Name: İmmünohistokimya: Parafin Bölüm Vektör Labs Vectastain ABC Seti (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-01T00:00:00.000+00:00
Duration: 21 min 38 s
Description: Öğrenin, parafin gömülü doku kesilerini Vectastain ABC kiti ile boyama yöntemini. Isıya dayalı antijen geri kazanımı ve peroksidaz bloke adımlarını içeren bu protokol, immünohistokimya çalışmalarında güvenilir sonuçlar sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Kesitler boyanması <ol><li> Mumunu gidermek, her 5 dakika için 3x Ksilen (Fisher X3 G -4) ile slayt (kullanıma bağlı olarak her ay değişikliği ksilen, ksilen ZEHİRLİ) . Fisher ref 08-812-1A ve raflar 20 slaytlar için yemekleri ve kapakları kullanın bu yemekler uygun yaptı. Başına 200 ml sıvı bulaşık. </li><li> (Her 2 haftada bir değiştirmek degrade) aşağıdaki gibi alkol degrade ile Hidrat: <ul><li> % 100 etanol (Fisher # A406-20) her biri için 2 dakika içinde 2x </li><li> % 95 etanol içinde her biri 2 dakika 2x </li><li> 2 dakika süreyle% 70 etanol 1x </li><li> 1x 2 dakika süreyle% 50 etanol </li><li> 1x 2 dakika süreyle% 30 etanol </li><li> 1x 2 dakika süreyle GKD 2 O </li></ul></li><li> DPBS 5 dakika boyunca yıkayınız (DPBS = Dulbecco&#39;nun modifiye Fosfat Ca 2 Tamponlu Salin + ve Mg 2 +). </li></ol> Antijen kurtarma: <ol><li> Mikrodalga ısı Öncesi Na-sitrat tamponu (10 mM, pH 6.5). </li><li> Slaytlar mikrodalga fırında 15 dakika pişirin. Slaytlar böylece her dakika kontrol etmek ve gerektiğinde Na-Sitrat eklemek kuru asla. </li><li> Oda sıcaklığında soğumaya bırakın. </li><li> Endojen peroksidaz aktivitesini engellemek% 1 20 dakika DPBS H 2 O 2 (% 30 hisse senedinin 1,5 ml, 50 ml DPBS Sigma H-1009) . </li><li> DPBS 3 x 5 dakika bekletin. </li><li> +4 ° C DPBS +% 5 sığır serum albumini (BSA) +% 0.1 Na Azid +% 5 serum gece inkübe non-spesifik siteler engelleyin. Not: serum Choice boyanması için kullanılan antikorların yapıldığı türler bağlıdır. Ikincil Ab (biotin konjuge) yapıldığı türler serum ile engelleyin. Bu mevcut değilse, birincil Ab yapıldığı olandan farklı bir tür serum kullanın. </li><li> Avidin / biotin engelleme kiti (Vektör laboratuarlar katalog # SP-2001) ile biotin siteler Blok: <ul><li> Avidin D 15 dakika inkübe edin. DPBS kısaca durulayın. </li><li> Biotin çözümü ile 15 dakika inkübe edin. </li></ul></li><li> DPBS oda sıcaklığında 2 saat, BSA +% 2 +% 0.1 NaAzide +% 2 serum (adım Engelleme aynı) için birincil Ab inkübe edin. </li><li> PBS 3 x 5 dakika bekletin. </li><li> DPBS içinde oda sıcaklığı +% 2 BSA +% 0.1 Na Azid +% 2 serum (engelleme adım için kullanılan aynı). Az 1 saat biotin ile konjuge ikincil Ab ile inkübe </li><li> Kullanmadan önce en az 30 dakika süreyle geliştirmek zorundadır, çünkü aynı zamanda ABC reaktif hazırlayın! (Malzeme bakınız) </li><li> 50 ml konik bir tüp içinde hazırlayın. 15 ml DPBS (hiçbir serum, azid) reaktif 3 damla ekleyin, karıştırın ve 3 damla reaktif B ve karışımı ekleyin. Şişe sıkma kaçının yerine, kendi form damla bekleyin. Vektör Labs ABC kiti Vectastain PK-6100. </li><li> DPBS 3 x 5 dakika bekletin. </li><li> Oda sıcaklığında 30-45 dakika ABC reaktifi ile inkübe edin. </li><li> DPBS 3 x 5 dakika bekletin. </li><li> (Malzeme) kullanmadan önce hemen bir cam flakon, 5 ml GKD 2 O (Vektör Labs # SK-4100) DAB peroksidaz substrat hazırlayın <ul><li> 2 damla tampon stok solüsyonu, mix </li><li> DAB 4 damla, mix (hafif kahverengi haline gelmelidir) </li><li> 2 damla H 2 O 2, mix </li></ul></li><li> Bırak slaytların üstünde DAB yüzey ve kahverengi lekelere izlemek. </li><li> Buz içine batırın slaytlar + reaksiyonu durdurmak için su dokunun. </li><li> 5 dakika boyunca soğuk su altında durulayın. </li><li> Hematoksilen (20 sn; Fisher CS401-D) ile Counterstain ve su temizlemek gelene kadar musluk suyunda yıkayın. </li><li> Alkol degrade% 100 etanol (2 dk)% 30 etanol ile dehydrate. </li><li> Ksilen 3 x 5 dakika bekletin. </li><li> Permount Mount (Fisher # SP15-100): slaytta yukarıdaki bölüm koymak ve hava kabarcıkları olmadan bir bölümü ile lamel üzerine yavaşça basın. ~ 24 saat sürer, tamamen kuruyana kadar lamel hareket etmeyin. </li></ol>

