Name: Rat mezenter Anjiyogenez Testi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-06-18T14:00:00.000+00:00
Duration: 18 min 30 s
Description: Keşfedin sıçan mezenter pencere modelinde de novo anjiyogenezin nicel analizini. Bu yöntem, kanser metastazı ve anti-anjiyojenik tedaviler üzerine sistemik ajan etkilerini değerlendirmeye olanak tanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

İsveç Tıbbi Araştırma Konseyi (hibe 5942) tarafından çalışmalar için mali destek sağlanmıştır.

1. Hayvanlar <ol><li> Gibi, fare, sıçan, ve kobaylar gibi küçük kemirgenler, hayvan modellerinde olarak kullanılmaktadır. Ne yazık ki, yetişkin farelerde (birçok fare suşlarının değerlendirilmiştir) güvenilmez fareler kullanılarak çalışmalar yapar, kendi mezenterik pencereleri içinde potansiyel ebeveynli mikrodamarlar sadece çok düşük bir sayı (anjiyogenez köken aldığı) eksikliği ya da sahip olmak eğilimindedir. Bu nedenle tahlil öncelikle sıçanlar için geliştirilmiştir. </li><li> Sıçanlar, damızlık teslim edildikten sonra en az 7 gün boyunca standart bir ortama alışmanız genelde su ve pelet ücretsiz erişim ile 12 saat aydınlık / karanlık döngüsü altında standart bir kafes çiftleri yerleştirilmiştir. Her hayvan işaretlenir. Çeşitli yetiştiriciler elde edilen; Biz çoğunlukla genç erişkin sıçan (yaş 5-6 hafta daha genç sıçanlarda yerli mikrodamarlar sayısının düşük olma eğilimi çeşitli suşları yaşı genellikle 7-10 hafta ancak genellikle erkek Sprague-Dawley rat). Önce deney ve deney boyunca dönemde, hayvanların her ikinci gün tartılır ve her zaman fedakarlık günü. Hayvanlar, eş zamanlı olarak ip tedavi edildiğinde (anjiyogenez indüksiyonu için aşağıya bakınız) ve sc veya iv veya po, onlar her gün tartılır. Bu deney başlangıcında eşit vücut ağırlığının deney ve kontrol grupları kurulmasını sağlar ve deney sırasında vücut ağırlığı-kazanç tedavi etkisinin izlenmesine olanak sağlar. Erişkin erkek sıçanlarda fizyolojik güçlü bir büyümeye (gerilme tipine bağlı olarak haftada yaklaşık 40-60 g kazanıyor), kilo alımı geriliği hassas bir yerine refahı sistemik toksisite işaretleyici, iştahsızlık, gelişme geriliği. </li></ol> Biz, yüksek standart bir hayvan bakım tesisi çalışma ve önemli çabalar, hayvanların yaşadığı stres düzeyini en aza indirmek için yapılır. Geçerli etik kurallar Workman P. ve arkadaşları tarafından kurulmuş olan (kanser araştırma hayvanların refah ve kullanımı için rehber. Br. J. Kanser 102, 1555-1577, 2010). Göteborg Üniversitesi Hayvan Etik Kurul, bu çalışmalar onayladı. 2. Pro-anjiyogenik İntraperitoneal Tedavi <ol><li> Test edilecek aday pro-anjiyo-faktör çözülür ve hastaların infüzyon için kullanılan endotoksin içermeyen tuzlu su içinde seyreltilmesi (son derece düşük seviyelerde bile, endotoksin pro-anjiyogenik). Tüm çözümler, enjeksiyon gününde, steril filtrelenmiş (Millipore 0.22 mikron filtrasyon) taze yapılmış, nötr pH (7,1-7,3) kontrol ve oda sıcaklığında kullanılır. Test aracı, düşük ya da çok düşük konsantrasyonlarda enjekte edilir. Örneğin, sıçan rVEGF 164 (564-RV/CF, Ar-Ge Systems Europe Ltd, Oxon, Birleşik Krallık) baskın VEGF-A sıçanlarda izoformu, dondurulmuş, endotoksin ücretsiz salin 96 pmole / ml seyreltilir çözülmüş ve sıçan 5 ml&#39;lik bir hacim içine ip enjekte edilir. Biz ip enjeksiyon için 0.8 mm iğne ile (yeşil iğne, 21G) 5 ml şırınga kullanın. Pazartesi sabahı (Gün 0) Cuma sabahı (4. Gün) 4.5 gün, yani günde iki kez verilen bu tedavi, etrafında Gün 21 pik, mezenterik testi dokusu sağlam bir çimlenme anjiyogenez tepki neden olur. Çözüm ip yönetme tüm hacim periton boşluğuna (ve bağırsak, mesane ya da diğer herhangi bir organı içine) teslim olmasını sağlar. 5 ml, sıvı jet karın boşluğuna karın duvarı üzerinden geçtiğini operatör tarafından hızlı enjeksiyon dokunsal onay sağlar. Takiben, önce ip pro-anjiyogenik tedavi ile ya da eş zamanlı olarak, herhangi bir test aracı seçim sistemik uygulanan olabilir. </li></ol> 3. Sistemik administation Anjiyogenez modülasyon Ajanlar <ol><li> Ip tedavisi devam eden güçlü bir pro-anjiyo-yanıt yol açabilir test doku mast hücreleri aktive ederek inflamasyon veya muhtemelen indüksiyon yoluyla anjiyogenik tepki etkileyebilir ip rota dışında herhangi bir rota kullanılabilir. Oral yoldan ya da tek bir enjeksiyon sc veya iv yanı sıra, sık sık, iki ya da birkaç hafta kadar sabit bir hızda çözüm sunmak için (bir veya daha fazla, hacimleri ve pompalama kez değişen) osmotik minipumps kullanarak sc uygulama. </li><li> Sürekli subkutan infüzyon test ajanların Osmotik minipumps Dolum ve implantasyon Alzet Osmotik Pompalar, Mountain View, CA; Genellikle 5. Gün, yani ip VEGF tedavisi, ozmotik minipumps (örneğin, Model 2ML2, 14-15 gün süreyle 5.0 ul / h sabit pompalama hızı ile sona erdikten sonra bir gün , ABD) steril koşullar altında test aracı ya da uygun bir araç ile doldurulur. ° C, pompa (lar) 37 steril% 0.9 (w / v) NaCl gecede depolama sonra cerrahi (spinal colu kenarındaki sırtında sc implante.mn) isofluran gaz (Isoba veteriner kullanarak anestezi edilmiş sıçanlarda scapulaların bölgede, hava geçirmez bir şeffaf odasında başlangıçta, Schering-Plough Hayvan Sağlığı, Merck &amp; Co, Inc, Whitehouse Station, NJ, ABD) ve bir maske ile (daha sonra yeniden kullanılmadan önce aşağıdaki hayvana kaynaklanan stresi en aza indirmek için, oda hava ile temizlendi). Implantasyon sonrası hemen ipek iplik kullanarak pompa implantasyonu için yapılan cilt insizyonu sütüre edilir. Deney süresince hayvanların fizyolojik kilo ve test ajanlar sabit bir hızla uygulandığında bu yana, kg vücut ağırlığı başına bir test ilaç için seçilen gerçek doz infüzyon döneminin başında ortalama doz daha yüksek ve daha düşük infüzyon süresi sonunda ortalama doz daha. Sürekli infüzyon, burada açıklandığı gibi, uzun bir metronom tedavi biçimi olarak görülebilir. </li></ol> 4. Deney sona erdirme <ol><li> Bir kerede bir hayvan, hayvan hızla öldürür CO 2 gaz ile temizlendi şeffaf bir hava geçirmez odası, yerleştirilir . Odasına tekrar kullanılabilir edilmeden önce hava ile temizlendi. </li></ol> 5. Hasat Doku Örnekleri <ol><li> DVD &#39;de gösterildiği gibi, karın duvarı açılır ve bağırsak çekal valfi (ince bağırsak ve kalın bağırsağın birleştiği) ulaştığı en distal bölümü de dahil olmak üzere, küçük bağırsak mezenter tanımlanır. En distalde yer alan &quot;windows&quot; dört (veya daha fazla) sayılı ve objektif standart tedavi edilmezse SuperFrost Plus-slayt (DAKO Danimarka A / S, Glostrup, Danimarka) üzerine yayılır. Non-spesifik olarak bu malzemelerin lekeli olabilir mikrodamarlar sonraki immünohistokimyasal görselleştirme geçersiz olmamakla birlikte, mümkünse kan, bağırsak içeriği veya diğer vücut sıvıları ile numunelerin kirlenmesine neden olan, önlemek için önemlidir. </li><li> Bağlı küçük bir bağırsak segmenti Her mezenterik pencere örnek bir slayt üzerine yayılmış ve 20 dakika boyunca oda sıcaklığında kurutulur. Ardından, bağırsak güdük, bozulmadan membranöz mezenter örnekleri uzun süre için -20 ° C&#39;de saklanır, kapalı kesilir. Bu DVD gösterilmiştir. </li></ol> Bu doku ve patent damarsal iletilen ışık intravital mikroskobu ile hasat öncesi görülebilmesi belirtilmelidir. 