bir algılama için adapte edilmiştir. Burada bu tür sensörlerin üretimi ve kullanımı için genel bir prosedür mevcut.

Nükleik Asitler, Proteinler ve Küçük Moleküller Reagentless Algılama Elektrokimyasal DNA Biyosensörler Fabrikasyon

Günümüzde tıp uygulamalarında doktorlar, test edilmesi için örnekleri merkezi bir laboratuvara gönderirler ve bu nedenle sonuçları almak için saatlerce veya günlerce beklemek zorunda kalırlar. ...

Bu prosedürün genel amacı, elektrokimyasal DNA sensörlerini hazırlamak ve kullanmaktır. Bu işlem, öncelikle prob DNA'sının indirgenmesi ve ardından sensörlerin üzerine inşa edildiği altın elektrotların temizlenmesiyle gerçekleştirilir. Prosedürün bir sonraki adımı, prob DNA'sı içeren tiyol bazlı bir altın üzerinde kendi kendine düzenlenmiş tek tabakanın altın elektrotlar üzerine kaplanmasıdır.Ardından, altın elektrot yüzeyi merkaptoetanol ile geri doldurulur. Tam ve düzgün bir monotabaka oluşumunu sağlamak için prosedürün son adımı, sensörlerin ve tampon, idrar, serum veya kan gibi örneklerin kullanılmasıdır. Sonuç olarak, kare dalga veya alternatif akım voltajlarının pik akımındaki değişimler aracılığıyla analit konsantrasyonlarını gösteren sonuçlar elde edilebilir.Bu sensörler, birçok farklı biyobelirteci ve ilaç molekülünü doğrudan idrar veya serumda tespit edebildikleri için bu teknik, moleküler tanıda geniş kapsamlı uygulamalara sahiptir. Araştırma grubumdaki lisansüstü öğrencisi Bay Aaron Rowe, prosedürü uygulamalı olarak gösterecektir. Kendisine, bizimle birlikte çalışan iki doktora sonrası araştırmacı Dr. Ryan White ve Dr. Andrew Bonham eşlik edecektir.İşleme başlamak için, özel bir oligonükleotid sentez şirketinden ilgili prob DNA'sını satın alın; prob, sentez sırasında beş prime ucuna altı karbonlu bir tiyol ve üç prime ucuna redoks aktif metilen mavisi eklenerek modifiye edilmiştir. Prob DNA'sını, metilen mavisi kısmından kaynaklanan görünür mavi renkte bir çözelti elde edecek şekilde çözün. Bir spektrofotometre kullanarak 260 nanometrede absorbsiyonunu ölçüp konsantrasyonunu doğrulayın; prob DNA çözeltisinde bulunabilecek disülfit bağlarını indirgeyin. Bir mikrolitre prob DNA stok çözeltisini, taze hazırlanmış iki mikrolitre TEP çözeltisi ile birleştirin.Elde edilen çözeltiyi bir pipetle nazikçe karıştırın. Karışımı karanlık, soğutmalı bir kapta bir saat boyunca inkübe edin. İnkübasyon sırasında, TEP metilen maviyi tersinir şekilde indirgedikçe mavi çözelti berraklaşmalıdır.Ardından, indirgenmiş DNA prob çözeltisini PBS tamponu ile genellikle 25 ve 1000 arasında olan istenen konsantrasyona kadar seyreltin. Ano molar sensör hazırlığı, 0,05 mikron Illumina tozunun ince bir parlatma bezi üzerinde suyla birleştirilmesiyle başlar. Altın disk elektrot setini parlatmak için bu bezi kullanın; altın yüzeyi ıslak beze sıkıca bastırarak her bir elektrot için yaklaşık üç dakika boyunca sekiz çizerek hareket ettirin.Durulama işleminin ardından parlatılmış elektrotları deiyonize su ile durulayın. Elektrotları deiyonize su ile doldurulmuş EOR tüplerine daldırın. Ardından, kalıntı Illumina tozunu uzaklaştırmak için elektrotları beş dakika boyunca sonikasyona tabi tutun.Sonikasyondan sonra, elektrotları 0,5 molar sülfürik asit çözeltisine yerleştirin. Ardından, çözeltiye bir platin karşı elektrot ve bir gümüş/gümüş klorür referans elektrot yerleştirip bunları bir potansiyostat cihazına bağlayın. Daha sonra, elektrot yüzeylerini elektrokimyasal olarak temizlemek için bir dizi voltamperometre çalışması gerçekleştirin.Bu prosedürlerin ayrıntıları, bu videonun yazılı ekinde ve bu grup tarafından daha önce yayımlanmış