Name: Drosophila pupa Karın İmmünohistokimya (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-10-02T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 29 s
Description: Öğrenin Drosophila pupa karın immünohistokimya protokolü ile epitel morfojenez ve doku reorganizasyonunu incelemeyi. Bu yöntem yetişkin karın gelişiminin genetik analizlerini kolaylaştırır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışma, Ulusal Bilim Vakfı hibe tarafından desteklenen oldu.

1. 1. Gün Başlamadan önce: Sinek sağlıklı bir nüfus standart kültür protokolleri kullanarak muhafaza edilmelidir: yumurta yatıyordu ve geliştirme 3. instar larvaları pupariation başlatmak dolaşıp kadar sabit bir sıcaklıkta devam etmek için izin 3-4 gün sonra, şişe veya şişeleri yetişkin kaldırmak . Larva / pupa geçiş prepupae (0 saat sonra kabul puparium oluşumu-APF) oluşumu ile işaretlenir. TAŞINMAZ pupa beyaz renklenme büyük pupa ve larvalar, henüz dikdörtgen, yuvarlak şekilli ve ön spiracles çıkıntısı pupariation başlamamış ayırt edilirler. Şunlara ihtiyacınız olacak: <ul><li> Pupa toplamak için bir boya fırçası </li><li> Kültür pupa için nemli odasına: Petri kabı ıslatılmış kağıt havlu ile kaplı ve pupa toplanması, genotip ya da cinsel çeşitli noktalarında işaretlenmiş filtre kağıdı ile kaplı </li><li> 1X Fosfat pupa yıkamak için tamponlu salin (PBS) </li></ul> Koleksiyon, kültür ve evreleme pupa <ol><li> Islak bir fırça kullanarak 0hr APF pupa kültürü şişeleri / flakon yavaşça kaldırın ve nemli haznesinin kapağı koyun. </li><li> Fırça ve 1X PBS kullanarak pupa pupa halinde enkaz kaldırmak için hafifçe yıkayın </li><li> Eğer gerekli sıralama, cinsiyete göre pupa. Pupa gonad primordia cinsiyetler sıralamak için kullanılabilir. Erkek gonad primordia saydam diskler, yaklaşık 2 / 3 5 vücut uzunluğu aşağı pupa manikür yoluyla kolayca görülen bir yan çifti . Kadın gonad primordia küçük ve kolayca tespit edilmemiştir. </li><li> Pupa nemli odasında uygun etiketli pozisyonda yerleştirin ve sabit sıcaklıkta dönmek. Kültür uygun gelişimsel bir zaman noktasında. </li></ol> 2. 2. Gün: Diseksiyon, fiksasyon ve primer antikor inkübasyon Başlamadan önce: Şunlara ihtiyacınız olacak: <ul><li> Diseksiyon stereomikroskopta </li><li> Cerrahi forseps </li><li> Cerrahi neşter sayısı 11 bıçaklar </li><li> İki dokuz iyi cam depresyon yemekleri (Corning ürün # 7220-85) <ul><li> 1X PBS ile bir çanak kuyu doldurun: Bu disseke pupa temizlik için durulama çanak </li><li> Fiksasyon tamponu ile ikinci çanağı kuyu doldurun </li></ul></li><li> Antikor inkübasyon için Nemli odası. Biz, ıslatılmış kağıt havlu ile kaplı plastik yapışmalı, sandviç kutuları kullanın. </li><li> Fiksasyon tampon: 1x PBS,% 4 paraformaldehid,% 0.2 deoxycholic asit (permeabilization için) </li><li> Diseksiyon platformu: Clear mikroskop lamı, bir tarafında çift taraflı bant yapıştırılır bir parça ile </li><li> 1X PBS </li><li> P100 veya P200 pipet </li></ul> Diseksiyon <ol><li> Forseps kullanarak hafifçe pupa tek bir seferde kaldırmak ve geniş bant genişliği karşı karşıya pupa ön ucu ile diseksiyon platformu üzerine koyun. Pupa aşırı ıslak ise, ilk, kağıt havlu ile kurulayın kurulayın. </li><li> Pupa tamamen bant yapıştırılır önce, yerleştirmek için bir fırça kullanın. </li><li> İzin hava kuru pupa ve bant (5-10 dakika) bağlı </li><li> Bilateral cerrahi bistüri ile her pupa teşrih. Bu en iyi ön pupa arka sonuna kadar tek bir hızlı kesim gerçekleştirilir. Eğer doğru yapılırsa, kesme, ön ve arka spiracles çiftleri iki eşit parçaya böler. Yıkama ve hızlı bir şekilde, doku proteolitik hasarı önlemek için gerekli örnekleri temizliği gibi bir seferde en fazla 10 pupa parçalara ayır. </li><li> Bir fırça kullanarak, bant gevşetin her disseke pupa 1X PBS küçük bir miktar transfer. </li></ol> Temizleme, fiksasyon ve primer antikor inkübasyon <ol start="6"><li> Bir çift cerrahi forseps anteriora bireysel bir pupa yarım kavramak ve hemen durulama çanak iyi batırmayın ile. Diseksiyonu platformu mikroskop sahnede durulama çanak tarafından değiştirilmesi gerekir. Işlemleri tamamlandıktan ve örnekleri montaj için hazır olana kadar pupa halinde numune bırakılmalıdır. </li><li> Hala açgözlü iken pupa yarısı karın iç doku hafifçe yıkamak için bir pipet kullanın. Yıkama sırasında çok fazla baskı epitel hücrelerinin kaybına yol açabilir. </li><li> Hemen oda sıcaklığında temiz pupa yarım fiksasyonu tampon transferi ve kalan pupa yarıya benzer bir süreç. 20 pupa yarısının uygulama, teşrih ve yıkama 5 dakikadan daha az almalıdır. </li><li> Pupa fiksasyonu tampon 1 (bir) saat oda sıcaklığında inkübe izin verin. </li><li> 1X PBS sabit pupa 3x beş dakika durulayın </li><li> Örnekleri immünohistokimya için hemen işlenmiş olabilir veya hücreleri veya epitopu reaktivite kaybı olmadan 3 aya kadar, -20 ° C'de% 100 etanol saklanabilir. </li><li> Örnekleri saklamak için, bir seyreltme yoluyla örnekleri dengelenmesiPBS serisi:% 100 EtOH transfer öncesinde her seyreltme 20 dakika oda sıcaklığında EtOH (3:1, 1:1, 1:3). </li><li> Örnekleri immünohistokimya için işleme önce ters dizi PBS yeniden dengelenmiş olmalıdır. </li><li> 1x PBS (2% sığır serum albümini ile desteklenmiş) 1 (bir) saat primer antikor ek önce örnekleri Blok. </li><li> 4 gece boyunca uygun konsantrasyonu 1X PBS içinde seyreltilir primer antikor ° C sallanan olmadan inkübe edin. </li></ol> 3. 3. Gün: Sekonder antikor inkübasyon, montaj ve görüntüleme Başlamadan önce: Şunlara ihtiyacınız olacak: <ul><li> İki cerrahi forseps </li><li> Montaj medya (gliserol, Vectashield [Vektör Labs], ya da Slowfade Altın [Invitrogen]) </li><li> Depresyon iyi mikroskop lamı (0.8 mm) </li><li> Lamelleri (24 x 40 mm) </li></ul> İkincil antikor kuluçka ve montaj: <ol><li> Örnekleri 3x 1x PBS ile 10 dakika yıkayın </li><li> Ikincil antikor ek önce 1x PBS (2% sığır serum albümini ile desteklenmiş) 1 (bir) saat örnekleri Blok. </li><li> 1X PBS uygun konsantrasyon olmadan karanlıkta, oda sıcaklığında 3 (üç) saat sallanan seyreltilmiş ikincil antikor ile inkübe edin. </li><li> Örnekleri 3x 1x PBS ile 10 dakika yıkayın </li><li> Eğer uygunsa, counterstain pupa (Örnek DAPI ile çekirdekleri leke [4 ',6-diamidino-2-phenylindole] 10 dakika PBS içinde seyreltilmesi). </li><li> Montajdan önce uygun ortam örnekleri (en az 30 dakika) dengelenmesi. </li><li> Bir örnek slayt hazırlayın. Pupa morfolojisi düz montaj önler. Örnekleri iyi görüntüleme için bir depresyon slayt (damla slayt) monte edilir. Place de depresyon montaj medya 75-100ul. Çeşitli örnekler tek bir slayt monte edilebilir. </li><li> Pupa halinde montaj edilmeden önce numuneleri uzaklaştırılmalıdır. Anteriora iç pupa membran kavramak için emin bir birey pupa halinde tutun. </li><li> Ikinci bir çift forseps ile yavaşça başkanı tarafından iç pupa membran kavramak ve pupa halinde çıkarın. </li><li> Hemen depresyon örnek aktarmak ve ek örnekler işleme devam edin. </li><li> Lateral yüzeyi yukarı bakacak şekilde depresyon iyi örnekleri düzgün bir prob veya forseps pozisyonu kullanarak. Ara sıra hava kabarcığı, bir sonda ile kaldırılabilir. </li><li> Yavaşça hava kabarcıklarının tanıtmak için özen örnekleri üzerine lamel düşük </li></ol> 4. Temsilcisi sonuçları: Örnekler bu protokolü yetişkin karın brüt morfoloji korumak kullanılarak hazırlanmıştır. Resim yığınlarının karın topoloji araştırmak için uygulanabilir bir iki boyutlu görüntü ve 3 boyutlu render oluşturmak için tahmin edilebilir. <img src="/files/ftp_upload/3139/3139fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1. Drosophila pupa Segmentasyondaki gen ürünleri kanatsız protein ve Engrailed ifade (En-gal4: UAS-GFP) ve anti-GFP fare anti-Wg (Iowa Hibridoma Bankası 4D4) ile 26 saat sonra (APF) puparium oluşumu görüntülendi. 10x büyütme, ön sol ve dorsal kadar. Nucleii DAPI ile zıt. Yaklaşık 50 görüntü (2.5μm dilimleri arasında ΔZ) yığınlar tahmin edildi.

<ol><li>Kopp, A., Duncan, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anteroposterior+patterning+in+adult+abdominal+segments+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Anteroposterior patterning in adult abdominal segments of Drosophila.</a> Dev. Biol. 242, 15-30 (2002).</li>
<li>Ninov, N., Chiarelli, D. A., Martin-Blanco, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extrinsic+and+intrinsic+mechanisms+directing+epithelial+cell+sheet+replacement+during+Drosophila+metamorphosis%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Extrinsic and intrinsic mechanisms directing epithelial cell sheet replacement during Drosophila metamorphosis.</a> Development. 134, 367-379 (2007).</li>
<li>Bischoff, M., Cseresnyes, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+rearrangements%2C+cell+divisions+and+cell+death+in+a+migrating+epithelial+sheet+in+the+abdomen+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Cell rearrangements, cell divisions and cell death in a migrating epithelial sheet in the abdomen of Drosophila.</a> Development. 136, 2403-2411 (2009).</li>
<li>Matsuda, R. in Morphology and evolution of the insect abdomen. , Pergamon Press. Oxford. (1976).</li>
<li>Kerkis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Growth+of+the+Gonads+in+Drosophila+Melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">The Growth of the Gonads in Drosophila Melanogaster.</a> Genetics. 16, 212-224 (1931).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Bu video sunulan teknikler gelişimsel zaman noktalarında çeşitli Drosophila pupa hazırlamak için kullanılabilir. 32 saat 24 saat süre APF sırasında işlenmiş pupa APF epitel hücre kaybını en yatkındır. Genişletilmiş İnkübasyon sırasında deterjan kullanımı (örneğin, Triton X-100 ve Tween-20 gibi) hücre kaybı olasılığını artırır ve bu nedenle tavsiye edilmez. Aksine, deoxycholic asit, ilk fiksasyonu adımı sırasında bir deterjan olarak kullanılır. Tüm sonraki basamaklar deterjan olmadan 1X PBS yapılmaktadır. Ayrıca, uzun İnkübasyon sırasında örnekleri sallanan hücre kaybını artırır ve kaçınılmalıdır. Örnekleri konfokal mikroskopi teknikleri kullanarak görüntülü olabilir. Ancak, Drosophila pupa da anlatıldığı gibi işlenmiş konfokal teknikleri ile kıyaslanabilir görüntü kalitesi veren yapılandırılmış bir aydınlatma mikroskopi sistemi kullanarak görüntülü olabilir.

<ul><li> Diseksiyon stereomikroskopta </li><li> Cerrahi forseps </li><li> Cerrahi neşter sayısı 11 bıçaklar </li><li> Dokuz iyi cam depresyon yemekleri (Corning ürün # 7220-85) </li><li> Nemli odasına kültür pupa </li><li> 1X fosfat tamponlu salin (PBS) </li><li> # 11 cerrahi neşter </li><li> çift ​​taraflı bant </li><li> Fiksasyon tampon: 1x PBS,% 4 paraformaldehid,% 0.2 deoxycholic asit (permeabilization için) </li><li> P100 veya P200 pipet </li><li> Depresyon iyi mikroskop lamı (0.8 mm) </li></ul>

drosophila pupa karın İmmünohistokimya

Drosophila Pupal Abdomen Immunohistochemistry

Drosophila pupa karın epitel morfolojilerinden çalışma ve cinsel dimorfik 1-3 morfolojileri gelişimi için kurulmuş bir model sistem. (25 ° C) yaklaşık 96 saat boyunca pupa devresi sırasında, hayali hücreleri prolifere popülasyonlar erişkin karın segmentleri üretmek için larva epidermisi değiştirin. Bu hayali hücreleri, embriyogenez sırasında doğan, larvaların her karın segment histoblast yuva yan çift olarak var. Histoblast yuva dört çift yetişkin dorsal kütikül (anterior ve posterior dorsal yuvalar), ventral kütikül (ventral yuvalar) ve her segmentin (hava deliği yuvalar) 4 ile ilişkili spiracles neden olmaktadır. Puparation üzerine, bu diploid hücrelerinde (büyük polyploid larva epidermal hücreler-LECs boyutuna göre ayırt) proliferasyon, göç ve LECs değiştirilmesi basmakalıp bir süreç başlar. Çeşitli moleküler ve genetik araçları yetişkin karın morfonogenezi yer alan genetik yollarının katkıları araştırmak için istihdam edilebilirler. Ultimate yetişkin fenotiplerinin genellikle yetişkin karın tırnak etlerini aşağıdaki diseksiyon analiz edilmektedir. Ancak, altta yatan moleküler süreçlerin incelenmesi benzersiz zorluklar pupa epitel immünohistokimyasal analizleri, gerektirir. Geçici olarak iki ayrı epitel nüfus (larva ve hayali), dinamik morfolojilerinden ve etkileşimleri, diseksiyon ve daha sonraki işleme sırasında aşırı hücre kaybı eğilimli kırılgan bir doku oluşturur. Diseksiyon, sabitleme, montaj ve tutarlı yüksek kaliteli örnekleri konfokal veya standart floresan mikroskopi için uygun oluşturmak immunohistokimyasal çalışmalar için Drosophila pupa abdominem epitel görüntüleme yöntemleri geliştirmişlerdir.

Antikor boyama<em&gt; Drosophila</em&gt; Pupa yetişkin karın gelişim genetiği genetik analizler artırabilirsiniz. Biz sahneye diseksiyon, fiksasyon ve antikor boyama için protokol mevcut<em&gt; Drosophila</em&gt; Pupa karın.

Drosophila pupa Karın İmmünohistokimya

Drosophila pupa abdomeni, epiteliyal morfogenez ve cinsel dimorfik yapıların gelişiminin incelenmesi için kabul görmüş bir model sistemdir...

