SARS-CoV-2'yi Görselleştirmek için İmmüno-RNA Floresan In Situ Hibridizasyonun Kullanılması
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 2:59 dk. • July 8th, 2025
Sabit ve geçirgen koronavirüs ile enfekte olmuş Vero hücrelerini alın - interferon eksikliği olan bir memeli hücre hattı.
Konağın içinde, viral RNA, transkripsiyon yoluyla sentezlenen spesifik viral proteinleri kodlayan orta uzunlukta RNA molekülleri olan subgenomik veya sgRNA'lar olarak bulunur.
Hibridizasyon zincir reaksiyonu veya HCR başlatıcı probları ekleyin.
HCR probu, hedef RNA üzerindeki tamamlayıcı dizisine bağlanır.
Floresan etiketli oligonükleotid firkete probları, H-1 ve H-2'yi tanıtın.
Başlatıcı prob, tamamlayıcı H1 kuyruğuna bağlanarak firkete yapısını doğrusallaştırır.
Açıkta kalan H1 dizisi, tamamlayıcı H2 kuyruğuna bağlanır.
Takip eden H2 dizisi, bir H1 kuyruğuna bağlanmaya devam eder, hedef alanın etrafındaki floresan etiketli probları yükseltir ve sağlam bir sinyal üretir.
Konak hücre hücre iskeletini görselleştirmek için uygun antikorlar ekleyin.
DAPI kullanarak çekirdekleri boyayın.
Floresan mikroskobu altında, virüsle enfekte olmuş hücreler sitoplazmada kırmızı floresan gösterir ve bu da hedef RNA'nın varlığını gösterir.
Metin el yazmasında açıklandığı gibi hücreleri sabitledikten ve geçirgen hale getirdikten sonra, 1x PBS çözeltisini kuyulardan çıkarın ve her
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin