Name: Baba Yanıtları Nörobiyoloji incelenmesi Karşılaştırmalı Türlerin Yaklaşım (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-09-19T12:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 59 s
Description: Öğrenin baba davranışlarının nörobiyolojik temellerini karşılaştırmalı türler yaklaşımıyla. Peromyscus californicus ve P. maniculatus türlerini kullanarak vazopressin immünoreaktivitesini beyin bölgelerinde analiz edin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu araştırma herhangi bir hibe tarafından finanse edildi. Ulusal Bilim Vakfı (KGL) 0723341 Ayrıca Schapiro Lisans Araştırma Bursu programı ve Randolph-Macon College Psikoloji Bölümü tarafından sağlanan katkılar için teşekkür ediyoruz. Son olarak, bu video yazı için Ar-MC laboratuvar hazırlanmasında bu araştırma ve Amanda Rzucidlo yardım Craig Kinsley ortak katkıları için teşekkür ederiz.

1. Hayvan Modeli Tanıtımı <ol><li> California Deer Fare (Peromyscus californicus) baba yanıtları keşfetmek için ideal bir model. Gördüğünüz gibi, bu fare, anneler gibi yavrular mamülleri - hatta bu yüzden yavrular bakım gibi görünüyor üzerlerine Crouch. California farelerin davranışlarını sık sık kaçmak ya da onlara saldırmak için çalışırken, yavrular az ilgi gösteren ortak geyik fare (Peromyscus maniculatus) aynı cins, bir tür karşılaştırılır. (Yavrular ile etkileşim bu türlerin resimler için Bkz: Şekil 1). </li><li> Tür modeli tespit edildiğinde, daha sonra çeşitli gruplar oluşturulması gerekmektedir. Bu çalışmada, biyolojik babalar, anne-babalık deneyimi olmayan bakireler, ve her iki türün sınırlı yavru maruz kalma (yavru maruz kalan veya teşvik babalar) ile bakireler yatkın ve edinsel hem de baba özellikleri değerlendirilir, böylece kullanılır. Bu özel çalışmada da sosyal etkileşimler kafes yerleştirilir şey bir yavru ve temsili bir yanıt olduğunu sağlamak için yavru bir oyuncak fare tüm grupların maruz (Bakınız Şekil 2) </li><li> Nörobiyolojik faktörler soruşturma başlamadan önce, seçilen türün ilgi davranış belirgin farklılıklar sergilerler doğrulamak için önemlidir. Bu çalışmada, erkek ile temas yavru harcanan zamanı ve miktarı yaklaşım böyle bir gecikme olarak puan davranışları için kullanılır, beş dakika ve bir baba davranış ethogram (ethogram, örneğin bkz. Tablo 1) bir yavru ile bir kafes yerleştirilir yavru. Agresif tepkiler gözlenmesi halinde, yavru derhal kaldırılır. Bu seanslar genellikle dikkatli bir davranış analizi, daha sonra yapılan böylece videoya. </li></ol> 2. Beyin Dokusu hazırlanması <ol><li> Her fare standart perfüzyon (protokol) bağlı, beyinleri özel ilgi alanı (gösteri beyin) kesitli böylece kaldırılır. </li><li> Vazopressin (AVP) - Standart bir farenin beyin atlas (atlas gösterin) hipotalamus paraventriküler çekirdeği, bu çalışmada ilgi nöropeptid üreten hücrelerin zengin olduğu bilinen bir alan bulmak için kullanılır. </li><li> Mikrotom ile kesitli önce doku dondurma böylece beyin daha sonra bloke olur ve donma mandreni monte edilir. Beyin trim modu kesitli sonra, analiz için kullanılan beyin bölümler için belirli beyin kalınlığı, 30 mikron, bu durumda, özel simge tanımlanır kadar. </li><li> Beynin bölümleri dikkatlice fosfat buffer salin (PBS) ile dolu iyi plakaları yerleştirilir; (ekli PBS için protokol, bu sadece bir örnek, standart bir immünsitokimya protokol olduğunu lütfen unutmayın). </li></ol> 3. İmmünositokimya <ol><li> (Bkz. ekli protokol), bu sürecin çeşitli adımlar boyunca bu tekniği (öğrenci pipetleme gösterir), kimyasallar ve önemli diğer maddeler hassas ölçümler sağlamak için doğru pipetleme becerilere sahip önemlidir. </li><li> Bu süreçte ilk adım iyi plakaları 3-5 kez PBS yerine içerir beyinleri yıkama; her yıkama arasında iyi bir tabak, 10 dakika boyunca bir rocker yerleştirilen (göstermek yerine öğrenci PBS ve rockçılar iyi plakaları yerleştirerek) . </li><li> Beyin dilimleri sonra primer antikor çözümü maruz kalan ve 4 ° C rocker (gösteri süreci) gece boyunca saklanır. </li><li> Başka bir yıkama sonrasında, beyin dilimleri daha sonra tekrar yıkanır, bir saat boyunca oda sıcaklığında rocker ikincil bir antikor maruz kalmaktadır. </li><li> Sonraki beyin nörokimyasal-pozitif hücrelerin görselleştirme hazırlamak için bir Avitin Biotin Kompleks çözüm maruz kalmaktadır. </li><li> Son görselleştirme adım için, beyinleri DAB maruz kalmaktadır. Bu tehlikeli bir üründür ve her zaman dikkatli bir şekilde ele alınmalıdır. Burada görüldüğü gibi, beyin dilimleri (süreç göstermek) gözleri önünde koyu almak için başlar. </li><li> DAB maruz kalma ardından, beyinlerini yıkar son serisi üzerinden gitmek ve sonra dikkatle Altyazılı mikroskop lamı üzerine yerleştirilen ve bir gecede (slayt üzerinde bir beyin dilim yerleştirme gösterisi; Altyazılı slaytlar protokol için eke bakınız) kurutmak için izin verilir. </li><li> Slaytlar sonra, distile su ve alkol yıkar bir dizi temizlenir, nihayet güvenli tutmak için (bu sürecin çeşitli yönlerini göstermek; temizleme süreci için eke bakınız) slidebox dakika muamele ve depolanan önce Citrosolv batmış. </li></ol> 4. Neuroquantification <ol><li> Slaytlar kuruduktan sonra, bu özel neuroquantification yazılım ile değerlendirilebilir. Burada Bioquant yazılım (show ekranda yazılım ... ve mikroskop) fare beyinleri paraventriküler çekirdeğinde vazopressin-pozitif hücre ve lifler ölçmek için kullanılır. </li><li> Ilgi