<table><tbody><tr><td>Ksilen</td><td>Fisher Scientific</td><td>X3S-4</td><td>Kullanıma bağlı olarak ksilen her ay değiştirilmelidir. Ksilen TOKSİKTİR.</td></tr><tr><td>%100 etanol</td><td>Fisher Scientific</td><td>A406-20</td><td>EtOH gradyanı oluşturmak için kullanılır.</td></tr><tr><td>DPBS</td><td></td><td></td><td>Ca2+ ve Mg2+ İÇEREN Dulbecco&amp;rsquo; modifiye Fosfat Tamponlu Salin</td></tr><tr><td>Na-Sitrat tamponu</td><td></td><td></td><td>10 mM, pH 6.5</td></tr><tr><td>H2O2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H-1009</td><td>%30 stok =&amp;gt; DPBS içinde %1'e seyreltin</td></tr><tr><td>Bloklama solüsyonu</td><td></td><td></td><td>DPBS + %5 sığır serum albümini (BSA) + %0,1 Na Azid + %5 serum.</td></tr><tr><td>BSA</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sodyum Azid</td><td></td><td></td><td>NaAzid</td></tr><tr><td>avidin/biotin bloklama kiti</td><td>Vector Laboratories</td><td>SP-2001</td><td></td></tr><tr><td>Ab tamponu</td><td></td><td></td><td>DPBS + %2 BSA + %0,1 Na Azid + %2 serum (bloklama adımında kullanılanla aynı)</td></tr><tr><td>ABC kiti Vectastain PK-6100</td><td>Vector Laboratories</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DAB peroksidaz substratı</td><td>Vector Laboratories</td><td>SK-4100</td><td></td></tr><tr><td>ddH2O</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hematoksilin</td><td>Fisher Scientific</td><td>CS401-D</td><td>karşıt boyama</td></tr><tr><td>Permount</td><td>Fisher Scientific</td><td>SP15-100</td><td></td></tr><tr><td>Lam ve lamel</td><td></td><td></td><td>cam</td></tr></tbody></table>

İmmünohistokimya: parafin bölüm vektör labs vectastain abc seti

Immunohistochemistry: Paraffin Sections Using the Vectastain ABC Kit from Vector Labs

