Name: Basit Fare İntrakranial Xenograftlarında Çalışmaları Kılavuzu Vida Yöntemi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-09-26T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 11 s
Description: Öğrenin farelerde kılavuz vida yöntemiyle gliom intrakranial ksenogreft modeli kurmayı ve yeni tedavi ajanlarının etkinliğini değerlendirmeyi. Bu güvenli teknik tümör büyümesi ve sağkalım üzerindeki terapötik yanıtları incelemeye olanak tanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Yazarlar, yardım için Verlene Henry bu model geliştirme ve Lindsay Holmes teşekkür etmek istiyorum. Bu çalışma kısmen James S. McDonnell Vakfı (220.020.173) tarafından finanse edildi.

1. Hücre dizileri <ol><li> U87MG glioma hücrelerinin% 5 fetal sığır serumu (FBS) ile desteklenmiş DMEM-F12 ile büyük doku kültürü şişeleri kültür. </li><li> Hücreler şişeler sıcak Fosfat ile iki kez yıkanarak hasat Tamponlu Salin (PBS) ve 37 ° kuluçka ° C,% 0.25 'lik tripsin ve% 0.05 EDTA içeren 10 ml PBS ile 5 dakika. Bir kez hücreleri içeren bir kültür ortamı ve santrifüj (4 dakika için 300 X g) 10 ml 50 ml tüp yerleştirilir kaldırılır. </li><li> Yıkama sonrasında, hücrelerin 10 konsantrasyonda yeniden süspanse x 10 6 / ml ul 50.000 hücre / 5 bir aşılama için izin verilen kültür ortamı,. </li><li> Hücreler intrakranial enjeksiyon kadar buz üzerinde tutulur. </li></ol> 2. Intrakranial Rehberi vida civatalama Bu prosedür, hücre enjeksiyonu öncesinde birkaç gün yapılabilir. Burada açıklanan tüm prosedürler katı steril koşullar altında yapılmaktadır. <ol><li> Fare (nu BALB / c / nu kadın, 5-6 hafta yaklaşık 18g), tanıtım amaçlı numaralı tartılır ve ketamin (100 mg / kg) ve ksilizin (5 mg karışımı intraperitoneal (IP) enjeksiyonu ile anesthetised / kg). </li><li> Cilt iyot çözeltisi ile silinir ve küçük bir kesi (2-3 mm), orta hat ve interaural çizgi anterior sağ tarafı boyunca yapılır. Bu kafatasının koronal ve sagital sütür ortaya koyar. Bregma, bu iki sütür kavşakta konumlandırılmış. </li><li> 2,5 mm lateral ve bregma anterior 1 mm bir noktadan sonra kılavuz vida giriş noktası işaretlenir. Bu nokta, doğrudan kaudat nükleus 1 yukarıda yer almaktadır . </li><li> 1 x 1 mm derin delik dura kafatası yoluyla twist drill düzenlenen steril bir eli ile delinmiş. </li><li> Dura içine kafatasları yüzeyinin altında 1.6 mm uzatacaktır sterilize kılavuz vida sonra bir tornavida ile delik içine cıvatalı kafatası (Şekil 1A) ile aynı hizada kadar. </li><li> Steril bir stile veya vida kukla sonra açılması (Şekil 1B) kapatmak için kılavuz vida merkezi deliğe yerleştirilir. </li><li> Yara Vetbond Doku Yapıştırıcı (n-butil siyanoakrilat) ve fareler ile kapatılır reversine bir intraperitoneal enjeksiyon (küçük hayvanlar) (0.1 ml / kg) ve analjezi carprofen (5 mg/kg/100 ul) verilmiştir. Fare sonra 20 dakika kadar sürebilir bir ısınma mat (36 ° C) kurtarmak için izin verilir. Tamamen bilinçli kadar Fare sık sık izlenir ve bu kurtarma süre içinde gözlenir. </li></ol> 3. İntrakranial hücresel engraftman <ol><li> Steril kelepçeli Hamilton şırınga, iğne ucu kılavuz vida çıkışı (Şekil 1B) altında genişletmek için sadece 2 mm iğne sağlayan küçük plastik bir halka uygulanarak hazırlanmıştır. Bu nedenle, son aşılama noktası kafatası yüzeyinden 3.5 mm altında. </li><li> Dört gün kılavuz vida cerrahisi sonrası, farelerin yukarıdaki gibi tekrar anestezi (2.1) ve stile kaldırmak için kılavuz vida üzerinde küçük bir kesi yapılır. </li><li> Kelepçeli Hamilton şırınga sonra 5 ul herhangi bir hava kabarcığı oluşturabilir veya yukarı çekmek için önlem alarak iyice karıştırılır hücrelerinin ile doludur. </li><li> Şırınga perfüzyon pompa güvenli ve iğne kılavuz vidasını (Şekil 1C) eklenir. Hücreler daha sonra saatte 30 ul hızında infüze. </li><li> Otomatik cihazları (Şekil 1D), sabit bir akış hızında bir kerede bize 10 hayvanlara enjekte etmek için izin verdi. Hücreler aynı zamanda kelepçeli hamilton şırınga kullanılarak elle enjekte edilebilir ya da alternatif şırınga, iğne ucu 2 mm kılavuz