belirli bir alan ölçüm seçenekleri kullanılarak tanımlanıryazılım neuroquantification için görme alanı kurmak için. Tutarlı bir görsel alan boyutu (gösterisi öğrenci Bunu yaparken), her bir hayvan için sayısal olduğunu önemlidir. </li><li> Burada koyu lekeli vazopressin immunoreaktif hücre gövdeleri ve liflerinin açıktır. Bu doku saymak ya da izlemek için zor olduğundan, bu yazılımın bir özelliği belirtilen ilgi alanı içinde olumlu boyanan doku toplam miktarını belirlemek için ışık eşiklendirme kullanır. Bu eşikleme vazopressin pozitif doku (bilgisayar ekranında veri değeri göstermek) içerdiği belirtilen alanın ne kadar söyler. </li></ol> 5. Davranış Analizi <ol><li> Birden fazla gözlemci video kasetleri puanlama olacaksa, gözlemciler, tutarlı bir şekilde davranış puanlama olduğunu sağlamak için hakemlerarası güvenilirlik kurmak için önemlidir. Gerçek puanlama oturumu için, bir davranış puanlama formunda (bkz. Tablo 2 tablolama puanlama örneğin) kolay davranış puanlama gözlem oturumları sırasında izin vermek için hazırlıklı olmalısınız. </li><li> Hızlı epizodik yanıtları olmayan davranışlar, bir microsequencing analiz belirli yanıtlar ilerlemesi hakkında inceliklerini ortaya çıkarabilir. Örneğin bakım, davranış, çok hızlı yanıtlar bir zincir oluşur. Bir seçenek damat varlığı ve süresi sadece kayıt olmasına rağmen, başka bir bu yanıtı eşlik eden olaylar zinciri belge. Bu microsequencing yazılımı kullanarak, gözlemciler yazılım (yazılım ve video gösterisi) tarafından istendiğinde belirli bir davranışı, her saniye, varlığı puan. </li><li> Veri toplama, faiz parametreler tespit edilir ve uygun davranış puanları analiz edilmektedir. Örnekler damat dizisi kesintileri (her bir hayvan için girilen verileri tablolama bilgisayar) yavru, ya da numara ile temas halinde harcanan zamanın toplam süresi olabilir. </li><li> Davranış atılırsa sonra bu iki tür için farklı tepki stratejilerinin çalışmaya ilgi davranışı sergiledi onaylamak için önemlidir. Bu durumda California geyik fareler ortak geyik farelere göre daha baba davranışları göstermelidir. Ayrıca, ilgili etkilerin daha bilinçli bir görünüm elde etmek için çeşitli davranış önlemler beyin önlemler ile ilişkili olabilir. </li></ol> 6. Temsilcisi Sonuçlar: <ol><li> Modeli doğrulamak için, iki tür faiz davranış bakımından farklı gerçekleştirilen veri açıkça belirtmelidir. Burada gördüğünüz P. californicus erkek yavrular, baba tepkileri iki işaretlerinden (Bakınız Şekil 4) üzerinde bakım ve çömelme daha fazla zaman harcadı. </li><li> Görüleceği gibi, baba P., faiz neurobiologial değişken, baba tepkileri önemlidir vazopressin (AVP) miktarını olumlu doku birkaç ilgili beyin alanları için sayısal belirlemek için californicus hayvanlar, bu beyin bölgelerinin çeşitli daha immün pozitif doku vardı . (Bkz. Şekil 5). </li><li> Microsequencing analizi ile ilgili bir çalışmada, baba Kaliforniya fareler, bakire muadillerine göre daha az anksiyete sergi olacağını hipotezi; buna göre, yırtıcı bir hayvan koku maruz kaldığında, babaları (Şekil damat dizisi bakire hayvanlardan daha az kesinti sergiledi 6). </li></ol><img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/3173/3173fig1.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 1"> Şekil 1: (A) conspecific yabancı yavru doğru baba yanıtları sergileyen Bay Kaliforniya fareler. (B) Erkek geyik fare ihtiyatlı bir yaklaşım (esneme katılmak) ve yavru bir conspecific yabancı varlığı kaçınma yanıtını sergiliyor. Not: Bu sosyal etkileşim değerlendirmelerde, bir erkek yavru karşı saldırgan tepkiler sergilemektedir, deneyciler erkek hemen dikkatini dağıtmak için kafesin üstüne vurdu. Şu anda oturum sonlandırılır ve yavru çıkarılır, herhangi bir yaralar için teftiş ve anne geri döndü. Laboratuvarımızda, bu P. ile nadiren görülmektedir californicus erkek ama bazen P. görülmektedir maniculatus yakın gözlem ve acil müdahale, ancak, hayvanların meydana gelen zarar görmesini engellemek. <img alt="Şekil 2" src="/files/ftp_upload/3173/3173fig2.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2: oyuncak fare ile etkileşim California fare; en çok bu uyaranlara çiğnemek çalıştı . <img alt="Şekil 3" src="/files/ftp_upload/3173/3173fig3.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 3"> Şekil 3: Deneysel çalışma tasarımı; her grupta yaklaşık 6 hayvanlar her tür vardı. <img alt="Şekil 4" src="/files/ftp_upload/3173/3173fig4.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 4"> Şekil 4: immünsitokimya süreci Grafik. <img alt="Şekil 5" src="/files/ftp_upload/3173/3173fig5.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 5"> Incirure 5 Kaliforniya ve geyik fareler Baba cevaplar; baba tepkileri (damat, çömelme, hızlı bir yaklaşım) Kaliforniya farelerde gözlendi. Streç katılır (stres tepkisi) geyik farelerde gözlendi. <img alt="Şekil 6" src="/files/ftp_upload/3173/3173fig6.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 6"> Şekil 6, her iki türün çeşitli beyin bölgelerindeki vazopressin immünoreaktivite. Kaliforniya fareler PVN hücreleri ve elyaf boyama vardı. <img alt="Şekil 7" src="/files/ftp_upload/3173/3173fig7.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Şekil 7"> Şekil 7: Baba Kaliforniya fareler yavru maruz kalan ve bakir gruplarına göre daha yırtıcı bir hayvan koku varlığında onların tımar dizileri daha az kesintileri sergilenmektedir .

