Caenorhabditis elegans Nöronlarında Hücre Altı Kalsiyum Dinamiğinin Görüntülenmesi
JoVE Deneyler Ansiklopedisi
Sinirbilim
0 görüntülenme • 3:17 dk. • June 17th, 2025
İki ayrı transgenik Caenorhabditis elegans suşunu agar pedleri ile slaytlar üzerinde alın. Pedler, hareketi en aza indiren felçli bir ajan içeren yuvarlanan bir çözelti içerir.
Solucanların ventral sinir kordonu veya VNC, bir suşta sitoplazmik kalsiyum göstergelerini ve diğerinde mitokondriyal kalsiyum göstergelerini eksprese eden uyarıcı internöronlar içerir.
Solucanları yuvarlamak için bir lamel yerleştirin, VNC'yi görselleştirme için yönlendirin, ardından bunları bir floresan mikroskobu altında konumlandırın.
Solucanları bulmak için görünür ışık kullanın, ardından floresan moduna geçin.
Dinlenme nöronlarında, düşük hücre içi kalsiyum, göstergeleri bağlanmamış halde tutar ve bu da zayıf floresan ile sonuçlanır.
Spontan nöronal aktivite, voltaj kapılı kalsiyum kanallarını açarak kalsiyum akışına izin verir.
Sitoplazmik indikatörleri olan suşta, kalsiyum indikatörlere bağlanarak sitoplazmik floresansı arttırır.
Fazla sitoplazmik kalsiyum mitokondriye kanallar yoluyla girer. Mitokondriyal göstergeleri olan suşta, kalsiyum bağlanması mitokondriyal floresansı arttırır.
Hücre altı kalsiyum dinamiklerini izlemek için her iki suştaki nöronları görüntüleyin.
13 x 100 milimetrelik bir cam kültür t
Tam transkripti görüntüleyin ve binlerce bilimsel videoya erişin