bir nature protocols makalesinde yer almaktadır. Bunu takiben, önceden açıklanan prosedüre uygun olarak, sülfürik asit içindeki KCl çözeltisinde ikinci bir elektrokimyasal temizleme işlemi gerçekleştirin. Ardından, bir dizi iki mililitrelik einor tüpünü bir raka yerleştirin ve her birini 200 µL prob DNA çözeltisi ile doldurun.Bu çözeltideki prob DNA konsantrasyonu, prob DNA'nın sensör yüzeyine paketlenme yoğunluğunu belirleyecektir ve her yeni sensör tipi için optimize edilmelidir. Altın disk elektrotları deiyonize su ile durulayın. Ardından, elektrotları bir ependorf tüpündeki ilgili prob DNA çözeltisine bir saat boyunca daldırın.Bu aşamada, prob DNA'sı, altın üzerinde bir tiyol kendi kendine düzenlenen tek tabaka oluşumu aracılığıyla altın elektrot yüzeyine bağlanacaktır. Elektrotları tekrar deiyonize su ile duruladıktan sonra, bir eppendorf tüpü içindeki iki milimolar merkaptoetanol çözeltisine daldırın. Bu işlem, yüzeyi geri doldurarak tam ve kararlı bir kendi kendine düzenlenen tek tabaka oluşumunu sağlar.Buharlaşmayı önlemek için elektrotları parafilm ile einor tüpün içine mühürleyin. Kendi kendine düzenlenmiş tek katmanın tamamen oluşmasını sağlamak için daldırılmış elektrotları karanlık bir yerde, oda sıcaklığında üç saatten bir geceye kadar saklayın. İnkübasyon sonrası sensörü kullanıma hazırlamak için sensörü deiyonize su ile durulayın ve ardından en az 10 dakika boyunca tampon çözelti içinde bekletin.Sensörler ile DNA deteksiyonu, beş prime ucundaki bir tiyol aracılığıyla altın elektroda sabitlenmiş 17 nükleotidlik bir prob dizisi kullanılarak gösterilmiştir; prob, üç prime ucunda bir metilen mavisi redoks raporlayıcı içerir. Prob molekülü bir yakalama dizisi ile hibridize olduğunda, sensör tarafından üretilen elektrokimyasal akım azalır. Başlamak için, yeni bir sensörü deiyonize su ile durulayın ve boş bir numuneye daldırın.Arka plan sinyalini kaydetmek için, 25 milivolt genlikte ve bir milivolt basamak voltajıyla, sıfırdan negatif 0,6 volta kadar bir kare dalga ölçümü gerçekleştirilir. Optimal kare dalga frekansı, prob mimarisinin detaylarına bağlı olacaktır. Metilen mavinin redoks potansiyeli olan yaklaşık negatif 0,25 volta denk gelen bölgede yuvarlak bir pik görülmelidir.Bu pikin temel akım yüksekliği, metilen mavisi ile altın elektrot arasındaki elektron transferi verimi ile orantılıdır. Bu arka plan ölçümünü kaydedin. Ardından, elektrotları ilgilenilen hedef DNA molekülünü içeren bir çözeltiye taşıyın ve dengelenmelerini bekleyin.Alternatif olarak, hedef DNA'nın sensörlerin daldırıldığı çözeltiye eklenmesi mümkündür. İkinci bir kare dalga voltammogramı kaydedin. -0.25 volt'taki pik yüksekliği, başlangıçtaki arka plan ölçümüne göre değişiklik gösterecektir.Bu değişimin büyüklüğü, analitin konsantrasyonu ile ilişkilidir. Bu, sensörün temel çıktı verisidir. Ölçümün ardından, göreceli sinyal değişimini hesaplayın.Yüzey alanındaki elektrottan elektrota farklılıkları düzelttiği için, bu yüzde genellikle akımdaki mutlak değişimi ölçmekten daha tekrarlanabilirdir. İşlem tamamlandıktan sonra sensör, antikor tespiti için hazırlanan beraberindeki yazılı prosedürde açıklandığı şekilde yeniden oluşturulabilir. Sensörlerde, metilen mavisi ve tiyol modifiyeli DNA, bir çapa zinciri görevi görerek doğrudan altın elektroda bağlanır.Ardından, ilgili antijene kovalent olarak konjuge edilmiş ikinci bir tanıma DNA zinciri ile hibridizasyon gerçekleştirilir. Bunu, spesifik bir antikor hedefi ile inkübasyon takib eder. Önceden hazırlanmış sensörü, 100 nano molar ilgili tanıma dizisi içeren bir ependorf tüpüne aktararak hibridizasyon adımını gerçekleştirin.Sensörü bir saat boyunca PBS içindeki DNA zinciriyle inkübe edin. Boş çözeltiye geçmeden önce, hibridize olmamış probları uzaklaştırmak için sensörü PBS tamponuna daldırın. Ardından, sensörü ilgili boş çözeltiye yerleştirin ve çözeltinin içine bir platin karşıt elektrot ile bir gümüş/gümüş klorür referans elektrot yerleştirin.Elektrotları potansiyostata bağlayın. Daha önce açıklandığı şekilde kare dalga voltametrisini gerçekleştirin; bu örnekte kullanılan özel prob mimarisi için optimal kare dalga frekansı 60 hertz'dir. Negatif 0,25 volt civarında yuvarlak bir pik görülmelidir.Bu arka plan ölçümünü kaydedin. Beş ila 60 dakikalık bir inkübasyonun ardından elektrotları hedef analiti içeren bir çözeltiye aktarın ve ikinci bir kare dalga voltampereogramı toplayın. Hedef antikor mevcutsa, negatif 0,25 voltteki pik azalacaktır.Bu değişimin büyüklüğü, antikor konsantrasyonu ile ilişkilidir. Küçük molekül tespitini göstermek için, sensör yüzeyindeki prob DNA'sı bir aptr'dir. Aptr, belirli bir moleküler analite bağlanmak üzere in vitro ortamda seçilmiş bir DNA veya RNA molekülüdür.Aptamerler, yapılarını değiştirmek amacıyla sıklıkla yeniden tasarlanabilirler. Bu tür bir bağlanma sonucunda, burada kullanılan aptima, kokain ilacına bağlandığında konformasyonunu değiştirir.Başlamak için, yeni bir sensörü deiyonize su ile durulayın ve arka plan sinyalini kaydetmek amacıyla hedef madde içermeyen boş bir numuneye daldırın. Ardından, çözeltiye bir platin karşıt elektrot ve bir gümüş/gümüş klorür referans elektrot yerleştirin. Elektrotları bir potansiyostatın uçlarına bağlayın, kare dalga veya alternatif akım voltametrisi gerçekleştirin.Daha önce açıklandığı üzere, burada kullanılan özel prob mimarisi için optimal kare dalga frekansı 60 hertz'dir. Yine, negatif 0.25 volt civarında yuvarlatılmış bir pik görülmeli ve bu değer arka plan ölçümü olarak kaydedilmelidir. Ardından elektrotları, hedef analiti içeren bir çözeltiye aktarın.32. inkübasyonun ardından, ikinci bir kare dalga veya alternatif akım voltamperogramı kaydedin. -0.25 volt seviyesindeki pikin yüksekliği değişecektir. Bu değişimin büyüklüğü, hedef analitin konsantrasyonu ile ilişkilidir.Burada açıklanan prob mimarisine sahip DNA biyosensörleri, DNA tespitinde elektrokimyasal olarak kullanıldığında, sinyal en az %60 oranında azalmalıdır. Deiyonize su ile üç kez kısa süreli durulamanın ardından 200 nanomolar hedef ile dengelendiğinde, sinyal orijinal değerinin %0,1 ile %5'i arasındaki bir seviyeye geri dönmelidir. Benzer şekilde, burada açıklanan sensörler antikor tespitinde kullanıldığında, antikor bağlanması üzerine sinyal %40 ile %80 arasında azalmalıdır. Aksine, kokain tespiti için aptamer tabanlı sensörler, küçük moleküllerin bağlanması üzerine %200'e kadar sinyal artışı sergiler.Bu değişimin büyüklüğü, elektrokimyasal sorgulama frekansına ve sensörlerdeki yüzey kaplamasına bağlıdır. Kokain sensörü için görece düşük bir yüzey kaplaması en iyisidir. Uzmanlaşıldığında, bu sensörlerin üretimi ve kullanımı tek bir günde gerçekleştirilebilir.Bu prosedürü uygularken, kare dalga frekansı veya elektrot yüzeyindeki prob yoğunluğu gibi parametrelerin sensör performansını büyük ölçüde etkilediğini unutmamak önemlidir. Bu videoyu izledikten sonra elektrokimyasal, DNA biyosensörleri, aptamer biyosensörleri ve iskele biyosensörlerinin nasıl hazırlanacağını ve bunları çok çeşitli temel ölçümler için nasıl kullanacağınızı öğrenmiş olacaksınız. Bu protokoldeki tek önemli tehlike, açıkça korozif olan sülfürik asit kullanımıdır; göz koruması ve eldiven kullanımı zorunludur.