<ol><li>Tada, N., Sato, M., Yamanoi, J., Mizorogi, T., Kasai, K., Ogawa, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryopreservation+of+mouse+spermatozoa+in+the+presence+of+raffinose+and+glycerol%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Reprod.+Fertil%22%5BJournal%5D)">Cryopreservation of mouse spermatozoa in the presence of raffinose and glycerol.</a> J. Reprod. Fertil. 89, 511-516 (1990).</li>
<li>Yokoyama, M., Akiba, H., Katsuki, M., Nomura, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+normal+young+following+transfer+of+mouse+embryos+obtained+by+in+vitro+fertilization+using+cryopreserved+spermatozoa%5BTitle%5D)+AND+%22Jikken+Dobutsu%22%5BJournal%5D)">Production of normal young following transfer of mouse embryos obtained by in vitro fertilization using cryopreserved spermatozoa.</a> Jikken Dobutsu. 39, 125-128 (1990).</li>
<li>Sztein, J. M., Farley, J. S., Young, A. F., Mobraaten, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Motility+of+cryopreserved+mouse+spermatozoa+affected+by+temperature+of+collection+and+rate+of+thawing%5BTitle%5D)+AND+%22Cryobiology%22%5BJournal%5D)">Motility of cryopreserved mouse spermatozoa affected by temperature of collection and rate of thawing.</a> Cryobiology. 35, 46-52 (1997).</li>
<li>Thornton, C. E., Brown, S. D., Glenister, P. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Large+numbers+of+mice+established+by+in+vitro+fertilization+with+cryopreserved+spermatozoa%3A+implications+and+applications+for+genetic+resource+banks%2C+mutagenesis+screens%2C+and+mouse+backcrosses%5BTitle%5D)+AND+%22Mamm.+Genome%22%5BJournal%5D)">Large numbers of mice established by in vitro fertilization with cryopreserved spermatozoa: implications and applications for genetic resource banks, mutagenesis screens, and mouse backcrosses.</a> Mamm. Genome. 10, 987-992 (1999).</li>
<li>Sztein, J. M., Farley, J. S., Mobraaten, L. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+fertilization+with+cryopreserved+inbred+mouse+sperm%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Reprod%22%5BJournal%5D)">In vitro fertilization with cryopreserved inbred mouse sperm.</a> Biol. Reprod. 63, 1774-1780 (2000).</li>
<li>Liu, L., Nutter, L. M., Law, N., McKerlie, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sperm+freezing+and+in+vitro+fertilization+in+three+substrains+of+C57BL%2F6+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Am.+Assoc.+Lab.+Anim.+Sci%22%5BJournal%5D)">Sperm freezing and in vitro fertilization in three substrains of C57BL/6 mice.</a> J. Am. Assoc. Lab. Anim. Sci. 48, 39-43 (2009).</li>
<li>Nakagata, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cryopreservation+of+mouse+spermatozoa+and+in+vitro+fertilization%5BTitle%5D)+AND+%22Methods.+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Cryopreservation of mouse spermatozoa and in vitro fertilization.</a> Methods. Mol. Biol. 693, 57-73 (2011).</li>
<li>Mazur, P., Koshimoto, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Is+intracellular+ice+formation+the+cause+of+death+of+mouse+sperm+frozen+at+high+cooling+rates%5BTitle%5D)+AND+%22Biol.+Reprod%22%5BJournal%5D)">Is intracellular ice formation the cause of death of mouse sperm frozen at high cooling rates.</a> Biol. Reprod. 66, 1485-1490 (2002).</li>
<li>Jin, B., Yamasaki, C., Yamada, N., Seki, S., Valdez, D. M., Kasai, M., Edashige, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+mechanism+by+which+mouse+spermatozoa+are+injured+during+freezing%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Reprod.+Dev%22%5BJournal%5D)">The mechanism by which mouse spermatozoa are injured during freezing.</a> J. Reprod. Dev. 54, 265-269 (2008).</li>
<li>Visconti, P. E., Westbrook, V. A., Chertihin, O., Demarco, I., Sleight, S., Diekman, A. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+signaling+pathways+involved+in+sperm+acquisition+of+fertilizing+capacity%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Reprod.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Novel signaling pathways involved in sperm acquisition of fertilizing capacity.</a> J. Reprod. Immunol. 53, 133-150 (2002).</li>
<li>Ostermeier, G. C., Wiles, M. V., Farley, J. S., Taft, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conserving%2C+distributing+and+managing+genetically+modified+mouse+lines+by+sperm+cryopreservation%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Conserving, distributing and managing genetically modified mouse lines by sperm cryopreservation.</a> PLoS ONE. 3, e2792-e2792 (2008).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Bu makale üç temel bileşenden davranışsal sinirbilim araştırmaların başarılı bir şekilde yürütülmesi için kritik olduğu düşünülen anlatılmaktadır: (2) doğru ve hassas bir immünsitokimya protokol; (1) temsilcisi ve geçerli bir hayvan modeli ve (3) en iyi analiz (gözlemsel ve istatistiksel ) hem de davranış ve beyin veri. Hatalar tek bir kategoride kesinlikle tüm çalışma sonuçları tehlikeye sokacaktır. Bu nedenle, dikkatli bir şekilde uygun hayvan modeli seçtikten sonra, önemli çaba Pilot beyinleri başarılı işleme takip davranış güvenilir çalışma gözlenen olacağını sağlamak için, davranışsal ve histolojik prosedürleri, test doğru olmalıdır. Bu teknikte, genetik mühendisliği veya ağrılı cerrahi manipülasyonlar gerektirmez, çünkü belirli bir yanıt nörobiyolojik mekanizmaları tanımlamak için karşılaştırmalı türlerinin kullanımı Daha önce de belirtildiği gibi, değerli bir metodolojik yaklaşımdır. Bu nedenle, bu metodolojik bir yaklaşım, daha az tehdit sağlam hayvanlar kullanır. Laboratuar hayvanları içinde yer bile hayvanların doğal varyasyon kullanımı, ancak, doğal-benzeri ortamlarda kuruluş tarafından güçlendirilmiştir. Laboratuvar çalışmaları, daha fazla ilgi davranışı türlerin farklılıkları orijinalliğini doğrulamak için alanına uzatılabilir Dahası, eğer bu bir sonraki adım önerilir. Karşılaştırmalı bir yaklaşım pek çok avantaj sunuyor olsa da, bir sınırlama verilerin bağıntılı doğası; dolayısıyla, farmakolojik manipülasyonları gibi ek teknikler daha fazla ilgi davranış hedeflenen nörobiyolojik sistemler rolü doğrulamak için kullanılan olmalıdır. Deneyciler, davranışsal, histolojik ve istatistiksel işlemler hakkında güvende hissediyorum sonra, hayvanların yaşam koşullarının tüm gruplar için deneysel manipülasyon için, tabii ki hariç, sabit kalması için alınması gerekmektedir. Işık programları, gürültü seviyeleri, bakıcı, nem seviyeleri ve laboratuvar kokuları gibi değişkenler hayvanların nörobiyolojik tepkiler üzerine önemli etkileri olabilir. Bu yazıda primer antikor vazopressin ama diğer primer antikorlar farklı ilgi nörokimyasalların bir bolluk için kullanılabilir tespiti için kullanıldı. Deneyci yeni bir antikor ile çalışıyorsa, yeni antikor optimum seyreltme belirlemek için titrasyon çalışmalar yapmak önemlidir. Daha fazla antikor aşırı kullanımı çok pahalı; Birçok kez çok antikor dokuda sinyal ayırt etmek için çok karanlık (satıcı tarafından önerilen) kullanılır. Sonunda, tek bir istatistiksel analiz daha fazla alternatif görüş ve yorumlara veri sağlamak için kullanılır eğer onlar kullanılan olmalıdır. Bu özel çalışmada, genel doğrusal modeller, bağıntı ve çok boyutlu ölçeklendirme analizi, verilerin en bilgilendirici bir görüş sağlamak için kullanılmıştır.

<table border="1"><tbody><tr><td> Isim </td><td> Şirket </td><td> Katalog Numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> Binoküler Bileşik Mikroskop </td><td> Motic </td><td> BA400 </td><td></td></tr><tr><td> BIOQUANT Yaşam Bilim Yazılımı </td><td> BioQuant Görüntü Analiz Corporation </td><td> Sürüm 8.40.20 </td><td></td></tr><tr><td> Kriyostat </td><td> Microm </td><td> HM525 </td><td></td></tr><tr><td> Masterflex Konsol Sürücü Kolay Yük L / S (Perfüzyon Pompa) </td><td> Cole-Parmer Instrument Company </td><td> 7518-00 </td><td></td></tr><tr><td> 24 Kuyu Hücre Kültürü Küme (doku kültürü tedavi; non-pirojenik polistiren; steril) </td><td> Corning Costar </td><td> 3526 </td><td></td></tr><tr><td> 25x75x1mm Mikroskop kızakları </td><td> Globe Scientific, Inc. </td><td> 1324W </td><td></td></tr><tr><td> 22x50mm No.1 Kapak Kayma </td><td> Globe Scientific, Inc. </td><td> 1414-1410 </td><td></td></tr><tr><td> Steril olmayan 3ml Büyük Ampul Transfer Pipetler Mezun </td><td> Elektron Mikroskopi Bilimler </td><td> 70962-9 </td><td> &amp;nbps; </td></tr><tr><td> Alconox Deterjan Toz </td><td> Alconox </td><td> 1104 </td><td></td></tr><tr><td> Sodyum klorür </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> S9888-1kg </td><td> CAS 7647-14-5 </td></tr><tr><td> Mono Sodyum Fosfat </td><td> Spektrum </td><td> SO130 </td><td> CAS 10049-21-5 </td></tr><tr><td> Sodyum Fosfat Dibazik Dihidrat </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> 30412 </td><td> CAS 10028-24-7 </td></tr><tr><td> Triton X </td><td> Spektrum </td><td> TR135 </td><td> CAS 9002-93-1 </td></tr><tr><td> Permount </td><td> Balıkçı </td><td> SP15-500 </td><td> CAS 108-88-3 </td></tr><tr><td> Krom potasyum sülfat </td><td> Sigma </td><td> C-5926 </td><td> CAS 7788-99-0 </td></tr><tr><td> CitriSolv </td><td> Fisher Scientific </td><td> 22-143975 </td><td></td></tr><tr><td> Etanol, Yüksek Den.Poly Şişeler, 200 kanıt, 24 x 1 pint </td><td> Pharmco-AAPER </td><td> 111000200CSPP </td><td></td></tr><tr><td> Normal Keçi Serum </td><td> Vektör </td><td> S-1000 </td><td></td></tr><tr><td> Tavşan anti vazopressin analit spesifik reaktif </td><td> Immunostar, Inc. </td><td> 20069 </td><td></td></tr><tr><td> Biotinlenmiş anti-tavşan IgG (H + L) afinite-saflaştırılmış </td><td> Vektör </td><td> BA-1000 </td><td></td></tr><tr><td> Elite Standart Vectastain ABC Seti </td><td> Vektör </td><td> PK-6100 </td><td></td></tr><tr><td> DAB Peroksidaz Yüzey Seti </td><td> Vektör </td><td> SK-4100 </td><td></td></tr><tr><td> Orijinal tatsız jelatin (4 sayımı zarflar) 1-oz kutusu </td><td> Knox </td><td></td><td> Yerel bakkal alımları </td></tr><tr><td> % 3 Hidrojen Peroksit </td><td> CareOne </td><td></td><td> Yerel eczaneden satın alma </td></tr><tr><td> Çamaşır suyu </td><td> Clorox </td><td></td><td> Yerel bakkal alımları </td></tr></tbody></table>