vida ötesine izin 3 mm koparılmış 200 ul pipet ucu tarafından kelepçeli olabilir. Enjeksiyonu sonra sürekli bir sabit hızda yapılmalıdır. </li><li> Infüzyon tamamlandığında, şırınga dikkatlice çıkarılır ve stile kılavuz vida değiştirilir. Yara kapalı yapıştırılmış ve fareler (2.7) daha önce olduğu gibi kurtarma ilaçlar verilir ve bir ısınma mat kurtarmak için izin verilir. </li></ol> 4. Terapötik meydan okuma <ol><li> Dört gün U87MG hücre aşılama sonra, fare tartılır ve rastgele kontrol ve tedavi grupları ayrılmıştır. </li><li> Tedavi grubunda AMG102 (PBS 100 ul 100 mikrogram) bir IP enjeksiyonu ise kontrol grubu, PBS (100 ul) bir-periton içi (IP) enjeksiyonu. </li><li> Enjeksiyonlar, 14 gün boyunca her iki günde toplam 6 enjeksiyonları (Şekil 2) bir tekrarlanır. </li><li> Son enjeksiyondan sonra, farelerin günlük olarak izlenmekte ve her ikinci gün tartılır. </li><li> Farelerde ciddi nörolojik işlev bozuklukları (denge bozukluğu, felç), dehidratasyon, ya da% 10'dan fazla kilo kaybı ya da can çekişen gösterilecek başladığında, onlar insanca ötenazi uygulandı. Bu insani bir uç nokta gün sonra, Kaplan-Meier sağkalım eğrisi kaydedildi. </li></ol> 5. Tedavi verimliliğinin değerlendirilmesi <li> GraphPad Yazılım, Windows için GraphPad Prism 4.03 San Diego Kaliforniya ABD, Kaplan-Meier sağkalım eğrisi kullanılarak oluşturulan <a href="http://www.graphpad.com">www.graphpad.com</a> 3. Ölümler veya euthanizations son nokta olayları olarak işaretlenir ve 1 olarak puanlandı. Deneyin sonunda kurtuldum Hayvanlar olmayan olaylar olarak kaydedilir ve 0 olarak skorlandı. </li> 6. Temsilcisi sonuçları: Kontrol hayvanların hücrelerinin ilk aşılama sonrası nörolojik bozukluğu ve kilo kaybı 23 gün belirtileri göstermeye başladı. Bu önemli ölçüde, 35 gün AMG102 tedavi grubunda ertelendi. Gerçekten de 35 günde,% 77 (n = 7 / 9), kontrol grubunda ötenazi olmuştu. Kaplan-Meier sağkalım eğrisi açıkça AMG102 tedavi (Şekil 3) yanıt sağkalım önemli bir artış göstermektedir. 70 gün, kontrol farelerin% 88,% 37 ile karşılaştırıldığında (n = 8 / 9) ötenazi olmuştu AMG102 tedavi edilen grupta (n = 3 / 8). Beyinleri histolojik analiz, kontrol grubunda ise tüm 9 hayvanlar gelişmiş tümörler sadece 3 8 AMG102 tedavi edilen farelerde (Şekil 4) ile karşılaştırıldığında doğruladı. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/3157/3157fig1.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1: Görüntü (A) doğrudan kaudat nükleus üstünde yer alan bir alanda konumlandırılmış intrakranial kılavuz vida gösterir. 2 mm iğne kılavuzu ötesine uzatır ve böylece hücreler kaudat nükleus içinde 3,5 mm enjekte edilir kelepçeli hamilton şırınga (hücreleri ile önceden yüklenmiş) sonra kılavuz vida içine yerleştirilir. Şırınga sonra bir stile (B) tarafından kaldırılır ve değiştirilir. Otomatik infüzyon cihazı (C) bir defada 10 hayvanlara enjekte edebilir. Simültane beş enjeksiyonları (D) burada gösterilir. <img alt="Şekil 2" src="/files/ftp_upload/3157/3157fig2.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2: Şematik Çalışma protokolü. Hücreler, tedavi günde 4 başlamadan gün 0 enjekte edildi. Kontrol hayvanlar PBS (100 ul) IP enjeksiyon tedavi grubunda AMG102 (100 μg/100 ul) IP enjeksiyon alırken aldı. Bu enjeksiyonlar, 10 gün boyunca her ikinci gün verildi. Toplam 6 enjeksiyonları verildi. Hayvanlar daha sonra nörolojik ve fiziksel bozuklukları belirtileri açısından 70 gün süreyle takip edildi. <img alt="Şekil 3" src="/files/ftp_upload/3157/3157fig3.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 3"> Şekil 3: Kaplan-Meier sağkalım eğrisi kontrolü ve AMG102 tedavi edilen farelerde karşılaştırarak. Anlamlı sağkalım AMG102 (p = 0.005) tedavi sonrasında elde edildi. <img alt="Şekil 4" src="/files/ftp_upload/3157/3157fig4.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 4"> Şekil 4: koronal beyin bölümlerinin kontrol hayvanlarda tümör gelişimi (A) ve AMG102 tedavi hayvanlarda hiçbir beyin tümörü geliştirme (B) gösteren Microphotographs. Ölçek çubuğu 1 mm.

<ol><li>Lal, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+implantable+guide-screw+system+for+brain+tumor+studies+in+small+animals%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosurg%22%5BJournal%5D)">An implantable guide-screw system for brain tumor studies in small animals.</a> J Neurosurg. 92, 326-333 (2000).</li>
<li>Jun, H. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((AMG+102%2C+a+fully+human+anti-hepatocyte+growth+factor%2Fscatter+factor+neutralizing+antibody%2C+enhances+the+efficacy+of+temozolomide+or+docetaxel+in+U-87+MG+cells+and+xenografts%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">AMG 102, a fully human anti-hepatocyte growth factor/scatter factor neutralizing antibody, enhances the efficacy of temozolomide or docetaxel in U-87 MG cells and xenografts.</a> Clin Cancer Res. 13, 6735-6742 (2007).</li>
<li>Pillay, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+plasticity+of+oncogene+addiction%3A+implications+for+targeted+therapies+directed+to+receptor+tyrosine+kinases%5BTitle%5D)+AND+%22Neoplasia%22%5BJournal%5D)">The plasticity of oncogene addiction: implications for targeted therapies directed to receptor tyrosine kinases.</a> Neoplasia. 11, 448-458 (2009).</li>
<li>Buchanan, I. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiosensitization+of+glioma+cells+by+modulation+of+Met+signaling+with+the+hepatocyte+growth+factor+neutralizing+antibody.+AMG102%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Mol+Med%22%5BJournal%5D)">Radiosensitization of glioma cells by modulation of Met signaling with the hepatocyte growth factor neutralizing antibody. AMG102.</a> J Cell Mol Med. 15, 1999-2006 (2011).</li>
<li>Wen, P. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+phase+II+study+evaluating+the+efficacy+and+safety+of+AMG+102+%28rilotumumab%29+in+patients+with+recurrent+glioblastoma%5BTitle%5D)+AND+%22Neuro+Oncol%22%5BJournal%5D)">A phase II study evaluating the efficacy and safety of AMG 102 (rilotumumab) in patients with recurrent glioblastoma.</a> Neuro Oncol. 13, 437-446 (2011).</li>
<li>Caretti, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monitoring+of+Tumor+Growth+and+Post-Irradiation+Recurrence+in+a+Diffuse+Intrinsic+Pontine+Glioma+Mouse+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Pathol%22%5BJournal%5D)">Monitoring of Tumor Growth and Post-Irradiation Recurrence in a Diffuse Intrinsic Pontine Glioma Mouse Model.</a> Brain Pathol. 4, 441-451 (2011).</li>
<li>Jallo, G. I., Volkov, A., Wong, C., Carson, B. S., Penno, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+brainstem+tumor+model%3A+functional+and+histopathological+characterization%5BTitle%5D)+AND+%22Childs+Nerv.+Syst%22%5BJournal%5D)">A novel brainstem tumor model: functional and histopathological characterization.</a> Childs Nerv. Syst. 22, 1519-1525 (2006).</li>
<li>Johns, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+efficacy+of+epidermal+growth+factor+receptor-specific+antibodies+against+gliomaxenografts+is+influenced+by+receptor+levels%2C+activation+status%2C+and+heterodimerization%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">The efficacy of epidermal growth factor receptor-specific antibodies against gliomaxenografts is influenced by receptor levels, activation status, and heterodimerization.</a> Clin Cancer Res. 13, 1911-1925 (2007).</li>
<li>Scott, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+phase+I+clinical+trial+with+monoclonal+antibody+ch806+targeting+transitional+state+and+mutant+epidermal+growth+factor+receptors%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.+S.+A%22%5BJournal%5D)">A phase I clinical trial with monoclonal antibody ch806 targeting transitional state and mutant epidermal growth factor receptors.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 104, 4071-4076 (2007).</li>
<li>Niyazi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Therapeutic+options+for+recurrent+malignant+glioma%5BTitle%5D)+AND+%22Radiother.+Oncol%22%5BJournal%5D)">Therapeutic options for recurrent malignant glioma.</a> Radiother. Oncol. 98, 1-14 (2011).</li>
</ol>