Bu prosedürün genel amacı, immünohistokimya için drosophila puy'un abdominal epitelini hazırlamaktır. Bu işlem, önce stage drosophila puy'un bilateral olarak diseke edilmesi ve internal organların çıkarılmasıyla gerçekleştirilir; böylece sadece prolifere olan imaginal hücreler, osteoblastlar ve larval epidermal hücrelerden oluşan abdominal epitel, pupa membranına yapışık halde kalır.Doku daha sonra fiksle ve dış göz kılıfından alınan antikorlarla inkübe edilir; ardından abdominal epitelyumun genel morfolojisini ve ilgilenilen proteinlerin ekspresyonunu göstermek için immünofloresan mikroskopi ile görüntülenir. Merhaba, ben John Yoder. Laboratuvarım Alabama Üniversitesi Biyolojik Bilimler Bölümü'ndedir.Merhaba, ben we won. Yoda laboratuvarında birinci sınıf bir öğrenciyim. Bugün size drosophila pupa diseksiyonu ve drosophila pupa abdomeninin immünohistokimyası için kullandığımız yöntemimizi göstereceğiz.Bu yöntem, epitelyal morfogenez ve doku yeniden organizasyon süreçlerini araştırmak için kullanılabilir. Biz özellikle, yetişkin drosophila abdomeninin cinsel olarak dimorfik morfolojisinin gelişimini incelemek için bu tekniği kullanıyoruz. Yetişkinlerin bulunmadığı 25 °C'lik bir popülasyon şişesinden, henüz immobilize olmuş, kütikülleri henüz renklenmeye başlamamış pupaları belirleyin; bunlar 0 saatlik pupa (PF) olarak kabul edilir. Islatılmış bir boya fırçası kullanarak, bu pupaları nazikçe çıkarın ve nemlendirilmiş bir haznenin kapağına yerleştirin. Boya fırçası ve PBS kullanarak, gerekirse pupa kılıflarındaki kalıntıları nazikçe yıkayarak temizleyin.Sıfırıncı saatte pupaları cinsiyetine göre ayırın. Erkeklerde goad primordiumları pupa kütikulası üzerinden kolayca görülebilir. Vücudun yaklaşık üçte iki boyunca aşağıda, dişilerin goad primordiumları daha küçüktür ve tanımlanmaları o kadar kolay değildir.Şimdi, pupayı nemlendirilmiş odadaki ıslatılmış filtre kağıdına yerleştirin. Kapağı kapatın ve onları sabit sıcaklıktaki ortama geri koyun. Hayvanlar ilgilenilen gelişim zaman noktasına ulaştığında, diseksiyona geçin.24 ila 32 saatlik A PF puby örneklerinin, sonraki işlemler sırasında epitel hücre kaybına en yatkın olduğunu unutmayın. Şeffaf bir lamın bir kenarı boyunca çift taraflı bant yapıştırarak diseksiyon için hazırlık yapın. Ardından, ön küreler arasından her bir pupili pensle nazikçe kavrayın ve dorsal tarafı yukarı gelecek şekilde bandın üzerine yerleştirin.Çok yavaş çalışmamak için bu şekilde en fazla 10 PPE sıralayın. Beş ila 10 dakika içinde PPE'ler tamamen sabitlenecektir; ancak bu gerçekleşmeden önce, bir boya fırçası kullanarak onları eşit aralıklarla açın ve paralel şekilde konumlandırın. Bu aşamada uzun süreli kurutma, kalitelerini düşürecektir.Bu nedenle hızlı hareket edin. Şimdi her iki taraftaki pupa A'ları diseke etmek için cerrahi bir bistüri kullanın. Pupanın ön ucundan arka ucuna doğru tek ve hızlı bir kesi yapın.Doğru şekilde yapıldığında, kesim işlemi hem ön hem de arka küresel çiftleri ikiye bölerek, pupayı banttan ayırmak için simetrik sol ve sağ yarılar oluşturacaktır. Cerrahi pensler kullanarak, bir fırça yardımıyla diseke edilen her pupaya az miktarda PBS uygulayın. Bir pupa yarısını ön ucundan tutun ve diseksiyon mikroskobu tablasındaki PBS dolu durulama kabına daldırın; pupayı tutmaya devam ederken, bir pipetle karın boşluğuna PBS pompalayarak iç dokuyu nazikçe yıkayıp temizleyin.Epitelden hücre kaybı yaşanmaması için çok fazla