baba yanıtları nörobiyoloji incelenmesi karşılaştırmalı türlerin yaklaşım

Using a Comparative Species Approach to Investigate the Neurobiology of Paternal Responses

Davranışsal sinirbilim bir hedefe belirli davranışlarını düzenleyen altta yatan nörobiyolojik faktörleri tanımlamak. Bu hedefi gerçekleştirmek için hayvan modelleri kullanarak, birçok metodolojik stratejileri ilgi davranış yoğunluğu (örneğin, lezyon yöntemleri, farmakolojik manipülasyonlar, mikrodiyaliz teknikleri, genetik olarak hayvan modellerinde) işlemek için invaziv teknikler gerektirir. Karşılaştırmalı bir tür yaklaşımın kullanımı araştırmacılar, doğal olarak tepki stratejilerini yakından ilgili türlerin mevcut farklılıklar meydana yararlanmanızı sağlar. Laboratuvarda, biz baba tepkileri farklı Peromyscus cins iki tür kullanın. Erkek Kaliforniya geyik fare (Peromyscus californicus), kuzeni ise kadın aynı ebeveyn tepkiler sergiler, ortak geyik fare (Peromyscus maniculatus) yavrular varlığı hemen hemen hiç besleyici / ebeveyn tepkiler sergiler . Bu makalede özel ilgi baba California geyik fare tarafından sergilenen affiliative sosyal tepkiler ile ilişkili nörobiyolojik faktörlerin bir keşif. Davranışsal sinirbilim yaklaşımı çok yönlü olduğundan, çalışmanın aşağıdaki temel bileşenleri kısaca değinilmiş olacak: bu tür araştırma için uygun türlerin tanımlanması, davranış analizi için veri toplama, hazırlama ve beyinleri kesit; için immünsitokimya dahil temel adımlar vazopressin-immünoreaktivite miktarının; beyin dokusu ölçmek için beyin görüntüleme yazılımı kullanımı; microsequencing video analizinin kullanımı, davranış puanı ve, nihayet, uygun istatistiksel analizler, araştırma bulgularının en bilgili yorumlara sağlamak için.

