Fagozom Oluşumu ve Kapanışının TIRF Mikroskobu Tabanlı Görselleştirilmesi
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
İmmünoloji
0 görüntülenme • 4:13 dk. • July 8th, 2025
Yüzeyine yapışmış IgG-opsonized kırmızı kan hücreleri veya RBC'ler içeren polimer kaplı bir cam alt tabak alın.
Çanağı, fizyolojik sıcaklıkta tutarak toplam iç yansıma floresan mikroskobu aşamasına yerleştirin.
Hücre iskeleti görselleştirmesini kolaylaştıran, polimerize aktine bağlanan floresan etiketli sitoplazmik peptitler içeren makrofajlar ekleyin.
Görüntüleme sırasında, bir lazer ışınını kritik açıdan daha üstün bir açıyla yönlendirerek temas noktasında iç yansımaya ve geçici dalga oluşumuna neden olur.
Buharlaşan dalgalar, cam numune arayüzündeki floroforları seçici olarak aydınlatır ve fagositozun gerçek zamanlı olarak görselleştirilmesini sağlar.
Makrofaj Fc reseptörleri, IgG-opsonize RBC'ye bağlanır ve temas alanı etrafında reseptör kümelenmesine neden olur.
Kümelenme, hücre içi sinyal yollarını ve GTPaz aktivasyonunu tetikleyerek aktin polimerizasyonunu ve dinamin alımını hızlandırarak psödopodlar oluşturur.
Psödopodlar, RBC'nin etrafına uzanır ve fagositik bir kap oluşturur.
Sonunda, psödopod uçları birleşir. Biriken dinamin, opsonize RBC'yi içselleştirerek hücre zarından fagozom ayrılmasına aracılık eder.
SRBC'lerin kovalent olmayan fiksasyonu için, polilizin kaplı taba
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin