October 1st, 2007
Civciv bıldırcın kuruntulardan ve odak boya etiketleme dahil olmak üzere çeşitli yaklaşımlar kullanarak hücre kaderi harita deneyler için embriyo erişilebilirlik kolaylığı sağladı. Bu yazıda, uzun sağkalım süreleri için optimize edilmiş bir yumurta hazırlama yöntemi göstermektedir.
Kramer Laboratuvarı'na hoş geldiniz. Ben Matt Korn, California Irvine Üniversitesi Nörobiyoloji ve Davranış Bölümü'ndenim. Bugün size boncuk yerleştirme, boya enjeksiyonu veya yumurta keşfi dahil olmak üzere çeşitli manipülasyonlar için tavuk yumurtalarını nasıl hazırlayacağınızı göstereceğim.
O halde lafı daha fazla uzatmadan başlayalım. Tamam, öyleyse devam edeceğiz ve yumurtayı temizleyeceğiz. Bunun nedeni, kuluçka makinesine yerleştirilebilecek pek çok şey olmasıdır.
Bunu bantla mühürleyeceğiz. Pencerenin yumurtayı alacağı yerde küçük parçaların dolaşmasını ve embriyonun onu çıkarmak istediğimiz zaman ölme şansını artırmasını istemiyoruz. Yani kuluçka makinesinden gördüyseniz, yumurtalar büyük tarafı yukarı bakacak şekilde oturuyor.
Yapacağımız şey, devam edip yumurtayı alıp yana çevirmek. Ve bu iki şey yapacak. Birincisi, penceremiz tam burada olacak ve ikincisi, embriyonun tepeye doğru yüzmesi gerekiyor ki her türlü manipülasyonu yapabilelim.
Bu yüzden burada kuluçka makinesindeki raftan bir karton yumurta tutucusuna kadar birkaç tane hazırlayacağım. Bu aslında yumurtalar teslim edildiğinde kutuya gelen parçadır. Bu yüzden bugün için, devam edeceğiz ve sadece yumurtaları tutmak için kullanacağız.
Şimdi düzenleme size kalmış. Bu şekilde yapmayı seviyorum çünkü tüm yumurtalara istediğim zaman erişebiliyorum ve hiçbiri birbirine değmiyor. Gevşek olan, çatlağı olan bir tane bulsaydım ve onu düşürseydim, hepsinin birbirinden biraz boşluğu var.
Bu yüzden devam edeceğim ve gazlı bezimi buraya getireceğim ve bunun gibi güzel bir yığın çıkarıp ikiye böleceğim. Burada %70 alkol alacağım ve dibinin nemlendiğini hissedene kadar dolduracağım. Ve işte bu yüzden tüm bu yığını tüm yumurtaları temizlemek için kullanacağım.
O zaman üstten birkaç tane alacağım, devam edeceğim ve gerçekten üstünü yapacağım ama aslında burada neredeyse tüm yumurtanın etrafından dolaşacağım. Ve bu yapıldıktan sonra, alkol oldukça hızlı bir şekilde kurur ve sonra devam edip üzerine bant koyabiliriz. Bant güzelce yapışacak ve bir seti bitirdiğimde, genellikle ilki kurur ve yumurta hazırlamamızda bir sonraki adıma geçebiliriz.
Yine, onu tekrar çöp kutusuna atın ve bir sonraki adıma geçmeye hazırız. Tamam, şimdi tüm yumurtalarımız alkolle temizlendiğine göre, devam edip yumurtanın büyük tarafına, yumurtanın tabanına bir tahliye deliği açabiliriz. Ve bu içeri girip bir miktar albümin çıkarmamıza izin verecek çünkü albümini çıkarmazsak embriyo düzgün bir şekilde oturmaz.
Herhangi bir manipülasyon yapamayız. Yani bu sadece benim bir bıçak almamı ve bu plastik bandı almamı içeriyor. Biraz elastik, ki bu harika.
İstediğimizden biraz daha büyük olan bir deliğin üzerinden genişlememize izin vermekle kalmaz, aynı zamanda tüm yumurtayı kapladığımızda, bunu germemiz gerekecek. Böylece pencerenin olacağı alan tamamen kaplıdır. Bu yüzden devam edeceğim ve parçayı bu şekilde keseceğim ve sonra yaklaşık milimetrelik bir şerit yapacağım.
Ve bundan yaklaşık bir milimetre kare bant parçası yapabilirim. Ve sonra bundan devam edeceğim ve onu tarihin hemen soluna yerleştireceğim. Sadece oraya koy ve görebilirsin.
Çok güzel yapışıyor. Sonra daha önce yaptığım şeride geri dönebilir, başka bir milimetrelik bant parçası kesebilirim. Ve yine, onu oradaki sayının soluna yerleştirin, bu aslında yumurtanın üst kısmıdır.
Şimdi onu yana çevirdiğimize göre, sağa doğru. Ve burada bir parça daha. Şimdi eldiven giymiyorum çünkü eldiven giymek bu bandın eldivenlere yapışmasına neden olacak ve ellerimi yıkadım.
Bu noktada aktif olanı kirleten başka bir şey hakkında gerçekten endişelenmiyorum. Bu yüzden devam edeceğim ve keskin uçlu bir makas alacağım. Bandı yerleştirdiğim yerin ortasına gideceğim ve sadece saat yönünün tersine çevireceğim, ta ki içini doldurana kadar, birazcık kırılana kadar.
Ve orada küçük bir delik olduğunu göreceksiniz. Şimdi deliğin çok büyük olmasına gerek yok çünkü bu şırıngayı oraya soktuğumuzda, deliği yeterince büyük yapacak. Ama bu yüzden doğrudan bir iğne ile içeri girmiyoruz ve bununla yumurtayı kırmaya çalışmıyoruz çünkü çoğu zaman bu, yumurtanın tüm tarafının parçalanmasına yol açacaktır.
O zaman yumurtayı daha fazla kullanamayız. Tamam, şimdi devam edeceğim ve yumurtayı boşaltacağım. Yan tarafta küçük bir delik var ve ben bu 10 mililitrelik şırıngayı ve oldukça büyük bir iğneyi kullanarak albümini çıkaracağım.
Şimdi yaklaşık üç ya da dört mililitre istiyorum, kesinlikle üçten fazla, dört buçuk ya da beşten fazla değil. Bu, şu anda üstte oturan embriyomuzun kabuktan biraz uzağa düşmesine izin verecektir. Ve sonra manipülasyonlarımızı yapabileceğiz.
Yani 45 derecelik bir açıyla girerek, sarının altındayım. Ve sonra biraz sağa çevirmek istiyorum, sadece oraya gizlice girmek için ve iğne ucunun yumurtanın dibine değdiğini hissedebilirsiniz. Ve devam edeceğim ve üç ya da dört tanesini çıkaracağım ve oldukça güzel bir şekilde ortaya çıkıyor.
Devam edeceğim ve o albümini burada bel kovama koyacağım ve şimdi diğer yumurtalarla devam edebilirim. Tamam, öyleyse devam edeceğim ve devam edeceğim. Ve burada göreceksiniz ki, boşaltma için açtığım delik istediğimden biraz daha büyük, ama bunun iyi olduğu ortaya çıkıyor.
Endişelenmek istediğim şey, iğneyi batırırken artık onu kırmadığım. Bu yüzden devam edeceğim ve bunu yapacağım. Tamam, yumurtanın içinde biraz çatlak olduğunu şimdiden görebiliyorum.
Şimdi küçük çatlaklar tamam, ancak yumurtanın başka bir düzlemine uzandığında endişelenmeniz gerekiyor. Ve bu durumda öyle. Bunu delikten görebilirsiniz.