Karşılaştırmalı tür yaklaşım davranışsal sinirbilimciler, belirli bir hayvan modelinin karakteristik olarak görülmelidir özel davranışları ile ilgili çeşitli nörobiyolojik faktörler keşfetmek için izin verir. Yakından ilgili türler arasındaki davranış farklılıkları doğal olarak meydana gelen yararlanarak, bu tekniği invaziv tekniklerin davranış ifade işlemek için gerekli değildir.

Baba Yanıtları Nörobiyoloji incelenmesi Karşılaştırmalı Türlerin Yaklaşım

Davranışsal nörobilimin bir amacı, belirli davranışları düzenleyen temel nörobiyolojik faktörleri tanımlamaktır. Bunu başarmak için hayvan modelleri kullanmak...

Bu prosedürün genel amacı, karşılaştırmalı tür yaklaşımını kullanmaktır. Babalık davranışı ile ilişkili beyin bölgeleri ve nörokimyasallar hakkında daha fazla bilgi edinmek için ilk adım, incelenen davranışın ifadesi açısından önemli ölçüde farklılık gösteren, birbiriyle yakından ilişkili iki tür belirlemektir. Ardından, her iki türün de yavrularla etkileşime girmesine izin verilir ve ebeveyn tepkisi kapsamındaki davranışlar gözlemlenir.Et ekogramı. Bu davranışlar, daha sonra analiz edilmek üzere videoya kaydedilir. Prosedürün bir sonraki adımı, beyin örnekleri toplamak ve hedef bölgedeki vazopressin immünreaktif dokunun varlığını analiz etmektir.Ardından, hedeflenen beyin bölgelerindeki türe özgü farklılıkları belirlemek için nörogörüntüleme yazılımı kullanılır. Nihayetinde, belirli beyin bölgelerindeki babalık tepkileri ve vazopressin immünoreaktivitesinde türe bağlı farklılıkları gösteren sonuçlar elde edilebilir. Farmakolojik olarak manipüle edilmiş veya genetik olarak mühendisliği yapılmış türler gibi mevcut diğer yöntemlerin aksine, karşılaştırmalı tür yaklaşımını kullanmanın temel avantajı, yapay olarak indüklenmiş davranışlar kullanmak yerine, yakından ilişkili türler arasında doğal olarak meydana gelen farklılıklardan yararlanmanıza olanak tanımasıdır.Bu yöntemin babalık davranışları hakkında içgörü sağlayabileceği düşünülmektedir. Ayrıca, testten önce saldırganlık, cinsel davranış veya tımar gibi diğer davranışlara da uygulanabilir. Birbirine yakın akraba olan iki türden fareler; ebeveynlik deneyimi olmayan biyolojik babalar ve yavrularla sınırlı etkileşimi olan bakirlerden oluşan test gruplarına ayrılır.Öncelikle, kafesi ve video kayıt sistemini hazırlayın. Ardından, bir yavruyu kafesin ortasına yerleştirin. Her şey hazır olduğunda, test erkeğini yavrunun bulunduğu kafese yerleştirin ve davranışı beş dakika boyunca kaydedin.Saldırgan tepkiler gözlemlenirse yavruyu derhal uzaklaştırın. Kaliforniya geyik faresi, yavrular emziriliyormuş gibi görünecek şekilde üzerlerine çömelerek, tıpkı annelerin yaptığı gibi yavruları temizler. Buna karşılık, yaygın geyik faresi yavrulara çok az ilgi gösterir ve sıklıkla onlardan kaçmaya veya onlara saldırmaya çalışır.Gözlemlenen sosyal etkileşimlerin genel bir tepki değil, yavruya özgü olduğundan emin olmak için tüm gruplar bir oyuncak fareye de maruz bırakılır. Gözlem süresinden sonra davranış puanlama çizelgelerini hazırlayın. Eğer video kayıtlarını birden fazla gözlemci puanlayacaksa.Değerlendiriciler arası güvenilirliğin saptanması önemlidir. Burada görülen babalık davranışı programı, davranışları puanlamak için kullanılır. Örnekler arasında yavruların üzerine çömelme, yavruları yalama ve temizleme veya uzanma-dikkat (stretch attend) yanıtları gibi kaygı davranışları sergileme yer almaktadır.Mikro sekanslama yazılımı, belirli davranışlar arasındaki ince ayrıntıları ortaya çıkarmak için kullanılabilir. Burada, bir yırtıcı kokusuna maruz bırakılan Caucuses farelerinden elde edilen veriler örnek olarak kullanılmıştır. İlk olarak, davranışları ikili durumlara (örneğin, grooming yapan ve grooming yapmayan) dönüştürün ve ardından bir zaman serisi oluşturun.Son olarak, dalgalanma derecesini hesaplayın. Önceden belirlenmiş bir formül kullanıldığında, birçok önemli davranış gözden kaçabilir. Yaygın gözlem teknikleri kullanıldığında, yanıtların yavaş çekimde izlenebilmesi için davranışların videoya kaydedilmesi en iyisidir.Daha doğru bir gözlem için, uzmanlaşmış yazılımlar araştırmacıların davranışların mikro sekanslarını analiz etmesine olanak tanıyarak, gerçek zamanlı insan gözlemiyle kaçırılabilecek veriler