Mikroglia tarafından Tau proteini alımını değerlendirmek için hücre bazlı bir test

Beyindeki yapışmış murin mikroglia - fagositik hücreleri içeren düz tabanlı çok kuyulu bir plaka ile başlayın.

İmmünokompleksler içeren serum içermeyen bir ortam tanıtın. Bu kompleksler, belirli nörodejeneratif hastalıklar sırasında oluşan fosforile Tau protein agregatlarına bağlı antikorlardan oluşur.

Tau agregaları, pH'a duyarlı yeşil floresan boya ile etiketlenmiştir.

İnkübasyon sırasında, bu immünokompleksler, mikroglial hücrelerin Fc reseptörleri ile etkileşime girerek yutulmalarını kolaylaştırır.

Bu immünokompleks içeren endozom bir lizozom ile birleşerek bir endolizozom oluşturur. Endolizozomun asidik ortamı, boya moleküllerinin floresan oluşmasına neden olur.

İçselleştirilmemiş immünokompleksleri çıkarmak için yıkayın.

Hücreleri ayırmak için tripsin-EDTA çözeltisi ile tedavi edin.

Endolizomu stabilize etmek için hücre süspansiyonunu buz üzerine yerleştirilmiş bir U-alt plakaya aktarın. Hücreleri pelet haline getirin ve süpernatanı atın.

Hücreleri FACS tamponu ile yıkayın ve yeniden süspanse edin.

FACS'ı kullanarak, tek canlı hücreleri tanımlayın ve mikroglia tarafından Tau alımını değerlendirmek için yeşil floresan yoğunluğunu ölçün.

Deneyin ilk gününde, BV-2 hücrelerini ön