Bu çalışma Amgen Inc Araştırma Fonu tarafından desteklenen

Burada sunulan intrakranial kılavuz vida yöntemi intrakranial xenografts hızlı ve tekrarlanabilir kurulmasını sağlar ve eğitimli bir hayvan teknisyen elinde, bu işlem çok kolay bir stereotaktik cihaz için gerek kalmadan yapılır. Bizim yöntemi doğru in vivo tümör gelişimi için en uygun beyin bölgesi ve bir seferde 10 hayvanların aynı anda aşılama sağlayan otomatik bir infüzyon pompası bulmak için bir kılavuz vida kullanımı birleştiriyor. Kılavuz vida büyütme yordamı gerçekleştirmek için en az 5 dakika sürer. 30 ul / saat hücre otomatik infüzyon 5 ul hacmi için sadece 10 dakika sürer. Bu sabit bir oranda doğru dozaj sağlar ve artmış intrakranial basınç nedeniyle ekstra kranial alana hücre çıkarılma riskini azaltır. Ayrıca 10 ul hacimli bu yordamı var ve hücresel reflü nedeniyle herhangi bir ekstra kranial tümör büyüme görülmez. Otomatik infüzyon pompası aynı zamanda çeşitli hayvanların, saatte yaklaşık 15 hayvan sınırlı bir stereotaktik prosedüre göre saatte 60 hayvanlara enjekte edebilir aynı anda inoküle olması elverdiğince. Konumunu tümör toplu nihai konumunu belirleyen en önemli adım olarak, bu yordamı kafatası kılavuz vida konumudur. Kılavuz vida çok merkezi ise, hücreler kılavuzu ileriye doğru yerleştirilir ise iki beyin hemisfer arasında bir bölgeye enjekte edilecektir, tüm hücrelerin beyin içine enjekte edilir olmaz. Bu kılavuz yanal 2.5 mm ve 1 mm bregma 1 anterior bulmak mümkün olduğunca doğru olması çok önemlidir. Plastik bir kılavuz vida gibi MR veya PET 6 gibi beyin görüntüleme gerektiren çalışmalar için de kullanılabilir olmasına rağmen, bu çalışmada biz, bir çelik kılavuz vida kullanılır. Otomatik infüzyon pompası, bazı gruplar için engelleyici maliyet olsa bile, hücreler hâlâ elle daha hızlı stereotaktik yaklaşımlar daha enjekte edilebilir. Genel olarak, bu hızlı, doğru ve tekrarlanabilir bir yöntem glioma, medulloblastom ve beyin sapı tümörleri 7 incelemek için kullanılabilir . Bu prosedür iki laboratuarlar arasında beklenmedik anestezi reaksiyonları (&lt;% 1) bağlı ölümlerin 500 fareler üzerinde yapılmıştır. Fare kılavuz vida ile sabitledim ve hücreler, herhangi bir nörolojik komplikasyonlara prosedürün bir sonucu olarak ölmek ya da zarar vermedi ile sonradan infüze edildi. Hayvanlar herhangi bir komplikasyon olmadan 100 gün geçmişte kalmıştır. SCID gibi saçlı tüysüz bir fare, immün yetmezlikli fare kullanmayı tercih rağmen uygun kafatası saç sitesi temiz tutmak ve kılavuz vida ile müdahale saç önlemek için ameliyat öncesi kaldırıldı gibi olurdu. Glioma 8-10 tedavisi için geliştirilmiş olan birçok romanı terapötikler vardır. Yakın zamanda subkutan U87MG glioma xenografts AMG102 3 ile tedavisi ile inhibe edilebilir olduğunu gösterdi; humanize antikor glioma 5 klinik değerlendirme yapılan HGF yönetti. Biz çıplak farelerin beyinlerinde, intrakranial U87MG tümörlerin kurmak yöntemi tanımlamak için kullanılan. Bizim çalışmamız açıkça yöntemin yararını gösterir ve AMG102 ortotopik U87MG xenografts büyüme önemli ölçüde inhibe ettiğini göstermektedir. Biz daha etkili tümör büyüme inhibisyonu elde etmek için diğer terapötikler AMG102 ile birlikte kullanıldığında ne belirlemek için bu modeli kullanmaya devam edecektir.

<table border="1"><tbody><tr><th> Reaktifin Adı </th><th> Şirket </th><th> Katalog numarası </th><th> Yorumlar (isteğe bağlı) </th></tr><tr><td> DMEM/F12 </td><td> Invitrogen </td><td> 12634010 </td><td></td></tr><tr><td> FCS </td><td> Bovogen </td><td> SFB&#39;ler </td><td></td></tr><tr><td> Tripsin </td><td> Invitrogen </td><td> 15050065 </td><td></td></tr><tr><td> EDTA </td><td> Sigma </td><td> E6758 </td><td></td></tr><tr><td> Balb / c nu / nu fareler </td><td> ARC Perth </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Vidalı Tutucu </td><td> Plastik Bir </td><td> SD-1 </td><td></td></tr><tr><td> Matkap Tutucu </td><td> Plastik Bir </td><td> DH-1 </td><td></td></tr><tr><td> Matkap ucu </td><td> Plastik Bir </td><td> D # 60 </td><td></td></tr><tr><td> Vida kılavuzu (metal) </td><td> Plastik Bir </td><td> C212SG </td><td></td></tr><tr><td> Vida Dummy (stylus) </td><td> Plastik Bir </td><td> C212SD </td><td></td></tr><tr><td> Hamilton Şırınga (10 ul 26g çimentolu iğne) </td><td> Grace Bölümü Discovery Science </td><td> 80075 </td><td></td></tr><tr><td> PHD 22/2000 infüzyon pompası </td><td> Harvard Apparatus </td><td> 70-2003 </td><td> Isteğe bağlı </td></tr><tr><td> Vetbond </td><td> 3M </td><td> 1469SB </td><td></td></tr><tr><td> Thermo pedi </td><td> Harvard Apparatus </td><td> 340390 </td><td></td></tr></tbody></table>

basit fare İntrakranial xenograftlarında Çalışmaları kılavuzu vida yöntemi

A Simple Guide Screw Method for Intracranial Xenograft Studies in Mice

Insan tümör hücreleri bağışıklık farelerin beyin içine aşılama çalışması için, glioblastoma (glioma) ve medulloblastom beyin kanserleri dahil olmak üzere kurulmuş bir yöntemdir. Yaygın olarak kullanılan stereotaktik yaklaşım, sadece tek bir seferde hayvan enjeksiyon için, emek yoğun ve son derece özel ekipman gerektirir. Başlangıçta, Lal ve arkadaşları, 1 tarafından geliştirilen kılavuz vida yöntemi, hantal stereotaktik prosedürleri ortadan kaldırmak için geliştirilmiştir . Şimdi hızlı ve son derece güvenli, modifiye edilmiş bir kılavuz vida yaklaşım tarif, her ikisi de kritik etik kaygılar. Özellikle, bizim prosedür şimdi tümör hücreleri ile aynı anda enjekte edilmek üzere 10 hayvan sağlayan bir infüzyon pompası içermektedir. HGF / dağılım faktörü şu anda klinik değerlendirme 2-5 geçiren bir insan antikor; bu prosedürün yardımcı programı göstermek için, biz sonra AMG102 ile tedavi edilen farelerde intrakranial xenografts olarak insan U87MG glioma hücreleri kurdu . AMG102, Sistemik enjeksiyon intrakranial U87MG xenografts tüm farelerin hayatta kalma önemli ölçüde uzun süreli ve tam kürleri bir dizi sonuçlandı. Bu çalışmada, kılavuz vida yöntemi intrakranial xenografts kurmak için ucuz, yüksek tekrarlanabilir bir yaklaşım olduğunu göstermektedir. Ayrıca, beyin kanserlerinin tedavisinde yeni tedavi stratejilerinin doğrulamak için ilgili fizyolojik bir model sunar.

Glioma tedavisi için yeni tedavi paradigmalar değerlendirmek için, fizyolojik ilgili modeller gereklidir. Biz stereotaktik yaklaşımlar daha hızlı ve daha güvenli bir intrakranial xenograft modelleri kurulması için implante edilebilir bir kılavuz vida prosedürü kullanır.

Basit Fare İntrakranial Xenograftlarında Çalışmaları Kılavuzu Vida Yöntemi

İmmünosüprese farelerin beynine insan tümör hücrelerinin aşılanması, glioblastoma dahil olmak üzere beyin kanserlerinin incelenmesi için kabul görmüş bir yöntemdir...

