Name: Nadir bir Case IgA ve Doku Transglutaminaz 2 Antikorlar Epidermal Transglutaminaz tanınması Rhesus Dermatit (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-12-15T12:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 27 s
Description: Keşfedin dermatitis herpetiformis'te IgA ve epidermal transglutaminaz arasındaki otoimmün reaksiyonu görselleştirme yöntemini. Bu teknik, rhesus maymunlarında cilt hastalığının patogenezini anlamak için değerli bir model sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar Amanda Tardo, Dr. Mostafa Bouljihad Stephanie Feely Carol Coyne, Dr. Erin Ribka, Dr. Pete Didier ve Dorothy Kuebler, teknik yardım için teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışma NIH hibe R01-DK076653 ve KS 3R01 DK076653-02S1 ve TNPRC RR000164 temel işletim hibe tarafından desteklenmiştir.

1. Cilt biyopsisi örnek toplama <ol><li> Önce cilt biyopsisi işlemi, 2,5 mg / tiletamine hidroklorür ve zolazepam hidroklorür telazol karışımı (Fort Dodge Hayvan Sağlığı, Fort Dodge, IA) kg intramusküler hayvanları uyutmak. Uzanma kadar anestezik yönetimi hayvanlar izleyin ve sonra da onların muhafaza kaldırmak. </li><li> Ilgilendiren bir boyutu 40 bıçak (Oster Profesyonel Ürünler, McMinnville, TN) ile bir Oster Altın A5 Tek Hız Veteriner Clipper kullanan deri alanından saç çıkarın ve aseptik betadin fırçalayın ve alkol alternatif hazırlamak. Seçilen biyopsi sitesi üzerinden steril bir Fenestre asmak sabitleyin. </li><li> Alet hafif basınç saat yönünde ve saat yönünün tersine 180 derece dönerken punch biyopsi subkutan ti dermal katmanlardan ile transects kadar steril bir tekniği kullanarak, deri karşı 4,0 mm Miltex Punch Dermal Biyopsi aleti (Miltex York, PA)ssue. Biyopsi örneği çıkarın ve forseps ve deri altı doku ile cilt transeksiyon kısmını kavramak. </li><li> 3-0 naylon sütür ile çapraz desen 3 / 8 daire kesici iğne (Ethilon, Ethicon, Johnson &amp; Johnson Medikal Limited, Berkshire, İngiltere) bağlı cilt defekti kapatın. Bütün hayvanların post operatif analjezi için 0.01 mg / kg intramusküler buprenorfin hidroklorür (Hospira, Lake Forest, IL) verin. </li></ol> 2. Örnek işleme <ol><li> Kronik dermatit ve sağlıklı kontrol deri biyopsi örnekleri ile İş rhesus makaklarda. 02:58 (çapı 4 mm) her hayvan numuneleri biyopsi alın. </li><li> 24 saat boyunca çinko formalin (Z-fix, Anatech Ltd, Battle Creek, MI) Fix ilk örnek, ASP300 Leica doku işlemci (Leica Microsystems Inc, 30 dakika süreyle suda yıkayın% 70 etanol içinde kısa bir süre yıkama yeri ve Buffalo Grove, KS doku,% 70,% 80,% 95 ve% 100 etanol 48 artan notları ile susuz)ksilen (Fisher) tarafından iki değişiklik her (Fisher Scientific, Pittsburgh, PA), dk. </li><li> Oda sıcaklığında uzun vadeli depolama için, parafin medya (Balıkçı) gömün. Kesit için 20 dakika önce-20oC yerleştirin. 6 mikron bölümlerde döner mikrotom (HM325, Microm International, Waldorf, Almanya) kullanarak hazırlayın. Ücret slaytlar (Balıkçı) ve bir gecede 60 ° C kuru hava yerleştirin bölümleri. Leke ile hematoksilen ve eozin (H &amp; E) standart yöntemi (aşağıda açıklanmıştır). </li><li> Fix ikinci örnek oda sıcaklığında 30 dakika süreyle% 2 paraformaldehid (USB Corp, Cleveland, Ohio), fosfat üç defa yıkamak salin (PBS, Gibco-Invitrogen, Carlsbad, CA)% 30 sakaroz (Balıkçı), tamponlu 4 saat ve Ekim dondurma orta (Sakura Finetek, Torrence, CA) gömmek. Kesit için 20 dakika önce-80oC tutun. 15 mikron bölümleri Kriyostat (HM560, Thermo Scientific, Kalamazoo, MI) kullanarak hazırlayın. </li></ol> 3. H &amp; E boyama <ol><li> Embed Deparaffinizeüç değişiklik% 100,% 95 iki değişiklik, bir değişim ve% 80 distile su, 2 dakika her üç xylene (Balıkçı) değişiklikleri ve kademeli ethanols yoluyla rehidrate ile ded kesitler. </li><li> Bir dakika için hematoksilen (Richard Allan Bilimsel, Kalamazoo, MI) Leke ve musluk suyu çalıştırarak kısa bir yıkama tarafından takip. </li><li> Eozin (Sigma) ile 6 dakika Counterstain. </li><li> 2 dakika her iki değişiklikler ve ardından xylene üç değişikliklere açık, her biri 3 dakika,% 95 ve mutlak etanol ile lekeli dokuları dehydrate. </li><li> H &amp; E boyalı doku bölümleri üzerinde Cytoseal Montaj Orta kullanarak Dağı coverglass (Richard Allan Bilimsel). </li></ol> 4. Histopatolojik değerlendirme Bir SPOT Insight dijital fotoğraf makinesi (Dijital Instruments Inc, Michigan, ABD) ile 40x büyütme ve Leica mikroskop - 4 kullanarak ışık mikroskobu altında H &amp; E boyalı biyopsi cilt bölümleri inceleyin. 5. Immunofluorescent staining <ol><li> Immunofluorescent boyama OCT gömülü cilt bölümleri ile çalışın. Boyamadan önce, 20 dakika PBS içinde% 0.1 ile% 0.2 Triton X-100 (Sigma) OCT kaldırmak ve doku permeabilize balık derisi jelatin (FSG, Sigma) içeren bekletin. </li><li> Slaytları yıkadıktan sonra, oda sıcaklığında 1 saat süreyle PBS-FSG seyreltilmiş% 10 normal keçi serumu (NGS, Sigma) ile nemlendirilmiş bir slayt odası, kuluçkaya yatmaktadır. </li><li> IgA ve tTG2 antikorlar birikimi görselleştirmek için, 1 saat süreyle% 10 NGS-PBS-FSG sulandırılmış anti-rhesus IgA ve tTG2 birincil antikorlar, slaytlar kuluçkaya yatmaktadır. </li><li> 10 dakika, 10 dakika süreyle PBS-FSG tarafından takip PBS-FSG-Triton X-100 (Sigma) ile yıkayın. </li><li> 1:1,000 seyreltme Alexa Fluor florokrom 488 (yeşil), 568 (kırmızı) veya 633 (mavi) (Moleküler Probları-Invitrogen) ile etiketli ikincil, izotip-özgül antikorlar ile inkübe edin. ToPro-3 boya, nükleer DNA görselleştirmek için kullanın. Antikor seyreltici olarak% 10 NGS-PBS-FSG kullanın. </li><li> Lekeli doku kesitlerinde monte etmek için anti-su verme solüsyonu (Sigma) kullanın. </li></ol> 6. Konfokal görüntüleme Argon-Kripton lazer 488 nm (yeşil), 568 nm dalga boyunda bir Kripton lazer (üç lazerler (kullanılabilir uyarma altı satırlık) ile donatılmış bir Leica TCS SP2 Gerçek Konfokal Lazer Tarama Mikroskobu (Leica, Wetzlar, Almanya) ile görüntüleme gerçekleştirin kırmızı) ve görünür spektrumun uzak kırmızı tarafına yayılmış 633 nm (mavi), helyum-neon lazer. Etiketli mimari dokusu değerlendirilmesi için Kayıt diferansiyel girişim kontrast (DIC) görüntüleri. 7. Temsilcisi Sonuçlar Şekil tTG2 ve IgA antikorları hem de ETG pozitif tanıma bir örnek gösterilmiştir. 3A. Tutarlı insan hastalarda durum ve rhesus makaklarda de gluten duyarlılığı CD-DH-benzeri dermatit daha çok daha düşük yaygınlık nedeniyle, deri biyopsi örneklerinin en sho bekleniyorw, ancak tTG2 + IgA + çift pozitif hücreler (Şekil 4) varlığı olmadan tTG2 antikorları ile pozitif reaksiyon. Mikrobiyal kökenli dermatit vakalar da dahil olmak üzere bu durumlarda, DH-ilgisiz, epitel altında dağınık bazı tek pozitif IgA + hücreler ortaya ama tTG2 ve IgA etiketli belirteçleri (Şekil 3B ve 4) arasında spektral