SARS-CoV-2'yi Görselleştirmek için İmmüno-RNA Floresan In Situ Hibridizasyonun Kullanılması

JoVE Encyclopedia of Experiments

İmmünoloji

0 görüntüleme • 2:59 dk • July 8th, 2025

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Sabit ve geçirgen koronavirüs ile enfekte olmuş Vero hücrelerini alın - interferon eksikliği olan bir memeli hücre hattı.

Konağın içinde, viral RNA, transkripsiyon yoluyla sentezlenen spesifik viral proteinleri kodlayan orta uzunlukta RNA molekülleri olan subgenomik veya sgRNA'lar olarak bulunur.

Hibridizasyon zincir reaksiyonu veya HCR başlatıcı probları ekleyin.

HCR probu, hedef RNA üzerindeki tamamlayıcı dizisine bağlanır.

Floresan etiketli oligonükleotid firkete probları, H-1 ve H-2'yi tanıtın.

Başlatıcı prob, tamamlayıcı H1 kuyruğuna bağlanarak firkete yapısını doğrusallaştırır.

Açıkta kalan H1 dizisi, tamamlayıcı H2 kuyruğuna bağlanır.

Takip eden H2 dizisi, bir H1 kuyruğuna bağlanmaya devam eder, hedef alanın etrafındaki floresan etiketli probları yükseltir ve sağlam bir sinyal üretir.

Konak hücre hücre iskeletini görselleştirmek için uygun antikorlar ekleyin.

DAPI kullanarak çekirdekleri boyayın.

Floresan mikroskobu altında, virüsle enfekte olmuş hücreler sitoplazmada kırmızı floresan gösterir ve bu da hedef RNA'nın varlığını gösterir.

Metin el yazmasında açıklandığı gibi hücreleri sabitledikten ve geçirgen hale getirdikten sonra, 1x PBS çözeltisini kuyulardan çıkarın ve her oyuğa en az 300 mikrolitre amplifikasyon tamponu ekleyin. Numuneleri oda sıcaklığında 30 dakika inkübe edin. İstenilen hacmi ayrı tüplerde hızlı bir şekilde soğutarak her bir HCR saç tokasını hazırlayın.

300 mikrolitre amplifikasyon çözeltisi hazırlamak için her saç tokasından 18 pikamole kullanın. Saç tokası solüsyonunu tüplere aktarın ve 95 santigrat derecede 90 saniye inkübe edin. Ardından, karanlıkta 30 dakika oda sıcaklığına soğutun. Çıtçıtla soğutulmuş H1 ve H2 saç tokalarını amplifikasyon tamponuna ekleyerek bir saç tokası karışımı hazırlayın. Parafilm üzerine 30 ila 50 mikrolitre saç tokası karışımı damlatın ve numuneleri gece boyunca karanlıkta oda sıcaklığında inkübe edin.

Slaytları monte etmek için, iki adet 10 mikrolitrelik montaj ortamı damlasını bir slayt üzerine yerleştirin ve damlaların iki lamel üzerine tek bir lamel yerleştirilmesine izin verecek kadar ayrıldığından emin olun. Lamelleri temiz bir havluya vurarak fazla sıvıyı çıkarın. Ardından, hücreler aşağı bakacak şekilde solmaya karşı koruma sağlayan montaj ortamına yerleştirin. Monte edilen numuneleri karanlıkta kuru ve düz bir yüzeye yerleştirin ve kürlenmelerine izin verin.

08:26

ve Doğan RNA FISH ile kopyalanma Analizi İn Vivo Trofoblast Dev Hücreler ya da İn Vitro Ectoplacental Koni Eksplantlarından kısa vadeli Kültürler

İlgili videolar

0 Görüntüler

06:44

Çift iplikçikli RNA ve desen tanıma reseptörleri negatif anlamda RNA virüsü enfeksiyonu confocal görüntüleme

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:58

Caenorhabditis elegans Bağırsaklarında Mikrobiyal Kolonizasyon ve Enfeksiyonu Görselleştirmek için RNA Floresan in situ Hibridizasyon (FISH)

İlgili videolar

0 Görüntüler

20:47

Aynı zamanda Virüs CD8 + T Hücreleri ve virüsle enfekte olan hücreleri görselleştirin için bir Tekniği In situ

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:16

Floresans tarafından viral RNA tespit edilmesi In situ Hibridizasyon (FISH)

İlgili videolar

0 Görüntüler

13:22

Floresan Nöronal Dokularda Kalıcı DNA Virüs Genomu ve Transkriptlerinin Algılama In situ Melezleme immün ile birlikte

İlgili videolar

0 Görüntüler

05:23

Immuno RNA-Floresan In Situ Hibridizasyonu Kullanılarak SARS-CoV-2'nin Görselleştirilmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

10:25

Psödovirüs Enfeksiyonunun Yüksek Verimli Floresan Görüntülemesi Kullanılarak SARS-CoV-2 Nötralize Edici Antikorların Tespiti

İlgili videolar

0 Görüntüler

07:08

Çok Katlı Boncuk Tabanlı Akış Analiz Sistemi için Hızlı, Çok Katlı Çift Muhabir IgG ve IgM SARS-CoV-2 Nötralizasyon Tahlil

İlgili videolar

0 Görüntüler

08:41

K18 hACE2 Transgenik Farelerde Viral Enfeksiyonun Canlı Görüntülenmesi ve Raporlayıcı İfade Eden Rekombinant SARS-CoV-2 Kullanılarak Ölçülmesi

İlgili videolar

0 Görüntüler

Son güncelleme: 15 Ağustos 2026