Name: CD4 + T-Lenfosit Yakalama HIV için Disposable mikroakışkan Chip (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-01T13:03:52.000+00:00
Duration: 12 min 44 s
Description: Keşfedin, PDMS tabanlı mikroakışkan cihaz kullanarak hasta kanından CD4 pozitif T yardımcı lenfositleri yakalama ve nicelendirme yöntemini. Bu teknik, kaynak sınırlı ortamlarda HIV tanısı için yüksek hassasiyet sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

<ol><li> Mikroakışkan kanal anti-CD4 + biotinlayted yüzey hazırlayın. </li><li> 5 ml / dk 10 ml numune kan şırınga pompası ile mikroakışkan kanal içine enjekte edilir. </li><li> PBS ile 20 dakika için 20 ml / dak kan yıkayın. </li><li> 15 dakika için 5ul/min seyreltilmiş FACS parçalama solüsyonu (PBS ile stok solüsyonu% 10 sulandırılmış) enjekte edilir. </li><li> 15 dakika boyunca inkübe. </li><li> 5 ml / dk 20 dk birincil CD3 + antikor solüsyonu (PBS ile stok solüsyonu% 10 sulandırılmış) enjekte edilir. </li><li> 2 saat süreyle inkübe edin. </li><li> 5 ml / dk 15 dk PBS ile kanal yıkayın. </li><li> 5 ml / dk, aynı zamanda 20 dakika boyunca% 20 AF488 CD4 + antikor,% 0.2 DAPI stok solüsyonu,% 10 ikincil CD3 + antikor enjekte edilir. </li><li> 20 dakika boyunca inkübe. </li><li> 5 ml / dk 15 dk kanalı PBS ile yıkayın. </li><li> Floresan mikroskop altında hücrelerin sayısı: <ol><li> Beyaz (optik) - Siyah ve beyaz: hücre ve toz </li><li> Yalnızca UV (DAPI) - Mavi: hücre </li><li> Blue (CD4 +) - Yeşil: T-lenfosit ve monosit </li><li> Sadece Yeşil (CD3 +) - Kırmızı: T-lenfosit </li></ol></li></ol>

<table><tbody><tr><td>PDMS mikrokanal</td><td></td><td></td><td></td><td>SU-8 kalıbı ile üretilmiştir</td></tr><tr><td>Kan</td><td></td><td></td><td></td><td>Normal insan denekten bağışlanmış kan. Mass General Hospital, 10 X yüksek yoğunluklu WBC veya Brigham and Women&amp;rsquo;s Hospital.</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Tampon</td><td>Invitrogen</td><td>14190</td><td>1x Dulbecco&amp;rsquo;s Fosfat Tamponlu Tuzlu Su.</td></tr><tr><td>FACS lizleme çözeltisi</td><td></td><td>BD Biosciences</td><td>349202</td><td>Stok çözeltiden PBS ile %10'a seyreltilmiştir.</td></tr><tr><td>Anti-CD4+ biyotinlenmiş Ab</td><td></td><td>Beckman Coulter Inc.</td><td>IM0704</td><td>Yüzey, 0.2mg stok ve 1ml deiyonize su ile karıştırıldıktan sonra stok çözeltiden PBS/BSA ile %10'a seyreltilen Anti-CD4+ biyotinlenmiş Ab ile hazırlanmıştır.</td></tr><tr><td>keçi anti-hCD3delta</td><td>pAB</td><td>Santa Cruz Biotechnology, Inc.</td><td>sc-1128</td><td>Stok çözeltiden PBS ile %10'a seyreltilmiştir</td></tr><tr><td>tavşan anti-keçi IgG PE</td><td></td><td>Santa Cruz Biotechnology, Inc.</td><td>sc-3755</td><td>Anti-CD3 Ab için sekonder Ab, stok çözeltiden PBS ile %10'a seyreltilmiştir</td></tr><tr><td>anti-insan CD4+</td><td></td><td>BD Biosciences</td><td>557695</td><td>Alexa Fluor 488 işaretli, stok çözeltiden PBS ile %20'ye seyreltilmiştir.</td></tr><tr><td>DAPI</td><td></td><td>Invitrogen</td><td>D1306</td><td>4&amp;rsquo;,6-dianidino-2-fenilindol, dihidroklorür çözeltisi, stok çözeltiden PBS ile %0.2'ye seyreltilmiştir.</td></tr></tbody></table>

