Genetik Olarak Tasarlanmış Fare Modellerinde Prostat Kanserinin Modellenmesi: Fare Ön Prostat Lob Hücrelerinde CRISPR/Cas9 Aracılı Lokalize Gen Düzenleme Tekniği
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Kanser Araştırmaları
0 görüntülenme • 4:40 dk. • April 30th, 2023
Güçlü bir yukarı akış promotörü tarafından Cas9 endonükleazlarını ve yeşil floresan proteinlerini veya GFP'leri eksprese etmek için tasarlanmış bir genom taşıyan, anestezi uygulanmış ve hazırlanmış bir CRISPR / Cas9 knock-in fare modeliyle başlayın. Normal koşullar altında Cas9 ve GFP transkripsiyonunu promotör bloklarının hemen aşağısına yerleştirilen floxed-STOP kaseti veya LSL.
Seminal veziküle bağlı ön prostat lobunu ortaya çıkarmak için farenin karın duvarını kesin. Hücrelere hedeflenen viral genom iletimini kolaylaştırmak için istenen adenoviral süspansiyonu ön loba enjekte edin. Prostat lobunu karın boşluğuna geri yerleştirin ve kesiyi dikin.
Virüs ile enfekte olmuş hücreler içinde, viral genom, mutasyona uğrayacak geni hedefleyen Cre rekombinaz enzimlerini ve kılavuz RNA'ları eksprese eder. Cre enzimleri LSL kasetini tanır ve floxed transkripsiyon blokerini eksize eder. Bu adım, promotörün Cas9 endonükleazlarının ve GFP'lerin ekspresyonunu yönlendirmesine izin verir.
Daha sonra, Cas9 endonükleazları, bu kompleksleri mutasyona uğratılacak gen içindeki hedef diziye yönlendiren virüs kodlu kılavuz-RNA'larla kompleksler oluşturur. Bu lokalizasyon, Cas9 endonükleazının hedef gen
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin