Uterus Doku Otomatik nakli Cerrahi indüklenen Endometriozis Fare Modeli

Bu prosedürün genel amacı, uterus dokusunun intestinal mezenterin arteriyel kaskadına otolog transferi yoluyla farelerde cerrahi olarak endometriozis indüklemektir. Bu işlem, öncelikle uterus endometriyumunun ligasyonu, çıkarılması ve açığa çıkarılması ile gerçekleştirilir. Prosedürün ikinci adımı, açığa çıkarılan endometriyumdan iki milimetrelik bir biyopsi punch'ı kullanarak üç adet endometrioid implant oluşturmaktır.

Prosedürün üçüncü adımı, üç endometrioid implantın intestinal mezenterin arteriyel kaskadındaki arterlere süture edilmesidir. Prosedürün son adımı ise karın duvarı ve derinin kapatılması ve hayvanın endometrioid lezyonları geliştirmesi için iyileşmeye bırakılmasıdır. Farelerden eksize edilen lezyonlar, histolojik analiz ile gen ve protein ekspresyon modelleriyle belirlendiği üzere, endometriozis hastası kadınlardaki lezyonlara benzemektedir.

Genel olarak, bu yöntemde yeni olan kişiler üç temel nedenden dolayı zorluk yaşarlar. Birincisi, fare dokularının çok küçük olmasıdır. İkincisi, intestinal mezenterin kolayca hasar görmesidir ve üçüncüsü, sütürlerin çok sıkı yerleştirilmesi durumunda bağırsak nekrozu gelişmesidir.

Analjezi ve anestezi solüsyonları da dahil olmak üzere, başarılı bir aseptik cerrahi için gerekli tüm cerrahi ekipmanları toplayarak başlayın. Hayvana inhale izofluran kullanarak anestezi uyguladıktan sonra, tam anesteziyi ayak parmağı sıkıştırma uyaranına verilen negatif yanıtla doğrulayın; cerrahi sırasında kurumayı önlemek için gözlere oftalmik pomad uygulayın ve ardından cerrahi bölgeyi küçük tıraş makineleriyle tıraş edin. Cerrahi bölgeyi klorheksidin solüsyonu ve %70 etanol ile sırayla üç kez silerek dezenfekte edin ve ardından hayvanı steril bir örtüyle örtün.

Küçük makas veya neşter ucu kullanarak, vajinal açıklığın 0,5 ila 1,0 santimetre rostralinde sonlanan küçük bir orta hat insizyonu yapın. Cerrahi alanın kapatılmasını kolaylaştırmak için vücut duvarını karın duvarından nazikçe künt diseksiyonla ayırın. Künt diseksiyondan sonra, karın duvarında küçük bir orta hat insizyonu yapın.

Ardından, küçük bir pens yardımıyla sol uterus kornusunu dikkatlice belirleyin. Uterus, insizyon bölgesine ilk girildiğinde genellikle görünen bağırsakların dorsalindedir; uterus kornusunu nazikçe yukarı çekin ve bir ekartör görevi görmesi için altına açık bir pens yerleştirin. Bu aşamada ovaryumların ve uterusun görünümünü not etmek de faydalı olacaktır.

Östrus döngüsü tarihlendirmesine yardımcı olmak için; gerilmiş uterus kornusunun altına 6-8 cm uzunluğunda beş sıfır (5-0) siyah örgü ipek sütür parçaları kaydırın. Kornusu, utero tübül bileşkesinden güvenli bir şekilde ligatize edin.

Fallop tüpüne ve utero-servikal bileşkeye düğüm atın. Her konumda kare düğüm kullanarak sütün uçlarını kesmeden bırakın. İki ligasyon arasındaki uterus boynuzu bölümünü kesin ve dokuyu, penisilin ve streptomisin içeren yaklaşık 100 µL PBS bulunan cam bir Petri kabına yerleştirin.

İpek sütürün uçlarını en son kesin. Sütür gevşerse veya kanama olursa, güdüğü bulun ve küçük bir makas kullanarak başka bir düğüm atın veya atmayın. Uterus kornundaki yağ tabakasını temizleyin.

Küçük bir makasın bir ucu lümen içine yerleştirilerek uterus kornu açılır. Kornu pensle tutarken, makas dikkatlice uterus kornu boyunca aşağı doğru kaydırılır. Cam Petri kabı içerisinde, iki milimetrelik bir biyopsi punch'ı kullanılarak eşit büyüklükte üç implant kesilir. Bu esnada implantların kurumamasına dikkat edilir.