Immünhistokimyasal (İHK) lokalize / spesifik antikorların bağlanmış bir doku bölümünde protein ekspresyonu görselleştirmek için kullanılan değerli bir tekniktir. Iki yöntem vardır: doğrudan ve dolaylı yöntem. Bu deneyde, biz sadece dolaylı İHK boyama anlatacağız. Dolaylı İHK boyama son derece özel, primer ve biyotin-konjuge sekonder antikorlar kullanır. İlköğretim antikorlar ikincil antikorlar, non-spesifik bir arka plan boyanması için çıkarma ve primer antikor kompleksleri oluşturarak sinyal yükseltmek discretely ilgi, belirli bir epitop bağlanarak proteinleri tespit etmek için kullanılmaktadır. Slaytlar ya frozen üretilen veya parafin bölümleri cam slaytlar üzerine monte edilmiş olabilir. Bu protokol, biz, alkol degrade kullanarak, endojen peroksidaz aktivitesini ve non-spesifik bağlayıcı siteleri dewaxing hidrasyon, ısıya bağlı antijen alma ve engelleme parafine gömülü bölümlerinin hazırlık tartışacağız. Daha sonra bazı bölümleri için özel antikorlar ile T hücre işaretleyici CD8 lekeli ve diğerleri tirozin hidroksilaz lekeli. Slaytlar sonradan biotin için konjuge uygun sekonder antikor ile tedavi edilir, sonra substrat olarak Diaminiobenzidine (DAB) avidin-konjuge horseradish peroksidaz (HRP) kullanılarak geliştirildi. Gelişimini izleyerek, slaytlar kontrast zıt, ve permount ile lamelleri altına monte edilmiştir. Yeterli kurutulduktan sonra, bu slaytları sonra görüntüleme için hazır.

İmmünohistokimya: Parafin Bölüm Vektör Labs Vectastain ABC Seti

İmmünohistokimya (IHC), spesifik ... kullanarak, lam üzerine yerleştirilmiş bir doku kesitindeki protein ekspresyonunun lokalizasyonu/görselleştirilmesi için kullanılan değerli bir tekniktir.