Bu prosedürün amacı, yeni bir terapötik ajanın etkinliğini değerlendirmek için bir intrakraniyal beyin kanseri grefti oluşturmaktır. Bu işlem, öncelikle kafatasına bir kılavuz vida sabitlenerek ve ardından kılavuz vida aracılığıyla beyne hücreler infüze edilerek gerçekleştirilir. Bir sonraki adım, beyinde yerleşmiş olan tümör hücrelerini hedefleyen terapötik bir müdahaleye başlamaktır.Ardından, sağkalım sonuçları değerlendirilerek hayvanlarda terapötik yanıtlar izlenir. Nihayetinde, terapötik ajanlar, kontrol gruplarına kıyasla tedavi gruplarında tümör büyümesini ve sağkalımı etkileyebilir. Bu prosedür, hücre enjeksiyonundan birkaç gün önce gerçekleştirilebilir.Fareleri tartarak ve intraperitonal enjeksiyon yoluyla ketamin ve ksilazin karışımı ile anestezi uygulayarak başlayın. Fareler ayak parmağı sıkıştırma testine yanıt vermemeye başladığında, kafa derisini iyotla hazırlayın, ardından orta hattın sağ tarafı boyunca ve interoral hattın ön kısmına iki ila üç milimetrelik bir insizyon yapın. Bu insizyon, kafatasının koronal ve sagital sütürlerini açığa çıkarır.bgma, bu iki sütürün birleşme noktasında yer alır. Kılavuz vida girişini, bgma'nın 0.2 0.5 milimetre lateraline ve bir milimetre anteriore işaretleyin. Bu nokta, doğrudan CAU sekiz çekirdeğinin üzerinde yer almaktadır.Şimdi işaretli noktada, el tipi bir burgu matkap kullanarak dura vidasına bir milimetre derinliğinde bir delik açın. Sterilize edilmiş bir kılavuz vidayı, kafatası yüzeyiyle aynı seviyeye gelene kadar deliğe yerleştirin. Vida kafatası yüzeyine değer değmez ilerletmeyi durdurduğunuzdan emin olun.Vida kafatasını oyarsa, kafatasında kırık oluşabilir. Kılavuz vida, 1,6 mm uzunluğunda 26 gauge bir iğneyi destekler. Kılavuz vidanın açıklığını kapatmak için kılavuzun içine bir tıpa veya dummy vida yerleştirin.Şimdi vidayı takın. Kesilen deriyi pens yardımıyla bir arada tutarak ve bir damla vet bond ile yapıştırıp deri kenarı boyunca yayarak yarayı kapatın; deri yapışana kadar birkaç saniye boyunca tutun. Son olarak, intraperitoneal enjeksiyon yoluyla geri çevirici ve karprofen analjezikleri uygulayın ve farelerin ısıtma pedi üzerinde iyileşmesini sağlayın.Geri kazanma işlemi 20 dakikayı bulabilir. Örnek deney için, U 87 mg glioma hücreleri, %5 fetal sığır serumu ile desteklenmiş D-M-E-M-F 12 içeren büyük doku kültürü flasklarında kültüre edilmiştir. Bu bölüm, bu hücrelerin enjeksiyon gününde enjeksiyona nasıl hazırlanacağını açıklamaktadır.Flaskı önce iki kez ılık PBS ile yıkayarak hücreleri hasat edin. Ardından, %0,25 tripsin ve %0,05 EDTA içeren 10 mililitre PBS ekleyin ve hücreleri 37 °C'de beş dakika boyunca veya hücreler yerinden ayrılana kadar inkübe edin. Daha sonra hücreleri 10 mililitre besiyeri içinde toplayın.Hücreleri bir hemositometreye yerleştirin ve hücreleri mikroskop altında sayın. 10 mL kültür medyası ve hücre içeren 50 mililitrelik konik tüp, 300 ×g hızda dört dakika boyunca santrifüj edilir. Santrifüj işleminden sonra, hücreleri kültür medyasında mililitrede 10 milyon hücre konsantrasyonunda yeniden süspanse edin. Bu konsantrasyonda, her bir intrakraniyal enjeksiyonda kullanılan 5 µL hücre süspansiyonu 50.000 hücre içerecektir.Enjeksiyon için hücre süspansiyonunu buz üzerinde saklayın. Beş mikrolitrelik hacimler kolayca buharlaşabileceği ve bu durum hücreleri yok edeceği için burada süspansiyondaki hücrelerin tek bir hacmi gereklidir. Kelepçeli bir Hamilton şırıngası hazırlayarak başlayın.İğnenin sadece iki milimetresi kılavuz vida çıkışının altına uzanacak şekilde, iğne ucuna küçük plastik bir halka takın. Bu, inokülasyon noktasının 3,5 mm derinlikte olmasını sağlar; önceden augmentasyon uygulanmış bir fareyi anestezi altında uyutun ve kılavuz vidanın üzerine küçük bir insizyon yapın. Stileti çıkarın.Ardından şırıngayı, buz üzerinde saklanan ve iyice karıştırılmış hücrelerden 5 µL ile doldurun. Şırıngada hava kabarcığı kalmamasına dikkat edin, çünkü bu kabarcıklar emboliye veya hücrelerin enjeksiyon bölgesinden geri akmasına neden olabilir. Şırıngayı perfüzyon pompasına sabitleyin ve ardından iğneyi kılavuzun içine yerleştirin.Hücre infüzyonuna saatte 30 µL hızla başlayın. Otomatik aparat kullanılarak, sabit bir akış hızında aynı anda 10 hayvana kadar enjeksiyon yapılabilir. Sabit ve düzenli bir hızda yürütüldüğü takdirde manuel enjeksiyon da uygulanabilir.İnfüzyon tamamlandığında, şırıngayı dikkatlice çıkarın, ardından stilet'i daha önce olduğu gibi kılavuz vidaya geri yerleştirin. Yarayı vet bond ile kapatın, analjezikler uygulayın ve farelerin iyileşmesini bekleyin. İyileşme süreci 20 dakikaya kadar sürebilir.U 87 mg hücre inokülasyonundan dört gün sonra fareler tartıldı ve rastgele kontrol ve tedavi gruplarına ayrıldı. Kontrol grubuna intraperitoneal olarak 100 microliters PBS enjekte edildi ve tedavi grubuna 100 microliters başına 100 micrograms MG 1 0 2 ip olarak enjekte edildi. Enjeksiyon, 14 gün boyunca gün aşırı tekrarlanarak toplam altı kez uygulandı.Son enjeksiyondan sonra fareler günlük olarak izlendi ve gün aşırı tartıldı. Hayvanların sonlanma noktası; denge bozukluğu veya felç gibi belirgin nörolojik disfonksiyonların başlangıcı, dehidratasyon, ağırlığın %10'dan fazla azalması veya ölüm olarak tanımlandı. Sonlanma günleri Kaplan-Meier sağkalım eğrileri olarak kaydedildi.Ölümler veya çağrılar son nokta ve olay olarak işaretlenmiş ve bir olarak puanlanmıştır. Deney sonunda hayatta kalan hayvanlar olay gerçekleşmemiş olarak kaydedilmiş ve kontrol olarak sıfır puanlanmıştır. Hayvanlar, hücrelerin ilk inokülasyonundan 23 gün sonra nörolojik bozukluk ve kilo kaybı belirtileri göstermeye başlamıştır.Bu durum, A MG 1 0 2 ile tedavi edilen grupta önemli ölçüde gecikmiştir. 35. güne gelindiğinde, kontrol grubundaki dokuz hayvanın yedisi ötanize edilmiştir. 78. güne gelindiğinde ise, A MG 1 0 2 ile tedavi edilen hayvanların sadece üçüne kıyasla, kontrol grubundaki dokuz hayvanın tamamı ötanize edilmiştir.Beyinlerin histolojik analizi, kontrol grubundaki dokuz hayvanın tamamında tümör geliştiğini, buna karşılık saat 08:00'de g 1 0 2 ile tedavi edilen farelerin sadece üçünde tümör geliştiğini doğrulamıştır.

