Name: Deneysel Fare Modeli Vajinal Aşılama ve Örnek Toplama Protokolleri Candida Vajinit (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-12-08T12:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 57 s
Description: Öğrenin fare modelinde vajinal aşılama ve örnek toplama tekniklerini kullanarak Candida vajinitisinde fungal yükü nasıl ölçeceğinizi. Bu yöntem immünolojik ve histolojik analizler için hücre izolasyonu sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, R01 AI32556 (NIAID, Ulusal Sağlık Enstitüsü) tarafından desteklenmiştir. Bu çalışma ayrıca, Louisiana Aşı Merkezi ve Güney Louisiana Louisiana Regents Kurulu tarafından desteklenen Enfeksiyon Hastalıkları Araştırma Enstitüsü tarafından desteklenmiştir.

1. Candida albicans ile Vajinal aşılama <ol><li> Aşılama Üç gün önce, karın ortaya çıkarmak için hayvan frenleyici, alt karın bölgesinde subkütan 0.1-0.5 mg β-östradiol içeren susam yağı enjekte 100 ul. Enjeksiyon yerinden sızıntı en aza indirmek için cilde yan 5 ila 10 mm iğne ilerletin. Alt karın östrojen subkutan uygulanması, genital sistem yakınlığı nedeniyle bu model en uygunudur. Etkili dozlarda fare suşlar, yaşları ya da östrojen türevleri göre değişebilir. CBA-J (H-2 κ), C3H/HeN (H-2 κ), C57BL / 6 (H-2 b), Balb / c (H-2 d) Daha önceki çalışmalarda, DBA / 2 (H- 2 d), yaş 6-8 hafta SJL (H-2 s) farelerde, 0.1 mg/100 ul etkili bulunmuştur vajinal duvar kalınlaşması ile kanıtlanır, vajinal mukus ve azaltılmışepitel hücre dökülmesi arttı. Yukarıdaki bu konsantrasyonda östrojen ile tedavi edilen farelerde, Candida ile tutarlı vajinal kolonizasyon sergilerler . Diğer suşları ve yaşları farelerde aşılama için bir pilot çalışma değiştirilmiş koşullar altında östrojen etkinliğini sağlamak ve gerekirse östrojen dozu artırmak için önerilir. Östrojen çözüm enjeksiyon gününde her zaman taze olarak hazırlanması gerekir. Susam yağı östrojen tam çözünürlük sağlamak için, iyice bir vorteks mikser ve ısı 37 ° aralıklı olarak kullanarak çözüm karıştırmak ° C Haftalık çalışma süresi boyunca enjeksiyon işlemi tekrarlayın. </li><li> Inokulum hazırlamak için, C. loopful ekleyin 10 ml% 0.1 glukoz ile desteklenen Phytone-pepton suyu içine Sabouraud dekstroz agar (SDA) bir son altkültürü hazırlık albicans blastoconidia. 25 ° C sallayarak bir su banyosunda 18 saat süreyle sabit faz suyu kültür inkübe edin. </li><li> Inkübasyon sonrasında, inci toplamake 5 dakika boyunca 800 xg'de 15 ml konik boru ve santrifüj içine suyu kültürü. Pelet steril PBS ile iki kez yıkayın. </li><li> Tripan mavi boya dışlama hemasitometre canlı blastoconidia numaralandırır. Hücre konsantrasyonu 2.5 x 10 6 / ml steril PBS (ya da istediğiniz bir inokulum konsantrasyonu) ayarlayın. </li><li> Fare stabilize etmek için, iki parmak ile kuyruk tabanı tutun ve vajinal açıklık (Şekil 1A) dönüktür kalça yukarı kadar kaldırın. Fare, fare kuyruğu kısıtlama karşı direnç sağlar, böylece, düz bir rendelenmiş yüzey (örneğin kafesinin üst) yerleştirilir ise idealdir. </li><li> Pipet 20 ul vajinal lümen (Şekil 1B) derinliklerine yaklaşık 5 mm pipet ucu takarak inokulum süspansiyon (veya istenen hacmi 20 ul geçmemek üzere). Fare sıkıntı olduğunca çabuk ve nazik bir şekilde mümkün olan en aza indirmek için bu adımı tamamlayın. </li></ol> 2. Vajinal lavaj <ol><li> Aşağıdaki ötenazi (ya da genel anestezi), hvajinal açılış maruz olur böylece iki parmak ile kuyruk tabanı tarafından aşağı eski fare. </li><li> Bir pipet ucu ile tekrar aspirasyon ve ajitasyon ile steril PBS 100 ul getirerek vajinal lümen Lavaj. Pipet ucu hücreleri ile tıkanmış olabilir. Bu durum ortaya çıkarsa, engelleyen hücreleri dağıtmak ve lavaging vajina içinde kalan PBS ile devam edin. Bir mikrosantrifüj tüp içine lavaj sıvısı toplayın. </li><li> Alternatif olarak, vajinal lavaj izofluran uçucu anestezi ile anestezi fareler üzerinde yapılabilir. Bunun için, tam olarak (~ 30 sn.) Sedasyon kadar izofluran buharlaşmış farelerin maruz kalmaktadır. Farelerin kuyruk tabanı tarafından aşağı doğru tutun ve yavaşça 50 ul steril PBS kullanarak vajinal lümen lavajı. Bu işlem sırasında vajina travmayı en aza indirmek için bir pipet ucu ile sert bir ajitasyon önlemek için emin olun. Sedatize fareler ortam havasına maruz kalma 30 saniye içinde anestezi kurtarmak gerekir. İsofluranınizofluran bir buharlaştırıcı ve O 2 (tercih edilen) veya buharlaştırıcı sistemi (solunum sıkıntısı önlemek için sedasyon ise hayvanın yakın takip gerektirir) olmadan kapalı anestezi odasına standart bir damla sistemi kullanarak buharlaşmış olabilir. Anestezi fareler üzerinde Vajinal lavaj aynı fareler üzerinde uzunlamasına lavaj örnekleri için tercih edilen yöntem olmalıdır. Ardıl lavaging zaman 41 üzerinde mantar yükünün değerlendirilmesi etkilemez. </li><li> Lavaj sıvısı, cam bir slayt üzerine monte ıslak hazırlıkları için 10 ul transferi ve ışık mikroskobu ile 400-1000x büyütme az gözlemlemek. Ayrıca, lavaj sıvısının hücresel kesirler hücre ve nükleer morfolojileri incelemek için lekeli olabilir. Smear hazırlıkları için lavaj sıvısı, cam bir slayt üzerine 10 ul transferi ve dış duvar bir pipet kullanarak hafifçe yayılır. CytoPrep fiksatif ile smear örnekleri korumak ve standart Papanicolaou tekniği ile leke (Pap smear.) 400 × büyütmede ışık mikroskobu ile gözlemleyin. </li></ol> 3. Vajinal mantar yükünün Kantitasyonu <ol><li> 96 yuvarlak alt plaka, lavaj sıvısı, bu sütunun aşağıdaki 5 kuyu (tabak aşağı) içine üst satır ve 180 ul steril PBS iyi birine aktarın. </li><li> Sütun bir sonraki kuyuya 20 ul sıvı aktararak vajinal lavaj sıvısının 01:10 seri dilüsyonları olun. Her aktarmadan önce tekrarlanan aspirasyon ile iyice karıştırın. 12 lavaj örnekleri (tam bir yatay satır) kadar seri dilüsyonları 12-kanallı pipet kullanarak aynı anda yapılabilir. </li><li> Sabouraud dekstroz agar (SDA), en düşük sulandırma ile başlayarak, 10 ul üzerine örnek aktarmak. 