Hemen hemen tepeye kadar uzanır. Ve aslında, penceremizin oturacağı yer burası. Ne yazık ki bu yumurta için, gidip bunu atmak zorunda kalacağız.
Ve onu atmanın özel bir yanı yok. Belirli bir protokol veya başka bir şey yazmanıza gerek yok. Sadece devam edip atık kovasına koyacağım.
Bu siyah çöp kutularını hayvan atığı olarak tanımlamak için kullanıyoruz, ancak bunun dışında zaten halledildi. Bir sonraki yumurtaya geçebiliriz. Tamam, artık tüm yumurtalarımızı boşalttığımıza göre, devam edip boşaltma deliğini kapatabiliriz.
Şimdi bu önemli çünkü eğer kuvözün içine girmezsek, albüminden geriye kalan her şeyi muazzam bir şekilde buharlaştırabiliriz. Ve sonra kuru bir yumurta, ölü bir yumurtadır. Bu yüzden devam edeceğiz ve aynı boyutta bant alıp deliğin üzerine yerleştireceğiz ve bu deliğe tekrar girme konusunda endişelenmemize gerek kalmayacak.
Bazı durumlarda, bir yumurtadan daha fazla albümin boşaltmayı denemek istediğinize karar verirseniz, bir kez açıldıktan sonra, bu delik daha sonra bir iğne batırabileceğiniz ve çok fazla albümin kaybetmeyeceğiniz kapalı bir alan gibi davranır. Tamam, öyle mi? Tamam, şimdi devam edeceğiz ve yumurtaları güzel boyutta bir bantla kapatacağız.
Ve ben bunu, içine küçük bir iğne koymadan önce bir balonun üzerine bir parça bant koymaya benzetiyorum. İşin güzel yanı, balonun patlamaması ve bu durumda yumurtanın üzerine küçük bir bant yapıştırılması. Yumurta birden fazla yerde çatlamaz ve daha sonra pencere kapatılabilir ve sonra pencere kapandığında, bant kullandığımız için, güzel bir küçük conta oluşturur ve herhangi bir buharlaşma konusunda endişelenmemize gerek yoktur.
Gördüğünüz gibi, bandın boyutu büyük, muhtemelen şimdiye kadar kestiğim en büyük bant, ama o zaman bile devam edeceğim ve onu biraz gereceğim ve gerçekten sadece çekeceğim, orada biraz gerginlik olacak ve yumurtanın üzerine yerleştireceğim. Ve ben buranın arkasından geçeceğim ve yumurtanın üzerine çok dikkatli bir şekilde gereceğim, böylece penceremin olacağı yerde kırışıklık kalmayacak. Ve bandı biraz sıfırlayabilirsiniz.
Endişelenmen gereken o kadar çok yapışmıyor. Bir kez sıkıştığında, sıkışıp kalır. Ve burada gördüğünüz gibi genel bir alan, ben burada pencereyi kesip açacağım.
Tamam, şimdi tüm yumurtaların üzerinde bant olduğuna göre, devam edip üstüne bir pencere kesebiliriz. Bu en zor kısım olabilir ve çoğu zaman yumurtalarınızın çoğunu kaybedeceğiniz yer burasıdır. Bu yüzden devam edeceğim ve üzerinde alkol olan gazlı bezle makasımı güzelce sileceğim ve sonra devam edip sadece kurutacağım.
Alkol hemen hemen kendi kendine kurur, ancak alkolün doğrudan yumurtaya girmesini istemezsiniz. Bu yüzden kasetin olduğu yerin ortasına gideceğim ve tekrar, biraz çatladığını duyana kadar saat yönünün tersine hareketi kullanacağım. Ve sonra bıçağımın içeride olduğunu biliyorum.