sağlar. Bu yöntem, davranışsal nörobilim alanındaki, yavru maruziyetini takiben hayvanlarda gözlemlenen belirli davranışların hangi nörokimyasal sistemler tarafından aracılık edildiği gibi temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Beyni izole etmek için standart bir perfüzyon protokolü kullanın ve beyni dondurun; ardından belirli işaret noktaları belirlenene kadar beyni trim modunda kesitlere ayırın.Hipotalamustaki paraventriküler çekirdeği konumlandırmak için, nöropeptit vazopressin veya VP üreten hücreler bakımından zengin olduğu bilinen bir standart fare beyin atlası kullanılır. Paraventriküler çekirdeğe ulaşıldığında, ileri analizler için 30 mikron kalınlığında kesitler alın. Beyin kesitlerini önce fosfat tamponlu tuzlu su veya PBS ile doldurulmuş plakaların içine dikkatlice yerleştirin. Beyin kesitlerini, taze PBS ekledikten sonra plakaları 10 dakika boyunca bir sarsıcı (rocker) üzerine yerleştirerek 3 ila 5 kez PBS ile yıkayın.Ardından, plaklara primer antikor içeren solüsyonu ekleyin ve bunları dört derece Celsius'da, ertesi güne kadar sallayarak bir gece boyunca saklayın. Sekonder antikoru eklemeden önce dilimleri yıkayın. Numuneleri oda sıcaklığında bir saat boyunca sallamaya bırakın. Son bir yıkamanın ardından, beyin dilimlerini nörokimyasal pozitif hücrelerin görselleştirilmesine yardımcı olan bir Aden biotin kompleks solüsyonuna maruz bırakın.Görselleştirme prosedürünün son adımı, DAB maruziyetinin ardından DAB'ın dikkatlice eklenmesidir. Beyin kesitlerini son bir yıkama serisine tabi tutun. Kesitleri dikkatlice işaretli mikroskop lamları üzerine yerleştirin ve gece boyunca kurumaya bırakın.Kuruma işleminden sonra, lamlar bir dizi distile su ve alkol yıkanmasıyla temizlenir; yıkamanın ardından kesit citrus solve içine daldırılır. Son olarak lamel kapatma işlemi uygulanır ve lamlar güvenli bir şekilde saklanmak üzere bir kutuya yerleştirilir. İmmünokimya süreci için birçok yöntem mevcuttur.Başarının anahtarı, net bir protokol oluşturmak ve buna uymaktır. Lamlar artık özel nöro kantifikasyon yazılımı kullanılarak analiz edilmeye hazırdır. Fare beyinlerinin paraventriküler çekirdeğindeki vazopressin pozitif hücreleri ve fiberleri nicelendirmek için Bio quant yazılımı kullanılır.Nöro kantifikasyon için ilgi çekici spesifik alanı belirlemek ve görsel alanı oluşturmak için ölçüm seçeneğini kullanın. Burada, koyu boyanmış VA baskılayıcı, immünoreaktif hücre gövdeleri ve fiberler belirgindir. Belirli bir alan içindeki pozitif boyanmış toplam doku miktarını belirlemek için yazılımın ışık eşikleme (light thresholding) özelliğini kullanın.Bu eşik değerleme, ne kadar vazopressin pozitif doku bulunduğunu bize söyler. Burada görüldüğü üzere, Californicus erkekleri, benzer bir türe kıyasla yavraları temizleme ve üzerlerinde çömelme (babalık tepkilerinin iki temel özelliği) şeklinde daha fazla zaman harcamışlardır. Mikro sekanslama analizi, babalık yapan Kaliforniya farelerinin, bakire hayvanlara kıyasla temizleme sekanslarında daha az kesinti yaşadıklarını ortaya koymaktadır.Nörobiyolojik değişkenlerin babalık tepkilerinde önemli olup olmadığını belirlemek amacıyla yırtıcı kokusuna maruz bırakıldığında, ilgili birkaç beyin bölgesi için vazopressin pozitif doku miktarı nicelleştirilmiştir. Burada görüldüğü üzere, babalık yapan californicus hayvanları, bu beyin bölgelerinin birkaçında daha fazla immün pozitif dokuya sahiptir. Sonuç olarak, karşılaştırmalı tür yaklaşımı, ilgilenilen belirli bir davranışla ilişkili temel nörobiyolojik sistemleri tanımlamanıza olanak tanır.Buna rağmen, verilerin doğası korelasyoneldir; bu nedenle, nörobiyolojik sistemin rolünü ve ilgili davranışı daha fazla teyit etmek için ek metodolojik teknikler eklemek önemlidir.

using-comparative-species-approach-to-investigate-neurobiology

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Sperm Rekabet Yeteneği in değerlendirilmesi farklılıklar<em&gt; Drosophila</em

Bu makale melanogaste motivasyon incelemek için r Drosophila erkek çiftleşme sürücüsünü kullanan bir davranış deneyi anlatır. Bu yöntemi kullanarak, araştırmacılar bu motivasyonu altında yatan genetik moleküler ve hücresel mekanizmaları ortaya çıkarmak için ileri sinek neurogenetic teknikler kullanabilirler.