basınç uygulamaktan kaçının. Temiz dokuyu derhal oda sıcaklığındaki 400 µL fiksasyon tamponuna daldırın ve tüm pupa yarılarını temizleyin. Benzer şekilde, uygulama ile 20 PU yarısının diseksiyonu ve yıkanması beş dakikadan kısa sürmelidir.Puyların oda sıcaklığındaki tespit tamponunda bir saat boyunca inkübe edilmesini sağlayın ve ardından her yıkama için beş dakika boyunca 400 µL PBS ile üç kez durulayın. Örnekleri saklamak için öncelikle %100 methanol ile iki kez durulayın, ardından saklama için %100 ethanol'e aktarın. Bu örnekler, herhangi bir hücre kaybı veya epitop reaktivite kaybı olmaksızın -20 °C'de %100 ethanol içerisinde üç aya kadar saklanabilir.Saklanan örnekleri işlemek için, öncelikle bir etanol serisi aracılığıyla PBS içinde yeniden derecelendirilmelidirler. Örnekleri oda sıcaklığında, sallamadan bir saat boyunca %2 BSA içeren PBS ile bloke ederek immünohistokimyaya geçin. Örneklerin sallanması, abdominal epitelden hücre kaybını önemli ölçüde artırır.Ardından bloklama çözeltisini, PBS içinde uygun konsantrasyona seyreltilmiş primer antikor ile değiştirin. Örnekleri, ertesi gün buharlaşmayı önlemek için kapalı, nemlendirilmiş bir oda içerisinde, sallamadan, dört santigrat derecede gece boyunca inkübe edin. Örnekleri, sallamadan, her yıkama için 10 dakika süreyle PBS ile üç kez yıkayın.Ardından numuneleri, %2 BSA içeren PBS içerisinde sallamadan bir saat boyunca bloke edin. Bloklama solüsyonunu, PBS içindeki oda sıcaklığındaki sekonder antikor ile değiştirin. Daha sonra numuneleri karanlıkta, sallamadan üç saat boyunca inkübe edin.Uygunsa, sekonder antikoru takiben PBS ile 10'ar dakikalık üç yıkama işlemi gerçekleştirin. Örneği karşıt boyayın; örneğin, çekirdekler PBS ile seyreltilmiş DPI içerisinde 10 dakikalık bir inkübasyon ile boyanabilir. Ardından, örnekleri minimum 30 dakika boyunca montaj medyumunda bekletin.Numuneleri monte etmek için, ikinci bir pens setiyle iç göz bebeği membranına temas etmemeye dikkat ederek her bir göz bebeği kılıfını ön kısımdan tutun. İç göz bebeği membranını baş kısmından nazikçe kavrayın. Ardından, numuneyi göz bebeği kılıfından yavaşça çekerek çıkarın.unca örneğini, 75 ila 100 µL mountlama medyumunun bulunduğu bir çukur lam üzerine aktarın. Tek bir lam üzerine birden fazla örnek yerleştirilebilir. Şimdi, örnekleri çukurun içine eşit şekilde yerleştirmek için bir prob ve pens kullanın.Yan yüzeyleri yukarı bakacak şekilde döndürün ve herhangi bir hava kabarcığını bir prob yardımıyla giderin. Son olarak, bu hazırlık aşamasında hava kabarcığı oluşturmadan lameli numunelerin üzerine yavaşça indirin. Yapılandırılmış aydınlatma mikroskopisi, konfokal tekniklerle karşılaştırılabilir olacaktır.Bu, kesitler arasında 2.5 mikron olan 50 konfokal görüntünün projeksiyonudur. Doku, PF'nin 26. saatindedir ve boyama; wingless proteininin, grail tarafından yönlendirilen GFP'nin ve çekirdeklerin ekspresyon paternini göstermektedir. Anterior sol tarafta, dorsal özellikler ise ekranın üst kısmındadır.Bu video, örneklerin genel morfolojisinin prosedür ile nasıl korunduğunu göstermektedir. Böylece görüntü yığınlarının üç boyutlu rekonstrüksiyonuna olanak sağlanır. Birkaç düzine pupilla örneği hazırlanabilir ve 30 dakikadan kısa bir sürede fiksasyon tamponuna yerleştirilebilir.Ek olarak, bu protokol kullanılarak hazırlanan örnekler hibridizasyona uygundur ve bu da yöntemi gen ekspresyon çalışmaları için değerli bir protokol haline getirir.

