Name: Paraziter Eşek Arıları Bir Giriş Drosophila Ve antiparaziter İmmün Yanıt (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-05-07T12:00:00.000+00:00
Duration: 13 min 4 s
Description: Öğrenin parazitoid eşek arısı kültürlerini Drosophila konakçılarında nasıl sürdüreceğinizi ve lenf bezi ile yağ dokusunun diseksiyon tekniklerini. Bu yöntem bağışıklık tepkilerini incelemek için benzersiz bir model sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Biz Trichopria drosophilae, transgenik sinek suşları için Prof Tony Ip, ve anti-; pestolu spatzlé antikorları Prof Carl Hashimoto için Prof Todd Schlenke minnettarız. Biz Bu tanıtımı katkıları için laboratuar şimdiki ve geçmiş üyeleri teşekkür ederiz. NIH (S06 GM08168, RISE 41.399-009 ve G12-RR03060), USDA (NRI / USDA CSREES 2.006-03.817 ve 2009-35302-05277) ve PSC-CUNY sahibi: Bu çalışma aşağıdaki bağışları ile desteklenmiştir.

<ol><li>Schlenke, T. A., Morales, J., Govind, S., Clark, A. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contrasting+infection+strategies+in+generalist+and+specialist+wasp+parasitoids+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Contrasting infection strategies in generalist and specialist wasp parasitoids of Drosophila melanogaster.</a> PLoS Pathog. 3, 1486-1501 (2007).</li>
<li>Chiu, H., Morales, J., Govind, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+and+immuno-electron+microscopy+localization+of+p40%2C+a+protein+component+of+immunosuppressive+virus-like+particles+from+Leptopilina+heterotoma%2C+a+virulent+parasitoid+wasp+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gen.+Virol%22%5BJournal%5D)">Identification and immuno-electron microscopy localization of p40, a protein component of immunosuppressive virus-like particles from Leptopilina heterotoma, a virulent parasitoid wasp of Drosophila.</a> J. Gen. Virol. 87, 461-470 (2006).</li>
<li>Gueguen, G., Rajwani, R., Paddibhatla, I., Morales, J., Govind, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((VLPs+of+Leptopilina+boulardi+share+biogenesis+and+overall+stellate+morphology+with+VLPs+of+the+heterotoma+clade%5BTitle%5D)+AND+%22Virus+Res%22%5BJournal%5D)">VLPs of Leptopilina boulardi share biogenesis and overall stellate morphology with VLPs of the heterotoma clade.</a> Virus Res. 160, 159-165 (2011).</li>
<li>Paddibhatla, I., Lee, M. J., Kalamarz, M. E., Ferrarese, R., Govind, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+for+sumoylation+in+systemic+inflammation+and+immune+homeostasis+in+Drosophila+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Role for sumoylation in systemic inflammation and immune homeostasis in Drosophila larvae.</a> PLoS Pathog. 6, e1001234(2010).</li>
<li>Sorrentino, R. P., Carton, Y., Govind, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+immune+response+to+parasite+infection+in+the+Drosophila+lymph+gland+is+developmentally+regulated%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Cellular immune response to parasite infection in the Drosophila lymph gland is developmentally regulated.</a> Dev. Biol. , 243-265 (2002).</li>
<li>Sorrentino, R. P., Melk, J. P., Govind, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+analysis+of+contributions+of+dorsal+group+and+JAK-Stat92E+pathway+genes+to+larval+hemocyte+concentration+and+the+egg+encapsulation+response+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Genetic analysis of contributions of dorsal group and JAK-Stat92E pathway genes to larval hemocyte concentration and the egg encapsulation response in Drosophila.</a> Genetics. 166, 1343-1356 (2004).</li>
<li>Jung, S. H., Evans, C. J., Uemura, C., Banerjee, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Drosophila+lymph+gland+as+a+developmental+model+of+hematopoiesis%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The Drosophila lymph gland as a developmental model of hematopoiesis.</a> Development. 132, 2521-2533 (2005).</li>
<li>Krzemien, J., Crozatier, M., Vincent, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ontogeny+of+the+Drosophila+larval+hematopoietic+organ%2C+hemocyte+homeostasis+and+the+dedicated+cellular+immune+response+to+parasitism%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Ontogeny of the Drosophila larval hematopoietic organ, hemocyte homeostasis and the dedicated cellular immune response to parasitism.</a> Int. J. Dev. Biol. 54, 1117-1125 (2010).</li>
<li>Martinez-Agosto, J. A., Mikkola, H. K., Hartenstein, V., Banerjee, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+hematopoietic+stem+cell+and+its+niche%3A+a+comparative+view%5BTitle%5D)+AND+%22Genes+Dev%22%5BJournal%5D)">The hematopoietic stem cell and its niche: a comparative view.</a> Genes Dev. 21, 3044-3060 (2007).</li>
<li>Lemaitre, B., Hoffmann, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+host+defense+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Annu.+Rev.+Immunol%22%5BJournal%5D)">The host defense of Drosophila melanogaster.</a> Annu. Rev. Immunol. 25, 697-743 (2007).</li>
<li>Schlegel, A., Stainier, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lessons+from+%22lower%22+organisms%3A+what+worms%2C+flies%2C+and+zebrafish+can+teach+us+about+human+energy+metabolism%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">Lessons from "lower" organisms: what worms, flies, and zebrafish can teach us about human energy metabolism.</a> PLoS Genet. 3, e199(2007).</li>
<li>Ferrandon, D., Jung, A. C., Criqui, M., Lemaitre, B., Uttenweiler-Joseph, S., Michaut, L., Reichhart, J., Hoffmann, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+drosomycin-GFP+reporter+transgene+reveals+a+local+immune+response+in+Drosophila+that+is+not+dependent+on+the+Toll+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+J%22%5BJournal%5D)">A drosomycin-GFP reporter transgene reveals a local immune response in Drosophila that is not dependent on the Toll pathway.</a> EMBO J. 17, 1217-1227 (1998).</li>
<li>Bruckner, K., Kockel, L., Duchek, P., Luque, C. M., Rorth, P., Perrimon, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+PDGF%2FVEGF+receptor+controls+blood+cell+survival+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Cell%22%5BJournal%5D)">The PDGF/VEGF receptor controls blood cell survival in Drosophila.</a> Dev. Cell. 7, 73-84 (2004).</li>
<li>Tokusumi, T., Shoue, D. A., Tokusumi, Y., Stoller, J. R., Schulz, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((New+hemocyte-specific+enhancer-reporter+transgenes+for+the+analysis+of+hematopoiesis+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Genesis%22%5BJournal%5D)">New hemocyte-specific enhancer-reporter transgenes for the analysis of hematopoiesis in Drosophila.</a> Genesis. 47, 771-774 (2009).</li>
<li>Tokusumi, T., Sorrentino, R. P., Russell, M., Ferrarese, R., Govind, S., Schulz, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+a+lamellocyte+transcriptional+enhancer+located+within+the+misshapen+gene+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Characterization of a lamellocyte transcriptional enhancer located within the misshapen gene of Drosophila melanogaster.</a> PLoS One. 4, e6429(2009).</li>
<li>Morales, J., Chiu, H., Oo, T., Plaza, R., Hoskins, S., Govind, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biogenesis%2C+structure%2C+and+immune-suppressive+effects+of+virus-like+particles+of+a+Drosophila+parasitoid%2C+Leptopilina+victoriae%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Insect+Physiol%22%5BJournal%5D)">Biogenesis, structure, and immune-suppressive effects of virus-like particles of a Drosophila parasitoid, Leptopilina victoriae.</a> J. Insect Physiol. 51, 181-195 (2005).</li>
<li>Bettencourt, R., Asha, H., Dearolf, C., Ip, Y. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hemolymph-dependent+and+-independent+responses+in+Drosophila+immune+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Cell+Biochem%22%5BJournal%5D)">Hemolymph-dependent and -independent responses in Drosophila immune tissue.</a> J. Cell Biochem. 92, 849-863 (2004).</li>
<li>Melk, J. P., Govind, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+analysis+of+Ganaspis+xanthopoda%2C+a+larval+parasitoid+of+Drosophila+melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Biol%22%5BJournal%5D)">Developmental analysis of Ganaspis xanthopoda, a larval parasitoid of Drosophila melanogaster.</a> J. Exp. Biol. 202, 1885-1896 (1999).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Drosophila parazitik yabanarısı Faiz tüm genom çözmek için moleküler teknikler verimli ve maliyet-etkin hale kabaran edilir. Ancak, son derece iyi çalışılmış hosts göre, yaban arısı biyoloji pek çok büyüleyici özelliği belirsiz kalır. Bu aralık, bağışıklık bastırma, süperparazitizm ve davranışlarını ev sahipliği ile ilgili konuları içerir. Bu sunumun odak sinek bağışıklık dokularda enfeksiyon etkileri göstermekti. Burada gösterildiği Diseksiyon teknikleri RNA düzeyinde (in situ hibridizasyon), ya da mi...

<table border="1"><tbody><tr><td> Malzemeler </td><td> Tip </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td></tr><tr><td> Böcek kültür bakımı için malzemeler </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Maya </td><td> Aktif kuru </td><td> Fisher Scientific </td><td> S802453 </td></tr><tr><td> Gıda Fly </td><td> Mısır unu, şeker </td><td></td><td> Standart tarifi </td></tr><tr><td> Bal </td><td> Yonca </td><td> Hollandalı Altın </td><td></td></tr><tr><td> Flakon </td><td> Polipropilen shell flakon (dar) </td><td> Fisher Scientific </td><td> AS514 </td></tr><tr><td> Flakon kapanışları </td><td> Pamuk fişi </td><td> Fisher Scientific </td><td> AS212 </td></tr><tr><td> Flakon kapanışları </td><td> Buzz eklentisi </td><td&gt; Genesee Bilimsel </td><td> AS273 </td></tr><tr><td> Soğutmalı inkübatör </td><td> Hassas 815 </td><td> Thermo Scientific </td><td> 3721 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Numune hazırlama için malzemeler </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> CO 2 tankı </td><td> Kemik kuru notu </td><td> TW Smith </td><td> UN1013 </td></tr><tr><td> Spatula </td><td> Mikro spatula (14 cm) </td><td> Fisher Scientific </td><td> 21-401-15 </td></tr><tr><td> Pyrex spot test plakaları </td><td> 9-iyi diseksiyon plakası 85 mm X 100 mm </td><td> Thomas Bilimsel </td><td> 7812G17 </td></tr><tr><td> Pasteur Pipetler </td><td> Soda kireç </td><td> J &amp; H Berge </td><td> 71-5200-05 </td></tr><tr><td> Forseps </td><td> Stil # 5 </td><td> Sigma </td><td> T-4662 </td></tr><tr><td> Etanol </td><td> 190 kanıtı USP </td><td> Fisher Scientific </td><td> 04-355-221 </td></tr><tr><td> Formaldehit </td><td> % 37 w / w </td><td> Fisher Scientific </td><td> F79-1 </td></tr><tr><td> Sekonder antikor Cy3 AffiniPure eşek anti-tavşan IgG (H + L) </td><td> 01:50 Uyarma 546 nm; Emisyon 565 nm </td><td> Jackson Immuno Research Laboratories, Inc </td><td> 711-165-152 </td></tr><tr><td> Antifade (N-propil gallat) </td><td> 1X PBS içinde% 50 gliserol içinde 4 mg / ml </td><td> MP Biomedicals </td><td> 10274790 </td></tr><tr><td> Gliserin </td><td></td><td> Fisher Scientific </td><td> G33-1 </td></tr><tr><td> Hoechst 33.258 </td><td> 0.2 mg / ml Uyarma 352 nm; Emisyon 461 nm </td><td> Molecular Probes </td><td> H-1398 </td></tr><tr><td> Rodamin Phalloidin </td><td> 200 adet / ml (6.6uM) Uyarma 540 nm; Emisyon 565 nm </td><td> Molecular Probes </td><td> R415 </td></tr><tr><td> Alexa Fluor 488 Phalloidin </td><td> 300 adet / ml Uyarma 495 nm; Emisyon 518 nm </td><td> Molecular Probes </td><td> A12379 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Sarf </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Şişe yıkayın </td><td> Fisherbrand </td><td> Fisher Scientific </td><td> 03-409-22A </td></tr><tr><td> Kimwipes </td><td> Kimberly Clark </td><td> Fisher Scientific </td><td> 06-666A </td></tr><tr><td> Kağıt Havlu </td><td> 1 kat C-Fold </td><td> Mızrap </td><td> 901-7CFTB2400 </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td> Mikroskopi </td><td> &amp;nbsp; </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Leica stereomikroskop </td><td> MZFLIII </td><td> Empire Imaging Systems, Inc </td><td> 10446208 </td></tr><tr><td> Zeiss stereomikroskop </td><td> STEMI 1000 veya 2000-C </td><td> Carl Zeiss </td><td> 000000-1006-126 </td></tr><tr><td> Işık Kaynağı - LED </td><td> Gooseneck aydınlatıcı </td><td> Fisher Scientific </td><td> 12563501 </td></tr><tr><td> Sahne </td><td> Plaka ile iletilen ışık kutusu </td><td> Carl Zeiss </td><td> 455137000 </td></tr><tr><td> Zeiss lazer konfokal mikroskop tarama </td><td> EKK 510 </td><td> Carl Zeiss </td><td></td></tr><tr><td> Zeiss bileşik mikroskop </td><td> Dik Axioplan 2 </td><td> Carl Zeiss </td><td></td></tr></tbody></table><table border="1"><tbody><tr><td> Wasp Suşları </td><td> Gerinme Flys </td></tr><tr><td> Leptopilina victoriae 16 </td><td> yw </td></tr><tr><td> Leptopilina boulardi 17 1 </td><td> UAS-GFP-Dorsal 17 </td></tr><tr><td> Leptopilina heterotoma 2 </td><td> SerpentHemoGal4 13 </td></tr><tr><td> Leptopilina heterotoma 14 1 </td><td> MSNF9-moCherry 14 </td></tr><tr><td> Trichopria drosophilae </td><td> MSNF-GFP 15 </td></tr><tr><td> Ganaspis xanthopoda 18 </td><td> yw Serpent-gal4 UAS GFP-Dorsal/Basc 4 </td></tr><tr><td></td><td> yw; Drosomycin-GFP/CyO y + 12 </td></tr></tbody></table>

paraziter eşek arıları bir giriş<em&gt; drosophila</em&gt; ve antiparaziter İmmün yanıt

An Introduction to Parasitic Wasps of Drosophila and the Antiparasite Immune Response

Bilinen çoğu parazitoid yaban arısı türü, Drosophila'nın larva veya pupa evrelerine saldırır. Trichopria drosophilae konakçının pupa evrelerini enfekte ederken (Şekil 1A-C), Leptopilina (Şekil 1D, 1F, 1G) ve Ganaspis (Şekil 1E) cinsine ait dişiler larva evrelerine saldırır. Biyolojik bir silahlanma yarışının moleküler temelini incelemek için bu parazitleri kullanıyoruz. Parazit yaban arıları, biyokontrol ajanları olarak muazzam bir değere sahiptir. Bunların çoğu, konakçı fizyolojisini ve bağışıklığını değiştiren virülans ve diğer faktörleri taşır. Drosophila yaban arılarının analizi, türe özgü etkileşimlerin doğal toplulukların genetik yapılarını nasıl şekillendirdiğine dair içgörüler sunmaktadır. Bu çalışmalar ayrıca, konakçıların bağışıklık fizyolojisini ve koordineli bağışıklık reaksiyonlarının bu parazit sınıfı tarafından nasıl engellendiğini anlamak için bir model görevi görmektedir.
Larva/pupa kütikülü ilk savunma hattı görevi görür. Yaban arısı ovipozitörü, yumurtaları konakçı hemoselini etkili bir şekilde ileten keskin, iğne benzeri bir yapıdır. Ovipozisyonu, kütikülde bir yara iyileşmesi reaksiyonu takip eder (Şekil 1C, ok uçları). Bazı yaban arıları aynı konakçıya iki veya daha fazla yumurta yerleştirebilse de, yalnızca bir yumurtanın gelişimi başarılı olur. Fazla yumurtalar veya gelişmekte olan larvalar, henüz anlaşılmamış bir süreçle elenir. Bu nedenle, bu yaban arıları soliter parazitoidler olarak adlandırılır.
Sinek suşuna ve yaban arısı türüne bağlı olarak, arı yumurtası iki kaderden birine sahip olur. Yumurta ya kapsüllenir ve böylece gelişimi engellenir (konak çıkar; Şekil 2 sol); ya da arı yumurtası çatlar, gelişir, deri değiştirir ve yetişkin bir bireye dönüşür (arı çıkar; Şekil 2 sağ). L. heterotoma, Drosophila parazit arılarının üzerinde en çok çalışılan türlerinden biridir. Bu tür bir "generalisttir", yani çoğu Drosophila türünü konak olarak kullanabilir1. L. heterotoma ve L. victoriae kardeş türlerdir ve kapsülleme yanıtını aktif olarak engelleyen virüs benzeri partiküller üretirler2. L. heterotoma'nın aksine, L. boulardi uzmanlaşmış bir parazittir ve kullandığı Drosophila türleri yelpazesi nispeten sınırlıdır1. L. boulardi suşları da virüs benzeri partiküller üretirler3, ancak D. melanogaster üzerinde başarılı olma yetenekleri bakımından önemli ölçüde farklılık gösterirler1. Bu L. boulardi suşlarının bazılarını D. melanogaster üzerinde yetiştirmek zordur1 çünkü sinek konak, yumurtaları kapsüllemede sıklıkla başarılı olur. Bu nedenle, belirli deneysel protokollerde her iki partner hakkında da bilgiye sahip olmak önemlidir.
Bariyer dokuların (kütikül, bağırsak ve trake) yanı sıra, Drosophila larvaları, sırasıyla kan hücrelerinin ve yağ cisimciğinin fonksiyonlarından kaynaklanan sistemik hücresel ve humoral bağışıklık yanıtlarına sahiptir. L. boulardi tarafından yumurta bırakılması, her iki bağışıklık kolunu da aktive eder1,4. Kan hücreleri dolaşımda, bölmeli kütikül altındaki sabit popülasyonlarda ve lenf bezinde bulunur. Lenf bezi, larvanın dorsal tarafında bulunan küçük bir hematopoetik organdır. Loblar olarak adlandırılan hematopoetik hücre kümeleri, hayvanın anterior-posterior ekseni boyunca uzanan dorsal damar boyunca segmentler halinde çiftler şeklinde düzenlenmiştir (Şekil 3A). Yağ cisimciği, çok fonksiyonlu büyük bir organdır (Şekil 3B). Mikrobiyal ve metazoan enfeksiyonlarına yanıt olarak antimikrobiyal peptitler salgılar.
Yaban arısı enfeksiyonu immün sinyallemeyi aktive eder (Şekil 4)4. Hücresel düzeyde, kan hücrelerinin bölünmesini ve farklılaşmasını tetikler. Öz savunma mekanizması olarak, enfekte hayvanların hemoselinde agregatlar ve kapsüller gelişir (Şekil 5)5,6. Aktive olmuş kan hücreleri yaban arısı yumurtasına (veya yaban arısı larvasına) doğru göç eder ve etrafında bir kapsül oluşturmaya başlar (Şekil 5A-F). Bazı kan hücreleri nodüller oluşturmak için kümelenir (Şekil 5G-H). Dikkatli bir analiz, yaban arısı enfeksiyonunun en ön lenf bezi loblarının çevrelerinde dağılmasını tetiklediğini ortaya koymaktadır (Şekil 6C, D).
Yaban arısı enfeksiyonu sonrası lenf bezi ve hemöseldeki spesifik değişikliklerin nasıl incelenebileceğini göstermek için, Toll sinyal iletim yolu bileşenleri olan Dorsal ve Spätzle (Şekil 4,5,7) ile bunun hedefi olan Drosomycin'e (Şekil 6) ait temsilci veriler sunuyoruz. Burada açıklanan diseksiyon protokolleri aynı zamanda konak hemolenfinden yaban arısı yumurtalarının (veya yaban arılarının gelişme aşamalarının) elde edilmesini sağlar (Şekil 8).

Parazitoit (asalak) arılar dahil olmak üzere birçok böceklerin doğal düşmanları önemli bir sınıfını teşkil<em&gt; Drosophila melanogaster</em&gt;. Biz bu parazitleri yaymak için teknikler tanıtacak<em&gt; Drosophila</em&gt; Spp. ve bağışıklık dokular üzerindeki etkileri analiz nasıl gösterilmektedir<em&gt; Drosophila</em&gt; Larva.

Paraziter Eşek Arıları Bir Giriş<em&gt; Drosophila</em&gt; Ve antiparaziter İmmün Yanıt

Bilinen çoğu parazitoid yaban arısı türü, Drosophila'nın larva veya pupa evrelerine saldırır. Trichopria drosophilae ise konakçının pupa evrelerini enfekte eder (Şekil ...

Bu prosedürün genel amaçları, parasitoid yaban arısı kültürlerinin drosophila konakçılar üzerinde nasıl sürdürüleceğini ve lenf bezinin ile yağ cisminin nasıl diseke edileceğini göstermektir. Bu işlem, öncelikle arıların drosophila larvaları üzerinde kültüre edilmesiyle gerçekleştirilir. Daha sonra hayvanlar, kutikülün soyulması ve lenf bezlerini izole etmek için yağ cisimlerinin ve diğer daha ince yapıların uzaklaştırılmasını içeren bir işlemle larva lenf bezlerini izole etmek amacıyla diseke edilir.Benzer şekilde, yağ cisimcikleri immunositokimya ve floresan mikroskobu kullanılarak benzer bir prosedürle izole edilebilir. Gen ekspresyonu ve hücreye özgü değişimler bağışıklık dokularında görselleştirilir. Yaban arısı istilasının ardından, drosophila konakçısını ve onun parazit yaban arısını kullanan benzersiz bir enfeksiyon ve bağışıklık sistemini inceliyoruz.Laboratuvarımız, drosophila parazitoidlerinin canlı kültürlerinin sürdürüldüğü az sayıdaki laboratuvardan biridir. Bu nedenle, tekniklerimizi paylaşmamız sıklıkla talep edilmektedir. Parazitoidler, birçok böceğin doğal düşmanıdır.Çalıştığımız türler, birçok drosophila türünün larva evrelerine saldırır. Laboratuvarda, böceklerin bağışıklık sisteminin parasitoid saldırılarından nasıl etkilendiğini anlamak için drosophila melan gastro kullanıyoruz. İkinci olarak, yaban arılarının konakçı savunmasını aşmak için kullandıkları stratejileri keşfetmek istiyoruz.Genel olarak, yağ vücudu ve lenf bezi diseksiyonlarına yeni başlayan kişiler zorluk yaşarlar; çünkü oph larvaları yetiştirmesi kolay olsa da boyutları oldukça küçüktür ve bu larval organları rutin olarak kolayca diseke edebilmek için ciddi bir aşinalık gerekir. NF kappa B sinyalizasyonunun konstitütif aktivasyonunun, hücre dokularının otoimmün benzeri bir enkapsülasyonuna yol açtığını keşfettikten sonra, bu reaksiyonun oph fla mutantlarında nasıl gerçekleşeceği konusunda meraklandık. Bu nedenle, indüklenen enkapsülasyonun bunun doğal karşılığı olduğunu hipotez ettik ve bugün göstereceğimiz bu standart protokolleri geliştirdik. Şimdi, yaban arısı kültürlerinin nasıl hazırlanacağını ve sürdürüleceğini göstereceğim.Taze hazırlanmış az miktarda maya pastası içeren taze bir sinek besin tüpü hazırlayarak başlayın. Yumurta bırakmaları için 50 ila 60 genç vahşi tip sineği, 24 °C'de 48 saat boyunca tüpe aktarın. İki günlük yumurtlama süresinin ardından sinekleri tüpten çıkarın ve buzz tıpasına bir damla bal ekleyin.Ve son olarak, tüpün kapağını kapatın. Eşek arılarını anesteziye almadan önce karbondioksit akışını düşürün çünkü eşek arıları gazla ilgili olarak sineklerden daha hassastır. Eşek arılarını anesteziye almaya hazır olduğunuzda, altı ila sekiz dişi ve altı ila sekiz erkek eşek arısı ayıklayarak tüpe ekleyin.Drosophila yumurtaları ve larvaları ile birlikte. Eşek arıları uyanana kadar tüpü nazikçe yan yatırın. Ardından tüpü 24 degrees Celsius'lik bir inkübatöre yerleştirin.Etkilenmeyen gilo konakçısı ve kendilerini başarıyla savunan konaklar, normal gelişim zaman noktasında pupa evresine geçecektir. Bunlar, yaban arılarının çıkışından önce uzaklaştırılabilir. Yaban arıları, genellikle aynı gelişim aşamasındaki yaban arılarını hazırlamak için 25 ila 30 gün civarında koza örerler.Bağışıklık dokularının veya parazitlerin diseksiyonu için enfekte larvaları toplamak amacıyla, yaban arılarını 48 saatlik bir süre yerine, konak yumurtalarının iki ila altı saatlik bir süre boyunca bırakıldığı koşullarda yetiştirin. Sinek tüplerinin içeriğini küçük bir cam veya plastik Petri kabına aktarın. Ardından, bir stereo mikroskop ve ince uçlu pens kullanarak altı ila 10 larvayı dikkatlice seçip alın.Larvaları önce bir kuyucuğa 1X PBS ekleyerek yerleştirin, ardından sırasıyla su, %70'lik etanol çözeltisi ve tekrar 1X PBS içerisine aktarın. Bu adımların amacı, hayvanları sinek yeminden arındırmak ve yüzeylerini tamamen temizleyip sterilize etmektir. Bir Zes 1000 diseksiyon mikroskobunun diseksiyon tablasına, numuneden geçebilecek yansıyan ışık sağlayan bir ışık kutusu yerleştirin.Hassas pens kullanarak, PBS içerisinden temizlenmiş, gezgin üçüncü evre bir larva seçin. Larvayı bir mikroskop lamı üzerine yerleştirin. Pens yardımıyla hayvanı ventral tarafı yukarı gelecek şekilde konumlandırın.Organizmanın şeffaf görünmesi ve iç organların görünür olması için ışık kaynağını örnekten uzaklaştıracak şekilde eğin. Larvaları lam üzerine aktarırken, bazen işlemi zorlaştırabilen fazla PBS kalmadığından emin olun. İki çift pens kullanarak, hayvanı arka ucun her iki yanından tutun ve kütikülde küçük, yüzeysel bir yırtık oluşturmak için kütikülü nazikçe çekin.Hemositler, bağırsak ve yağ cisimlerini içeren hemolenf, vücut boşluğundan dışarı çıkmaya başlayacaktır. Gerektiğinde yayma preparatları hazırlamak için hemolenf, 10 µL'lik bir pipetle alınabilir; bunun için her iki pens dikkatlice hayvanın sol tarafına, ağız kancalarının hemen altına yerleştirilmelidir. Kütikülde nazik bir yırtık oluşturun.Her iki penseti hayvanın sağ tarafında, ağız kancalarının hemen altına getirin ve dikkatlice küçük bir yırtık daha oluşturun. Şimdi, hayvanın ağız kancalarını tutarken, kütikülü hayvanın posterior ucuna doğru nazikçe soyun. Kütikül geriye çekildikçe beyin, yağ cismi, imaginal diskler, tükürük bezleri ve proventrikulus açığa çıkacaktır.Arka uçtaki ayrılmış kütikülde, ona bağlı lenf bezi ile birlikte dorsal damar bulunur. Lenf bezi beynin altındadır. Kanıtlanmış ventrikülü kesin ve lenf bezi bölgesinden uzaklaştırın.Yağ, vücut dokusu, bağırsak, tükürük bezleri ve diğer yapıları lenf bezinden dikkatlice ayırın. Lenf bezinin, beynin arkasında yer alan halka bezden ve dorsal damardan ayrılmamasına dikkat edin. Lenf bezini mikroskop lamına düz bir şekilde yerleştirin ve tüm bez, ön loblardan son perikardiyal hücre setine kadar tamamen açılana kadar tüm ek dokuları dikkatlice temizleyin.Bez şimdi, bir Zes 1000 diseksiyon mikroskobunun diseksiyon tablası üzerinde tespit edilmeye ve boyanmaya hazırdır. Örnekten gelen ışığın geçmesine izin veren bir ışık kutusu yerleştirin. Temizlenmiş üçüncü dönem bir larvayı mikroskobun üzerine konumlandırın.200 µL 1X PBS ekleyin. Işık kaynağını, organizma şeffaf görünecek ve iç organlar seçilecek şekilde örnekten uzağa eğin. Pens yardımıyla, hayvanın anterior ucunu sizden uzak olacak şekilde konumlandırın.Bir sonraki adımda, iç organlara dokunmadan yalnızca kütikülü yırtmayı sağlamak için pensleri nereye konumlandırdığınıza dikkat etmeniz önemlidir. Bir çift pensle larvanın ağzının sol tarafındaki kütikülü tutun, diğer pensle kancaları yakalayın. Kütikülü diğer taraftan posterior uca kadar nazikçe yırtın.Kütikülü posterior uçtaki gövdeden ayırarak yırtmadan önce durun, bağırsağı çok nazik bir şekilde bir kenara doğru çıkarmaya başlayın. Beyin imaginal disklerini ve dorsal damarın içinden geçen lenf bezini içeren halka bezini nazikçe çıkarın. Son olarak, yağ vücudunun her iki yanındaki kütikülü nazikçe kaldırın.Tükürük bezlerinin her iki yanında yağ cisimcikleri bulunduğundan, bu bezleri çıkarmayın. Dokunun tespit ve boyama işlemlerine geçmeden önce, PBS'yi uzaklaştırdığınızdan emin olun. İyi diseke edilmiş bir yağ cisimciği örneği, normal hücre temaslarını korumalı ve diseke edilen örneğin çevresinde minimum düzeyde yağ globülleri bulundurmalıdır.Yaban arısı istilasının gen ekspresyonu üzerindeki etkisi in vivo olarak görselleştirilmiştir. Enfekte edilmemiş kontrol hayvanlarda, Theso Mycin promotörüne bağlı bir GFP raporcusu kullanıldığında, GFP ekspresyonu saptanmamıştır. Buna karşın, l Victoria ile enfekte edilmiş hayvanlardan disseke edilen yağ cisimciklerinin sitoplazmasında GFP sinyali açıkça saptanmaktadır.El Victoria enfeksiyonu sonrası ön loblarda meydana gelen hücresel değişiklikleri gözlemlemek için lenf bezleri diseke edildi. Misshapen enhancer tarafından yönlendirilen GFP ile işaretlenmiş yeni farklılaşmış sitler, lobların çevresinde görülmektedir. Normal şartlarda bezler, lobu sürekli olarak çevreler.Ancak, aynı diseksiyonlarda yaban arısı enfeksiyonundan sonra bazal membran süreksiz olduğundan, bu bezlerde ön lobların bütünlüğü bozulmuştur. Hemolenfteki sitler yaymalarda görüntülenmiştir. Bazı lenfositler, betzel ekspresyonunu saptamak için parazit gelişimini engellemeye yönelik kapsül oluşumuna katılmıştır.Diseke edilmiş lenf bezleri. Lenf bezleri, in vivo olarak poliklonal anti schpeil antikorları ile boyanmıştır. Yaban arısı enfeksiyonundan sonra, enfekte edilmemiş kontrollere kıyasla lenf bezi hücrelerindeki schpeil seviyeleri artmıştır.Bu prosedürü uygularken, özofagus kültürlerini istenen biyolojik yaşta hazırlamak önemlidir. Manuel işlemlerin immün reaksiyonları tetiklememesi için kültürlere nazik davranın. Bu prosedürün ardından, çıkarılan RNA veya proteini kullanmak amacıyla diseke edilmiş organlar, yağ cismi ve lenf bezi RNA ve protein ekstraksiyonu için kullanılabilir.Gen ve protein ekspresyonunu incelemek için PCR veya Western analizi gerçekleştirebiliriz. Bu videoyu izledikten sonra, parazitlerin drosophila konakçılarında nasıl büyütüleceği ve immünohistokimya ile diğer uygulamalar için immün dokuların diseksiyonunun nasıl yapılacağı konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız.