6. Mikrodamarlar İmmünohistokimyasal Boyama Protokolü <ol><li> Gün 0 Numuneler -20 ° C oda sıcaklığında, 1 saat için 60 ° C&#39;de bir kabin kurutulur Çözülme izin ve gece boyunca oda sıcaklığında tutulur. </li><li> 1. Gün Slaytları slayt sahipleri (her saniye bir parça) boyama boyama kavanoza yerleştirin ve oda sıcaklığında 10 dakika TBS (pH 7.8) ile iki kez yıkayın. Çözüm atılır ve sonraki çözümü ile değiştirilir ve bu nedenle aşağıdaki adımları için. </li><li> Tripsin tedavisi Tripsin çözüm (25 ° C&#39;de 20 dakika) ile boyama slayt sahibi olacak Limana boyama kavanoza doldurun. Çözüm atın ve% 2.5 sakkaroz solüsyonu (her seferinde 10 dakika boyunca oda sıcaklığı) ile iki kez kuluçkaya yatmaktadır. Çözüm atın ve su dest kez bir çift (bir kaç dakika her biri için oda sıcaklığında) durulayın. </li><li> Engelleme % 0.5 H 2 O 2 metanol (30 dakika boyunca oda sıcaklığı) ile boyama slayt sahibi olacak Limana boyama kavanoza doldurun. Çözüm atın ve su dest (bir kaç dakika oda sıcaklığında) ile durulayın. Çözüm atın ve TBS (pH 7.4) (her defasında 8 dakika boyunca oda sıcaklığında) ile iki kez yıkayın. </li><li> Kuluçka Tüm inkübasyonlar oda sıcaklığında nemlendirilmiş bir odasında. Aşağıda listelenen çözümleri her biri yaklaşık 150 ul slayt başına kullanılır. Slaytlar nemlendirilmiş bir odasında yerleştirilir ve çözümleri örnekleri (non-membranöz parça çözümler ile kaplı olması gerekmez) üzerine pipetlenir. Sonraki çözüm eklenmeden önce her biri için aşağıdaki adımları dikkatli bir şekilde çözüm silkeleyin. <ol><li> Normal (engelleme) serum (at) (ABC kiti) 3 Kuluçka sarı çözüm / 20 dakika için 10 ml seyreltme tamponu düşer. </li><li> Kuluçka sıçan damar endotel hücreleri etiketler İlköğretim antikor ARU0181. Antikor seyreltme tamponu (Biosource) (100 ul seyreltilmiş 40 kat [dondurulmuş] artı 900 ul seyreltme tamponu) ve inkübasyon 1:600 ​​seyreltilir 4 geceleme gerçekleşir ° C </li></ol></li><li> 2. Gün Slaytlar nemlendirilmiş odasından çıkarılır, birincil antikor atılır ve slaytlar bir boyama slayt tutucu, boyama kavanoza batık ve TBS ile iki kez yıkanır konur8 dakika (pH 7.8). <ol><li> Biotinlenmiş antikor ile inkübasyon (ABC kiti) Slaytlar nemlendirilmiş bir odasında yatay olarak yerleştirilmiş ve 1 damla mavi çözüm / 30 dakika için 10 ml seyreltme tamponu ile inkübe edilir . Çözüm atın ve boyama kavanoz içinde batık bir boyama slayt sahibi slaytlar ve 8 dakika TBS (pH 7.4) ile iki kez yıkayın. </li><li> ABC reaktifi ile inkübasyonu Slaytlar nemlendirilmiş bir odasında tekrar yatay olarak yerleştirilmiş ve aşağıdaki çözümleri örneklerinin membran parçalarının üzerine pipetlenir: 2 damla artı 30 dakika kahverengi çözüm / 10 ml TBS (pH 7.4) 2 damla portakal çözüm. 30 dakika kullanmadan önce dikkatlice karıştırın! Çözüm atın ve boyama kavanoz slaytlar slayt tutucu ve 8 dakika TBS (pH 7.4) ile iki kez yıkayın. </li></ol></li><li> DAB (% 0.05) ile boyanarak Bu adım havalandırılan bir kimyasal kaput yapılmalıdır! Slaytları yerleştirin ve 3,3 diaminobenzidin (DAB, Sigma-Aldrich) ekleyebilirsiniz pipet kullanarak çözüm: TBS içinde% 0.1 DAB solüsyonu (pH 7.4) [dondurulmuş] 10 ul H 2 O karışımı ile 1:1 seyreltilir 2 ve 7.5 ml TBS (pH 7.4). Bu çözüm, (herhangi bir parçacık mikroskobik resmi gizleyebilir ortadan kaldırmak için) hemen önce steril filtre edilir. 8 dakika örneklerdir Leke. Çözüm atın ve boyama kavanoza batık boyama slayt sahibinin slaytlar. Birkaç dakika sonra su dest çalışan ve musluk suyu altında durulayın. </li><li> Kurutma Slaytları boyama slayt sahibi tutulur. Atarak yıkayın ve dolum su dest / etanol içeren boyama kavanoz: 2 dakika her çözüm, su dest,% 70 alkol,% 95 alkol, mutlak alkol. </li></ol> 7. Vasküler Endotelyal Hücre İmmünohistokimyasal Boyama sonra Görüntüleme ve Her Mezenterik Pencere Numune Mikrovasküler Ağ Değerlendirilmesi Filmde gösterildiği gibi, mikrodamarlar sağlam doku in situ mikroskobik görselleştirildiği . <ol><li> Öncelikle, biz beyaz kağıt kalem büyütme aralığı 14 ila 34 (Leica Vahşi M 3Z) ile tüm pencere alanı, mezenterik pencere başına tüm vaskülarize alanı (VA) yanı sıra bir çizim mikroskobu kullanın. VA, tüm bölgenin bir yüzdesi olarak, kolay bilgisayarlı veya non-bilgisayarlı planimetri (ya da sadece tüm pencere resim ve görüntüleri tüm vaskülarize parça kesme ve ağırlık) ile ölçülür. </li><li> Kullanarak kolayca tespit başka bir çizim mikroskobu, bireysel mikrodamar profilleri, rastgele seçilen alanlar içinde 80 büyütme beyaz kağıt üzerine siyah mürekkeple çizilir. Bu temelde mikrovasküler yoğunluk ölçümü mikrovasküler uzunluğu sonraki bilgisayarlı morfometrik değerlendirmesi (MVL), başlangıç ​​noktasıdır. </li><li> İsteğe bağlı olarak, mikrovasküler desen oluşumu ile ilgili değişkenlerin yanı sıra, bireysel mikrovasküler lahanası (No SP ve Le SP, sırasıyla) mikrovasküler lahanası ve uzunluk sayısı değerlendirme için bu tespit edilebilir . Tasvir siyah damar yapıları ve beyaz arka plan, en ticari morfometrik bilgisayar programları, görüntülerin detaylı analizi kolaylaştırır arasında optimum kontrast. </li><li> Çoğu durumda, en önemli değişkenler birlikte çarpılır, toplam mikrovasküler uzunluğu (TMVL) oluşturmak VA ve MVL . </li></ol> 8. İstatistiksel Analiz Biz genellikle eşleştirilmemiş (iki uçlu) gözlemleri analiz etmek için standart non-parametrik Mann-Whitney U testi kullanın. Ortalama hayvan başına dört mezenterik pencereleri mezenterik penceresinin her değişken için bağımsız olarak veri noktası kullanılır. Kriter istatistiksel anlamlılık için p ≤ 0.05.