Kesi bölgesinin hemen üzerine steril gazlı bez yerleştirin ve penisilin ile streptomisin içeren steril PBS ile iyice ıslatın. Sonraki adımlar boyunca küçük, düz uçlu pensler yardımıyla hidrasyonun korunması önemlidir. Sekumu nazikçe bulun ve ince bağırsak boyunca yavaşça ilerleyin.

Bağırsaktan dört ila beş santimetrelik küçük bir bölüm çıkarın ve intestinal mezenterin arteriyel kaskadı net bir şekilde görünecek şekilde önceden ıslatılmış gazlı bez üzerine yelpaze gibi yerleştirin. Bağırsağın her zaman steril salin ile nemli tutulduğundan emin olun. Bir implantı bir iğneye yerleştirin, ardından implantı bağırsağın yaklaşık 0.5 santimetre uzağındaki bir artere nazikçe sabitlemek için 6-0 siyah alon sütür kullanın.

Yalnızca bir adet kullanın. Forseps üzerinden atın ve sütürü çok sıkı bağlamayın. Çünkü bunu yapmak kan akışının kaybına ve ardından bağırsağın nekrozuna yol açabilir.

Bir adetle iki düğüm tamamlayın, her birini sıkın ve sütürü implantın iki milimetre yakınından kesin, bağırsağı hidrate edin. Ardından rostral yönde ilerleyin. Bağırsağın sonraki üç ila dört santimetresini dışarı çıkarın ve halihazırda implant içeren bölümü nazikçe yerine yerleştirin.

Önceki implant bölgesinden bir veya iki arter atlayarak bir sonraki implantı sütürleyin; üçüncü implant için aynı işlemi tekrarlayın. Son olarak, karın duvarını sütürleyin ve cildi yara klipsleri ile kapatın. Cerrahi bölgeyi kapattıktan ve analjezikleri uyguladıktan sonra, hayvan iyileşene kadar, kısmen sirkülasyonlu ısıtmalı su pedinin üzerine gelecek şekilde, ventral tarafı aşağıya gelecek şekilde kafese yerleştirin.

Endometrioid lezyonları geri kazanmak için intestinal mezenterdeki siyah süturları bulun. Her bir endometrioid lezyonun uzunluğunu ve genişliğini kumpas kullanarak ölçün. Endometrioid lezyonları, onları delmemeye dikkat ederek diseke edin.

Lezyondan endometrioid olmayan tüm dokuları uzaklaştırın. Sütürü çıkarmadan önce sıvı dolu üç endometrioid lezyonu sallayın. Sütürü nazikçe çıkarın ve endometrioid lezyonların ikisini kesin.

Doku işlemeye geçmeden önce bunları tekrar tartın. Ardından kalan uterus kornusunu eksize edin ve tartın; hem kadınlarda hem de burada gösterilen fare modelinde endometriozis üzerine yapılan histolojik analizler, endometrioid lezyonun endometrial bezler ve stroma içerdiğini göstermektedir. Farelerdeki endometriotik lezyonlar, kadınlardaki endometriozisin yaygın bir belirteci olan hemosiderin yüklü makrofajları da içerir. İndüksiyondan üç gün sonra farelerden çıkarılan endometrioid lezyonlar, solda gösterildiği gibi, iki ila dört haftalık büyümeden sonra enflame ve hemorajik görünür.

Fare modelindeki endometriotik lezyonlar, indüksiyon sırasındaki lezyon ağırlığına kıyasla kist benzeri, sıvı dolu ve peritoneal adezyonlarla çevriliydi. Sıvı dolu lezyonlar, indüksiyondan bir ve iki ay sonra sırasıyla %306 ve %862 daha büyükken; lans lezyonlar ise sırasıyla %51 ve %172 daha büyüktü. Sıvı dolu ve lad endometrioid lezyon.

Bu prosedürün uygulandığı beş farklı deneyde, indüksiyondan bir ay sonra ağırlıklar tutarlı kalmıştır. Bu model, endometriozisin patofizyolojisi hakkındaki soruları yanıtlamak ve bu hastalıkla ilişkili ağrı ve infertilite tedavisi için yeni terapötik yöntemler araştırmak amacıyla kullanılabilir.