Name: Sıçanlarda Kabul edilmiş Gecikmeli-Tipi aşırı duyarlılık indüksiyonu ve İzleme (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-01T00:00:00.000+00:00
Duration: 22 min 6 s
Description: Öğrenin Lewis sıçanlarında gecikmeli tip aşırı duyarlılık indüksiyonu ve izleme yöntemini. Antijen spesifik T hücrelerini aktive ederek enflamatuar yanıtı beş gün boyunca ölçün.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Biz bu protokolü kullanılan GFP etiketli ovalbumin-spesifik T hücre hattı bize sağlamak için Dr. Alexander Flügel (Martinsried Almanya) teşekkür ederim.

1. Ovalbumin-spesifik T lenfositlerin uyarılması Dinlenme ovalbumin-spesifik T hücreleri, antijen sunan hücreler (APC) olarak Uyarım Orta ışınlanmış Lewis sıçan timositleri (30 Gy), (DMEM + Pen / Strep / L-Glut + NEAA + RPMI Vitaminler hazırlanın varlığı ovalbumin ile uyarılan + 2ME + Rat Serum + ovalbumin final konsantrasyonlarda malzeme listesinde kaydetti.) Sıçan serum hazırlık <ol><li> Biz timus vericisi olarak kurban sıçanlarda serum alır. </li><li> Sıçanlar halotan inhalasyon derin anestezi ve kardiyak perfüzyon (sıçan başına 5-10 ml), 10 ml şırınga ve sıçanlarda ölüm sağlamak için hemen dekapite sonra 23 G 1 &quot;iğneler, kullanarak mümkün olduğunca fazla kan olarak çizilir. </li><li> Kan 37, 10 dakika süreyle pıhtı izin ° C 10 dakika buz üzerinde izledi. </li><li> Pıhtı çıkarılır ve kalan sıvı döndü. </li><li> -20 ° C&#39;de, serum toplanan steril filtreden ve saklanır </li></ol> Antijen sunan hücreler hazırlanması <ol><li> Steril aletler kullanılarak dekapite sıçan timus alın ve PBS içeren penisilin ve streptomisin (PBS-PS), buz üzerine yerleştirin. </li><li> Bir doku kültürü kaput timus atın, kan pıhtılaşması ve diğer kirlenmesine neden olan doku temiz ve küçük parçalar halinde kesip, 10 ml içeren bir 10 cm petri yerleştirilir bir hücre süzgeç (Fisher # 08-771-2) PBS- PS. </li><li> Her bir parça, 1 ml steril bir şırınga pistonu geri kullanarak hücre süzgecinden bastırılır. 50 ml tüp içine buz üzerinde bir tek hücre süspansiyonu toplayın. </li><li> PBS-PS 20-40 daha fazla ml hücre süzgeç durulayın. 1250g süspansiyon santrifüj ve buz üzerinde PBS-PS pelet, 5 ml / timus, tekrar süspansiyon haline getirin. </li><li> Bir gama ışınlama bu süspansiyon (30 Gy) ışın tedavisi ve hemen, 50 ml PBS-PS ile iki kez yıkayın. Not: En iyi timus bağışçılar, eski genç erişkin sıçan, 5-7 hafta . 10 hafta kadar rat kullanıldı ama zamanla hücre sayısı azalır olabilir. Bazı insanlar, erkekler daha iyi timus donörlerin olduğunu söylemek rağmen Cinsiyet önemli değildir. Tüm hayvanlar aynı oda içinde muhafaza edilir çünkü her zaman kadın ve erkekler ve kadınlar aynı odada istemiyorum. </li></ol> Uyarım <ol><li> T lenfositleri bir kez yıkayın ve bunları saymak. </li><li> Antijen-sunan hücreler güvenin. </li><li> Mix 3 x 10 6 10 ml stimülasyon orta içeren 10 cm&#39;lik petri 150 x 10 6 APC&#39;ler ovalbumin-spesifik T hücreleri. </li><li> 37 az 48 saat inkübe ° C. </li></ol> 2. Ovalbumin-spesifik T lenfositleri evlatlık transferi <ol><li> Alıcıları olarak kullandığımız fareler 7-10 hafta yaşlı kadın vardır. </li><li> T lenfositleri sayın büyük ve yuvarlak olmalıdır. Antijen-sunan hücreler ölmüş olacak. </li><li> T lenfositleri Santrifüj ve 10 x 10 6 hücre / ml PBS onları tekrar süspansiyon haline getirin. </li><li> 1 ml intraperitoneal 3 ml şırınga ve 23 G 1 &quot;iğneler kullanılarak enjekte edilir. </li></ol> 3. Kulak antijen ile Mücadelesi <ol><li> İki gün evlatlık transferi sonra, bir kulak ve diğer kulak tuzlu su (ya da ilgisiz antijen), 1 mg / ml ovalbumin çözümü (= ilgili antijen) 20 ul enjekte edilir. Inflamatuar reaksiyon geliştirmek agrega kaybedebilirsiniz antijen çözüm filtre yapmayın. Not: sıçanlarda hareketleri önlemek için anestezi olmalıdır. Sağ elini, sol başparmak ve işaret parmağı, işaret parmağı kulak içinde olmak ve size dönük olacak şekilde sıçan arasındaki kulak tutun. </li><li> 27G ½ &quot;iğne ile kulak kepçesi çözüm enjekte edilir. Farelerin hepsinde aynı yerde tam olarak enjekte etmeye çalışın. </li></ol> 4. DTH, ölçümü <ol><li> Kulak inflamasyonun bir işareti olarak şişer ve kırmızı dönmeye başlayacak. Yaylı mikrometre (örnek model Mitutoyo gelen PK-0505) ile her bir kulak kalınlığı ölçülür. </li><li> Her zaman bir noktada her bir kulak için 5-6 ölçüm ve ortalama hesaplamak. </li><li> 24 ve 72 saatleri arasında maksimum şişme meydana gelmelidir. </li></ol>

<ol><li>Beeton, C., Barbaria, J., Devaux, J., Benoliel, A. -M., Gola, M., Sabatier, J. -M., Bernard, D., Crest, M., Beraud, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Selective+blocking+of+voltage-gated+K%2B+channels+treats+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+and+inhibits+T-cell+activation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Selective blocking of voltage-gated K+ channels treats experimental autoimmune encephalomyelitis and inhibits T-cell activation.</a> J. Immunol. , 166-936 (2001).</li>
<li>Beeton, C., Chandy, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+and+monitoring+of+active+delayed+type+hypersensitivity+%28DTH%29in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Induction and monitoring of active delayed type hypersensitivity (DTH)in rats.</a> J Vis Exp. (5), (2007).</li>
</ol>

Antijenik meydan aynı zamanda, arka (2) cilt örneğin, diğer sitelerde de yapılabilir. Ancak bu zorlu bulabilirsiniz. Bu videoda gösterildiği gibi kulak kepçesi, DTH reaksiyon en hassas ölçüm için izin verir.

<table><tbody><tr><td>DMEM</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td>12430-062</td><td>500ml</td></tr><tr><td>Sodyum piruvat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S8636</td><td>Stimülasyon ortamında final konsantrasyon 1 mM</td></tr><tr><td>Penisilin &amp;#8211; Streptomisin &amp;#8211; L-Glutamin</td><td>Cambrex/BioWhittaker</td><td>17-718R</td><td>Stimülasyon Ortamı içinde sırasıyla final konsantrasyonlar 100 u/ml - 100 &amp;#x03BC;g/ml - 4 mM</td></tr><tr><td>Esansiyel olmayan amino asitler</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R7131</td><td>NEAA, Stimülasyon Ortamı içinde final konsantrasyon %1</td></tr><tr><td>RPMI vitaminleri</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>R7256</td><td>Stimülasyon ortamında final konsantrasyon %1</td></tr><tr><td>beta-merkapto&amp;#8211;etanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M6250</td><td>2ME, Stimülasyon Ortamı içinde final konsantrasyon 50 &amp;#x03BC;M</td></tr><tr><td>Singenik sıçan serumu</td><td></td><td></td><td>Final konsantrasyon %1. Protokoldeki açıklamaya bakınız.</td></tr><tr><td>Ovalbumin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A5503</td><td>Stimülasyon Ortamı içinde final konsantrasyon 10 &amp;#x03BC;g/ml.</td></tr></tbody></table>

sıçanlarda kabul edilmiş gecikmeli-tipi aşırı duyarlılık indüksiyonu ve İzleme

Induction and Monitoring of Adoptive Delayed-Type Hypersensitivity in Rats

Gecikmiş tip aşırı duyarlılık (DTH), bağışıklık sisteminin astarlanmalıdır karşı antijen enjeksiyonu site sızmaya CCR7 efektör bellek T lenfositleri aracılık ettiği inflamatuar bir reaksiyondur. Inflamatuar reaksiyon antijenik meydan yerinde kızarıklık ve şişme ile karakterize edilir. Immunsupresanların in vivo etkinliğini belirlemek için uygun bir model. Kutanöz DTH, antijen-spesifik T lenfositlerin evlatlık havalesi ile veya antijen ile aktif bağışıklama ve inflamatuar reaksiyon, belirli bir cilde alanda ikna etmek için antijen ile daha sonraki intradermal meydan tarafından başlatılabilir. DTH yanıtları örnek ovalbumin, tüberkülin, tetanoz toksoidi ya da anahtar deliği limpet hemosiyanin için, çeşitli antijenleri ikna olabilir. Bu tür reaksiyonlar da MBP, multipl skleroz (1) için bir hayvan modeli olan deneysel otoimmün ensefalomyelit indüklenen sıçan miyelin bazik protein (MBP), örneğin, otoantijen karşı tetiklenen olabilir. Burada nasıl ikna etmek için Lewis sıçanlarda bir evlatlık DTH reaksiyon göstermektedir. Biz ilk kez in vitro ovalbumin-spesifik T hücreleri uyarmak ve naif sıçanlarda bu aktive hücrelerinin intraperitoneal enjekte. Hücreleri, 2 gün boyunca in vivo olarak dengelenmesi için izin sonra, diğer kulak wil tuzlu alırken, fareler bir kulak kepçesi ovalbuminspesifik ile meydan okuyacak. Inflamatuar reaksiyon 3-72 saat sonra görülebilir ve kulak kalınlığı DTH şiddetinin bir göstergesi olarak ölçülen olacak.

Gecikmiş tip aşırı duyarlılık (DTH) CCR7-efektör bellek T (TEM) lenfositlerin aracılık ettiği inflamatuar bir reaksiyon. Burada, antijen spesifik TEM hücreleri aktive Lewis sıçanlarda evlatlık DTH neden ve inflamatuar yanıt izlemek nasıl göstermektedir.

Sıçanlarda Kabul edilmiş Gecikmeli-Tipi aşırı duyarlılık indüksiyonu ve İzleme

Gecikmiş tip aşırı duyarlılık (GTH), ... enjeksiyon bölgesine sızan CCR7- efektör bellek T lenfositleri tarafından aracılık edilen inflamatuar bir reaksiyondur.

Ben Christine Beaton. California Üniversitesi Irvine'deki Fizyoloji ve Biyofizik Bölümü'nde, George Chen'in laboratuvarında araştırma asistanıyım. Önümüzdeki birkaç gün boyunca size Lewis sıçanlarında adaptif DTH oluşturma ve ölçme prosedürünü göstereceğim.Bu prosedür beş gün sürmektedir ve size burada; antijen spesifik T hücrelerinin nasıl aktive edileceğini ve ardından iki gün sonra bu hücrelerin naif sıçanlara nasıl enjekte edileceğini göstereceğim. İki gün sonra, sıçanların kulaklarına, söz konusu T hücrelerinin spesifik olduğu antijenle challenge uygulayacağız. Bir gün sonra ise bu sıçanlardaki inflamasyon derecesini ölçeceğiz.Doku kültürüme serum elde etmek için kan almam gerekiyor. Bunun için kardiyak ponksiyon yapıyorum. Sol işaret parmağımı solar pleksus üzerine yerleştiriyorum ve iğnemle kaburgaların arasından kalbe ulaşıp mümkün olduğunca fazla kan aspire ediyorum.Ve tek bir çekimde, güne ve verimliliğe bağlı olarak, belirli bir sıçandan 2 ile 10 ml arasında kan alabiliriz. Kültürde seruma ihtiyaç duymamızın nedeni, syngeneic olan Louis sıçan hücrelerini serum içinde büyütmek istememizdir. Bu nedenle bunlar Louis sıçan serumu olacaktır.Ardından kanı bir tüpe aktarıyorum,

induction-monitoring-adoptive-delayed-type-hypersensitivity

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

DA sıçanlarda kronik relapsing deneysel otoimmün ensefalomyelit: Bu video, multipl skleroz bir hayvan modeli indüksiyonu ve klinik skorlama göstermektedir. Tüm sıçan omurilik ve tam Freund adjuvan içeren bir emülsiyon immunizing fareler tarafından uyarılan hastalık, insan hastalığına benzer klinik belirtiler sunar.

İndüksiyon ve Kronik Relaps Deneysel Otoimmün Encephalomyelitis Klinik Puanlama

Gecikmiş tip aşırı duyarlılık (DTH) CCR7-efektör bellek T lenfositlerin aracılık ettiği inflamatuar bir reaksiyon. Burada Lewis sıçanlarda aktif DTH neden ve inflamatuar yanıt nasıl izleneceğini gösteriyor.

Sıçanlarda Aktif Gecikmiş tip aşırı duyarlılık (DTH) İndüksiyon ve İzlenmesi

Burada uyaran ve sıçan kulak gecikmiş tip aşırı duyarlılık (DTH) reaksiyon ilerleme kaydetmek için bir yöntem gösteriyor. Bu sıçan kulak doku hazırlanması / bellek efektör T hücre yanıtının iki foton görüntüleme için bir gösteri izledi.