<ol><li>Norrby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+models+of+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell.+Mol.+Med%22%5BJournal%5D)">In vivo models of angiogenesis.</a> J. Cell. Mol. Med. 10, 588-612 (2006).</li>
<li>Norrby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Drug+testing+with+angiogenesis+models%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Opin.+Drug.+Discov%22%5BJournal%5D)">Drug testing with angiogenesis models.</a> Expert Opin. Drug. Discov. 3, 533-549 (2008).</li>
<li>Norrby, K., Jakobsson, A., Sorbo, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mast-cell-mediated+angiogenesis%3A+a+novel+experimental+model+using+the+rat+mesentery%5BTitle%5D)+AND+%22Virchows+Arch.+B+Cell.+Pathol.+Incl.+Mol.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Mast-cell-mediated angiogenesis: a novel experimental model using the rat mesentery.</a> Virchows Arch. B Cell. Pathol. Incl. Mol. Pathol. 52, 195-206 (1986).</li>
<li>Norrby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mast+cells+and+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22APMIS%22%5BJournal%5D)">Mast cells and angiogenesis.</a> APMIS. 110, 355-371 (2002).</li>
<li>Albertsson, P., Lennernas, B., Norrby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((On+meteronomic+chemotherapy%3A+modulation+of+angiogenesis+mediated+by+VEGF-A%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Oncol%22%5BJournal%5D)">On meteronomic chemotherapy: modulation of angiogenesis mediated by VEGF-A.</a> Acta Oncol. 45, 144-155 (2006).</li>
<li>Norrby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+apo-lactoferrin+enhances+angiogenesis+mediated+by+vascular+endothelial+growth+factor+A+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vasc.+Res%22%5BJournal%5D)">Human apo-lactoferrin enhances angiogenesis mediated by vascular endothelial growth factor A in vivo.</a> J. Vasc. Res. 41, 293-304 (2004).</li>
<li>Norrby, K., Mattsby-Baltzer, I., Innocenti, M., &amp, T. uneberg, S, <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orally+administered+bovine+lactoferrin+systemically+inhibits+VEGF%28165%29-mediated+angiogenesis+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Cancer%22%5BJournal%5D)">Orally administered bovine lactoferrin systemically inhibits VEGF(165)-mediated angiogenesis in the rat.</a> Int. J. Cancer. 91, 236-240 (2001).</li>
<li>Norrby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low-molecular-weight+heparins+and+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22APMIS%22%5BJournal%5D)">Low-molecular-weight heparins and angiogenesis.</a> APMIS. 114, 79-102 (2006).</li>
<li>Norrby, K., Nordenhem, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dalteparin%2C+a+low-molecular-weight+heparin%2C+promotes+angiogenesis+mediated+by+heparin-binding+VEGF-A+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22APMIS%22%5BJournal%5D)">Dalteparin, a low-molecular-weight heparin, promotes angiogenesis mediated by heparin-binding VEGF-A in vivo.</a> APMIS. 118, 949-957 (2010).</li>
<li>Norrby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Basic+fibroblast+growth+factor+and+de+novo+mammalian+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Microvasc.+Res.%22%5BJournal%5D)">Basic fibroblast growth factor and de novo mammalian angiogenesis.</a> Microvasc. Res.. 48, 96-113 (1994).</li>
<li>Norrby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+endothelial+growth+factor+and+de+novo+mammalian+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Microvasc.+Res%22%5BJournal%5D)">Vascular endothelial growth factor and de novo mammalian angiogenesis.</a> Microvasc. Res. 51, 153-163 (1996).</li>
<li>Norrby, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microvascular+density+in+terms+of+number+and+length+of+microvessel+segments+per+unit+tissue+volume+in+mammalian+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Microvasc.+Res%22%5BJournal%5D)">Microvascular density in terms of number and length of microvessel segments per unit tissue volume in mammalian angiogenesis.</a> Microvasc. Res. 55, 43-53 (1998).</li>
</ol>