36 örnekleri kadar Kaplama, 1 tabak kullanarak kare ızgara ve ayarlanabilir bir boşluk çok kanallı pipet petri kaplarına hazırlanan SDA yapılabilir. </li><li> 34 az inkübasyondan sonra koloni oluşturan birim (CFU) numaralandırır ° C fveya 48 saat </li></ol> 4. Vajinal doku ekstraksiyonu <ol><li> Vajinal lavaj prosedürü izleyerek, sırtında ötenazi fare yattı ve% 70 etanol ile kasık bölgesinde doyurabilecek. Bir çift forseps kullanarak, yukarı vajinal açılış maruz haline gelmesi idrar orifis kaldırın. </li><li> Kavisli bir forseps bir çift vajinal lümen içine yerleştirin ve serviks bulun. Forseps ile sağlam bir tutuş korurken, vajinal boşluğu (Şekil 2A-C) ile serviks ayıklayın. </li><li> Vajina Vergi üssünde vajinal açılış ve ardından cerrahi makas ile vajinadan rahim ağzı çıkarın. Vajinal dokuların (epitel tarafı vajina iç dışa açık) involuted olduğunu aklınızda bulundurun. Doku ya yanal vajinanın başlangıç ​​yönlendirmesinden korumak için ters veya lateral kesi yaparak bir sayfa açılıyordu olabilir. Eksize vajinal dokuların) 1 kullanılabilir lenfosit çekimini takiben kolajhistolojik analizler için 25 Nase sindirim (~ 1 × 10 4 / fare) 40, 2) epitel hücre izolasyonu aşağıdaki dispase sindirim (~ 5 × 10 4 / fare) 28, 3) dondurulmuş veya parafine gömülü preparatlar. </li></ol> 5. Bel lenf nodu eksizyonu <ol><li> Vajinal lavaj prosedürü izleyerek, sırtında ötenazi fare yattı ve% 70 etanol ile karın doyurabilecek. Lateral kesi alt karın göğüs başlangıç ​​yapın ve iç organların maruz. Iki eliyle bir çift forseps kullanarak, merkezi kan damarları görünür hale gelir bağırsak yukarı kadar hareket ettirin. </li><li> Inferior vena kava ve abdominal aorta bulun. Normalde, bir çift lomber lenf nodu, abdominal aort bitişik belirlenen yaklaşık yarım böbrek ve ortak iliak arterlerden 39 kökeni arasında yer olabilir. Bu lenf düğümleri görsel olarak yağ dokusunun elastik doku tarafından ayırt edilebilirve yağ dokusu (Şekil 3) ile karşılaştırıldığında daha açık renkli ve daha opak. Bu lenf düğümleri uninoculated hayvanlara göre, enfekte hayvanların belirgin şekilde daha büyük. </li><li> Vergi sonra lenf düğümü altında microforceps koyarak düğümleri ve doku çevreleyen ayrı hafifçe yukarı çekin. </li></ol> 6. Tek hücre süspansiyonları lenfoid hücrelerin izolasyonu <ol><li> ~ 10 ml Hanks dengeli tuz solüsyonu (HBSS) (Şekil 4) içeren bir steril cam petri içine yerleştirilen steril bir tel örgü ekran (boyut olarak yaklaşık 3 x 3 cm 2) üzerine lenf düğümleri aktarın. </li><li> Hafif eğimli petri ile karşı lenf düğümleri bir şırınga piston kafası ile ekran tuşuna basın. Düğümleri hücresel olmayan bileşenleri (yani, membranlar, stroma, yağ) ekranda kalırken düğümleri hücresel içeriği ekrana geçmesi, böylece tüm lenf düğümleri kırmak için emin olun. </li><li> Aynı piston ve şırınga, aspirat tiçeren hücrelerin HBSS. ~ 5 ml HBSS ile ekran yıkayın ve 15 ml konik bir tüp içine kalan sıvı toplamak. </li><li> 10 dakika için 800 xg'de santrifüjleyin. Sıvı atarak önce bir pipet ile sıvının üst kısmında herhangi bir yağ mevduat aspire. HBSS hücre pelletini üç kez yıkayın. Tripan mavi boya dışlanma ve numaralandırmak canlı hücreler tarafından HBSS 1 ml pelletini tekrar. </li></ol> 7. Temsilcisi Sonuçlar: &gt; 4-günlük inoküle fareler vajinal lavaj sıvısının hücresel kesirler genellikle Candida, epitel hücreleri ve hücresel infiltratlar (Şekil 5) oluşur. Islak-montaj mikroskopi, Candida görsel hifler varlığı yanı sıra maya (Şekil 5A) tarafından tespit edilebilir. Ana hücreleri üç nucle tarafından belirlenen nötrofil olan epitel hücreleri ve infiltre lökositler, vajinal lavaj sıvısının Smear hazırlıkları incelemek için Papanicolaou tekniği ile boyananar loblar (Şekil 5B). Çok az sayıda nötrofil, eğer varsa, 41 uninoculated fareler (Şekil 5C) tespit edilir. Vajinal mantar yükünün bir örnek Şekil 6'da gösterilmiştir. CFU sayımı (Şekil 6A) için belirli bir zaman noktalarında toplanan Vajinal lavaj sıvısı kültürü. Candida vajinal kolonizasyonu olmayan östrojen ile tedavi edilen farelerde (Şekil 6C) inoküle kurmak için başarısız olur, Candida vajinal kolonizasyon / enfeksiyon, östrojen tedavisi inoküle fareler (Şekil 6B) hafta boyunca devam etmektedir . Uninoculated östrojen ile tedavi edilen farelerde süresi (veriler gösterilmemiştir) boyunca Candida negatif kalır. Buna ek olarak, her zaman noktasında veya boyuna aynı farelerde anestezi altında vajinal lavaj ayrı fareler üzerinde ya bir kez gerçekleştirilir olabilir. Lomber lenf düğümleri, genital sistem ve vajinal sorun sistemik bağışıklık yanıtlarını değerlendirmek için en uygun site temel drenaj lenf düğümleri. Note uninoculated fareler normalde oldukça küçük görünen bu lenf düğümleri inoküle farelerde genişlemiş olabilir. Lökosit hücresel kurtarma genellikle 8 aralık × 10 5 / uninoculated fare 5 × 10 6 / inoküle fare. Lomber lenf bezlerine ek olarak, kasık, popliteal ve mezenterik lenf düğümleri de kullanılabilir. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/3382/3382fig1.jpg"> Şekil 1. Candida ile Vajinal aşılama. A) fare inokülasyon için ölçülü. Fare, bir tel kafes eklemek yerleştirilir ve bacaklar hafifçe yukarı doğru kaldırın ve vajinal açılma ortaya çıkarmak için, kuyruk tabanı tarafından düzenlenen. Kuyruk kısıtlama direnmeye çalışır fare kalça aynı eli ile stabilize olabilir. B) inokulum vajinal lümen içine giriş. Bir pipet yavaşça vajinal lümen içine derin yaklaşık 5 mm eklenir. Süspansiyon inokulum sonra yatırılır. Şekil 2: Vajinal doku ekstraksiyonu . AB serviks) Ekstraksiyon. Serviks kavisli bir forseps ile yer ve vajinal boşluğu yoluyla dışa maruz kalmaktadır. Bir kez vajinal kavite, serviks, vajina tamamen açığa çıkarmak için daha fazla dışa çekilir. C) vajina Ekstraksiyon. Vajina, vulva makas ile eksize edilir. Müstakil sonra, vajinadan rahim ağzı çıkarın. <img alt="Şekil 3" src="/files/ftp_upload/3382/3382fig3.jpg"> Şekil 3. lomber lenf nodlarının belirlenmesi. Pelvis çevresinde, çevre organlara / kan damarları arasında lomber lenf nodu yeri gösterilir. A, abdominal aorta. B, mesane. C, iliyak arter. Ben, bağırsak. L, karaciğer. R, rektum. S, dalak. U, Uteri. <img alt="Şekil 4" src="/files/ftp_upload/3382/3382fig4.jpg"> Şekil 4, bir tel örgü ekran üzerine yerleştirilen lomber lenf düğümleri . Lenf düğümleri, HBSS ile bir petri kabına yerleştirilir ekrana toplanmış. Lenf düğümleri tek hücre süspansiyonları lenfoid hücreleri elde etmek için bir şırınga pistonu ile ekrana bastırılır. <img alt="Şekil 5" src="/files/ftp_upload/3382/3382fig5.jpg"> Şekil 5 inoküle farelerden alınan vajinal lavaj sıvısı Hücresel kesirler. Vajinal lavaj örneklerinin A) Islak mount ve B) Pap smear preparatları uninoculated farelerden alınan) sonrası aşılama ve C 4 gün toplanan. Görüntüler 1000 × (A) veya 400 × (B, C) büyütme. B eklemek 1000 × vajinal nötrofil nükleer morfoloji göstermektedir. Candida maya (Y) ve hif (H), epitel hücreleri (EC) ve neutrohils (N) gösterilir. <img alt="Şekil 6" src="/files/ftp_upload/3382/3382fig6.jpg"> Şekil 6: Algılamavajinal mantar yükünün iyon. A) Temsilcisi C. albicans kolonileri SDA plaka üzerinde büyüdü. Neat (N) altı (üst satırda) farklı inoküle fareler lavaj örnekleri seri olarak seyreltilmiş ve CFU sayımı için kültüre edildi. B) vajinal mantar yükünün Niceleme östrojen ile tedavi edilen ve C) non-östrojen ile tedavi edilen farelerde. Inoküle farelerden alınan lavaj sıvısı CFU/100 ul belirtilen zaman noktalarında değerlendirildi.

