Name: Bir Ortotopik Fare Beyin Tümörü Modelinde Kombinasyon Radyoterapi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-03-06T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 2 s
Description: Öğrenin, fare beynine glioblastoma hücreleri implantasyonu ve kombinasyon radyoterapi uygulamalarını. Bu yöntem, yeni tedavi stratejilerinin değerlendirilmesi için güvenilir bir ortotopik model sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu araştırma NIH Intramural programından fon tarafından desteklenmektedir.

I. Hücre Hazırlık <ol><li> Hücreler implante edilmesi her 5 fareler için bir 80% konfluent 225 cm 3 şişeyi yaklaşık% 10 FBS ile DMEM birleştiği yetiştirilmektedir. </li><li> Hücre kapama ortamı aspire; kalsiyum veya magnezyum olmaksızın PBS ile 10 ml ile yıkanır. Aspirat PBS kapalı hücreler. </li><li> Tripsin 3 ml hücreleri Trypsinize, 10-15 dakika bekleyin ve medya 15 ml tripsin nötralize. </li><li> Pipet bir 50 ml konik içine tüm hücreleri ve medya. İki büyük şişeler biri 50 ml konik içine sığacak. </li><li> 4 ° C'de 7 dakika boyunca 1600 rpm'de hücreleri Spin Tamamen süpernatant aspire. Soğuk PBS 10 ml hücre süspansiyon hale getirin ve yavaşça aşağı pipetleme ve hücreleri durulayın. Hücre pelletini PBS ile eşit karıştırılarak emin olun. Süspansiyon bulanık olmalıdır. </li><li> Şu anda bir hücre sayımı coulter sayacı kullanılarak yapılır. Hücreler 4 ° C'de 7 dakika boyunca 1600 rpm'de santrifüje tabi tekrar edilir </li><li> Hücrelerinin 2. santrifüjleme gibi sonraPBS 1 ml korsan tüm PBS ve Pastör pipetiyle. </li><li> Hücreler 4 ° C'de 10 dakika süre ile 3000 rpm'de 1 ml PBS içinde bükülmüş edilir PBS aspire edilir, ve PBS U87 hücreleri için 5 ul başına 1x10 6 ila son konsantrasyon ayarlamak için eklenmektedir, diğer hücre çizgileri optimum tümör büyümesi için hücreleri, farklı sayıda ve konsantrasyon gerektirebilir. </li><li> Son hacim ve konsantrasyon elde edildikten sonra hücreler bir Eppendorf tüpüne buz üzerinde tutulur. </li></ol> II. Xenograftlarında <ol class="ualpha"><li> Farenin hazırlanması <ol><li> Fareler Ketamin / Ksilazin / Tuzlu bir enjeksiyon karışımını kullanarak anestezi uygulanmıştır. Karışım 120 Ketamine, 16 mg / spinal anestezi ve tuzlu su kg mg / kg 'dır. Fareler bireysel tartılmış ve ağırlık temelinde 10 g başına 0.1 ml verilmiştir. Anestezi 1 ml şırınga IP bağlı 26G iğne ile verilir. Hiçbir ağrı yanıt için bir uyku safhaya fareler için yaklaşık 15 dakika sürecektir. Bu ağrı yanıtı kontrol edebilirsinizonların haydut sıkıştırarak fareler. </li><li> Fare tamamen uyuşturulduktan sonra, göz merhemi kurumasını engellemek için gözlerini tatbik edilmiştir. </li><li> Fare ağız çubuğundaki çentik ön üst dişler ile stereotaksik yatağına yerleştirilir. Daha sonra oda stereotaksik yerleştirilir. </li><li> Burun koruma baş hareketini önlemek için, ve kulak çubukları hafifçe farelerin kulak kanalları yerleştirmek olan farenin burnunun üzerine yerleştirilir. Kafatası kırık ve / veya nefes almasını engelleyebilir fare gibi, burun çubuğu ya da çok sıkı kulak çubukları ya yerleştirme yapmak için dikkatli olun. </li><li> Fare kafası stereotaksik üzerindeki onay işareti kullanarak seviyesi bu süreçte yararlı olduğundan emin olun. </li><li> Hazırlık için fare, alkol ve providine iyot iyot alkol ve 3 uygulamanın 3 uygulama toplam alternatif farenin başına bolca uygulanır. % 70 olan bir alkol pedi biri nihai uygulama içinkafası. </li></ol></li><li> Cerrahi girişim <ol><li> Prosedüründe tüm enstrümanlar prosedürü başlamadan önce% 70 etanol araçları otoklav veya iliklerine yoluyla sterilize edilmelidir. </li><li> Bir insizyon çapraz geri kafatasının sol arka için sağ göz arkasında kafatası üstüne yapılır. Kesi 10 mm uzunluğunda 15 mm olmalıdır. </li><li> Bir Q-tip kullanarak, yavaş yavaş kafatası maruz ve kafatası ve cilt arasında membran silip için kesi ayırın. Aşırı kanama için herhangi bir kan kurulayın ve izlemek için bir Q-ucu kullanın. </li><li> Bregma görselleştirmek için kafatasının üst Açığa. Hamilton enjektörü noktasını kullanarak, bregma üzerine getirin. Kafatasında açılacak deliğin doğru pozisyonda 2 mm sağ ve bregma (Şekil 2) anterior 1 mm'dir. Steril satın alındığında bir cerrahın keçeli işaretleyici, açılacak deliğinin yeri işaretlemek için kullanılır. Delik bir yakın bulunan unutmayınposterior sütür hattı. </li><li> Sonra, bir 18G iğne ile bir