fabrication-electrochemical-dna-biosensors-for-reagentless-detection

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Biz hızlı bakteri bulunması ve belirlenmesi için bir elektrokimyasal sensör test yöntem açıklanmaktadır. Tahlil, ribozomal RNA (rRNA) türe özgü dizileri için DNA oligonükleotid probları yakalama fonksiyonuna sahip bir sensör dizisi içerir. Yakalama prob ve yaban turpu peroksidaz bağlı DNA oligonükleotid dedektör prob ile hedef rRNA Sandwich melezleme ölçülebilir bir amperometrik akım üretir.

Elektrokimyasal Sensörler kullanarak Bakteriyel Algılama ve Tanıma

Biz cihaz imalat ve karbon nanotüp tabanlı yüksek frekans biyosensörler için ölçü protokol açıklar. Yüksek frekans algılama tekniği temel iyonik (Debye) tarama etkisi azaltır ve geleneksel elektronik biyosensörler başarısız yüksek iyonik gücü çözümleri ameliyat olmak için nanotüp biyosensör sağlar. Teknolojimiz noktası bakım (POC) fizyolojik gerekli koşulların faaliyet gösteren elektronik biyosensör için benzersiz bir platform sağlar.

Yüksek İyonik Güç Çözümleri Algılama için karbon Nanotube Yüksek Frekans nanoelektronik Biyosensör Fabrikasyon

Biz DNA hibridizasyon tespiti için mikroakışkan tabanlı elektrokimyasal Bioçip sunuyoruz. SsDNA probu fonksiyonlandırmalar ardından, özgüllük, duyarlılık ve algılama limiti tamamlayıcı ve non-ssDNA hedefleri ile incelenmiştir. Sonuçlar 3.8 nM'lik bir algılama sınırı ile, elektro-kimyasal sistemine DNA hibridizasyonu olaylarının etkisini göstermektedir.

Etiket-serbest DNA Hibridizasyon Analiz için mikroakışkan tabanlı Elektrokimyasal Biochip

Asimetrik ferrosen türlerinin sentezi, çözüm teknikleri kullanılarak zordur.  Bu rapor, katı faz sentezi yoluyla gerçekleştirilen kolay ve temiz reaksiyonlar kullanılarak bir ferrosen-biyotin biyokonjugatı üretmek için gerçekleştirilen yöntemlere odaklanmaktadır.  Bir tiolat parçasının dahil edilmesinin, altın yüzeyler üzerinde hareketsizleştirme yeteneği kazandırdığı gösterilmiştir.