Tahlil 1986 3 yılında ortaya çıkmıştır ve gittikçe daha da geliştirildi ve laboratuvarımızda 7,10-12 rafine olmuştur. Derlemeler (davet edildi) 1, 2 tartışıldığı, tahlil, özellikle yetişkin testi doku gibi önemli özellikleri bakımından diğer memeli in vivo anjiyogenez tayininde iyi karşılaştırır, doğal vaskülarize ve fizyolojik anjiyogenez yoksun; minimal travma, eğer varsa, verdirdiler doku üzerine gerçekten kantitatif değişkenler ölçülür, doz-yanıt ve moleküler-aktivite çalışmaları ile ilgili ses istatistiksel analiz sağlar; çimlenme anjiyogenez, normal dokularda ve tümörlerde hakim olduğu ortaya çıkar ve toksisite verileri kolayca sağlam büyümek sıçanlarda biriken fizyolojik yetişkinlik. Fareler için pek uygun olduğunu; real-time/serial gözlemler izin vermez; Dezavantajlı özellikleri, özellikle bireysel mikrodamar segment ve mikrovasküler lahanası sayısı ve uzunluğu değerlendirilmesi, tahlil, nispeten zaman alıcı olduğunu gerçeği içerebilir farelerde çok sayıda mezenterik pencereler potansiyel ebeveyn mikrodamarlar eksikliği bu yana yeni kılcal damarların kaynaklı olabilir. Ancak, gerçek zamanlı gözlemler, hayvan, 1 tartışılan anestezi ise exteriorized ama sağlam mezenterik pencereler mikroskop aşamasında üzerinden dışarı yayvan intravital mikroskobu ile etkindir. Anjiyogenez araştırma faydalı ama sonuçta sınırlı araçlar kornea micropocket, civciv chorioallantoic membran ve sc Matrigel fiş testleri gibi modelleri kullanarak, geçmiş yıllarda önemli gelişmeler elde edilmiştir. Antianjiyojenik ve pro-anjiyogenik tedavilerin gelecekte klinik uygulamalarda raporda açıklanan biri olarak daha duyarlı ve biyolojik ilgili, gerçekten kantitatif klinik öncesi modelleri, kurulması ve doğrulanması zorunlu kılmaktadır.

Tamponlar ve reaktifler 0.5 M Tris-HCl (pH 7.8) stok solüsyonu Tris (hidroksimetil) aminomethan (60,57 gr) ~ 900 ml su dest çözülür ve ~ 45 ml% 25 HCl (konsantre), pH 7.8 ile 1 litre su dest seyreltme takip ulaşmak için eklenir . Tris-buffer salin (TBS; pH 7.8) 18 g NaCl ~ 1800 ml su dest çözünmüş 2 litre su dest seyreltme tarafından takip stok solüsyonu, 7.8 pH ayarlaması için 200 ml stok solüsyonu eklenir. TBS (pH, 7.4 &#39;) Stok çözelti için 200 ml, 2 litre su dest seyreltme tarafından takip stok solüsyonu, pH 7.4 &#39;e ayarlanması ile ~ 1800 ml su dest çözünmüş çözünmüş 18 gr NaCl eklenir . Tripsin solüsyonu (% 0.05 tripsin,% 0.1 CaCl 2) 200 ml TBS (pH 7.8) 0.1 g tripsin ve 0.2 g CaCl 2 içerir. Sakaroz çözeltisini% 2.5 200 ml TBS (pH 7.8) 5 g sakaroz içerir. TBS içinde% 1 Sodyum azid (pH 7.4) stok solüsyonu TBS (pH 7.4) ile 100 ml 1 g Na-azid içerir. Sulandırma tampon% 0,1 BSA,% 0.01 Na-azid: (Antikorlar Vectastain ABC kiti sulandırmak için kullanılır). TBS (pH 7.4) ile 100 ml seyreltilmiş, 0.1 g sığır serum albumini (BSA) ve 1 ml% 1 Na-azid içerir. ABC kiti Vectastain PK 4002, ABC peroksidaz fare IgG Normal at serumu; engelleme serum; sarı çözüm: 3 drops/10 ml seyreltme tamponu. Biotinlenmiş antikor, anti-fare IgG, mavi çözüm: 1 drop/10 ml seyreltme tamponu. ABC-reaktif: 2 damla portakal çözüm artı kahverengi çözüm 2 drops/10 ml TBS (pH, 7.4 &#39;). 20 dakika önce bu çözümler karıştırın! Fare (monoklonal) anti-sıçan endotel (Biosource International, Camarillo, CA, USA) <table border="1"><tbody><tr><td> Katalog # </td><td> ARU0181 </td></tr><tr><td> Klon # </td><td> MRC OX-43 </td></tr></tbody></table> Bu antikor, beyindeki bu istisna ile sıçan tüm vasküler endotelyal hücreler karşı yönlendirilmiştir. Vectastain peroksidaz Avidin Biotin Kompleksi (ABC) kiti Kiti primer antikor, biotinlenmiş sekonder antikoru, avidin-biotinlenmiş enzim kompleksi (ABC), ve enzim substrat içerir. <a href="http://www.vectorlabs.com/">Www.vectorlabs.com</a> veya <a href="http://www.immunkemi.se/">www.immunkemi.se</a> protokoller için. Sığır serum albumini (BSA) (Sigma-Aldrich, katalog # A-4503). DAB = 3,3 &#39;-diaminobenzidin Isopac (Sigma-Aldrich, katalog # D 9015). Sığır Pankreas (Sigma-Aldrich, katalog # T 4665) tripsin. Vectastain peroksidaz ABC-kit, Fare IgG (F &amp; D Immunkemi AB, Jarfalla, İsveç)