Merhaba, ben Victor Chi; California Üniversitesi Irvine, Fizyoloji ve Biyofizik Bölümü'ndeki Chandy Laboratuvarı'nda lisansüstü öğrencisiyim. Bugün, Vector Laboratories'in A b, C kiti kullanılarak parafin gömülü kesitlerin nasıl boyanacağını göstereceğim. Bu prosedür; parafin gömülü kesitlerin dewaksajını ve hidratasyonunu, antijenleri açığa çıkarmak için ısı ile uyarılmış antijen geri kazanımının gerçekleştirilmesini, peroksidazın ve spesifik olmayan protein bağlanmasının bloke edilmesini, CD four, tirozin hidroksilaz ve sekonder antikorlarla inkübasyonu, ardından lamın geliştirilmesini ve kapatılmasını içermektedir.Öyleyse başlayalım. Lamlar parafine gömüldüğü için ilk adım lamlardaki parafini uzaklaştırmaktır. Bu işlem genellikle bir çeker ocak içerisinde, her biri beşer dakikalık üç yıkama şeklinde, üç ksilen kavanozu kullanılarak gerçekleştirilir.Ardından lamlar %100 etanol içine konur. Lamlar üzerindeki mumun gittiğini fark edeceksiniz, ancak lamları eldivenle tutmamaya dikkat edin çünkü ksilen eldivenlerin kauçuğunu çözer. Buradan itibaren, lamları %100 etanol içinde, bir hidratasyon gradyanına tabi tutulacakları laboratuvara geri taşırsınız.Burada, lamlarımızı uygulayacağımız hidratasyon gradyanından bahsedeceğim. İşlem önce %100 etanol içeren iki banyo ile başlar. Ardından, lamlarımızı %95 etanol içeren iki banyoya aktarırız.Ardından lamlarımızı %70 etanol banyosuna, oradan da %50 etanol banyosuna aktarıyoruz. Sonrasında lamlarımızı %30 etanola aktarıyor ve iki dakika sonra çift distile suya aktarıyoruz. Çift distile su işlemi sonrası, lamlarımızı PBS içerisinde bekletiyoruz.Şimdi size, slaytların taşıyıcılar yardımıyla bir banyodan diğerine nasıl aktarılacağını göstereceğim. İlk adım olarak, taşıyıcı tutucunuzu kullanarak slaytları çıkarın ve bir sonraki banyoya çok fazla sıvı taşımamak için fazla sıvıyı nazikçe sıyırın. Ardından, slaytı banyoya daldırın ve bir sonraki gradyan değişimine kadar iki dakika bekleyin.Dokular fikse edildiğinde, çoğu zaman antijen maskelenir ve böylece antikor ona bağlanamaz. Bu nedenle şimdi size sodyum sitrat kullanarak ısı ile indüklenen antijen geri kazanımı yöntemini göstereceğim. Şu an, immünohistokimya ile tespit etmeye çalışacağım CD eight antijenini maskesiz hale getireceğim mikrodalga fırının yanındayız.Şimdi çözeltimi ekleyip 15 dakika boyunca mikrodalgada ısıtacağım. Slaytlarımızın kurumasını önlemek için sodyum sitrat ile birlikte 15 dakika kaynatacağız. Sıvı taştığında, slaytların nemli kalmasını sağlamak için sodyum sitrat ile tekrar doldurmak üzere slaytlarımızı takip edeceğiz.Slaytlarımı sodyum sitrat içine yerleştirmeden önce, çözeltimi 45 saniye boyunca önceden ısıttım. Ardından slaytlarımı sodyum sitrata yerleştirdim ve şimdi sodyum sitratı 15 dakika boyunca ısıtıyorum. Slaytlar içindeyken, çözelti genellikle kaynama işleminin ikinci veya ikinci buçuk dakikası civarında taşmaya başlar.Bu noktada işlemi durduracağım ve eksilen sodyum sitratı taze sodyum sitrat ile tamamlayacağım. Sodyum sitratı 15 dakika kaynattıktan sonra, lamlarımızı ve çözeltiyi çıkarıp soğutmak istiyoruz. Bunu yapmanın en iyi yolu, lam tutucunun kapağını kapatmak, fazla sıvıyı boşaltmak ve kavanozun içindeki çözelti oda sıcaklığına gelene kadar soğuk su akışının altında tutmaktır.Bu işlem genellikle yaklaşık 10 ila 15 dakika sürer. Lamları lavabodan çıkardıktan sonra, dokulardaki endojen peroksidaz aktivitesini bloke etmemiz gerekir. Bunun için %30'luk hidrojen peroksit kullanarak %1'lik bir hidrojen peroksit çözeltisi hazırlayacağız.Buradan itibaren, lamları doğrudan hidrojen peroksit çözeltisine aktarıyorum. Şimdi lamlarımızı 20 dakika boyunca hidrojen peroksit içinde inkübe edeceğiz. 20 dakika geçtikten ve endojen peroksidaz bloke edildikten sonra, lamlardaki hidrojen peroksiti PBS yıkamalarıyla temizleyeceğim.Şimdi lamlarımı taşıyıcıya aktaracağım ve her biri beş dakika süren üç yıkama işlemi uygulayacağım. Dokulara zarar verebilecek diğer lamlarla teması önlemek için bu lamlar sırt sırta yerleştirilmiştir. Bu nedenle lamları sadece kaydırarak çıkarıyorum ve dokunun cama temas etme olasılığını ortadan kaldıracak şekilde düzenliyorum.Burada slaytlarımızı PBS'ye aktarıyoruz. Slaytlarımızı PBS ile yıkadıktan sonra, şimdi %5 BSA, %5 keçi serumu ve %0,1 sodyum azid içeren bir solüsyonla proteinlerin spesifik olmayan bağlanmasını önlemek için slaytları bloke edeceğim. Eğer keçi antikorlarıyla çalışıyorsanız, keçi serumunu başka bir türe ait serumla değiştirmeniz gerekir.