drosophila-pupal-abdomen-immunohistochemistry

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Bu protokol disseke Drosophila larva immünohistokimya nasıl gerçekleştirileceği göstermektedir.

Drosophila Larvaların NMJ İmmünohistokimya

Larva, Pupa ve Erişkin diseksiyonu ve İmmünohistokimya<em&gt; Drosophila</em&gt; Retinaları

Drosophila'nın yetişkin yapıları, hayali diskler adı verilen kese benzeri yapılardan türetilmiştir. Bu disklerin analizi, doku tayini, kompartman sınırı oluşturma, hücre proliferasyonu, hücre kaderi spesifikasyonu ve düzlemsel hücre polaritesi dahil olmak üzere birçok gelişimsel süreç hakkında bilgi sağlar. Bu protokol, ışık/floresan mikroskobu için hayali diskleri hazırlamak için kullanılır.

Diseksiyon ve hayali Disklerin immün itibaren Drosophila melanogaster

Bu tekniğin amacı, araştırmacıların herhangi bir yaştaki Drosophila melanogaster'den pupa göz disklerinin diseksiyonunu, immün boyama ve montajını gerçekleştirmelerini sağlamaktır.

Diseksiyon ve montajı<em&gt; Drosophila</em&gt; Pupa Göz Diskler

Yaprak biti embriyoları üzerinde tam montajlı immün boyama protokolü sunulmuştur, burada arka plan boyamasını azaltmak ve doku geçirgenliğini artırmak için kritik koşullar ele alınmaktadır. Bu koşullar, yaprak bitlerinin embriyonik dokularında protein ekspresyonunun etkili bir şekilde tespit edilmesi için özel olarak geliştirilmiştir.

Bezelye Afit Embriyolar immün için kritik Koşulların Belirlenmesi: Doku geçirgenliğini arttırarak ve Arka Plan Boyama azaltılması

Doğru bir şekilde transkript veya proteinler Drosophila dokularda algılama yeteneğini kendi bereket ve yerelleştirme için geliştirme süreci ile ilgili eğitim için önemlidir. Pupa kanatları incelemek için basit bir yordam açıklaması burada. Bu kanatlar örnekleri çeşitli teknikler (immünhistokimya, PCR tahlil, vb) olarak kullanılabilir.

Drosophila Immunodetections veya PCR deneyleri için uygun pupa Wings incelemek için hızlı ve etkili bir yöntem

Drosophila yumurtalık kök hücre niş geliştirme eğitim için mükemmel model bir sistemdir. Larva ve yetişkin yumurtalık dissekan için yöntemleri yayımlanmış olsa, Pupa yumurtalık diseksiyonlarının ayrıntılı olarak yayınlanmamıştır farklı teknikler gerektirir. Burada diseksiyon, boyama ve pupa yumurtalık montaj için bir protokol anahat.

Diseksiyon ve Drosophila pupa yumurtalık boyama

Bu kağıt doku immünhistokimya, Batı analiz ve RNA-ekstraksiyon için işlenmesi için protokolleri ile birlikte Drosophila pupa retina dissekan için cerrahi bir yöntem sunuyor.

Drosophila pupa Retina diseksiyon immünhistokimya, Batı analiz ve RNA izolasyon için

Mevcut protokol, Drosophila pupa notumunun sabit dokusunun hazırlanmasını ve görselleştirilmesini detaylandırmaktadır. Sağlam veya yaralı doku için kullanılabilir ve dokunun orijinal mimarisi korunur. Diseksiyon, sabitleme ve boyama prosedürlerinin tümü bu makalede açıklanmıştır.

Drosophila Pupal Notum'un Diseksiyonu, Sabitlenmesi ve Görselleştirilmesi

Drosophila , miyogenezin temel mekanizmalarını anlamak için güçlü bir modeldir. Toraks hemi-sezaritlerinin diseksiyonu ve hazırlanması için bu protokol, hem pupa hem de yetişkin aşamalarından dolaylı uçuş kasının mikroskopi analizini sağlar. Bu protokol, hücresel morfolojinin, protein lokalizasyonunun, kas yapısının ve miyogenezin diğer birçok yönünün konfokal görüntülenmesini sağlar.

Mikroskopi Yaklaşımları için Drosophila melanogaster Dolaylı Uçuş Kaslarının Diseksiyonu

Öğrenin Drosophila pupa karın immünohistokimya protokolü ile epitel morfojenez ve doku reorganizasyonunu incelemeyi. Bu yöntem yetişkin karın gelişiminin genetik analizlerini kolaylaştırır.

Drosophila pupa Karın İmmünohistokimya

Daha fazla video keşfet