Katı Faz Reçine-tabanlı Metodoloji aracılığıyla Asimetrik Ferrosen Türetilmiş Bio-konjuge Sistemleri Sentetik Metodoloji

Cihazın hazırlanması ve nanotel yüzeyinde bir DNA moleküler probunun immobilizasyonu ve doğrulanmasının yanı sıra DNA algılama koşulları da dahil olmak üzere polisilikon nanotel alan etkili transistörler kullanarak biyoalgılama için temel adımları açıklıyoruz.

Kimya ve Biyoalgılayıcı Uygulamaları için Silikon Nanotel Alan etkili Transistör hazırlanması

Nükleik asitler, biyolojik sistemleri değerlendirmek için yaygın analitlerdir; ancak, enzimatik manipülasyondan kaynaklanan yanlılık endişeye neden olabilir. Burada, polianilin kullanılarak nükleik asitlerin etiketsiz tespiti için bir yöntem açıklanmaktadır. Bu hassas, uygun maliyetli sensör teknolojisi, moleküller arasındaki tek nükleotid farklılıklarını ayırt edebilir.

Nükleik Asitlerin bir Polyaniline tabanlı sensör

Bir mikrosıvısal Biyoalgılayıcı platform tasarlanmıştır ve çeşitli analitlerin hızlı ve hassas miktar için düşük maliyetli kuru film fotorezist teknolojisi kullanılarak imal edilmiştir. Bu tek kullanımlık sistem-küçük parça-immobilize enzim bağlı deneyleri elektrokimyasal göstergesi için stop-akış tekniği yoluyla sağlar.

Kuru zar elektrokimyasal mikrosıvısal Biyoalgılayıcı fotorezist tabanlı Platform: Cihaz imalat, On-chip tahlil hazırlama ve sistemin çalışması

Vibrio parahaemolyticus algılamak için polylactic asit-sağlamlık, altın nano tanecikleri değiştirilme tarihi, Serigrafi karbon elektrot oluşan bir elektrokimyasal DNA biyoalgılayıcı geliştirilmesi için bir protokol sunulmuştur.

Gıda kaynaklı patojen tespit etmek için bir elektrokimyasal DNA biyoalgılayıcı gelişimi

İmalat yöntemi iyi interdigitated elektrotlar için (boşluk ve Genişlik: 20 µm) bir şırınga iğnesi ucunda (çapı: 720 µm) fotolitografi sürecinde bir sprey kaplama ve bükülgen ince tabaka photomask kullanarak gösterilmiştir.

Fotorezist sprey kaplama ve esnek Photomask Biyomedikal uygulamalarda kullanarak Hipodermik iğne ucu üzerinde ince elektrotlar imalatı

Vitro seçimi ve gruba özgü maddedir asit ester-bağlama DNA aptamers karakterizasyonu için bir protokol sunulmuştur. Bir elektrokimyasal aptasensor içinde seçilen aptamer uygulanması da dahil edilir.

Maddedir asit Ester-bağlama DNA Aptamer seçimi, karakterizasyonu ve elektrokimyasal bir Aptasensor uygulamaya

DNAzyme tabanlı nanomakineler, nükleik asitlerin son derece seçici ve hassas tespiti için kullanılabilir. Bu makale, özgür yazılım kullanılarak 10-23 çekirdekli DNAzyme tabanlı nanomakinelerin tasarımı için ayrıntılı bir protokolü ve örnek olarak bir Epstein-Barr virüs parçasının tespitinde uygulanmasını açıklamaktadır.

DNAzyme 10-23 - Nükleik Asit Tanıma için Tabanlı Nanomakineler

Öğrenin, elektrokimyasal DNA sensörlerinin üretimini ve nükleik asitler, proteinler ve küçük moleküllerin reagentless algılanmasını. Bu yöntem, karmaşık biyolojik matrislerde biyobelirteç tespiti için güvenilir bir araç sunar.

Nükleik Asitler, Proteinler ve Küçük Moleküller Reagentless Algılama Elektrokimyasal DNA Biyosensörler Fabrikasyon

Daha fazla video keşfet