a-simple-guide-screw-method-for-intracranial-xenograft-studies-in-mice

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Lusiferaz modifiye insan beyin tümörü xenografts atimik farelerde tümör büyümesi ve biyoparlaklık görüntüleme kullanarak tedaviye yanıt daha sonraki izleme ile intrakranyal kurulmuş olabilir. Sağkalım analizi ile birlikte, biyoparlaklık izleme, beyin tümörlerinin tedavisi için düşünülen tedavilerin klinik öncesi test için önemli bir araştırma aracı.

Biyoparlaklık Görüntüleme kullanarak Tümör Büyüme ve Terapi yanıt sonraki Analizi ile İntrakranial Beyin Tümörü Xenografts kurulması

Biz çıplak farelerin ve sonraki seri beyinlerine insan glioblastoma multiforme hücrelerinin hassas, stereotaktik implantasyon için tümleşik bir yöntem...

Stereotaktik intrakranial implantasyon ve<em&gt; In vivo</emGlioblastoma Multiforme bir Mouse Model Sistemde Tümör Xenografts arasında&gt; Bioluminescent Görüntüleme

Kaynak: Liou, C. et al. Serbest Hareket Eden Farelerde Bağırsak Kaynaklı Mikrobiyal Metabolitlerin İntraserebroventriküler Dağıtımı. J. Vis. Uzm. (2022).Bu video, beyin aracılı davranış üzerindeki etkilerini incelemek için serbestçe hareket eden bir farede kısa zincirli yağ asitlerinin (SCFA'lar) intrakraniyal enjeksiyonunu göstermektedir. Fare beynine implante edilen bir kılavuz kanüle bir enjektör kanülü yerleştirilir. İyileştikten sonra, fare yeni bir kafese alışır. Daha sonra SCFA'lar...