örtüşme. Bu nedenle, histopatolojik değerlendirme (Şekil 2) ve başka daha yaygın dermatit sebep olan ajanların yalnızca tespit edilebilir, konfokal tarafından klinik muayene (Şekil 1) ile başlayan, önerilen test prosedürleri düzeni sağlamak için önemlidir. tTG2 ve IgA için lekeli cilt biyopsi mikroskop incelemesi garantilidir. Tek başına klinik ve / veya histopatolojik değerlendirme, bu durumun olumlu bir tanı için yeterli değildir. Bu durumlarda çift-pozitif (tTG2 + IgA +), DH-benzeri hücreler dermal papilla alanı çevresinde tespit dermatit tanısı verilebilir. Bu gibi durumlarda diyet gluten, yoksunlukve dermatit semptomları hafifletmek için glutensiz bir diyet uygulaması tavsiye edilir. <img src="/files/ftp_upload/3154/3154fig1.jpg" alt="Şekil 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1. önce EM96 makak Kasık bölge (A) ve sonrası (B) 5 hafta boyunca diyet gluten çekilmesi. Diyet gluten yeniden yerleştirilmesi dermatit yeniden ortaya çıkma (C) ile çakıştı. <img src="/files/ftp_upload/3154/3154fig2.jpg" alt="Şekil 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2 HE, önce toplanan EM96 makak deri biyopsi boyama (A) ve sonrası (B) 9 hafta boyunca diyet gluten çekilmesi . A: Epitel hiperkeratotik hücreleri kalın bir yüzeysel kabuk yozlaşan nötrofiller ile infiltre (7-15 kat epitel hücrelerinin) kalındır. Nötrofiller epitel içinde de görünür ve lenfositler, plazma hücreleri ve üst dermiste etrafındaki etrafında histiyositler orta numaraları ile karıştırılır. B: Bazı hyperkeratosis hala mevcut, üst dermiste minimal lenfoplazmositik infiltrasyon epitel kalınlığı (4-7 katman) normalize edilir. C: hiçbir lenfoplazmositik infiltrasyon FR56 makak Normal karın cilt, karşılaştırma için yer almaktadır. Büyütme 20x. <img src="/files/ftp_upload/3154/3154fig3.jpg" alt="Şekil 3" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 3"> Şekil 3, önce toplanan EM96 makak deri biyopsi mikroskopisi görüntüleri (A) ve sonrası (B) 9 hafta boyunca diyet gluten çekilmesi . A: IgA boyama (yeşil), tTG2 (kırmızı) ve ToPro-3 nükleer DNA marker (mavi). IgA ve tTG2 Co-lokalizasyon dermal papilae alanı etrafında sarı görünür. B: Cilt örneği 9 hafta sonra alınan bazı subepitelyal IgA, (yeşil) hala tTG2 (kırmızı) ve ToPro-3 nükleer DNA marker (mavi) mevcut ise glutensiz diyet epitel içinde hiçbir IgA gösterir. <img src="/files/ftp_upload/3154/3154fig4.jpg" alt="Şekil 4" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 4"> Şekil 4. <table border="1"><tbody><tr><td> Hayvan Etiketi </td><td> Seks [E / K] </td><td> Yaş [Yıllar] </td><td> Klinik Belirtileri </td><td> Plazma tTG2 antikorlar </td><td> Diyet [1,2] * </td></tr><tr><td> HJ71 </td><td> F </td><td> 1,3 </td><td> Sağlıklı </td><td> - </td><td> 1 </td></tr><tr><td> HD13 </td><td> M </td><td> 1,4 </td><td> Sağlıklı, zaman zaman ishal </td><td> + </td><td> 1 </td></tr><tr><td> FR56 </td><td> M </td><td> 5,4 </td><td> Kronik idiopatik diyare </td><td> - </td><td> 1 </td></tr><tr><td> EM96 </td><td> F </td><td> 5,0 </td><td> Kronik dermatit </td><td> + / - (Sınırda) </td><td> 1 ve 2 </td></tr><tr><td> GI24 </td><td> F </td><td> 4,6 </td><td> Kronik dermatit </td><td> - </td><td> 1 </td></tr></tbody></table> (Tablo 1). TNPRC rhesus deri biyopsi toplama için kullanılan makaklarda * Diyet 1 - Düzenli maymun chow (gluten içeren) Diyet 2 - glutensiz diyet

<ol><li>Diosdado, B., Wijmenga, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanisms+of+the+adaptive%2C+innate+and+regulatory+immune+responses+in+the+intestinal+mucosa+of+celiac+disease+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Expert.+Rev.+Mol.+Diagn%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanisms of the adaptive, innate and regulatory immune responses in the intestinal mucosa of celiac disease patients.</a> Expert. Rev. Mol. Diagn. 5 (5), 681-700 (2005).</li>
<li>Schuppan, D., Dennis, M. D., Kelly, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Celiac+disease%3A+epidemiology%2C+pathogenesis%2C+diagnosis%2C+and+nutritional+management%5BTitle%5D)+AND+%22Nutr.+Clin.+Care%22%5BJournal%5D)">Celiac disease: epidemiology, pathogenesis, diagnosis, and nutritional management.</a> Nutr. Clin. Care. 8 (2), 54-69 (2005).</li>
<li>Sardy, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidermal+transglutaminase+%28TGase+3%29+is+the+autoantigen+of+dermatitis+herpetiformis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">Epidermal transglutaminase (TGase 3) is the autoantigen of dermatitis herpetiformis.</a> J. Exp. Med. 195 (6), 747-757 (2002).</li>
<li>Rose, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Autoantibodies+against+epidermal+transglutaminase+are+a+sensitive+diagnostic+marker+in+patients+with+dermatitis+herpetiformis+on+a+normal+or+gluten-free+diet%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Acad.+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Autoantibodies against epidermal transglutaminase are a sensitive diagnostic marker in patients with dermatitis herpetiformis on a normal or gluten-free diet.</a> J. Am. Acad. Dermatol. 61 (1), 39-43 (2009).</li>
<li>Bethune, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transepithelial+transport+and+enzymatic+detoxification+of+gluten+in+gluten-sensitive+rhesus+macaques%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Transepithelial transport and enzymatic detoxification of gluten in gluten-sensitive rhesus macaques.</a> PLoS ONE. 3 (3), e1857-e1857 (2008).</li>
<li>Mazumdar, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualization+of+transepithelial+passage+of+the+immunogenic+33-residue+peptide+from+%CE%B1-2+gliadin+in+gluten-sensitive+macaques%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Visualization of transepithelial passage of the immunogenic 33-residue peptide from α-2 gliadin in gluten-sensitive macaques.</a> PLoS ONE. 5 (4), e10228-e10228 (2010).</li>
<li>Schuppan, D., Junker, Y., Barisani, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Celiac+disease%3A+from+pathogenesis+to+novel+therapies%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Celiac disease: from pathogenesis to novel therapies.</a> Gastroenterol. 137 (6), 1912-1933 (2009).</li>
<li>Hunt, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Newly+identified+genetic+risk+variants+for+celiac+disease+related+to+the+immune+response%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Genet%22%5BJournal%5D)">Newly identified genetic risk variants for celiac disease related to the immune response.</a> Nature Genet. 40 (4), 395-402 (2008).</li>
<li>Abadie, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integration+of+genetic+and+immunological+insights+into+a+model+of+celiac+disease+pathogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Integration of genetic and immunological insights into a model of celiac disease pathogenesis.</a> Annu. Rev. Immunol. 29, 493-525 (2011).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Gluten hassasiyeti yeni kurulan insan dışı primat modeli son zamanlarda diyet gluten 5,6 ile tetiklenen bağırsak geçirgenliği değişiklikleri incelemek için kullanılır. Plazma tTG2 antikorlar yanı sıra bağırsak tTG2 + IgA + mevduat glutene duyarlı bazı makaklarda tespit edildi. Son zamanlarda rhesus koloni hiçbir olağan (metabolik / enfeksiyöz) etiyoloji kurulamadı makaklarda, idiyopatik dermatit nadir olayların tespit yılından bu yana, bu çalışmanın amacı değerlendirmek için ise tTG2 + IgA + antikor mevduat b...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif veya ekipman Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog Numarası / Ürün Kodu </td><td> Not </td></tr><tr><td> Anti-İnsan IgA-FITC * </td><td> Sigma, St Louis, MO </td><td> F-5259 </td><td> 1:100 çalışma seyreltme </td></tr><tr><td> Anti-İnsan tTG2 </td><td> Thermo Scientific, Kalamazoo, MI </td><td> MS-300-P1ABX </td><td> 1:100 çalışma seyreltme </td></tr><tr><td> Anti-Mouse IgG1 ** </td><td> Invitrogen, Carlsbad, CA </td><td> A-21124 </td><td> 1:1,000 çalışma seyreltme </td></tr><tr><td> ToPro-3 DNA prob *** </td><td> Invitrogen, Carlsbad, CA </td><td> T-3605 </td><td> 1:1,000 çalışma seyreltme </td></tr><tr><td> Formalin Çinko (Z-fix) </td><td> Anatech Ltd Battle Creek, MI </td><td> 171 </td><td></td></tr><tr&gt; <td> Ekim Donma Orta </td><td> Sakura Finetek, Torrence, CA </td><td> 4583 </td><td></td></tr><tr><td> Cytoseal Montaj Orta </td><td> Richard Allan Bilimsel, Kalamazoo, MI </td><td> 8312-4 </td><td></td></tr><tr><td> Anti söndürme Çözüm </td><td> Sigma, St Louis, MO </td><td> P 3130 </td><td></td></tr><tr><td> Ethilon (Naylon Sütür) </td><td> Ethicon, Johnson &amp; Johnson, Berkshire, İngiltere </td><td> 663G </td><td></td></tr><tr><td> Miltex Punch Dermal Biyopsi Enstrüman </td><td> Miltex York, PA </td><td> NA </td><td></td></tr><tr><td> Oster Altın A5 Tek hızlı bir boyut bıçak ile 40 Veteriner Clipper </td><td> Oster Ürünler, McMinnville, TN </td><td> 78005-050 </td><td></td></tr><tr><td> Leica Doku İşlemci </td><td> Leica Microsystems IncBuffalo Grove, KS </td><td> ASP300 </td><td></td></tr><tr><td> Döner Mikrotom </td><td> Microm Uluslararası Waldorf, Almanya </td><td> HM325 </td><td></td></tr><tr><td> Kriyostat </td><td> Thermo Scientific, Kalamazoo, MI </td><td> HM560 </td><td></td></tr><tr><td> Konfokal Mikroskop </td><td> Leica, Wetzlar, Almanya </td><td> TCS SP2 </td><td></td></tr></tbody></table> * Floresein izotiyosiyanat TTG2 primer antikor sonra kullanılan ** İkincil (Alexa Fluor 568-konjuge) antikor ** Boya

nadir bir case iga ve doku transglutaminaz 2 antikorlar epidermal transglutaminaz tanınması rhesus dermatit

Recognition of Epidermal Transglutaminase by IgA and Tissue Transglutaminase 2 Antibodies in a Rare Case of Rhesus Dermatitis

Doku transglutaminazı 2 (tTG2) zaten kısmen sindirilmiş diyet gluten örneğin gliadin peptitleri deamidates bir bağırsak sindirim enzimi. Genetik yatkınlığı olan bireylerde, tTG2 tTG2 antikorların üretimi ve ince bağırsak duvarının 1,2 içine doğrudan birikimi ile karakterize otoimmün yanıtları tetikler. Bu antikorların varlığı çölyak hastalığı (CD) en önemli işaretlerinden birini oluşturmaktadır. Epidermal transglutaminaz (ETG), CD hastaların küçük bir azınlık bir otoantijen olarak da işlev görebilir transglutaminaz ailenin bir başka üyesi. Bu nispeten nadir durumlarda, ETG klinik olarak herpetiform dermatit (DH) olarak bilinen bir otoimmün reaksiyonu (deri döküntüsü) tetikler. CD ve DH patogenez mekanizması tam olarak bilinmemekle birlikte, bilindiği tTG2 ve CD ve DH hastalarda 3,4 hem de serum antikorları tarafından kabul edilebilir hisse antijenik epitoplar ETG (macaca mulatta) (Tablo 1, Şekil 1 ve 2) deri lezyonları biyopsi örneklerinin konfokal mikroskop incelemesi etkilenen dokuların çalışmak için kullanılmıştır. Bir hayvan (EM96) IgA ve tTG2 antikorlar (Şekil 3) spektral örtüşme olduğu gösterilmiştir. Çift pozitif tTG2 varlığı + IgA + hücreler dermal papilla çevresindeki derin epidermis duruldu. Bu lezyonlar DH hastaların 3 açıklanan tutarlı. EM96 bir glutensiz diyet, dermatit, yanı sıra yerleştirildi tTG2 + IgA + mevduat kayboldu ve artık (Şekil 1-3) saptanabilir edildi. Dermatit EM96 diyet gluten (gösterilmemiştir) yeniden giriş dayalı, ancak ortaya çıkıverdi. Hayvan ile ilgisiz dermatit de dahil olmak üzere diğer makaklarda, tTG2 + IgA + mevduat tespit edilmedi. TTG2, varlığı ile birlikte EM96 dermatit Glutensiz diyet bağımlı remisyon + IgA +, cilt hücreleri öneririz otoimmün bir, DH-gibiBu durumun geliştirilmesi için mekanizma. Bu herhangi bir insan dışı primat DH-benzeri dermatit ilk rapor.

Dermatitis herpetiformis (DH) IgA ve epidermal transglutaminaz (ETG) arasında otoimmün bir reaksiyon ile karakterize kronik inflamatuar bir durumdur. DH gluten duyarlı ve / veya çölyak hastaların çok küçük bir kısmında gelişir. Bu çalışmanın sonuçları, DH de Rhesus maymun konak idiyopatik dermatit semptomları ile geliştirebilir göstermektedir.

Nadir bir Case IgA ve Doku Transglutaminaz 2 Antikorlar Epidermal Transglutaminaz tanınması Rhesus Dermatit

Doku transglutaminaz 2 (tTG2), halihazırda kısmen sindirilmiş diyetle alınan glutenü (örneğin gliadin peptitlerini) deamidize eden intestinal bir sindirim enzimidir. ...

Bu video makalesi, dermatitis herpetiformis olan glüten duyarlı Reeses Maccac'ların derisindeki otoimmün reaksiyonu görselleştirmek için bir yöntemi göstermektedir. Bu işlem, öncelikle bu idiyopatik vakalar ve yaşa uygun sağlıklı kontroller arasından, yaygın olarak teşhis edilen diğer dermatit nedenleriyle ilişkilendirilemeyen dermatitli hayvanların belirlenmesiyle gerçekleştirilir. Doku mimarisini, inflamasyonu ve epidermal transglutaminaz varlığını değerlendirmek amacıyla etkilenen bölgeden deri örnekleri alınır.Toplanan otoantikor örnekleri çinko formol ve %2 paraldehit hematin ile EOSIN veya HNE'de fikse edilir. Ardından, inflamasyonun derecesini ve histopatolojiyi değerlendirmek için boyama yapılır ve epidermal transglutaminaz otoantikor birikimini derin epidermiste değerlendirmek için immünofloresan boyama uygulanır. Dermatitis herpetiformis, IgA ile epidermal transglutaminaz arasındaki otoimmün reaksiyonla karakterize kronik inflamatuar bir durumdur ve gluten duyarlılığı olan çölyak hastalarının çok küçük bir kısmında gelişir. Bu çalışmanın sonuçları, DH'nin gluten duyarlılığı olan Rhesus maymunlarının küçük bir kısmında da gelişebileceğini göstermektedir.Sonuçlarımız, sunulan şekliyle yakın zamanda geliştirilen gluten hassasiyetinin Resus Meac modelinin geçerliliğini doğrulamaktadır. Sonuçlar, bu durumun klinik belirtilerinin yalnızca ince bağırsakla sınırlı olmadığını göstermektedir. Tipik bir protokol, idiyopatik dermatiti olan bir hayvan ve yaşla uyumlu sağlıklı bir kontrol grubundaki bir hayvanı içerir.Uygun anestezi ve steril teknik kullanılarak bölge hazırlığının yapılmasının ardından, 4,0 millimeter miltex punch dermal biyopsi aletini hafif bir basınç uygulayarak hayvan derisine yerleştirin. Biyopsi punch'ı dermal tabakaları geçip subkutan dokuya ulaşana kadar aleti saat yönünde ve saat yönünün tersine 180 derece döndürün. Pens kullanarak ikinci bir biyopsi için işlemi tekrarlayın.Kesilmiş deri kısmını kavrayın ve deri altı dokudan ayırın. H ve E boyaması için işlenecek olan ilk örneği çinko formine yerleştirin. Ardından, immunofloresan mikroskopi ile değerlendirilecek olan ikinci örneği, üç sekizlik daire şeklinde kesim iğnesi ve üç sıfır naylon sütür kullanarak %2'lik paraformaldehit içine yerleştirin.Cilt defektini çapraz dikiş deseniyle kapatın. Her hayvandan iki ila üç biyopsi örneği almak için bu işlemi tekrarlayın. IGA ve TTG two varlığını ve lokalizasyonunu incelemek için, yazılı protokolde ayrıntılı olarak açıklandığı şekilde postoperatif analjezi uygulayın.%2'lik paraformaldehit içine yerleştirilen örnekleri, fiksasyon sonrası sabitlemek için oda sıcaklığında dört saat boyunca inkübe ederek başlayın. Paraformaldehiti uzaklaştırın ve bir rocker platformu üzerinde 30 ila 60 dakika boyunca PBS ile yıkayın. Toplam üç yıkama olacak şekilde bu işlemi iki kez tekrarlayın, ardından PBS'yi uzaklaştırıp yerine en az dört saat ve en fazla iki hafta boyunca kalacak şekilde %30'luk sakkaroz ekleyin.Ardından, örneği OCT dondurma ortamına yerleştirin ve şeffaf OCT tamamen donduğunu belirten katı beyaza dönüşene kadar iki metil bütan ve kuru buz banyosuna daldırın. Sonra blokları en az 20 dakika boyunca minus 80 degrees Celsius'ta bekletin. Bu işlem, dokunun tamamen donmasını sağlayarak bıçağın dokuyu ezmeden kesmesine olanak tanır.Doku, -80 °C'de OCT içerisinde uzun süre saklanabilir. Kesitler alındıktan ve lamlara monte edildikten sonra, dokunun geçirgenliğini artırmak için OCT uzaklaştırılır. Lamlar, %0,2 balık derisi jelatini ve %0,1 triton X 100 içeren PBS bulunan bir Copeland kavanozuna daldırılır.Ardından kavanozu 20 dakika boyunca bir rocker üzerine yerleştirin; 20 dakika sonra lamları %0,2 balık derisi jelatini içeren PBS içerisinde 10 dakika boyunca yıkayın, ardından nemlendirilmiş bir lam haznesinde, oda sıcaklığında 40 dakika boyunca %0,2 balık derisi jelatini içeren PBS ile seyreltilmiş %10 normal keçi serumu ile inkübe edin. Lamları, anti resus IGA ve TTG iki primer antikor ile her birini ayrı ayrı bir saat boyunca inkübe edin. Sonrasında, lamı kenarlarından tutarak bir transfer pipeti yardımıyla üzerine nazikçe P-B-S-F-S-G Triton X 100 püskürtün.Ardından örneği, aynı tamponu içeren bir Copeland kavanozuna yerleştirin. Daha sonra kavanozu 10 dakika boyunca bir rocker üzerine koyun. Yıkama işlemini bir kez daha tekrarlayın.Ardından 10 dakika boyunca P-B-S-F-S-G ile yıkama işlemi gerçekleştirin. İnkübasyonu takiben, izotip spesifik Alexa flor işaretli sekonder antikorlar ile 40 dakika inkübe edin. Lamı daha önce yapıldığı gibi yıkayın.Ardından, nükleer DNA boyasını pro three to anti quenching montaj ortamına 1:2000 oranında seyrelterek ekleyin. Her bir lamın üzerine doğrudan bir damla ortam uygulayın. Daha sonra dokunun üzerine bir kapatma lamı yerleştirin ve oje ile mühürleyin.Lamı karanlık bir yere yerleştirin ve kurumasını bekleyin. IGA ve TTG çift boyamasını görüntülemek için, değerlendirme amacıyla kullanılan ikincil antikorlar için uygun lazerlerle donatılmış bir konfokal lazer tarama mikroskobu ile görüntüleme yapın ve işaretlenmemiş doku kaydı için diferansiyel kontrast (DIC) görüntüleri alın.DIC, mikroskop içinde dokuyu gri tonlamalı olarak çözümleyen bir kanaldır. Bu, HNE boyamasını gerçekleştirmek için hücresel mimarinin daha iyi belirlenmesini mümkün kılar. Çinko forminde yerleştirilen örnek önce parafinle gömülür ve lamlar üzerine kesitler halinde alınır.Slaytlar ardından 60 °C'de gece boyunca fırınlanır ve boyama işlemi tamamlandığında slaytları HNE ile boyayan otomatik bir boyama cihazına yerleştirilir. Boyanmış biyopsi kesitleri, dijital kamera donanımlı bir ışık mikroskobunda Forex ve 40 x büyütme kullanılarak incelenir. Her büyütme için üç ila dört görüntü kaydedilir. Diyetten gluten kısıtlamasının dermatitis üzerindeki etkisini incelemek amacıyla, Rhesus macaque deri lezyonlarından biyopsi örnekleri alınmış ve bu videoda açıklandığı şekilde boyanmıştır.Bir makak maymununun kasık bölgesi, diyetteki gluten çekilmeden önce gösterilmiştir. Bu hayvan glutensiz bir diyete geçirildiğinde, burada görüldüğü üzere dermatit kaybolmuş ve artık tespit edilemez hale gelmiştir. Doku mimarisini değerlendirmek amacıyla diyete tekrar gluten eklendikten sonra dermatit yeniden ortaya çıkmıştır.Gluten alımının kesilmesinden önce H ve E boyaması yapılmıştır. Epitel, yedi ila 15 kat epitel hücresiyle kalınlaşmış olup, dejenerasyona uğramış nötrofillerle infiltre olmuş hiperkeratotik hücrelerden oluşan kalın bir yüzeysel kabuk mevcuttu. Diyetteki gluten alımının dokuz hafta boyunca kesilmesinin ardından, epitel içinde nötrofiller görülmüş ve üst dermisteki adnekslerin çevresinde orta sayıda lenfosit, plazma hücresi ve histiyositlerle karışmış halde bulunmuştur.Bazı hiperkeratoz ve kalınlaşmış epitel hâlâ mevcuttu; ancak karşılaştırma yapıldığında, üst dermiste yalnızca minimal lenfoplazmasitik infiltrasyon görülmekteydi. Burada, epitel kalınlaşması ve üst dermiste lenfoplazmasitik infiltrasyon olmayan normal abdominal cilt gösterilmiştir. Diyetten gluten çekilmesi öncesinde alınan aynı maka cilt biyopsilerinin konfokal mikroskopi görüntülerinde, yeşil ile gösterilen IGA ve kırmızı ile gösterilen ttg two'nun kolokalizasyonu, epidermal transglutaminaza karşı otoantikorların varlığını belirterek dermal papilla alanı çevresinde sarı renkte görünmektedir.Dokuz haftalık glutensiz diyetten sonra, to pro üç nükleer DNA markeri mavi renkte görünmektedir. Epitelde artık IgA gözlemlenmemiştir; bu durum, sarı renkte görünecek olan epidermal transglutaminaza karşı otoantikorların yokluğunu göstermektedir. Bazı subepitelyal IgA'lar yeşil renkte görünmeye devam etmektedir; ilişkili olmayan idiyopatik dermatitli bir hayvan da dahil olmak üzere diğer Macaca'larda to pro üç nükleer DNA markeri mavi renkte görünmektedir.Otoantikorlar tespit edilmedi. IGA boyaması yeşil, ttg two kırmızı ve to pro three nükleer DNA markörü mavi renktedir. ttg two pozitif hücreler epitel içinde mevcuttur.Epitelin altında birkaç IGA pozitif hücre bulunmaktadır. Kırmızı ve yeşil belirteçler arasında geniş bir spektral örtüşme görülmemesi, epidermal transglutaminaza karşı otoantikorların yokluğunu göstermektedir. Bu çalışmada, epidermal transglutaminaza karşı IGA otoantikorlarının varlığını görselleştirmek için konfokal mikroskopi kullanıyoruz.Prosedür uygulanırken, dermatit vakalarının çoğunun gluten hassasiyetinden kaynaklanmadığını hatırlamak önemlidir. Bu nedenle; serum, anti-gladin, anti-doku transglutaminaz antikor saptaması ve dikkatli bir klinik değerlendirmeyi içeren diğer yöntemlerin önceden gerçekleştirilmesi gerekmektedir. Buna rağmen, dermatitis herpetiformis prevalansı, sunulan gluten hassasiyetli enteropati prevalansından daha düşüktür.Bu durumun mevcut olduğu ek hayvanların tespit edileceği varsayıldığında, sonuçlar gelecekteki araştırmalar için temel oluşturmaktadır.