<ol><li>Abraham, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inducible+immunity+to+Trichomonas+vaginalis+in+a+mouse+model+of+vaginal+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Inducible immunity to Trichomonas vaginalis in a mouse model of vaginal infection.</a> Infect. Immun. 64, 3571-3571 (1996).</li>
<li>Black, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Major+histocompatibility+haplotype+does+not+impact+the+course+of+experimentally+induced+murine+vaginal+candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22Lab.+Anim.+Sci%22%5BJournal%5D)">Major histocompatibility haplotype does not impact the course of experimentally induced murine vaginal candidiasis.</a> Lab. Anim. Sci. 49 (6), 668-668 (1999).</li>
<li>Black, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+neutropenia+decreases+inflammation+associated+with+murine+vaginal+candidiasis+but+has+no+effect+on+the+course+of+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Inf.+Immun%22%5BJournal%5D)">Acute neutropenia decreases inflammation associated with murine vaginal candidiasis but has no effect on the course of infection.</a> Inf. Immun. 66, 1273-1273 (1998).</li>
<li>Black, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+severity+of+Candida+vaginitis+in+BALB%2Fc+nu%2Fnu+mice+versus+the+parent+strain+is+not+abrogated+by+adoptive+transfer+of+T+cell+enriched+lymphocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Reprod.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Increased severity of Candida vaginitis in BALB/c nu/nu mice versus the parent strain is not abrogated by adoptive transfer of T cell enriched lymphocytes.</a> J. Reprod. Immunol. 45, 1-1 (1999).</li>
<li>Buchannan, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+stromal+and+epithelial+estrogen+receptors+in+vaginal+epithelial+proliferation%2C+stratification%2C+and+cornification%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Role of stromal and epithelial estrogen receptors in vaginal epithelial proliferation, stratification, and cornification.</a> Endocrinology. 139 (10), 4345-4345 (1998).</li>
<li>Clemons, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+susceptibility+of+mice+to+Candida+albicans+vaginitis+correlates+with+host+estrogen+sensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Genetic susceptibility of mice to Candida albicans vaginitis correlates with host estrogen sensitivity.</a> Infect. Immun. 72, 4878-4878 (2004).</li>
<li>Conrady, C. D., Halford, W. P., Carr, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Loss+of+the+type+I+interferon+pathway+increases+vulnerability+of+mice+to+genital+Herpes+simplex+virus+2+infection%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Virol%22%5BJournal%5D)">Loss of the type I interferon pathway increases vulnerability of mice to genital Herpes simplex virus 2 infection.</a> J. Virol. 85 (4), 1625-1625 (2011).</li>
<li>Cunha, G. R., Cooke, P. S., Kurita, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+estromal-epithelial+interaction+in+hormonal+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Histol+Cytol%22%5BJournal%5D)">Role of estromal-epithelial interaction in hormonal responses.</a> Arch Histol Cytol. 67 (5), 417-417 (2004).</li>
<li>Enjalbert, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+multifunctional%2C+synthetic+Caussia+princeps+luciferase+reporter+for+live+imaging+of+Candida+albicans+infections%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">A multifunctional, synthetic Caussia princeps luciferase reporter for live imaging of Candida albicans infections.</a> 77 (11), 4847-4847 (2009).</li>
<li>Feinen, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Critical+role+of+Th17+responses+in+a+murine+model+of+Neisseria+gonorrhoeae+genital+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Mucosal+Immunol%22%5BJournal%5D)">Critical role of Th17 responses in a murine model of Neisseria gonorrhoeae genital infection.</a> Mucosal Immunol. 3 (3), 312-312 (2010).</li>
<li>Fidel, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+protective+host+defenses+against+oral+and+vaginal+candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22Med.+Mycol%22%5BJournal%5D)">Distinct protective host defenses against oral and vaginal candidiasis.</a> Med. Mycol. 40, 359-359 (2002).</li>
<li>Fidel, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+intravaginal+live+Candida+challenge+in+humans+leads+to+new+hypotheses+for+the+immunopathogenesis+of+vulvovaginal+candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">An intravaginal live Candida challenge in humans leads to new hypotheses for the immunopathogenesis of vulvovaginal candidiasis.</a> Infect. Immun. 72, 2939-2939 (2004).</li>
<li>Fidel, P. L., Cutright, J. L., Sobel, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy+of+D0870+treatment+of+experimental+Candida+vaginitis%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrob.+Agents.+Chemother%22%5BJournal%5D)">Efficacy of D0870 treatment of experimental Candida vaginitis.</a> Antimicrob. Agents. Chemother. 41, 1455-1455 (1997).</li>
<li>Fidel, P. L., Cutright, J. L., Steele, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+Reproductive+hormones+on+experimental+vaginal+candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Effects of Reproductive hormones on experimental vaginal candidiasis.</a> Infect. Immun. 68, 651-651 (2000).</li>
<li>Fidel, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+murine+model+of+Candida+glabrata+vaginitis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Inf.+Dis%22%5BJournal%5D)">A murine model of Candida glabrata vaginitis.</a> J. Inf. Dis. 173, 425-425 (1996).</li>
<li>Fidel, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+vaginal+cell+populations+during+experimental+vaginal+candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22Inf.+Immun%22%5BJournal%5D)">Analysis of vaginal cell populations during experimental vaginal candidiasis.</a> Inf. Immun. 67, 3135-3135 (1999).</li>
<li>Fidel, P. L., Lynch, M. E., Sobel, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Candida-specific+cell-mediated+immunity+is+demonstrable+in+mice+with+experimental+vaginal+candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Candida-specific cell-mediated immunity is demonstrable in mice with experimental vaginal candidiasis.</a> Infect. Immun. 61, 1990-1990 (1993).</li>
<li>Fidel, P. L., Sobel, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunopathogenesis+of+recurrent+vulvovaginal+candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Microbiol.+Rev.+9%22%5BJournal%5D)">Immunopathogenesis of recurrent vulvovaginal candidiasis.</a> Clin. Microbiol. Rev. 9. 9, 335-335 (1996).</li>
<li>Fidel, P. L., Sobel, J. D. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFidel%2C+PL+%22Murine+Models+of+Candida+Vaginal+Infections%2C+In+Experimental+models+in+antimicrobial+chemotherapy%22">Murine Models of Candida Vaginal Infections, In Experimental models in antimicrobial chemotherapy</a>. Zak, O., Sande, M. , 2nd ed, Academic Press Ltd. London, UK. 741-748 (1999).</li>
<li>Fidel, P. L., Vazquez, J. A., Sobel, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Candida+glabrata%3A+Review+of+epidemiology%2C+pathogenesis%2C+and+clinical+disease+with+comparison+to+C.+albicans%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Microbiol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Candida glabrata: Review of epidemiology, pathogenesis, and clinical disease with comparison to C. albicans.</a> Clin. Microbiol. Rev. 12, 80-80 (1999).</li>
<li>Fulurija, A., Ashman, R. B., Papadimitriou, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neutrophil+depletion+increases+susceptibility+to+systemic+and+vaginal+candidiasis+in+mice%2C+and+reveals+differences+between+brain+and+kidney+in+mechanisms+of+host+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiology%22%5BJournal%5D)">Neutrophil depletion increases susceptibility to systemic and vaginal candidiasis in mice, and reveals differences between brain and kidney in mechanisms of host resistance.</a> Microbiology. 142, 3487-3487 (1996).</li>
<li>Gill, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NK+cells+require+type+I+IFN+receptor+for+antiviral+responses+during+genital+HSV-2+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Immunol%22%5BJournal%5D)">NK cells require type I IFN receptor for antiviral responses during genital HSV-2 infection.</a> Cell Immunol. 269 (1), 29-29 (2011).</li>
<li>Hamad, M., Abu-Elteen, K. H., Ghaleb, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Estrogen-dependent+induction+of+persistent+vaginal+candidosis+in+naive+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Cell.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Estrogen-dependent induction of persistent vaginal candidosis in naive mice.</a> Cell. Immunol. 47 (7), 304-304 (2004).</li>
<li>Hamad, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Utility+of+the+oestrogen-dependent+vaginal+candidosis+murine+model+in+evaluating+the+efficacy+of+various+therapies+against+vaginal+Candida+albicans+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Mycoses%22%5BJournal%5D)">Utility of the oestrogen-dependent vaginal candidosis murine model in evaluating the efficacy of various therapies against vaginal Candida albicans infection.</a> Mycoses. 49 (2), 104-104 (2006).</li>
<li>LeBlanc, D. M., Barousse, M. M., Fidel, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+role+for+dendritic+cells+in+immunoregulation+during+experimental+vaginal+candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">A role for dendritic cells in immunoregulation during experimental vaginal candidiasis.</a> Infect. Immun. 74, 3213-3213 (2006).</li>
<li>McGrory, T., Garber, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+intravaginal+infection+with+Trichomonas+vaginalis+and+role+of+Lactobacillus+acidophilus+in+sustaining+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Mouse intravaginal infection with Trichomonas vaginalis and role of Lactobacillus acidophilus in sustaining infection.</a> Infect. Immun. 60, 2375-2379 (1992).</li>
<li>Naglik, J. R., Fidel, P. L., Odds, F. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+mucosal+Candida+infection%5BTitle%5D)+AND+%22FEMS.+Microbiol.+Lett%22%5BJournal%5D)">Animal models of mucosal Candida infection.</a> FEMS. Microbiol. Lett. 283 (2), 129-129 (2008).</li>
<li>Nomanbhoy, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vaginal+and+oral+epithelial+cell+anti-Candida+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Inf.+Immun%22%5BJournal%5D)">Vaginal and oral epithelial cell anti-Candida activity.</a> Inf. Immun. 70, 7081-7081 (2002).</li>
<li>Pietrella, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+beta-glucan-conjugate+vaccine+and+anti-beta-glucan+antibodies+are+effective+against+murine+vaginal+candidiasis+as+assessed+by+a+novel+in+vivo+imaging+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">A beta-glucan-conjugate vaccine and anti-beta-glucan antibodies are effective against murine vaginal candidiasis as assessed by a novel in vivo imaging technique.</a> Vaccine. 28 (7), 1717-1717 (2010).</li>
<li>Redondo-Lopez, V., Cook, R. N., Sobel, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Emerging+role+of+Lactobacilli+in+the+control+and+maintenance+of+the+vaginal+bacterial+microflora%5BTitle%5D)+AND+%22Rev+Infect+Dis%22%5BJournal%5D)">Emerging role of Lactobacilli in the control and maintenance of the vaginal bacterial microflora.</a> Rev Infect Dis. 12 (5), 856-856 (1990).</li>
<li>Saavedra, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+production+of+chemokines+during+experimental+vaginal+candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22Inf.+Immun%22%5BJournal%5D)">Local production of chemokines during experimental vaginal candidiasis.</a> Inf. Immun. 67, 5820-5820 (1999).</li>
<li>Sobel, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+and+epidemiology+of+vulvovaginal+candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+N.+Y.+Acad.+Sci%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis and epidemiology of vulvovaginal candidiasis.</a> Ann. N. Y. Acad. Sci. 544, 547-547 (1988).</li>
<li>Sobel, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+and+treatment+of+recurrent+vulvovaginal+candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis and treatment of recurrent vulvovaginal candidiasis.</a> Clin. Infect. Dis. 14, Suppl 1. S148-S153 (1992).</li>
<li>Sobel, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vulvovaginal+candidiasis%3A+Epidemiologic%2C+diagnostic%2C+and+therapeutic+considerations%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Obstet.+Gynecol%22%5BJournal%5D)">Vulvovaginal candidiasis: Epidemiologic, diagnostic, and therapeutic considerations.</a> Am. J. Obstet. Gynecol. 178 (2), 203-203 (1998).</li>
<li>Song, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+and+humoral+immune+responses+against+primary+and+repeat+Neisseria+gonorrhoeae+genital+tract+infections+of+17%CE%B2-estradiol-treated+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Local and humoral immune responses against primary and repeat Neisseria gonorrhoeae genital tract infections of 17β-estradiol-treated mice.</a> Vaccine. 26, 5741-5741 (2008).</li>
<li>Taylor, B. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+virulence+of+Candida+albicans+isolates+causing+mucosal+infections+in+people+infected+with+the+human+immunodeficiency+virus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">In vivo virulence of Candida albicans isolates causing mucosal infections in people infected with the human immunodeficiency virus.</a> J. Infect. Dis. 182, 955-955 (2000).</li>
<li>Taylor, B. N., Saavedra, M., Fidel, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Local+Th1%2FTh2+cytokine+production+during+experimental+vaginal+candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22Med.+Mycol%22%5BJournal%5D)">Local Th1/Th2 cytokine production during experimental vaginal candidiasis.</a> Med. Mycol. 38, 419-419 (2000).</li>
<li>Tirabassi, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+mucosal+vaccination+approach+for+herpes+simplex+virus+type+2%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">A mucosal vaccination approach for herpes simplex virus type 2.</a> Vaccine. 29 (5), 1090-1090 (2011).</li>
<li>Broeck, W. V. anden, Derore, A., Simoens, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anatomy+and+nomenclature+of+murine+lymph+nodes%3A+descriptive+and+nomenclatory+standardization+in+BALB%2FcAnNCrl+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol.+Methods%22%5BJournal%5D)">Anatomy and nomenclature of murine lymph nodes: descriptive and nomenclatory standardization in BALB/cAnNCrl mice.</a> J. Immunol. Methods. 312 (1-2), 12-12 (2006).</li>
<li>Wormley, F. L., Chaiban, J., Fidel, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+adhesion+molecule+and+lymphocyte+activation+marker+expression+during+experimental+vaginal+candidiasis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol.+Methods%22%5BJournal%5D)">Cell adhesion molecule and lymphocyte activation marker expression during experimental vaginal candidiasis.</a> J. Immunol. Methods. 69, 5072-5072 (2001).</li>
<li>Yano, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+cell-derived+S100+calcium-binding+proteins+as+key+mediators+in+the+hallmark+acute+neutrophil+response+during+Candida+vaginitis%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Epithelial cell-derived S100 calcium-binding proteins as key mediators in the hallmark acute neutrophil response during Candida vaginitis.</a> Infect. Immun. 78 (12), 5126-5126 (2010).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Candida vajinit, deneysel bir fare model kurulmuş ve tarihsel olarak son birkaç yıldır kullanılan 3,4,11,13,16,17,19,21,24 antifungal tedaviler test etmek için Candida mukozal konak yanıtının yanı sıra çalışma olmuştur 25,37. Protokoller, burada verimli ve daha az emek-yoğun yöntemleri dahil, ve Candida vajinit en optimize edilmiş bir model sistemleri bugüne kadar açıklanan gibi görünen sundu. Bu teknikler hızlı kantifikasyon vajinal örneklerin fungal yükü ve t...