Kabul edilmiş DTH indüksiyonu sonra Kulak Görüntüleme Efektör Bellek T hücreleri

Bu video otoimmün hipofizitis SJL fareler ve histopatoloji ile şiddetini değerlendirmek için nasıl ikna etmek için nasıl gösterir.

SJL Farelerde Deneysel Otoimmün hipofizitis İndüksiyon

Biz potansiyel greft reddi yüksek riski olmadan nakli sonrası immünsüpresyonun sonlandırmaya karar için kullanılabilecek değerli bir tanı testi açıklar. Tahlil Gecikmeli Tip Aşırı duyarlılık ilkelerini kullanır ve alıcılar tarafından monte hem donör özel efektör ve düzenleyici immün yanıtın doğru bir değerlendirme sağlar.

Antijen Özgül Düzenleme için Trans-vivo Gecikmeli Tip Aşırı Duyarlılık Testi

Burada, hoşgörü Ekiminde teşvik ve içinde in vitro ve in vivo değerlendirmek için bir protokol farklı hücre alt kümeleri alıcıdan gelen süpresif kapasitesi ve donör veya eksojen antijenleri doğru alıcının bağışıklık durumu mevcut.

Vitro ve In Vivo değerlendirme T, B ve Myeloid hücrelerin süpresif etkinlik ve nakli alıcılardan gelen Humoral yanıt

Biz burada fareler ve pozlama formaldehit teneffüs Atopik dermatit üzerinde etkilerini araştırmak için buharlaşmış formaldehit Atopik dermatit ikna etmek yenidoğan kapsaisin tedavi yöntemleri açıklanmaktadır.

Formaldehit maruz bir fare modeli Atopik dermatit yenidoğan kapsaisin tedavi tarafından indüklenen etkileri

Bu protokol, CD4+ T hücreleri ve sitokinlerde insan romatoid artritine daha yakın romatoid artrit modelleri oluşturmak için G6PI karışık peptidler kullanır. Yüksek saflıkta değişmez doğal katil T hücreleri (özellikle iNKT2) belirli fenotip ler ve fonksiyonlar ile in vivo indüksiyon ve in vitro saflaştırma ile benimseyici immünoterapi elde edildi.

Glukoz-6-Fosfat İzomazlarında (G6PI)-Indüklenen RA Farelerde iNKT Hücrelerinin Benimseyici İmmünoterapisi

Kontakt aşırı duyarlılık (CHS), alerjik kontakt dermatitin (AKB) murin deneysel bir modelidir. CHS, göğüs ve karın bölgesinin traş edilmiş cildini boyayarak reaktif hapten ile hassaslaşmaya dayanır, daha sonra seyreltilmiş bir hapten ile kulak derisi meydan okuması ile çeşitli şekillerde değerlendirilen bir şişlik reaksiyonuna neden olur.

Alerjik Kontakt Dermatitin Murin Modeli Olarak Kontakt Aşırı Duyarlılık

Burada, erken postnatal ağrı yönetimi ile ilgili araştırmaları kolaylaştıran bir preterm sıçan modeli oluşturmak için kısa bir protokol sunuyoruz. Yöntem, beklenen doğumdan üç gün önce sezaryen yapılmasını, erken doğmuş sıçan yavrularının histerektomi yoluyla çıkarılmasını ve bunların bir vekil barajın biyolojik yavruları ile entegre edilmesini içerir.

Ağrı Çalışmaları için Preterm Sıçan Modeli

Çalışma, epikütan (EC) bağışıklama yoluyla farelerde bağışıklık tepkilerini modüle etmede cildin rolünü göstermektedir. Bir protein antijeni ile EC bağışıklaması, patojenle ilişkili moleküler paternlerle birleştirildiğinde temas aşırı duyarlılığında veya ters cilt kaynaklı baskılamada bağışıklık tepkilerini baskılayabilir. EC bağışıklaması, immünoterapiye etkili, iğnesiz bir yaklaşım olarak umut vaat etmektedir.

Epikütan İndüklenen İmmünomodülasyonun Murin Modeli

Öğrenin Lewis sıçanlarında gecikmeli tip aşırı duyarlılık indüksiyonu ve izleme yöntemini. Antijen spesifik T hücrelerini aktive ederek enflamatuar yanıtı beş gün boyunca ölçün.

Sıçanlarda Kabul edilmiş Gecikmeli-Tipi aşırı duyarlılık indüksiyonu ve İzleme

Daha fazla video keşfet