an-introduction-to-parasitic-wasps-drosophila-antiparasite-immune

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Drosophila Wolbachia Bakteriyel Enfeksiyon

Fopius arisanus Tephritid meyve sinekleri bu önemli tropikal zararlıları biyolojik kontrol başarıyla kullanılan bir yumurta larva parazitoit. Biz burada F. yetiştirme için optimize edilmiş bir protokol tarif hazır malzemeler kullanılarak küçük bir ölçekte arisanus.

Yetiştirilmesi için Optimum Protokol Fopius arisanus Tephritid Meyve bir parazitoit Sinekler

Immün yanıt ve davranış arasındaki bağlantıyı anlamak için, lokomotor davranışları ölçmek için bir yöntem...

İmmün Yanıt ve Uyku içinde kantitatif ölçümü<em&gt; Drosophila</em

Drosophila melanogaster, doğuştan gelen bağışıklık sistemlerini ve enfeksiyon ve hastalığın fizyolojik sonuçlarını incelemek için olağanüstü bir model organizmadır. Bu protokol, D. melanogaster'e sağlam ve kantitatif olarak tekrarlanabilir bakteriyel enfeksiyonların nasıl sağlanacağını ve daha sonra enfeksiyon şiddetinin nasıl ölçüleceğini ve konak immün yanıtının nasıl ölçüleceğini açıklar.

Sistemik Bakteriyel Enfeksiyon ve Bağışıklık Savunma FENOTİPİ içinde<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Bu yöntem, patojen işgali üç boyutlu (3D) modelleri ile böcek hücreye görselleştirmek gösterilmiştir. Hemocytes Drosophila larvaları üzerinden viral veya bakteriyel patojenler, ex vivo veya vivo içindeile bulaşmış. Virüslü hemocytes daha sonra sabit ve görüntüleme için bir confocal mikroskop ve sonraki 3D hücresel yeniden yapılanma ile lekeli.

Hemocytes mikrobiyal enfeksiyon ve çözümleme çekme--dan Drosophila melanogaster larva

Bu iletişim kuralı sözlü olarak ortaya çıkarmak ve bakteriyel patojenler ile meyve sineği Drosophila melanogaster bulaştırmak ve bağırsak enfeksiyonu takip bulaşıcı bakteri döken sayısını ölçmek için yöntemler açıklanır. Daha fazla sinek hayatta kalma sözlü bakteriyel enfeksiyonu takip bağışıklık mutantlar etkisini açıklar.

Bakteriyel enfeksiyon ve atma Drosophila melanogaster içinde sözlü

Bu iletişim kuralı bir hücre tanıma ve mikrobiyal enfeksiyonlar Gümrükleme ölçmek için yetişkin Drosophila melanogaster içinde vivo fagositoz tahlil açıklar.

Bir In Vivo fagositoz tahlil kullanarak Drosophila melanogaster, meyve sineği hücresel bağışıklık yanıtı değerlendirirken

Drosophila melanogaster yetişkin sinekleri, konakçı antimikrobiyal doğuştan gelen immün yanıtların ve mikrobiyal enfeksiyon stratejilerinin altında yatan moleküler mekanizmaları araştırmak için model organizmalar olarak yaygın olarak kullanılmaktadır. D. melanogaster larva aşamasını ek veya alternatif bir model sistem olarak tanıtmak için, bir larva enjeksiyon tekniği tanımlanmıştır.

Drosophila melanogaster Larva Enjeksiyon Protokolü

Ganaspis brasiliensis - Drosophila suzukii'nin (küresel istilacı bir meyve mahsulü zararlısı) larva parazitoidi - bu haşerenin biyolojik kontrolü için Avrupa ve Amerika Birleşik Devletleri'ne giriş için onaylanmış veya düşünülmüştür. Bu makale, bu parazitoidin hem küçük ölçekli hem de büyük ölçekli yetiştirilmesi için protokoller sunmaktadır.

İnvaziv Drosophila suzukii için Umut Verici Bir Biyolojik Kontrol Ajanı olan Parazitoid Ganaspis brasiliensis'i Yetiştirme Yöntemleri

Bu protokolün amacı, Asobara japonica ve Drosophila melanogaster'de parazitoid–konak etkileşimlerinin fonksiyonel analizini kolaylaştırmaktır. optimize edilmiş yetiştirme yöntemleri, tek yumurtlama enfeksiyonu testi ve RNAi aracılı gen etkisi aralı.

Endoparazitoid eşek arısı Asobara japonica ve konak Drosophila melanogaster'in Verimli Yetiştirilmesi ve Fonksiyonel Analizi Protokolleri

Öğrenin parazitoid eşek arısı kültürlerini Drosophila konakçılarında nasıl sürdüreceğinizi ve lenf bezi ile yağ dokusunun diseksiyon tekniklerini. Bu yöntem bağışıklık tepkilerini incelemek için benzersiz bir model sunar.

Paraziter Eşek Arıları Bir Giriş

Daha fazla video keşfet