rat mezenter anjiyogenez testi

Rat Mesentery Angiogenesis Assay

Yetişkin sıçan mezenter pencere anjiyogenez tahlil biyolojik uygun ve son derece iyi, in vivo anjiyogenez çimlenme çalışma için uygundur, insan tümörleri ve tümör olmayan dokular anjiyogenez hakim formu davet incelemesi tartışılan [Derlemeler bakın. ] kağıtlar 1,2. Membranöz mezenterik parça bir pro-anjiyo faktör intraperitoneal (ip) enjeksiyonu ile indüklenen Anjiyogenez subkutan (sc), intravenöz (iv) veya oral (po) tercih modifiye edici ajanlar ile tedavi modüle olabilir. Mezenter Her membranöz kısmında bir pencere gibi bir görünüm veren, saydam ve yağ dokusu tarafından çerçeveli. Tahlil aşağıdaki avantajlı özelliklere sahiptir: (i) test doku seyrek olsa da, doğal olarak vaskülarize, ve son derece ince bir yana, mikrovasküler ağ, tüm ağ in situ mikroskobik olarak değerlendirilmesi gereken izin veren, neredeyse iki boyutlu ( ii) yetişkin sıçanlarda test dokusunun en normal erişkin memeli dokularında görülen önemli fizyolojik anjiyogenez yoksun; yerli vaskülarizasyon derecesine, ancak, 1 de açıklandığı gibi yaş ile ilişkilidir; travma bağlı anjiyogenez (iii) ihmal edilebilir düzeyde (v) yüksek hassasiyet sağlar; anjiyogenez modülasyon test ilaçlar sistemik olarak uygulanan ve yanıtları metabolik,, hücresel ve moleküler değişiklikler tedavi ile indüklenen net etkisi yansıtacak gözlenir (iv) testinin, klinik durum çoğaltır;. böylece doz-etki ve moleküler yapı-aktivite ilişkileri sağlam istatistiksel analizler sağlayarak, testin yanı sıra çimlenme kapiller mikrovasküler mekansal uzantısı, yoğunluk ve ağ model oluşumu objektif, kantitatif, tarafsız değişkenleri değerlendirmelerini sağlar; ve (vi yetişkin sıçanlarda sağlam büyüdükçe) tahlil, fizyolojik vücut ağırlık artışı azalma oranı bakımından yüksek hassasiyet ile tedavilerin toksik veya zararlı etkileri ortaya koymaktadır. Bu testte 3,4 kullanarak mast hücre-aracılı anjiyogenez ilk gösterilmiştir. Modeli, doz-etki ilişkileri ve dahil olmak üzere sistemik kimyasal veya fonksiyonel olarak uygulanan yakından ilgili ilaçlar ve proteinler, ölçülen etkileri ile ilgili yüksek düzeyde bir ayrımcılık göstermektedir: (i) metronomically, farklı, ilaç özel efektler verimi standart kemoterapötikler uygulanan düşük doz, (yani, anjiyogenez baskılayıcı, nötr veya anjiyogenez-uyarıcı etkinlikler 5), (ii) inhibe VEGF-A-aracılı anjiyogenez 6 uyarır doğal demir-doymamış insan laktoferrin, ve doğal demir-doymamış sığır laktoferrin, VEGF-A- aracılı anjiyogenez 7, ve (iii), çeşitli yollarla 8,9 tarafından üretilen düşük molekül ağırlıklı heparin kesirler . Ayrıca, testin son derece eşzamanlı veya ardışık moda sistemik ajanlar anjiyogenez üzerinde kombine etkileri çalışmaları için uygundur. Bu video yapma fikri o bizim laboratuvar ziyaret etti ve gösterilen metodoloji tanık merhum Dr. Yahuda Folkman kökenli. İnceleme kağıtları (davet edildi) tahlil tartışılması ve değerlendirilmesi Anjiyogenez in vivo modellerde Norrby, K.. J. Hücre. Mol. Med. 10, 588-612 (2006). Norrby, anjiyogenez modelleri ile K. Uyuşturucu testi. Uzman Opin. İlaç. Discov. 3, 533-549 (2008).

Fizyolojik anjiyogenez ve yoksun Normal erişkin vaskülarize memeli doku çalışma için kullanılan cerrahi müdahaleye maruz kalmamış: (i) başlatılması ve test ajanların intraperitoneal uygulanması aşağıdaki anjiyogenez geliştirilmesi; ve sistemik uygulanması aşağıdaki (ii) anjiyogenez değişiklik Test ajanlar seçilir.

Rat mezenter Anjiyogenez Testi

Yetişkin sıçan mezanteryum penceresi anjiyogenez testi biyolojik olarak uygundur ve ... içindeki filizlenme anjiyogenezinin incelenmesi için son derece elverişlidir.