Ölçme ve Male Değiştirme Çiftleşme Sürücü<em&gt; Drosophila melanogaster</em

C. elegans erkeklerin verimli kalsiyum görüntüleme için bir adapte "koku çip" kullanımı burada açıklanmıştır. Gliserol ve bir feromon erkek maruz çalışmaların da gösterilir.

Yanıt olarak erkek C. Elegans baş nöronlar Feromonlar nöronal aktivite görüntüleme için adapte mikrosıvısal koku kozu kullanımı

Bu kağıt dopamin ve Glutamat yüksek zamansal çözünürlük ile serbest bırakılması sırasında doğal tatmin edici davranışlara ölçmek için karbon fiber elektrotlar ve enzimatik Biyoalgılayıcı teknoloji kullanarak sabit potansiyel amperometric kayıtları kullanımı detayları kadın hamster.

Doğal olarak kadın Suriye hamster davranışları ödüllendirme sırasında hücre dışı nörotransmitter ölçüm Vivo içinde değişimler

Nöropsikiyatrik bozuklukların patogenezinde yakın zamanda keşfedilen hastalıkla ilişkili genlerin rolü belirsizliğini korumaktadır. Modifiye edilmiş bir in utero elektroporasyon tekniği, büyük nöron popülasyonlarında gen transferine ve gen ekspresyon değişikliklerinin sosyal davranış üzerindeki nedensel etkilerinin incelenmesine izin verir.

Kemirgen Davranışı Üzerindeki Genetik Etkileri Sorgulamak için İkili İn Utero Elektroporasyonunu Kullanan Bir Boru Hattı

Kronik psikososyal stres (CGS) paradigması, annelerin ve bebeklerin psikiyatrik bozukluklarını modellemek için farelerde hamilelik sırasında klinik olarak ilgili stresörler kullanmaktadır. Burada, bu modeli doğrulamak için CGS paradigmasını ve aşağı akış değerlendirmelerini uygulamak için adım adım bir prosedür sunuyoruz.

Anne ve Bebeklerde Psikiyatrik Bozukluklar İçin Çevirisel olarak İlgili Bir Paradigma Olarak Gebelikte Psikososyal Stresin Murine Modelini Kullanmak

Burada, baba inhibisyonu ve anne ihmali varlığında emzirme bozuklukları için insan dışı bir primat anne-bebek müdahalesi modeli sunuyoruz. Eş modeli videosu, ağrı gibi emzirme sorunları olan bebeklerle ilgili olarak primat ve insan bakıcılarını desteklemek için eğitimi tamamlar.

Baba İnhibisyonu ve Anne İhmali Varlığında Emzirme Bozuklukları için Anne-Bebek Müdahalesinin Ortak Bir Marmoset Modeli

Anne farelerin hamilelikten emzirmeye kadar otonomik aktivitesinin ve ayrıntılı anne davranışının eşzamanlı olarak kaydedilmesi, bir telemetri sistemi kullanılarak elde edildi. Bu yöntem, annelerde hamilelikten sütten kesmeye kadar fizyolojik ve davranışsal özelliklerin dinamiklerini anlamaya yardımcı olur.

Farelerde Gebelikten Emzirme Dönemine Kadar Elektrokardiyogramların ve Davranışların Analizi

Bu protokol, doğum sonrası erken dönemde yoksul bir çevre ve öngörülemeyen anne bakımının neden olduğu erken yaşam sıkıntılarının beyin gelişimini ve gelecekteki zihinsel bozukluk riskini nasıl etkilediğini incelemek için bir hayvan modelini açıklamaktadır.

Farelerde Erken Yaşam Sıkıntısı için Bir Model Olarak Sınırlı Yatak Takımı ve Yuvalama

Burada, MRI ortamlarında davranışsal izlemedeki zorlukların üstesinden gelen ve dış ipuçlarına talimatsız davranışsal tepkilerin tespit edilmesine olanak tanıyan bir video analiz hattı sunulmaktadır. Bu analiz, uyarılmış iç durum değişikliklerinin ve beyin genelindeki aktivitenin daha kapsamlı bir şekilde anlaşılmasını kolaylaştıracaktır.

Tüm Beyin Görüntüleme Sırasında Anne Davranış Tepkilerinin Profillenmesi

Modern sinirbilimler, laboratuvar kemirgenleri ve insanlar dahil olmak üzere birçok tür arasındaki farkları keşfetmelidir. Ancak büyük beyinli memeliler söz konusu olduğunda teknik zorluklar ortaya çıkar. Bu yaklaşım, çok farklı memelilerde nöronal popülasyonların türler arası varyasyonlarını ele alır ve evrimsel kalıpların ortaya çıkarılması için haritalanacak benzer sonuçlar sunar.

Farklı Memeli Beyinlerinde Nicel Hücre Sayımı Çalışmaları İçin Karşılaştırmalı Yaklaşım

Öğrenin baba davranışlarının nörobiyolojik temellerini karşılaştırmalı türler yaklaşımıyla. Peromyscus californicus ve P. maniculatus türlerini kullanarak vazopressin immünoreaktivitesini beyin bölgelerinde analiz edin.

Baba Yanıtları Nörobiyoloji incelenmesi Karşılaştırmalı Türlerin Yaklaşım

Daha fazla video keşfet