Şimdi, lamları lam tutucuya yerleştireceğim ve çözeltimizi ekleyeceğim. Normalde, lamların hacmiyle birlikte dokuların tamamen battığından emin olmak için kabı yarıya kadar doldururum. Lamları kaba yerleştirirken dikkat etmeniz gereken noktalardan biri, dokuların kabın kenarlarına temas etmesini önlemektir.Son lam için, doku kabın kenarına değmeyecek şekilde içeri doğru döndürün. Lamları gece boyunca blokladığım için, şimdi fazla bloklama solüsyonunu her biri beş dakika süren üç kez PBS ile yıkayarak temizleyeceğim. Bu aşamada, kullanılan antikor miktarını minimize etmek için dokumuzun etrafına sıvı bloklayıcı ile bir daire çizmek istiyoruz.Antikor tasarrufu konusunda endişeniz yoksa, slaytları her zaman bloklama adımını gerçekleştirdiğimiz aynı kaplarda inkübe edebilirsiniz. Bu noktadan itibaren, dokumuzun etrafını sıvı bloklayıcı ile nasıl çevrelediğimizi göstereceğim. Öncelikle, dokuya temas etmemeye dikkat ederek fazla sıvıyı uzaklaştırıyoruz.Fazla sıvıyı temizlemek için köşelerin etrafını silin. Tekrar belirtmek gerekirse, dokuya dokunmamaya çok ama çok dikkat edin. Sıvı bloklama pimini alın, hafifçe bastırarak akışı başlatın ve buradan itibaren kaleminizle dokunun etrafını çevreleyin.Sıvı bloklayıcının yaklaşık 15 saniye boyunca kurumasına izin verin. Bu aşamada, primer antikoru eklemek istiyoruz. Bu nedenle, bir pipet kullanarak dokuyu primer antikorla tamamen kapladığınızdan emin olun ve ardından dokuyu nem kontrollü kutunuza aktarın.Bu nedenle, bir Kim wipe kullanıyoruz. Lamın primer antikor ile inkübe olduğu süre boyunca kurumasını önlemek için, bu kutudaki biraz di water ile nemlendirdik. Primer antikorumuz bir saat boyunca inkübe edildiğine göre, şimdi lamlarımızı çıkaracağız ve fazla antikoru PBS ile yıkayarak temizleyeceğiz.Bu nedenle, sıvının süzülmesini bekleyin ve örneği PBS yıkama çözeltisine yerleştirin. Ardından, beşer dakikalık üç yıkama daha gerçekleştirin. Üç adet beş dakikalık yıkama işleminden sonra, primer antikoru eklediğimiz yöntemle ikincil antikorumuzu dokuya ekleyeceğiz.Dokularınızı kaplayacak kadar hacim kullanarak, burada kullandığımız keçi anti-tavşan olan sekonder antikoru ekleyin ve lamınızı nem kontrollü hazneye geri yerleştirin. ABC yöntemini kullandığınızda temel öneme sahip olan biotinile keçi anti-tavşan sekonder antikoru kullanıyoruz. Böylece lamımızı nem kontrollü hazneye aktarıyoruz ve bir saat boyunca inkübasyona bırakıyoruz.Sekonder antikor inkübe olurken ABC reaktifini hazırlamamız gerekiyor. Vector Laboratories'in Vector Stain kitindeki ABC reaktifini kullanıyoruz. A reaktifini çıkarın, uç kısmını hazırlayın ve tüpü sıkmamaya dikkat ederek 15 mL PBS içine üç damla damlatın; çünkü damlaların özellikle ölçülü ve belirli bir boyutta olması gerekir.Sekonder antikor inkübasyonu yaklaşık bir saat sürdükten sonra, lamlarınızı alın ve tıpkı primer antikorla yaptığınız gibi tekrar PBS ile yıkayın. Her biri beş dakika süren üç yıkama işleminden sonra, lamlarınızı 30 ila 45 dakika önceden hazırladığınız ABC reaktifini eklediğiniz bu kaba aktarın. Ardından ABC reaktifini buraya ekleyip lamların üzerini doldurun ve 30 ila 45 dakika daha inkübe olmaya bırakın.Slaytlarınız yaklaşık 3-5 dakika boyunca ABC içinde bekledikten sonra, fazla ABC solüsyonunu yıkamak isteriz. Bu nedenle slaytlarınızı çıkarıp PBS solüsyonuna ekleyin. Aynı yıkama işlemini, her yıkama için beşer dakika olacak şekilde PBS içinde üç kez tekrarlamak isteriz.Slaytlar yıkanırken, Vector Laboratories marka DAB peroksidaz substratını hazırlıyorum. pH 7.5 tampon çözeltisinden iki damla ekliyorum. pH 7.5 tampon çözeltisinin ardından, DAB substrat reaksiyon reaktifinden iki damla ekliyorum.Yine belirtmek gerekir ki, damla boyutu kritiktir, bu nedenle şişeyi sıkmayın ve damlaların kendiliğinden düşmesine izin verin. pH 7.5 tamponu için iki damla ekleyin. Ardından, yine damlamasına izin vererek dört damla DAB substrat reaktifi ekleyin.Son olarak, iki damla hidrojen peroksit substrat reaktifi eklemek istersiniz. DAB substrat reaktif karışımı bu şekilde görünmelidir. Artık lamlara eklemeye hazırdır; lamlarınızı çıkarın ve PBS'nin lamlarınızdan süzülmesini sağlayın.Zamanla DAB reaktifi daha kahverengi bir renk alır. Bu aşamada reaktifi lamlara eklemek isteriz. Dokuları kaplayacak kadar hacim alarak doğrudan doku örneklerinin üzerine ekleyin.Uygun hacmi alıp doğrudan doku örneklerinizin üzerine ekleyin ve doku örnekleriniz zamanla daha kahverengiye döneceği için solüsyonun gelişmesine izin verin. DAB solüsyonunu ekledikten sonra, bu beyin kesitinde dokunun burada ve şurada kahverengiye döndüğünü görebilirsiniz. Kahverengi DAB boyaması, orta beyin dopaminerjik nöronlarını içeren bölgeyi ortaya çıkarmaktadır.Lamlarınızı iki ile 10 dakika arasında geliştirdikten sonra, reaksiyonu durdurmak için lamları buz gibi soğuk suya eklemeniz gerekir. Bu nedenle, çözeltinin süzülmesine izin verin ve lamlarınızı doğrudan buz gibi soğuk suya ekleyin. Lamlarınızı buz gibi soğuk suya daldırdıktan sonra, banyonuzu lavaboya götürün ve tüm DAB çözeltisinin banyodan tamamen süzüldüğünden emin olmak için içine yaklaşık beş dakika boyunca soğuk su akıtın.Bu nedenle, lavaboya ekleme yaparken akıntının dokuya çarpmamasına dikkat edin; bunun yerine akıntının köşelerden birine çarpmasını ve dokularınızın suyun akışıyla sarsılmaması için sadece taşmasını sağlayın. Slaytları yıkamadan çıkardıktan sonra karşıt boyama yapmanız gerekir. Peki, neden karşıt boyama yapmak isteyesiniz?Bunun bir nedeni, dokunuzun yapısını görmek istemeniz olabilir. Bir diğer nedeni ise tüm hücreleri görselleştirmektir. Bu nedenle, çekirdekleri temsil eden hematoksilen ile karşıt boyama yapacağız.Şimdi lamlarımızı alıp fazla sıvıyı uzaklaştıracağız ve lamları Hemat Hematin çözeltisine sadece bir kez daldıracağız. Bir kez daldırıp çıkardıktan sonra doğrudan suyun içine ekleyin. Lamları musluk suyuna ekledikten sonra, daha önce buz gibi soğuk su banyosuyla yaptığınız gibi lamları suyun altında tutun.Hematoksilen yıkama işlemi için, kavanozun içindeki su berraklaşana kadar musluk suyu altında bekletin. Kontrast boyanan lamları sudan çıkardıktan sonra, lamları yenidenyansızlaştırmak (dehidre etmek) isteriz. Bu nedenle lamları, etanol gradyanından ters sırayla tekrar geçirmemiz gerekir.Süreç şu şekilde ilerleyecektir: bir kez deiyonize su ile, bir kez %30 etanol ile, bir kez %50 etanol ile, bir kez %70 etanol ile, iki kez %95 etanol ile ve iki kez %100 etanol ile yıkama yapılacak ve her bir yıkama iki dakika sürecektir. Lamlarınızı çıkarın, fazla sıvıyı silin ve doğrudan %30 etanola ekleyip iki dakika bekletin. Son %100 etanol yıkamasından sonra lamları tekrar ksilen içerisine yerleştirmeliyiz.Slaytlarınızı tekrar alın, fazla sıvıyı sıyırın, slaytları alın ve beş dakika boyunca ilk ksilen çözeltisine ekleyin. Böylece, her biri beş dakika süren üç ardışık ksilen yıkaması yapılmış olacak. Artık slaytlarımızı monte etmeye hazırız.Genellikle yaptığım işlem, slaytlar hazır olmadan bir dakika önce pastör pipetimle perm mount solüsyonunu çekmek ve slaytlar çıkmaya hazır hale gelene kadar yaklaşık bir dakika beklemetir. Son ksilen yıkamasından sonra, eldivenlerinizi ksilenin içine daldırmamaya veya ıslatmamaya dikkat ederek, dokunun hangi tarafta olduğuna özen gösterip slaytları bir cımbız yardımıyla çıkarın. Dokuya dokunmamaya dikkat ederek, fazla ksileni bir Kimwipe ile nazikçe silin; sadece köşeleri ve kenarları dikkatlice silerek ksilenin büyük kısmının buharlaşmasını sağlayın. Muhtemelen biri kurumadan önce iki slayt üzerinde çalışabilirsiniz.Bir lamın kuruması tamamlandığında, diğer lam çalışmaya hazır olmalıdır. Tamamen kurumadan önce bunlar üzerinde çalışmanız gerekir. Bu nedenle, perimount'u alıp dokunuza değdirmemeye dikkat ederek dokunuzun yanına ince bir çizgi çekmelisiniz.Kapak camınızı alarak perimount'u temizleyin. Kapak camını 45 derecelik bir açıyla yerleştirin ve yavaşça aşağı doğru eğilmesini sağlayın. Ardından, perimount'un tüm dokuları kapladığından emin olarak kapak camını kaydırın.Ardından, onu yerleştirin ve tüm fazla hava kabarcıklarını gidermek için merkezden hafifçe bastırın. İkinci dokunuzla çalışırken kurumaya bırakın; ancak lamlara hemen bakılmamalıdır. Lamlarımızı incelemeden önce perma mount'un gece boyunca kurumasına izin vermemiz gerekir.Aksi takdirde, mikroskop ışığı altında perma mount kabarcıklar oluşturacak ve böylece numuneniz bozulacaktır. İşte kimyasallar ve tirozin hidroksilazı hedefleyen tavşan poliklonal antikoru ile boyama sonrası beyin kesitlerimizin görünümü. Yine, kahverengi DAB boyaması orta beyindeki dopaminerjik nöronların konumunu göstermektedir.Hematin karşıt boyası, bu dokudaki tüm çekirdekleri maviye boyar. Böylece, Vector Laboratories'den alınan ABC kitini kullanarak parafin gömülü kesitlerin nasıl boyandığını göstermiş oldum. Artık, boyayacağınız doku türlerine ve kullanacağınız antikorlara göre koşulları ayarlamak isteyeceksiniz.Deneylerinizde başarılar dileriz.