İsveç'teki Guttenburg şehri GaN Üniversite Hastanesi Patoloji Bölümüne hoş geldiniz. Ben Dr. Klaus Norby; şimdi izleyeceğiniz yöntem benim laboratuvarımda geliştirilmiştir. Hipoksi, solid tümörler veya diğer herhangi bir anjiyogenez hastalığı ile bağlantılı olarak gelişen klinik olarak anlamlı anjiyogenez, neredeyse tamamen doğal olarak vaskülarize olmuş dokularda meydana gelir. Yetişkin küçük kemirgenlerde, ince bağırsağı vücudun arka duvarına bağlayan mezenteri, bir dizi ince membranöz kısım içerir. Sıçanlarda bu mezenterik pencerelerden yaklaşık 40 ila 50 adet bulunur. Bunlar çıplak gözle neredeyse şeffaf, dolayısıyla pencere gibidir ve yetişkin erkek sıçanlarda her bir pencere yağ dokusu ile çevrilidir.Mezenterik pencereler doğal olarak vaskülarize edilmiştir ve ölçülebilir düzeyde fizyolojik anjiyogenezden yoksundur. Bu nedenle, yetişkin doğal vaskülarize memeli dokusunda de novo anjiyogenezi inceleme fırsatı sunarlar. Yani, farelerdeki tüm normal dokularda olduğu gibi, test dokusunda endojen olarak çalışan anjiyogenez inhibitörlerini aşarak, sıfırdan tam bir anjiyojenik yanıtın başlatılmasını sağlarlar; ancak birçok pencerede ana mikro damarlar olarak işlev görebilecek doğal mikro damarlar mevcut değildir ve bu durum ne yazık ki analizin farelerdeki doğal formda öngörülemez olmasına neden olur.Yetişkin sıçanlarda mezenterik pencereler normalde çevresel bölgelerde yer alan nispeten az sayıda küçük kan damarı içerir. Bu mezenterik pencereler doğal olarak yalnızca beş ile 10 mikrometre kalınlığındadır. Bu durum, sağlam dokunun lamlar üzerine yayılmasına ve mikroskobik olarak gözlemlenmesine olanak tanıyarak her penceredeki tüm damarların izlenmesini sağlar ve damarlara esasen iki boyutlu bir genişleme kazandırır.Bu yöntem, kan mikrodamarlarının uzamsal yayılımının, yoğunluğunun, patern oluşumunun ve boyutunun kantitatif ölçümlerini yapmak için eşsiz bir fırsat sunmaktadır. Subkutan bölge, anjiyogenez çalışmaları için popülerdir; ancak, endotelyal hücre heterojenliği ve dokuya özgü özellikler nedeniyle, anjiyogenezin kontrolü ve subkutan dokular ile subkutan olarak büyüyen tümörler; akciğer, karaciğer, kemik ve beyin gibi metastatik visseral organlardaki anjiyogenez kontrolünü öngörmeyebilir. Visseral metastazlar genellikle kanserin letalitesinden nihai olarak sorumlu olduğundan, bu durum dikkat çekicidir.Mezenterik pencerenin viseral olması bu açıdan avantajlı olacaktır. Projemizin amacı, de novo anjiyogenezin yönlerini kantitatif olarak incelemektir. Bu nedenle, bilinen bir pro-anjiyojenik faktörü veya bir test maddesini intraperitoneal olarak enjekte ediyoruz.Normal şartlarda, anestezi uygulanmamış yetişkin sıçanlara tek seferde beş mililitre enjeksiyon yapıyoruz. Bu miktardaki bir hacim, tüm mezenterin enjekte edilen sıvıya hızla maruz kalmasını sağlar. Hacmi çok küçük olmadığı sürece intraperitoneal olarak enjekte edilen herhangi bir solüsyon, test dokusundaki tüm hücreleri etkilemelidir; özellikle de son derece ince olan mezenterik pencereyi örten mezotelyal hücre tabakası çözünür maddelere karşı yüksek geçirgenliğe sahiptir. Herhangi bir cerrahi işlem uygulanmadığından, mezenterik pencerede incelenecek olan anjiyogenez, yara iyileşmesinin tetiklediği anjiyogenezden etkilenmez; bu nedenle anjiyojenik tedavi intraperitoneal enjeksiyonlar şeklinde uygulanır.Pratik nedenlerle, örneğin VEGF 1 65, 1 64 ve temel FGF gibi tanımlanmış proteinlerin anjiyojenik etkilerini incelerken standart olduğu üzere, Pazartesi sabahından Cuma sabahına kadar beş günlük bir süre boyunca günde iki enjeksiyon içeren bir tedavi protokolü uyguluyoruz. Genellikle taşıyıcı olarak Pharmacia infüzyon solüsyonu kullanılır. Tedavi sayısı fazla görünebilir, ancak VEGF ve temel FGF gibi güçlü pro-anjiyojenik faktörler yaklaşık fizyolojik seviyelerde tek bir doz veya aralıklı birkaç doz şeklinde uygulandığında, istatistiksel olarak anlamlı bir anjiyogenez indüklemenin her zaman mümkün olmadığı gösterilmiştir; dokularda güçlü endojen anjiyogenez inhibitörlerinin faaliyet gösterdiği unutulmamalıdır.Anjiyogenezi modüle eden terapötik modalitelerin uygulanması, klinik bir tedavi durumunu taklit eder. Bir veya daha fazla anjiyogenez modülatör faktör; sistemik, subkütan, intravenöz veya oral yollarla uygulanabilir. Örneğin.Bu durum, yalnızca ana molekülün değil, aynı zamanda metabolitlerinin de etkisinin incelenebilmesi bakımından klinik bir tedavi durumunu taklit eder. Sistem, sistemik olarak uygulanan anjiyogenez modüle eden ajanların toksik etkilerinin belirli bir düzeyde kontrol edilmesine olanak tanır. Yetişkin sıçanlar fizyolojik olarak büyüdükleri ve iki veya üç hafta süren bir deney sırasında ağırlıkları yaklaşık %40 oranında artabildiği için, hayvanların tartılmasıyla tedavinin vücut ağırlığı artışını ne derece yavaşlattığına dair bir anlayış elde etmek mümkündür; bu durum toksik etkilerin bir ifadesi olarak kabul edilebilir.Bu durum, kaçınılması gereken maddelerin, anjiyogenez modülasyon testlerinde toksik dozlar almasını sağlar. Sonuçların spesifik anti-anjiyojenik etkiler açısından yorumlanması imkansız olabileceği için bu önemli bir faydadır. Erişkin sıçanlar, erişkin farelerden önemli ölçüde daha hızlı büyüdüğünden, eğer toksik bir etki söz konusuysa, toksik ajanların vücut ağırlığı artışı üzerindeki etkisi sıçanlarda genel toksik etkilerin daha hassas bir göstergesi olmalıdır.Şimdi sizlere mezenterik pencere örneklerinin nasıl hazırlandığını göstermek istiyoruz. Bu hayvanlar CO2 kullanılarak öldürülmüştür. Mezenterik pencereler, mezenterin distal kısmından başlanarak üç inç boyutundaki standart artı lamlar üzerine yayılmıştır.İleosekal valften başlayarak retrograd yönde ilerleyen mezenterik pencerede anjiyogenez çıplak gözle gözlemlenemez. Mezenterin en distal kısmından toplanan dört pencere kullanılır. Lam üzerindeki numune, oda sıcaklığında 20 dakika boyunca kurutulur.