<table border="1"><tr><td> Reaktifi Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> Kadın CBA / J fareler </td><td> Charles River Laboratuvarları </td><td> 01C38 </td><td> 5-6 hafta </td></tr><tr><td> Candida albicans (3153A) </td><td> Patojenik Mantarlar, Birleşik Krallık Ulusal Koleksiyonu </td><td> NCPF3153 </td><td></td></tr><tr><td> Susam yağı </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> S3547 </td><td> Kullanmadan önce ön sterilize edilmek üzere ihtiyaç duymaz </td></tr><tr><td> Β-östradiol 17-valerat </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> E1631 </td><td> Susam yağı 0.1-0.5mg </td></tr><tr><td> Phytone pepton </td><td> Becton Dickinson </td><td> 211906 </td><td> % 0.1 glukoz ile Ek </td></tr><tr><td> Tripan mavi çözümü </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> T8154 </td><td></td></tr><tr><td> Sabouraud dekstroz agar </td><td> Becton Dickinson </td><td> 211584 </td><td></td></tr><tr><td> Kollajenaz tip IV </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> C5138 </td><td> % 0.25 </td></tr><tr><td> Dispase </td><td> Invitrogen </td><td> 17105-041 </td><td> 1.7 U / ml </td></tr><tr><td> Tel örgü ekranlar </td><td> TWP </td><td> 060X060S0065W36T </td><td> No 60 mesh, paslanmaz </td></tr><tr><td> Hanks dengeli tuz çözeltisi </td><td> Invitrogen </td><td> 24020-117 </td><td></td></tr><tr><td> CytoPrep fiksatif </td><td> Fisher Scientific </td><td> 12-570-10 </td><td> Smear slaytlar korur </td></tr><tr><td> Leke Papanicolaou EA-65 </td><td> Merck Kimyasallar </td><td> 7054X-85 </td><td></td></tr><tr><td> Leke Papanicolaou RG-6 </td><td> Merck Kimyasallar </td><td> 7052X-85 </td><td></td></tr><tr><td> Harris &#39;Şap hematoksilen </td><td> Merck Kimyasallar </td><td> 638A-85 </td><td></td></tr><tr><td> İsofluranın </td><td> Baxter Healthcare </td><td> NDC 10019-773-60 </td><td> Izofluran buharlaştırıcı ya da bir damla sistemi el anestezi kamara kapalı </td></tr></table>

deneysel fare modeli vajinal aşılama ve Örnek toplama protokolleri candida vajinit

Protocols for Vaginal Inoculation and Sample Collection in the Experimental Mouse Model of Candida vaginitis

Vulvovajinal kandidiazis (VVC), Candida türlerinin neden olduğu, aksi takdirde sağlıklı kadınların yaklaşık% 75&#39;i üreme yıl boyunca 18,32-34 etkileyen alt dişi genital sistemin bir mantar enfeksiyonu. Predispozan faktörler, antibiyotik kullanımı, kontrolsüz diyabet ve rahatsızlık üreme hormon düzeyleri gebeliğe bağlı, oral kontraseptif veya hormon replasman tedavileri 33,34 içerir . Tekrarlayan VVC (RVVC) yılda üç veya daha fazla bölüm olarak tanımlanan, hiçbir predispozan faktör 33 ile% 8 kadın için ayrı bir 5 etkiler. VVC deneysel bir fare modeli kurulmuş ve patogenezi ve Candida 3,4,11,16,17,19,21,25,37 mukozal konak yanıtı çalışma için kullanılan olmuştur. Bu model aynı zamanda, in vivo 13,24 potansiyel antifungal tedaviler test etmek için işe alındı ​​. Modeli hayvanlar opt pseudoestrus bir devlet muhafaza gerektirirolmuş bölgeler Candida kolonizasyonu / infeksiyonu 6,14,23. Bu koşullar altında, haftalar veya aylar için inoküle hayvanlar vajinal mantar yükünün saptanabilir olacaktır. Geçmişte yapılan çalışmalar, immünolojik ve fizyolojik özellikleri 3,16,21 göre hayvan modeli ve insan enfeksiyonu arasındaki son derece yüksek bir paralellik göstermektedir. Farklılıklar Ancak, normal vajinal flora olarak Candida eksikliği ve farelerde nötr bir vajinal pH içerir. Burada, bir dizi vajinal aşılama, vajinal örneklerin hızlı toplanması, vajinal mantar yükünün değerlendirilmesi ve hücresel çıkarma / izolasyonu için doku hazırlıkları fare vajinit modeli temel yöntemler göstermektedir. Bu vajinal lavaj sıvısı, mantar yükünü, ve drenaj lenf nodu lökosit verim bileşenlerinin temsilcisi sonuçları takip edilmektedir. Anesteziklerin kullanımı ile lavaj örnekleri boyuna değerlendirilmesi için aynı fareler üzerinde birden fazla zaman noktalarında toplananenfeksiyon / kolonizasyon. Ayrıca, tanımlanmış ana koşullar altında immünolojik çalışmalar sağlayan bu model, enfeksiyon başlatmak için herhangi bir immünosupresif ajanlar gerektirir. Son olarak, model ve her iki tekniğin burada potansiyel düşük kadın genital sistem (viral, parazitik, bakteriyel) ve ilgili lokal veya sistemik konak savunmasını diğer bulaşıcı hastalıkları incelemek için metodolojilerin kullanımı doğurabilecek tanıttı.

Değerlendirilmesinde kullanılacak kilit teknikleri<em&gt; Candida</em&gt; Vajinit deneysel bir hayvan modeli anlatılmaktadır. Yöntemleri, lomber lenf düğümleri drenaj, vajinal örneklerin ve lenfositler hızlı toplama sağlayacaktır. Bu teknikler, kadın alt genital sistem diğer hastalıkların fare modelleri yol açabilir.

Deneysel Fare Modeli Vajinal Aşılama ve Örnek Toplama Protokolleri Candida Vajinit

Candida türlerinin neden olduğu vulvovajinal kandidiyazis (VVC), kadın alt genital sistemini etkileyen ve kadınların yaklaşık %75'ini etkileyen fungal bir enfeksiyondur...

Bu prosedürün genel amacı, vajinal fungal yükü nicelleştirmenin bir yolu olarak vajinal kandidiyazis deneysel hayvan modelinin kullanımına ilişkin spesifik prosedür sorunlarını göstermek ve ayrıca vajinal veya lenfoid hücreleri immünolojik ve histolojik analizler gibi spesifik analizlerde kullanmaktır. Bu, öncelikle östrojen uygulanmış farelerde vajinal inokülasyon tekniğinin gösterilmesiyle gerçekleştirilecektir. Ardından, fare ötanize edildikten sonra, kandida geri kazanımı için vajinal lavaj uygulanacaktır.Ardından vajinal doku ve/veya vajinal drenaj lenf düğümleri çıkarılacaktır. Lavaj sıvısı, vajinal epitelyal hücrelerle ilişkili candida'yı göstermek için mikroskop altında incelenebilir veya vajinal fungal yükü nicelleştirmek için agara ekilebilir. Hücresel fraksiyonun bir yayması, epitelyal hücrelerin ve lenfoid hücrelerin boyanması için de kullanılabilir.Bu tekniğin gösterilmesinin temel amacı, vajinit hayvan modelini kullananların bu işlemi en verimli ve etkili şekilde gerçekleştirmelerini sağlamaktır. Teknik aracılığıyla yanıtlanan temel sorular; konakçı bağışıklık yanıtları, hücresel dağılım, ilaç etkinliği, immünoterapötik etkinlik ve ayrıca bağışıklamanın etkileri gibi vajinit ve ekoloji alanındaki kritik soruları kapsamaktadır. Bugün, laboratuvarımdaki lisansüstü öğrencisi Junco Yano, beta estradiol enjeksiyonundan üç gün sonra bir fareyi C. albicans ile enfekte edecektir.Fareyi, tutunabilmesi için düz bir gRED yüzeyine sabitleyerek başlayın. Ardından, kuyruğun tabanını iki parmağınızla tutun ve vajinal açıklık size bakacak şekilde kalçayı yukarı kaldırın. Pipet ucunu vajinal lümene yaklaşık beş milimetre derinliğinde yerleştirin ve 20 µL kadar inokülüm süspansiyonu çekin.Faredeki stresi en aza indirmek için bu adımı mümkün olduğunca hızlı ve nazik bir şekilde tamamlayın. İstenen inkübasyon süresinden sonra, hayvanı tesisinizin protokolüne uygun olarak ötanize edin. Ardından, vajinal açıklığın bir pipetle erişilebilir hale gelmesi için fareyi kuyruk tabanından iki parmağınızla aşağıya doğru tutun.Vajinal lümene 100 µL steril PBS ekleyin ve tekrarlanan aspirasyon ile ajitasyonla lavaj gerçekleştirin. Pipet ucu hücrelerle tıkanırsa, tıkanıklığa neden olan hücreleri boşaltın ve kalan PBS ile lavaja devam edin. Lavaj sıvısını bir mikro santrifüj tüpünde toplayın.Vajinal lavaj prosedürünün ardından, fareyi sırtüstü yatırın ve kasık bölgesini %70 etanol ile doyurun. Bir penset kullanarak, vajinal açıklığın açığa çıkması için idrar deliğini yukarı kaldırın. Kavisli bir penset çiftini vajinal lümene yerleştirin ve pensetle sıkıca kavrayarak serviksi bulun.Serviksi vajinal boşluk aracılığıyla çıkarın, vajinayı vajinal açıklığın tabanından eksize edin ve ardından serviksi cerrahi makas yardımıyla vajinadan ayırın. Vajinal doku involüsyon geçirdiği için, orijinal oryantasyonu korumak adına dokuyu ters çevirin veya hayvan sırtüstü pozisyondayken lomber nod eksize etmek için lateral bir insizyon yaparak dokuyu bir levha şeklinde açın. Karın bölgesini %70 ethanol ile doyurun.Alt karından göğse doğru lateral bir insizyon yapın ve her iki elinizdeki forsepler yardımıyla iç organları açığa çıkarın. Merkezi kan damarları görünür hale gelene kadar bağırsakları yukarı doğru kaydırın. Vena cava inferior ve abdominal aortayı belirleyin.Bir çift lomber lenf nodu, abdominal aortun bitişiğinde, renal arterlerin ve ortak iliak arterlerin başlangıç noktaları arasındaki yaklaşık orta mesafede tanımlanabilir. Bu lenf nodları, elastik dokuları sayesinde yağ dokusundan görsel olarak ayırt edilebilirler; yağ dokusuna kıyasla renkleri daha açık ve daha opaktır. Ayrıca, enfekte hayvanlarda, inoküle edilmemiş olanlara göre belirgin şekilde daha büyüktürler.Mikro pensleri lenf düğümünün altına yerleştirip ardından çevre dokudan ayırmak için nazikçe yukarı çekerek hayvanların lenf düğümleri çıkarıldı. Dokuyu çıkardıktan sonra lenf düğümlerini, yaklaşık 10 mililitre Hank's dengeli tuz çözeltisi içeren steril bir cam Petri kabının içine yerleştirilmiş steril bir tel süzgecin üzerine aktarın. Lenfoid hücreleri izole etmek için yazılı protokole bakın.En az dört gün önce inoküle edilmiş farelerden alınan vajinal lavaj sıvısının hücresel fraksiyonları, burada yaş preparat mikroskopisi ile gösterildiği üzere, tipik olarak candida epitel hücreleri ve hücresel infiltratlardan oluşur. Candida, mayaların yanı sıra PHA varlığı ile tanımlanabilir. Burada vajinal lavaj sıvısının yayma preparatları boyanmıştır.Pap smear tekniği kullanılarak, tri-nükleer loblar aracılığıyla tanımlanabilen ve temel hücreleri nötrofiller olan epitel hücreleri ve infiltre lökositler incelenir. İnoküle edilmemiş farelerde, eğer tespit edilirse, çok az sayıda nötrofil saptanır. Bu şekil, vajinal fungal yüküne bir örnek göstermektedir.Vajinal lavaj sıvısı belirli zaman noktalarında toplanır ve CFU sayımı için kültüre edilir. Bu örnekte sıvı, inokülasyondan sonraki beşinci günde toplanmış, seri dilüsyonla plaklara ekilmiş ve 48 saat boyunca inkübe edilmiştir. Ardından koloniler sayılır ve vajinal fungal yük hesaplanır; östrojen uygulanmış inoküle farelerde candida ile vajinal kolonizasyon veya enfeksiyon haftalarca sürer.Östrojen tedavisi uygulanmamış inoküle edilen farelerde candida vajinal kolonizasyon oluşturamazken, östrojen tedavisi uygulanmış inoküle edilmemiş fareler süre boyunca candida açısından negatif kalır. Ayrıca, vajinal lavajlar ya her zaman noktasında farklı farelere bir kez ya da aynı farelerde anestezi altında boylamsal olarak gerçekleştirilebilir. Bu prosedürü uygularken, vajinaya travma verilmesini önlemek için hayvanların güvenli bir şekilde sabitlendiğinden emin olmak önemlidir ve vajinal dokular çıkarılırken doğru vajinal fungal yükü elde etmek için lavajın titizlikle yapılmasına gerekli zaman ayrılmalıdır.Dehidrasyonu önlemek için durgun PBS kullanın; lenf düğümlerini çıkarırken ve lenf düğümü hücrelerini işlerken ana ven ve arterlere zarar vermemeye dikkat edin, hücre canlılığını korumak için hücreleri buz üzerinde veya dört derecede tutun. Bu videoyu izledikten sonra, vajinal fungal yükü tekrarlanabilir şekilde nicelendirmek ve spesifik immünolojik veya histolojik analizler için vajinal veya lenfoid dokuları çıkarmak amacıyla candida vajiniti deneysel fare modelinin nasıl uygulanacağı konusunda kapsamlı bir bilgiye sahip olmalısınız.

protocols-for-vaginal-inoculation-sample-collection-experimental

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Kaynak: Morrill, S.R., ve diğerleri. Anaerobik olarak yetiştirilen bakteriler tarafından murin vajinal kolonizasyon modelleri. J. Vis. Uzm. (2022)Bu video, antibiyotiğe dirençli anaerobik bakteriler kullanılarak farelerde vajinal kolonizasyonun modellenmesine yönelik bir protokolü göstermektedir. Epitel duyarlılığını artırmak için hormonal tedavi ile başlar, ardından anaerobik koşullar altında vajinal aşılama ve ko-aşılama ile devam eder. Prosedür, bakteri kolonizasyonunu ve biyofilm oluşumunu...

Murin Vajinal Kolonizasyonunun Anaerobik Bakterilerle Modellenmesi

Kaynak: O'Brien, Başkan Yardımcısı ve diğerleri. Gardnerella vaginalis mesane maruziyeti ile tetiklenen tekrarlayan Escherichia coli idrar yolu enfeksiyonu, farelerde ortaya çıkmıştır. J. Vis. Exp. (2020)Bu video, tekrarlayan idrar yolu enfeksiyonu için fare modeli oluşturmak için Gardnerella vaginalis inokulumunun hazırlanmasını göstermektedir.

Farelerde Tekrarlayan İdrar Yolu Enfeksiyonlarını Modellemek İçin Gardnerella vaginalis Inoculumun Hazırlanması

Kaynak: Patras, K. A., Doran, K. S. Grup B Streptococcus vajinal kolonizasyonunun fırın modeli. J. Vis. Exp. (2016)Bu video, enfeksiyonu modellemek için Grup B Streptococcus ile hormon tedavisi görmüş dişi bir farenin vajinal aşılanmasını ve hazırlanmasını göstermektedir. Bakterilerin nasıl kültürleneceği ve hazırlanacağı, aşının vajinal lümene nasıl uygulanacağı ve enfeksiyonun başarılı olmasını nasıl sağlayacağı açıklar.

Vajinal Grup B Streptococcus Enfeksiyonunun Fare Modeli Oluşturulması

Bu video, transüretral kateter damlatma yoluyla bir dişi fare mesanesinde üropatojenik Escherichia coli enfeksiyonunun oluşumunu göstermektedir. Enjekte edilen bakteriler, mesane içinde başarılı bir idrar yolu enfeksiyonu oluşturur ve idrar yolu ile ilgili sağlıkla ilişkili hastalıkları incelemek için değerli bir platform sağlar.

Dişi Farelerde İdrar Yolu Enfeksiyonu Modelinin Oluşturulması

Bu video, Candida albicans'ın deri altı dokuda biyofilm oluşumunu incelemek için bir in vivo fare modelinin geliştirilmesini göstermektedir. Deney, Candida ile enfekte olmuş cihazların biyofilm gelişimi için hayvanın sırt bölgesine implante edilmesini içeriyor.

Candida albicans Bir İn Vivo Fare Modelinde Biyofilm Oluşumu

Candida enfeksiyon modelleri, konak immün direncini incelemek için mevcut olsa da, Candida enfeksiyonu bağlamında T hücresi aracılı immünopatolojiyi incelemek için bir model yoktur. Burada, immün yetmezliği olan farelerde oral Candida enfeksiyonu ile ilişkili Th17 immünopatolojisini oluşturmak için bir yöntem tarif ediyoruz.

Immünyetmezligi Farelerde Orofaringeal kandidiyazis ve Th17 İltihabı Modeli

Bu protokolün amacı bir murin modelinde insan Grup B Streptococcus (GBS), vajinal kolonizasyonu taklit etmektir. Bu yöntem konak bağışıklık yanıtlarını ve GBS vajinal sebat katkıda bakteriyel faktörleri araştırmak için, yanı sıra tedavi stratejileri test etmek için kullanılabilir.

B Grubu bir murin modelinde<em&gt; Streptococcus</em&gt; Vajinal Kolonizasyon

Burada, benzersiz bir şekilde tasarlanmış bir ısıtma / kısıtlama cihazı kullanarak kemirgen kuyruk damarı enjeksiyonları için etkili ve verimli bir yöntem sunuyoruz. Vazodilasyon ve kısıtlama süreçlerinin başlatılmasını kolaylaştırarak, bu protokol, en az sıkıntıya sahip büyük hayvan gruplarının doğru ve zamanında intravenöz enjeksiyonlarına izin verir.

Murine Mantar Sepsis Modelinde Verimli Kuyruk Damarı Enjeksiyonları için Çağdaş Isınma/Kısıtlama Cihazı

Protokol, anaerobik olarak kültürlenmiş insan vajinal bakterileri ile vajinal kolonizasyonun bir fare modelini sunar. Prevotella bivia ve Fusobacterium nucleatum için öneriler eklerken Gardnerella vaginalis'e odaklanıyoruz. Bu protokol aynı zamanda vajinal aşılamalar ve diğer anaerobik olarak yetiştirilen bakterilerin canlı iyileşmesi için bir rehber olarak da kullanılabilir.

Yapay Olarak Yetiştirilen Bakteriler Tarafından Murin Vajinal Kolonizasyon Modelleri

Kateter üzerinde biyofilmin oluştuğu ve C.albicans ile konakçı arasındaki etkileşimin klinik CRI ile iyi korelasyon gösterdiği C.albicans ile ilişkili kateterle ilişkili enfeksiyonun (CRI) bir fare modelini oluşturduk. Bu model, C.albicans biyofilmle ilişkili CRI için tarama tedavilerine yardımcı olarak klinik dönüşüm için bir temel oluşturur.

Farede Kateterle İlişkili Candida albicans Enfeksiyon Modeli

Erken doğum (37 haftadan &lt; doğum), optimal olmayan önleme ve tedavi seçenekleriyle acil bir küresel sağlık sorunudur. Artan vajinal bakteriyel enfeksiyon kaynaklı erken doğumun bir fare modelini sunuyoruz ve ortaya çıkan yenidoğan morbidite ve mortalitesinin nasıl analiz edileceğini özetliyoruz.

Farelerde Yükselen Vajinal Enfeksiyon, Erken Doğum ve Yenidoğan Morbiditesinin Modellenmesi

Öğrenin fare modelinde vajinal aşılama ve örnek toplama tekniklerini kullanarak Candida vajinitisinde fungal yükü nasıl ölçeceğinizi. Bu yöntem immünolojik ve histolojik analizler için hücre izolasyonu sağlar.

Deneysel Fare Modeli Vajinal Aşılama ve Örnek Toplama Protokolleri Candida Vajinit

Daha fazla video keşfet