immunohistochemistry-paraffin-sections-using-vectastain-abc-kit-from

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Yerinde tetramer boyama in situ hibridizasyon (ISTH) birleştirerek bir tekniği görselleştirme, haritalama ve analiz, virüs bulaşmış hedefleri virüs spesifik CD8 + T hücreleri mekansal yakınlığı ve bu bağışıklık etkileyiciler ve hedefleri arasındaki nicel ilişkilerin belirlenmesi sağlar enfeksiyon sonuçlarını.

Aynı zamanda Virüs CD8 + T Hücreleri ve virüsle enfekte olan hücreleri görselleştirin için bir Tekniği In situ</em

Fizyolojik anjiyogenez ve yoksun Normal erişkin vaskülarize memeli doku çalışma için kullanılan cerrahi müdahaleye maruz kalmamış: (i) başlatılması ve test ajanların intraperitoneal uygulanması aşağıdaki anjiyogenez geliştirilmesi; ve sistemik uygulanması aşağıdaki (ii) anjiyogenez değişiklik Test ajanlar seçilir.

Rat mezenter Anjiyogenez Testi

Burada kantitatif immünofloresan, görüntü analizi, ve heterojenlik istatistiksel bir ölçü kullanarak, tümör malzeme histolojik bölümlerde moleküler heterojenite ölçmek için bir yöntem açıklanmaktadır. Bu yöntem, klinik biyomarker geliştirme ve analiz kullanım için tasarlanmıştır.

Kantitatif İmmünofloresan kullanarak Tümörler Protein İfade heterojenite Haritalama

Bu videoda, endobronşiyal biyopsilerden dendritik hücreleri tanımlamak için immünohistokimyasal boyama tekniği açıklanmaktadır.