İntestinal güdük kesilip ayrılır. Örnekler daha sonra -20 °C'deki bir dondurucuda saklanır. Bu sayede örnekler, kalitede belirgin bir bozulma olmaksızın birkaç ay, hatta belki yıllarca saklanabilir.Boyama, sıçan endotelyumuna karşı monoklonal bir antikor kullanılarak yapılır. Numunenin havada kurumasına izin verin, lam üzerine kapatma camı ile sabitlemeyin. Münferit mezenterik pencerelerdeki kan damarlarının insidanslarının nicelleştirilmesi, toplam optik büyütmesi 14 ile 34 arasında olan bir çizim mikroskobu kullanılarak bilgisayar destekli morfometrik mikroskopi ile gerçekleştirilir. Mezenterik pencerenin tamamı görselleştirilir.Görüş alanının mümkün olduğunca büyük bir kısmının numune tarafından kapsanması için büyütme sabit adımlarla seçilir. Pencere ile çevreleyen yağ dokusu arasındaki sınır belirgin olduğundan, pencerenin tüm alanı kolayca tasvir edilebilir. Ardından, tüm damarlı kısımlar dikkatle tanımlanmış kriterlere göre çizilir.Yüksek büyütmelerde çapının yaklaşık 2,5 ila 3,0 mikrometre olduğu tespit edilen en küçük yeni oluşmuş kan damarları bile net bir şekilde ayırt edilebilmektedir. Sıçan eritrositinin ortalama çapının 6,3 mikrometreye eşit veya daha büyük olması, bu damarların ne kadar küçük olduğunu göstermektedir. Bir penceredeki tüm damarlanmış kısımların alanının, tüm pencere alanına yüzde olarak oranı, bağıl damarlanma alanı va olarak bilinir.Bu işlem, esasen iki boyutlu bir uzanıma sahip olan damarların uzamsal genişliğinin bir ölçümüdür; örneğin, VA bilgisayar destekli telemetri kullanılarak kolayca ölçülebilir. Bir sonraki adımda, her pencerenin vaskülarize edilmiş alanlarının üç merkezi bölgesi içindeki mikrovasküler yoğunluk ve desen oluşumu kaydedilir. Bu bölgeler, 80 optik büyütmede sistematik olarak rastgele seçilir.Her bir damar, bir çizim mikroskobu kullanılarak tek bir çizgi şeklinde görselleştirilir. Her bir görüş alanının görüntüsü, dijitalleştirilmiş bir görüntüye ve bir görüntü analizörüne aktarılır ve ardından dijitalleştirilmiş görüntüdeki her bir damar, bir piksel kalınlığına indirgenir. Ardından makine, damarları temsil eden piksel sayısını ölçer ve bu değer, görüş alanındaki tüm piksellerin bir oranı olarak ifade edilir.Yüzde olarak ifade edilen bu değer, mikrovasküler uzunluk veya MVL, damarlanmış alanın her bir birimindeki mikrodamarların uzunluğunu temsil eder ve mikrodamarlar yoğunluğunun bileşik bir ölçümüdür. Hayvan başına dört pencerenin VA ortalamasının, ilgili tedavi grubunun ortalama MVL değeri ile çarpılmasıyla, hayvan başına toplam mikrovasküler uzunluk olan TMVL hesaplanır. Ayrıca, görüntü analizi kullanarak mikrodamarların yoğunluğu ve bileşiminin ayrıntılı kantitatif analizi için teknikler geliştirmiş bulunmaktayız.Bunlar arasında iki ardışık mikro damar arasındaki gerçek mesafenin, dallanma noktalarının, IE, münferit mikro damarların uzunluklarının, segment LEMS, mikro damar sayısının, birim doku hacmi başına düşen segmentlerin, NOMS ve birim doku hacmi başına düşen mikro damar dallanma noktası sayısının, NOBP ölçümü yer almaktadır. Mikro damarlardaki kıvrımlılık derecesi MVT, iki ardışık dallanma noktası arasındaki en kısa mesafe ile gerçek mesafe arasındaki farkla belirlenir; ayrıca mikro damarların birbirinin üzerinden geçme sıklığı olan kesişim indeksi INIS ve birbirine bağlanan döngü oluşumu değerlendirilir. Döngü oluşum indeksi INLF de mikro damar ağının çevresinde benzer teknikler kullanılarak doğru bir şekilde ölçülebilir.Aynı tedavi grubundaki hayvanlar arasında ve hatta aynı hayvanın farklı mezenterik pencereleri arasında önemli farklar olabileceği için, deneyleri tasarlarken filiz uzunluğu, LESP ve birim doku hacmi başına filiz sayısı (NOSP) dahil olmak üzere filizlere ait ilgili değişkenleri de nicelendirebiliyoruz. Gözlem süresi boyunca tedavi grubu başına hayvan sayısının 8 ila 12, VA açısından analiz edilen hayvan başına pencere sayısının, mikrodamar uzunluğu (MVL) açısından analiz edilen her pencere için görüş alanı sayısı, mikro damar segmentlerinin uzunluğu (LEMS), mikro damar segmentlerinin sayısı (NOMS), mikro damar sayısı, dallanma noktaları sayısı (NOBP), mikro damar tortuosity (MVT), kesişim indeksi (I) ve halka oluşumu indeksi (INF) şeklinde bir tasarımın pratik olabileceğini gördük; kontrol olarak araç (vehicle) ile tedavi edilen üç hayvan kullanılır. Mezenterik pencere anjiyogenez testi, doz etkisi çalışmaları ve anjiyogenez kinetik analizleri için oldukça uygundur.Bu işlem, hayvan gruplarının farklı dozlarda pro-anjiyojenik faktörle tedavi edilmesi ve bu hayvanların anjiyojenik yanıt sırasında farklı zaman noktalarında sakrifiye edilmesiyle gerçekleştirilebilir. Böylece ekspansif faz, zirve noktası ve ardından gelen anjiyo-regresif faz nicel terimlerle ayırt edilebilir. Bu tür çalışmalar, test edilen herhangi bir büyüme faktörü sitokinine karşı verilen de novo anjiyojenik yanıtın; hız, etkinlik ve süre açısından spesifik olarak doza bağımlı olduğunu ortaya koymuştur.Ayrıca, yeni damarların mekânsal yayılım ve mikrovasküler yoğunluktaki değişimler açısından örüntüsü, yaklaşık fizyolojik dozlardaki VEGF veya temel FGF tarafından aracılık edilen anjiyogenez ile karşılaştırıldığında genellikle belirgin şekilde doz ve zamana bağımlıdır. Mast hücrelerinin in situ seçici aktivasyonu yoluyla indüklenen mast hücresi aracılığıyla anjiyogenez (MCMA), önemli ölçüde daha yüksek potansiyel ve dikkat çekici derecede daha uzun süreli etki gösterir. Aslında, objektif anjiyogenez değişkenlerini nicelendirme yeteneği, sistemin yüksek derecede biyolojik uygunluğu ve toksik tedavilerin kontrol edilebilme olasılığı nedeniyle, mast hücresi aracılığıyla anjiyogenez ilk kez bu analiz kullanılarak tanımlanmıştır.Bu metodoloji, yapı-aktivite ve doz-yanıt analizleri için benzersiz bir şekilde uygundur. Sıçan MWAA, fizyolojik anjiyogenezin bulunmadığı ve cerrahi işlemden etkilenmeyen, yetişkin ve doğal olarak vaskülarize olmuş bir visseral dokuda anjiyogenezi incelemek için bir model sunar; böylece yara iyileşmesinin tetiklediği anjiyogenezin herhangi bir etkisi dışlanmış olur. Deney gerçek anlamda kantitatiftir ve mikrodamarların uzamsal yayılımını, yoğunluğunu ve patern oluşumunu tanımlayan biyolojik olarak ilgili bir dizi objektif değişkeni doğru bir şekilde değerlendirir.Bu analiz; anjiyogenezin sistemik etkilerini, modüle eden faktörleri ve yapı-aktivite ile doz-yanıt çalışmalarını incelemek için oldukça uygundur. Burada açıklanan metodoloji, İsveç'teki Göteborg Üniversitesi'ne bağlı Reka Üniversite Hastanesi Patoloji Bölümü'nde Dr. Kloss Carl Norby laboratuvarında geliştirilmiştir. Bu projedeki tüm çalışmalar, İsveç Tıbbi Araştırma Konseyi'nin 5 9 4 2 numaralı projesi tarafından desteklenmiştir.Projenin başlangıcından beri dahil olan Bayan Gun Effer, burada bulunmayan Bayan Monica Anderson ve Bayan Ann Nemar Lindgren'in becerikli teknik destekleri minnetle kabul edilmiştir.Umarım bu kısa sunum, analizin potansiyeli hakkında size bir fikir vermiştir. Eğer bu analizi laboratuvarınızda kullanırsanız, herhangi bir teknik sorunla karşılaştığınızda size yardımcı olmaktan mutluluk duyarım. Ayrıca, iletebileceğiniz her türlü öneriyi memnuniyetle karşılarım.Teşekkür ederiz.