cd4 + t-lenfosit yakalama hiv için disposable mikroakışkan chip

CD4+ T-Lymphocyte Capture Using a Disposable Microfluidic Chip for HIV

CD4 + T-Lenfosit Yakalama HIV için Disposable mikroakışkan Chip

Merhaba, benim adım Richard Lin; Harvard MIT Sağlık Bilimleri ve Teknolojileri Bölümü'nde Profesör TI Mercy'nin grubunda araştırmacıyım. Üzerinde çalıştığım proje, kaynakların sınırlı olduğu ortamlarda kullanılmak üzere, hasta kanındaki CD4 pozitif ve C3 pozitif T lenfositlerinin miktarını belirlemek ve bunları yakalamaktır.Şu an önümde, PDMS'den (Polidimetilsiloksan) yapılmış bir mikroakışkan cihaz bulunuyor. Cihazın kanal yüksekliği 50 µm olup cihazdaki toplam hacim 10 µL'dir. Bu, T yardımcı lenfositlerini yakalamak için kullanacağımız son derece hassas bir cihazdır.Temel olarak, HIV hastaları için tanısal referans noktasıdır. Mikro akışkan cihazın yüzeyi proteinle hazırlanmış ve şırıngada CD4 pozitif antikorlar bulunmaktadır. Şu an elimizde pH 7.4'te PBS biyolojik tamponu var ve fazla CD4 pozitif antikoru temizlemek için bunu kanala akıtacağız.Bu aşamada, sadece fazla maddeleri temizlemeye çalıştığımız ve akış hızının pek bir önem taşımadığı için hızı kontrol etmeye gerek yoktur. Cihazın girişleri burada olacaktır ve çıkışlar ise benim solumda, sizin sağınızda yer alacaktır. Şimdi fazla antikor çözeltisini temizleyeceğim; çıkıştan sıvı geldiğini fark edebiliyorsanız, bunun çok k

cd4-t-lymphocyte-capture-using-a-disposable-microfluidic-chip-for-hiv

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Hücre Yakalama mikroakışkan Cihaz Kullanımı

Bu görüntülenmiştir deney canlı konfokal görüntüleme deneyleri için HIV floresan moleküler klon kullanan için bir rehber.

HIV ve Live Konfokal Mikroskop Floresan Klonlar kullanılarak HIV görselleştirme Hücre-hücre Transferi

Biz Tat duyarlı LTR ek olarak, bu tür bir lentiviral vektör geliştirdik, HIV-1 Tat ve Rev-bağımlı bir moda muhabiri gen ekspresyonu düzenleyen Rev-yanıt elemanı (RRE). Vektör GFP ifadesi üzerinden canlı hücreler kopyalayan HIV özel algılama izin verir.

Yeşil Floresan Protein ifade Rev-bağımlı lentiviral Vector kullanarak HIV-1 Olumlu Hücreler Özgül İşareti

Entegre mikroakışkan termoplastik çip bir moleküler tanı olarak kullanılmak üzere geliştirilmiştir. Çip nükleik asit ekstraksiyon, ters transkriptaz ve PCR gerçekleştirir. Imalatı ve yonga çalıştırmak için yöntemler tarif edilmiştir.

Mikroakışkan Chip İmalat ve İnfluenza Algılama Yöntemi

Bu yazıda tek bir hücre analizi için bir mikroakışkan çip sunuyoruz. Bu sağlar: hücre içi proteinler, enzimler, kofaktörler, ve floresan deneyleri veya bağışıklık aracılığıyla ikinci haberciler miktar.

Tek Hücrelerinin yönlü Kimyasal Analiz için mikroakışkan Chip

Bu protokol, HIV enfeksiyonuna karşı kök hücre tabanlı tasarlanmış bağışıklığa sahip insanlaştırılmış bir kemik iliği/karaciğer/timus fare modeli oluşturma yöntemlerini açıklar.

Insanlaşmış Fare Modelinde HIV enfeksiyonuna karşı kök hücre Tabanlı Engineered Bağışıklık

Açıklanan 96 genlerin ifade quantitate için bir metodoloji olduğunu ve 18 yüzey proteinler tarafından tek hücreleri ex vivodifferentially tanımlanması için izin, genler ve proteinler kandan hücrelere göre virüs enfeksiyonlu hücrelerdeki dile getirdi. Yaklaşım+ T çalışma SIV-enfekte CD4 için uyguladığımız rhesus makak izole hücreler.

Tek hücreli Nefelometri mRNA ve yüzey Protein Simian virüs, immün yetmezlik enfekte CD4 ifadede+ T hücreleri izole Rhesus makak üzerinden

HIV-1 füzyon yoluyla üzerinde akış sitometresi veya floresan mikroskopi tarafından algılanabilir yeşil flüoresan proteinin ifade bildirmek için bir hücre tabanlı tahlil açıklar. İnhibitörleri (füzyon aşamada özellikle) viral girdisinin boş hücre ve hücre-hücre enfeksiyonu sistemlerinde test etmek için kullanılabilir.

Bir yüksek-den geçerek Cre-Lox Viral membran Fusion tahlil inhibitörleri HIV-1 Viral membran füzyon tanımlamak için aktive

Burada, nanoakışkan bir cihazda akut olaylar ve üretken HIV-1 enfeksiyonu için tek hücrelerin izlendiği bir protokol sunuyoruz. Görüntüleme verileri virüs konakçısı reseptör etkileşimlerini ve sinyal yolu dinamiklerini tanımlar. Bu, nanoakışkan yüksek verimli boyuna tek hücreli kültür ve görüntülemenin sinyal kinetik ve moleküler etkileşimleri incelemek için ilk yöntemidir.

Multiparametre Optofluidik Platform Kullanılarak Kalsiyum Akını ve HIV-1 Enfeksiyonunun Tek Hücreli Karakterizasyonu

Klinik mikroakışkan çip, klinik hasta kan numunesinin ön işlenmesini basitleştiren ve çip üzerinde yerinde dolaşan tümör hücrelerini (CTC'ler) yerinde boyayarak tek bir CTC'nin hızlı bir şekilde tespit edilmesini ve tanımlanmasını sağlayan önemli bir biyomedikal analiz tekniğidir.

Çok Yönlü Dolaşımdaki Tümör Hücrelerinin İzolasyonu için Klinik Mikroakışkan Çip Platformu

Dolaşımdaki tümör hücreleri (CTC'ler), kanserin ilerlemesi ve metastazının incelenmesi için kritik öneme sahiptir. Bu makale, CTC zenginleştirme ve tek CTC dizilimi için yüksek verimli, entegre bir protokol sunmakta, kontaminasyon ve dizileme maliyetlerini azaltırken yakalama verimliliğini ve CTC saflığını artırmakta, böylece hassas onkoloji araştırmalarını ve klinik uygulamaları ilerletmektedir.

Mikroakışkan Tabanlı Yüksek Verimli Dolaşımdaki Tümör Hücresi Sıralama ve Tek Hücre Dizileme Teknolojisi

Keşfedin, PDMS tabanlı mikroakışkan cihaz kullanarak hasta kanından CD4 pozitif T yardımcı lenfositleri yakalama ve nicelendirme yöntemini. Bu teknik, kaynak sınırlı ortamlarda HIV tanısı için yüksek hassasiyet sağlar.

CD4 + T-Lenfosit Yakalama HIV için Disposable mikroakışkan Chip

Daha fazla video keşfet