İmmünohistokimyasal Boyama: İnce Doku Kesitlerinden Mekansal Bilgi Elde Etmeye Yönelik Bir Yöntem

Bu makalede açıklanan dolaylı immünfloresan protokol algılama ve fare meme bezinde proteinlerin yerelleştirme verir. Tam bir yöntem olup, meme bezi örnekleri hazırlamak için floresan mikroskobu ile görüntü, doku kesitlerinde immunhistokimya gerçekleştirmek için ve görüntüleri yeniden verilir.

Fare Meme Bezinin Dondurulmuş Bölümler Dolaylı İmmünofloresan

Bu protokol Fare deride çıplak plazmid DNA eksprese etmek için uygun maliyetli bir alternatifidir. protokol genel amacı deri iltihabı, belirli bir genin işlevsel rolünü betimlemişlerdir cilt dokusuna immün ilişkili genleri sunmaktır.

&quot;Acufection&quot; ve Cilt Araştırmaları onun Uygulaması tarafından bir Ekonomik DNA Yerleştirme Sisteminin Geliştirilmesi

Burada, situ MHC-tetramer boyama immünhistokimya yerelleştirme, fenotip ve dokularda antijen spesifik T hücrelerinin miktarını belirlemek ile bir araya getiren bir yöntemi açıklanmaktadır. Bu iletişim kuralı diğer hücre tipi ve dokularda yapıları göreli antijen spesifik CD8 T hücrelerinin kayma ve fenotipik özellikleri belirlemek için kullanılır.

Situ MHC-tetramer boyama ve kantitatif fenotip antijen spesifik CD8 T hücre dokularında, bereket ve konumunu belirlemek için analiz

Morfolojik bilgi aynı zamanda gerekli olduğunda şu anda, immünfloresan sabit hücreleri üzerinde boyama seçim protein ifade düzeyleri tespiti için yöntemidir. Burada sunulan bu protokolü parafin gömülü hücre bloklar immunocytochemistry alternatif bir yöntem sağlar.

Immunocytochemistry hücre parafin gömülü bloklar tarafından kültürlü hücrelerdeki Protein ifade düzeyinin belirlenmesi

In vivo immünfloresans lokalizasyonu (IVIL) yöntemi, in vivo tümör hedeflemesi ve ekzo immünboyama kombinasyonu nu kullanarak canlı organizmalarda onkolojik amaçlarla antikor ve antikor konjugatörlerinin in vivo biyodağılımını incelemek için kullanılabilir. Yöntemler.

Kanser Araştırmalarında Terapötik ve Tanısal Antikor Biyodağılımının Değerlendirilmesi için In Vivo Immunofluoresence Lokalizasyonu

Bu deneysel protokol, esas olarak tek kanallı antikor inkübasyon koşullarını optimize ederek ve klinik kökenli akciğer kanseri dokularında otofloresan ve kanal karışma problemlerini çözmek için antikorların ve kanalların ayarlarını ayarlayarak bir multipleks immünohistokimya (IHC) boyama yöntemini tanımlar ve optimize eder.

Parafine Gömülü Akciğer Kanseri Dokusu için Multipleks İmmünohistokimya Boyama

Bu el yazması, optimize edilmiş bir heparin bazlı afinite kromatografisi yöntemi kullanılarak adeno ile ilişkili viral vektörlerin üretilmesi ve saflaştırılması için ayrıntılı bir protokolü açıklamaktadır. Ultrasantrifüjleme ihtiyacını ortadan kaldıran basit, ölçeklenebilir ve uygun maliyetli bir yaklaşım sunar. Elde edilen vektörler, klinik öncesi çalışmalarda değerlerini kanıtlayan yüksek saflık ve biyolojik aktivite sergiler.

Adeno ile İlişkili Viral Vektörlerin Tek Adımlı ve Yarı Otomatik Heparin Afinite Kromatografisi Protokolü ile İzolasyonu

Öğrenin, parafin gömülü doku kesilerini Vectastain ABC kiti ile boyama yöntemini. Isıya dayalı antijen geri kazanımı ve peroksidaz bloke adımlarını içeren bu protokol, immünohistokimya çalışmalarında güvenilir sonuçlar sağlar.

İmmünohistokimya: Parafin Bölüm Vektör Labs Vectastain ABC Seti

Daha fazla video keşfet