recognition-epidermal-transglutaminase-iga-tissue-transglutaminase-2

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Kolajen VII 200 amino asit (aa 757-967) bir streç karşı IgG antikorları saflaştırılmış, bugünkü iş tarif hayvan modelinde kabarma fenotipi yanı sıra insan için karakteristik histolojik ve immunopatolojik özellikleri üreten farelere sürekli enjekte edilir epidermolizis bülloza...

Granülosit-bağımlı otoantikor indüklenen Cilt Kabarcıklanma

Burada, kırmızı kan hücrelerine karşı antikorlar tarafından neden olunan kompleman aktivasyon ölçmek için iki tahlil tarif eder. Mevcut deneylerde üzerinde en büyük avantajı, nicel ve kolay yorumlamak doğasıdır.

Kırmızı kan hücreleri üzerinde antikor kaynaklı kompleman aktivasyon sayısal tespiti için Yöntemler

MHC kompleksi sınıf II dextramers ile direkt boyama ile beyin ve kalp kendinden reaktif CD4 T hücreleri algılamak için protokol bu raporda tarif edilmiştir. Kapsamlı bir analiz için in situ antijene özgü CD4 + T hücrelerinin frekansları numaralandırmak için güvenilir bir yöntem de planlanmaktadır.

Majör Histo-uyum Kompleks sınıf II Dextramers kullanarak Beyin ve Heart reaktif CD4 T hücrelerinin in situ tespiti

Burada, biz electrochemiluminescence (ECL) deneyleri kullanarak insan adacık otoantikorlar algılamak için yöntemler sundu. Tip 1 diyabet, tahmin etmek için kullanılan iletişim kuralı, üzerine otoantikorlar diğer otoimmün hastalıklar için algılamak için genişletilebilir.

Electrochemiluminescence deneyleri için insan adacık otoantikorlar

Bu yazıda, biz T-bağımlı ve T-bağımsız immünglobulin (Ig) izotip yanıt ELISA kullanarak farelerde karakterize için bir protokol tanımlamak. Bu yöntem tek başına veya kullanılabilir akış ile birlikte sitometresi araştırmacılar T-bağımlı ve bağımsız T antijen bağışıklama takip farelerde B hücre-aracılı Ig izotip yanıtlarında farkları belirlemek için izin verir.

Timus bağlı ve timus bağımsız immünglobulin izotip yanıt Immunosorbent Assay enzim bağlı kullanarak farelerde karakterizasyonu

Bu kağıt bir mikrosıvısal kartuş tabanlı Kemiluminesan sistemi ve kullanışlılığı değerlendirilmesi ile serum özel immünglobulin E Anti tanılar algılamak için bir protokol sunar.

Biochip mikrosıvısal teknolojisi uygulama algılamak Serum alerjen özgü immünglobulin e (sIgE)

Burada sunulan, enflamatuar mediatör üretimini değerlendirmek için epidermisin dermisten ayrılması için bir protokoldür. İltihaplanmadan sonra, sıçan arka pençe epidermisi 4 ° C'de termolysin ile dermisten ayrılır.  Epidermis daha sonra RT-PCR ile mRNA analizi ve batı blot ve immünostokimyası tarafından protein değerlendirmesi için kullanılır.

Bölgeye Özgü İnflamatuar mRNA ve Proteini Tespit Etmek İçin Sıçan Epidermis ve Dermis'in Termolysin ile Ayrılması

Bu protokol, CD4+ T hücreleri ve sitokinlerde insan romatoid artritine daha yakın romatoid artrit modelleri oluşturmak için G6PI karışık peptidler kullanır. Yüksek saflıkta değişmez doğal katil T hücreleri (özellikle iNKT2) belirli fenotip ler ve fonksiyonlar ile in vivo indüksiyon ve in vitro saflaştırma ile benimseyici immünoterapi elde edildi.

Glukoz-6-Fosfat İzomazlarında (G6PI)-Indüklenen RA Farelerde iNKT Hücrelerinin Benimseyici İmmünoterapisi

7 otoantikor testini bir araya getiren basit bir çoklanmış ECL testi modelliyoruz. Tahlil, çölyak hastalığı, otoimmün tiroid hastalığı ve otoimmün poliglandüler sendrom 1 dahil olmak üzere T1D ve diğer birçok otoimmün hastalığı aynı anda tarayabilir.

Yüksek Verimli Bir Elektrokemilüminesans 7-Plex Testi Aynı Anda Tip 1 Diyabet ve Çoklu Otoimmün Hastalıklar İçin Tarama

Bu protokol, üç boyutlu yeniden oluşturulmuş insan epidermisini tekrarlanabilir ve sağlam bir şekilde yetiştirmek için basit bir yöntemi açıklar. Ek olarak, epidermal bariyer modelinin yapı-işlev ilişkisini karakterize eder. Yeniden inşa edilen insan epidermisinin proinflamatuar uyaranlar üzerine biyolojik tepkileri de sunulmaktadır.

Büyük Ölçekte Üç Boyutlu Yeniden Yapılandırılmış İnsan Epidermisi Yetiştirmek

Deri lezyonları birçok romatizmal hastalıkta sık görülen ve önemli özelliklerdir ve patolojik inceleme ile biyopsi yapılması tanıda kritik rol oynar. Bu makale, standardize deri biyopsisi prosedürüne ayrıntılı bir genel bakış sunmakta ve örnek olarak diskoid lupus eritematozus kullanarak, romatizmal hastalıkların teşhisinde dermatopatolojinin önemli rolünü vurgulamaktadır.

Diskoid Lupus Eritematozus Tanısı için Deri Biyopsisi

Keşfedin dermatitis herpetiformis'te IgA ve epidermal transglutaminaz arasındaki otoimmün reaksiyonu görselleştirme yöntemini. Bu teknik, rhesus maymunlarında cilt hastalığının patogenezini anlamak için değerli bir model sunar.

Nadir bir Case IgA ve Doku Transglutaminaz 2 Antikorlar Epidermal Transglutaminaz tanınması Rhesus Dermatit

Daha fazla video keşfet