Bir fare modelinde bağırsak kaynaklı mikrobiyal metabolitlerin intrakraniyal enjeksiyonu

Yeni Bir Yüksek çözünürlüklü<em&gt; In vivo</emTümör Büyüme ve Tedavi için İntrakranial Yapıların Dinamik Tepki Eğitim&gt; Görüntüleme Tekniği

Malign gliomalar, farklı klinik ve moleküler özelliklere sahip heterojen bir yüksek infiltive glial neoplazm grubunu oluşturur. Primer ortotopik ksinograftlar preklinik hayvan modellerinde malign glioma alt tiplerinin histopatolojik ve moleküler özelliklerini rekapitulate eder.

Primer Ortotopik Glioma Xenografts Infiltratif Büyüme ve İsocitrat Dehidrogenaz I Mutasyonu Rekapitulate

Floklanmış, koşullu onkojenik alellerle tasarlanmış ve viral Cre aracılı rekombinasyon yoluyla transforme edilmiş farelerden toplanan fenotipik vahşi tip astrositler ve nöral kök hücreler, astrositom patogenezini modellemek için kullanılabilir in vitro ve in vivo dönüştürülmüş hücrelerin sinjeneik, bağışıklığı yetkin yavruların beyinlerine ortotopik enjeksiyonu ile.

Modelleme Astrositom Patogenez İn Vitro Ve In Vivo Kortikal Astrositler veya Şartlı, Genetiği fareler ile Nöral Kök Hücreler kullanma

Beyin de in vitro veya ektopik analizler tarafından temsil edilmeyen nitelikleri ile benzersiz bir sitedir. Tekrarlanabilir bulunduğu yere ve büyüme özelliklerine sahip Ortotopik fare modelleri güvenilir bir stereotaksik tespit aracı ve bir düşük basınç şırınga pompası kullanılarak kafatası içine uygulanan enjeksiyonları ile oluşturulabilir.

Oluşturma Anatomik Doğru ve İnsan Beyin Tümörleri Reproducible İntrakraniyal Ksenograftlar

Kök hücreler tümör tropizminden ötürü beyin tümörlerini tedavi etmek için terapötik taşıyıcıları umut vericidir. Non-invaziv intranazal kök hücre iletimi kan beyin bariyerini atlar ve klinik çeviri için güçlü bir potansiyel gösterir. Bu makale, glioma fare modelinde intranazal kök hücre sunumunun temel ilkelerini özetlemektedir.

Bir Fare Modelinde Tedavi Edici Kök Hücrelerin Glioblastomaya İntranazal Dağıtımı

Merkezi sinir sistemi (MSS) tümörleri, çocuklarda kansere bağlı ölümlerin önde gelen nedenidir ve lokorejyonel bağışıklık temelli tedaviler, klinik çalışmalardaki hastalar için giderek daha fazla test edilmektedir. Bu protokol, MSS tümörlerini hedef alan immünoterapötik infüzyonların preklinik değerlendirmesi için farelerde lokorejyonel kanül implantasyonu yöntemlerini açıklamaktadır.

Farelerde Seri Lokorejyonel Kimerik Antijen Reseptörü (CAR) T Hücre İnfüzyonları için İntrakraniyal Kanül İmplantasyonu

Ortotopik pediatrik beyin tümörü modellerinin geliştirilmesi, kanser hücrelerini hassas bir şekilde implante etmek için stereotaksik bir cihaz kullanarak titiz bir hassasiyet gerektirir. Burada sunulan metodoloji, beyin tümörü hücrelerinin hazırlanması, intrakraniyal enjeksiyonların gerçekleştirilmesi ve beyin tümörü aşılanmasını değerlendirmek için ameliyat sonrası bir izleme sisteminin uygulanmasında yer alan adımları özetlemektedir.

Stereotaksik Cihaz Kullanılarak Beyin Tümörleri İçin Ortotopik Hasta Kaynaklı Ksenogreft Modellerinin Oluşturulması

Bu protokolün amacı, araştırmacılara intrakraniyal implantasyonlar için son derece tekrarlanabilir bir teknik sunmaktır.

Farelerde glioblastoma hasta kaynaklı ksenograft hücre hatlarının stereotaktik intrakranial implantasyonu

Öğrenin farelerde kılavuz vida yöntemiyle gliom intrakranial ksenogreft modeli kurmayı ve yeni tedavi ajanlarının etkinliğini değerlendirmeyi. Bu güvenli teknik tümör büyümesi ve sağkalım üzerindeki terapötik yanıtları incelemeye olanak tanır.

Basit Fare İntrakranial Xenograftlarında Çalışmaları Kılavuzu Vida Yöntemi

Daha fazla video keşfet