Ve sonra makasımı yumurtanın yüzeyine neredeyse düz gelecek şekilde çıkarmak istiyorum. Ve sonra tüm makas parçasını oraya sokana kadar küçük keskin nişancılar yapın. Ve yaklaşık yarım daire yaptıktan sonra diğer tarafa geri döneceğim ve daireyi tamamlamak istemiyorum çünkü bir pencere istiyorum, ama sonra devam edip yumurtayı açabilirim.
Ve şu anda beklediğim yaştalar var gibi görünüyor, çok fazla kan damarları yok, ama embriyonun oturduğu yerde, esas olarak kan şimdi başladığı ve kalp atışının gittiği delion bölgesinden biraz kan var. Bu yüzden onu kapatacağım, sadece bu şekilde üstüne oturmasına izin vereceğim ve tekrar geleceğim ve devam edeceğim ve pencereleri kapatacağım. Ve yine, sadece, sadece yüzeye düz bir şekilde ve diğer tarafa geri dönün.
Ve tamam, burada birkaç baloncuk var ve embriyonun yan tarafa gittiği ortaya çıktı. Şimdi şu anda yapabileceğimiz iki şey var. Bol miktarda yumurtamız varsa ve her birini kullanma konusunda endişeli değilsek, devam edip bunu atabiliriz.
Ya da yapabileceğimiz şey, pencereyi kapatıp embriyonun tekrar istediğimiz yere doğru yüzeceği şekilde ayarlamak. Ve manipülasyonlarımızda ona ulaştığımız zaman, istediğimiz yerde olabilir. Değilse, o zaman atabiliriz.
Yani burada yaptığım şey sadece bir açıyla ayarlamak. Biraz albümin akıntısına sahip olacaksınız, ancak bu embriyonun olması gereken yere geri dönmesine yardımcı olacak. Tamam, şimdi tüm bu pencerelere sahip olduğumuza göre, kapalı olduklarından emin olmalıyız ve herhangi bir manipülasyon yapmadan önce sadece kapatılmalarını istiyoruz.
Ve sonra devam edip yumurtayı tekrar kapatabiliriz. Ancak açık bir penceremiz varsa, bazen boyunduruk dışarı kayabilir. Bir odadan diğerine yürürken yumurtanın biraz devrildiğini biliyorsanız, her şeyin düşmesini istemezsiniz.
Tek yaptığım bir milimetre uzunluğunda, ya da üzgünüm, milimetre genişliğinde, muhtemelen üç, iki veya üç milimetre uzunluğunda plastik bant parçası kesmek. Ve ben onu tam ortasına koymayı seviyorum. Ve eğer onu yumurtanın önüne çekebilirsem, o zaman biraz sıkı olur.
Ve pencerenin nereye oturduğunu, diğer bandın tam da nerede olduğunu, pencereyi nerede kestiğimizi görebilirsiniz ve bu onu bu sefer için oldukça sızdırmaz hale getiriyor. Demek istediğim, devam edeceğiz ve sadece bir dakika içinde bazı manipülasyonlar yapacağız, bu yüzden tamamen hava geçirmez olması gerekmiyor. İşte yumurtalarınızı bu şekilde hazırlar ve sergilersiniz.
Deneylerinizde iyi şanslar.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
Bu makale, nörobiyolojik deneylerde çeşitli manipülasyonlar için tavuk yumurtalarının hazırlanma yöntemini sunmaktadır. Teknik, uzun süreli hayatta kalma süreleri için optimize edilmiş olup, hücre kaderi haritalaması üzerine yapılan çalışmaları kolaylaştırmaktadır.
This method enables reliable access to chicken embryos for developmental studies, supporting target validation in neurobiology research. By optimizing survival times through a simple windowing technique, it reduces experimental variability and improves data consistency for mechanistic studies. The approach facilitates early-stage hypothesis testing in a disease-relevant system, enhancing predictive confidence in target engagement and pathway modulation.
The method fits within the early discovery continuum, supporting hypothesis generation and mechanistic exploration before lead identification. It enables reproducible preparation of embryos for downstream applications in screening and validation workflows.