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu video, immün yetmezlik modelindeki bir sıçanda, insan damarı (IMA) kullanılarak stent yerleşimi sonrası intimal hiperplazi gelişimini inceleyen bir modeli göstermektedir.

İnsan internal meme arter (İMA) Transplantasyon ve Stent: In-Stent Restenozis Geliştirme Eğitim Bir İnsan Modeli

Bu makale sıçan mezenter anjiogenezisi teşvik için basit bir model tanımlamaktadır. Modeli aşağı tek hücre düzeyine kadar tüm mikrovasküler ağlarının yüz görselleştirme tr sağlayan bir doku nispeten kısa bir süre boyunca kılcal filizlenmesi, damar alanı ve damar yoğunluğu dramatik artış üretir.

Sıçan mezenter eksteriorizasyon: Anjiogenez ilgilendim Hücresel Dinamikler araştırılması için Bir Model

Modifiye edilmiş Landis tekniği, mikroperfüzyon teknikleri kullanılarak kontrol ve test koşulları altında normal ve genetik olarak modifiye edilmiş sıçanların mezenterindeki tek tek mikro damarların hidrolik iletkenliğinin eşleştirilmiş ölçümünü sağlar. Fizyolojik koşullar altında mikrodamar geçirgenliğini ve transvasküler değişimi düzenleyen mekanizmaları değerlendirmek için uygun bir yöntem sağlar.

Şekilde, mikro Tekniği Sıçan mezenter mikrodamar geçirgenliği Yönetmelik Araştırma

Bu el yazması, kontrollü bir ortamda endotel hücre tüpü oluşumunu kullanarak belirli bir bileşiğin veya durumun anjiyogenez üzerindeki etkilerini ölçmek için bir tüp oluşturma testini açıklar.

Stratejik Endotel Hücre Tüp Oluşumu Testi: Azaltılmış Ekstrasellüler Matrix Ekstrasellüler Matrix ve Büyüme Faktörü Karşılaştırılması

Anjiyogenez, fizyolojik olarak ilgili bir ortamda araştırılması gereken çok hücreli, çok sistemli etkileşimleri içerir. Bu çalışmanın amacı, sıçan mezenter kültürü modelinin, anjiyogenez sırasında sağlam mikrovasküler ağların hızlandırılmış karşılaştırmalarını yapma yeteneğini göstermektir.

bir<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Yöntem kültürlü Rat Mezenterik Mikrovasküler Ağları Time-Lapse Görüntüleme için

Burada, prelabelled Mezenkimal hücrelerin sıçan aort kaynaklı endotel ağları ile birlikte kültürlü nerede aort yüzük testin yeni bir uygulama mevcut. Bu roman yöntemi görselleştirme Mezenkimal Stromal hücre (MSCs) posta ve endotel ağları ile entegrasyon, miktar ağ özellikleri ve MSC immunophenotypes ve gen ifade değerlendirme sağlar.

Aort yüzük ortak kültür tahlil: Mezenkimal Stromal hücre Vitro anjiogenik potansiyelini değerlendirmek için uygun bir araç

miRNA tedavi kanser ilerleme düzenlenmesinde önemli potansiyele sahip. Aşağıda gösterildiği analitik yaklaşımlar hücre döngüsü ve anjiogenezi durdurma içinde bir birleşimsel miRNA tedavi faaliyetinin tanımlaması için kullanılır.

Kombinatorik miRNA düzenleyen hücre döngüsü ve anjiogenezi tedavilere analizi

Biz metastazın tümör mikroortamı ile ilişkili geçici vasküler geçirgenliği değerlendirmek için iki yöntem tarif (tmem) kapı fonksiyonu ve kanser hücresi konvülsyon yüksek molekül ağırlığı İntravenöz enjeksiyon kullanarak (155 kDa) farelerde dekstran. Yöntemleri, canlı hayvanların intravital görüntüleme ve immünofluorescence kullanarak sabit doku analizi içerir.

Intravital görüntüleme ve sabit doku analizi kullanılarak kanserli hücre yaygınlaştırılması ile Ilişkili Metasküler kapı-aracılı vasküler geçirgenlik tümör Mikroortamının değerlendirilmesi

Burada, tümör taşıyan farelere transferinden sonra anti-anjiyojenik tümör ilişkili nötrofiller terapötik potansiyelini gösteriyoruz. Bu protokol, nötrofil aktivitesini ex vivo olarak işlemek ve daha sonra tümörlerin geliştirilmesinde in vivo olarak işlevselliğini değerlendirmek için kullanılabilir. Potansiyel nötrofil bazlı immünoterapileri incelemek için uygun bir modeldir.

Anjiogenik potansiyelinin In vivo çalışması için Işlenmiş tümör ilişkili Nötroflelerin tümör taşıyan fareler içine aktarılması

Burada sunulan yöntem, reaktiflerin anjiyogenez veya vasküler geçirgenlik üzerindeki etkisini in vivo boyamadan değerlendirebilir. Yöntem, neo-damarları veya vasküler sızıntıyı görselleştirmek için kuyruk damarı yoluyla dekstran-FITC enjeksiyonunu kullanır.

Anjiyogenez Çalışmaları için Modifiye In Vivo Matrix Jel Plug Testi

Mevcut protokol, trofoblast hücreleri gibi hücrelerin, hücre dışı bazal membran matrisinin bir tabakası üzerinde kılcal benzeri yapılar halinde organize olduğu klasik in vitro anjiyogenez-tüp oluşum testinde oluşan tüp benzeri yapıların geri kazanılmasına izin verir. Geri kazanılan yapılar, çeşitli biyokimyasal analizler için RNA ve protein izolasyonu için kullanılır.

Farklılaşma İşaretleyici İfade Analizi için Anjiyogenez-Tüp Oluşum Testinden Trofoblast Hücre Geri Kazanımı

Keşfedin sıçan mezenter pencere modelinde de novo anjiyogenezin nicel analizini. Bu yöntem, kanser metastazı ve anti-anjiyojenik tedaviler üzerine sistemik ajan etkilerini değerlendirmeye olanak tanır.

Rat mezenter Anjiyogenez Testi

Daha fazla video keşfet