iğne vazo ya da beslenen bir 22G iğne noktası kullanarak işaretli konumda kafatasına küçük bir delik açın. </li><li> Hücrelerin 5 ul ile 10 ul cam Hamilton şırınga yerleştirin. Hamilton enjektörü ile ona bağlı 33G sabit iğneli bir künt 30G ile 10 ul olduğunu. Onları pipetleme ya bağlı bir 25G iğne ile 1 ml şırınga kullanılarak, ya yüklemeden önce hücreleri karıştırmak için emin olun. Hamilton enjektörü yüklendikten sonra, kafatasında delik ile sıraya kolunda geri koyun. </li><li> Iğne kafatası ile seviyesini bir kez, kafatasının yüzeyine iğne bunt sonuna indirin; bu kafatasının yüzeyinin altında 3 mm derinliğe kadar iğne indirin. </li><li> Iğne indirdi sonra, beyin etkileyen iğne herhangi bir majör travma önlemek için 2 dakika için orada kalacaktır. Hücreler implante 6-8 dakika toplam için dakikada 1 ul'lik bir hızda olan, herhangi bir backflo dikkatli olmakw. Hücreler son implante edildikten sonra, bütün hücrelerin in getirilmesi için izin vermek üzere, bir 2 dakika süreyle bir yerde iğne terk </li><li> Beyinden iğne çıkarın ve bir Q-tip ile delik temizleyin. Her bir çözüm ve bu sırada 3x% 50 Actone,% 100 EtOH ve PBS ile iğne ve şırınga temizlemek için devam edin. </li><li> Kafatası üzerinde cilt bu noktada dikilerek üzere hazırdır. 5-0 kullanma PBS yaklaşık 3 dikiş ile kesi kapatın. </li><li> Fare bir ısı yastığı uyanmak için izin ver, ve gerekirse göz merhemi yeniden uygulayın. Kendi kendine hareket gösterir sonra fare kafesine iade edilebilir (yani başını yukarı kaldırılması veya omuzları hareket). </li></ol></li></ol> III. Radyasyon ve Uyuşturucu ile IC implant tedavisi <ol class="ualpha"><li> Radyasyon tedavisi <ol><li> Hücre hattı bağlı olarak, farelerin tedavisi 7 gün post-implant yerine 5 alabilir. Bölümümüz radyasyon tedavi için bir orthovoltage radyoterapi ünitesi kullanırMent. </li><li> Böyle BLI (Biyolüminesens Görüntüleme), MR veya BT gibi görüntüleme öncesinde randomizasyon (şekil 3A) tümör görselleştirmek için kullanılabilir. </li><li> Farelerde önceki gibi Ketamine / Xylazine / salin kokteyli ile anestezi uygulanmıştır, merhem ve göz gözlerine uygulanır. </li><li> Fareler farelerin başları merkezine doğru işaret edildiği bir pasta tekerlek gibi yapılandırılmış bir ölçüye radyasyon jig konumlandırılmıştır. Farelerin organları kurşun radyasyon korumalıdır. </li><li> İlaç tedavisi farklı teslimat yollarının, yani SQ, IP ve IV aracılığıyla önce ya da radyasyon da verilebilir. </li></ol></li></ol> IV. Sonuçlar Fare anestezi enjeksiyonu takiben 45-60 dakika içinde prosedürü uyanmak gerekir. Fare zor işlemden sonra uyanma ve süresi 1 aştı ½ saat işlemden sonra, fare kurtarmak olmayabilir ve ötanazi etkili bir alternatif olabilir. Eğer there aşırı kanama veya prosedür ötanazi sırasında herhangi bir noktada kırık kafatası olur tavsiye edilir. Tüm iyi ve hücre serisine bağlı olarak giderse prosedürü gerçekleşecek olan sonra, bir tümör 2-4 hafta içinde oluşturan başlamalıdır. Intrakraniyal xenograft modelleri kullanırken, terapötik etkinlik genellikle hayatta implantasyon sonrası 5 olarak ölçülür. Ancak, bu gibi bir IC modeli belirti ve bulgular önce ölüm meydana gelir. Fare görülebilir fiziksel belirtileri bazıları bir kambur duruş, vücut ağırlığı kaybı ve hareketsizlik vardır. Nörolojik bulguların bazıları nöbetler, baş eğme ve denge kaybı olabilir. Şekil 3B bir HE ölüm bir tümörün leke gösterir. Bir Kaplan-Meier arsa verileri (Şekil 4) değerlendirmek için kullanılır. % 50 hayatta kalma gün sayısı hesaplanır ve kontrol ile karşılaştırılmıştır. Bileşimi grubu bireysel radyasyon ve ilaç kollarının Ayrıca daha uzun yaşasaydınız kombinasyonu başarılı edilir. <img alt='"Şekil' src="/files/ftp_upload/3397/3397fig1.jpg" files> Şekil 1. Stoelting Stereotaksik ekipmanları. <img alt="Şekil 2" src="/files/ftp_upload/3397/3397fig2.jpg"> Şekil 2. Fare kafatasında açılan deliğin yerini şeması. <img alt="Şekil 3A" src="/files/ftp_upload/3397/3397fig3A.jpg"> GBM implantasyonu sonrası Şekil 3A. BLI görüntüleme. <img alt="Şekil 3B," src="/files/ftp_upload/3397/3397fig3B.jpg"> Şekil 3B. Ölüm H ve GBM tümör D. <img alt="Şekil 4" src="/files/ftp_upload/3397/3397fig4.jpg"> Şekil 4. PARP inhibitörü 7 gün sonrası cerrahi ile enjekte U87 IC implantların Sonuçları.

<ol><li>Bleau, A. M., Holland, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trapping+the+mouse+genome+to+hunt+human+alternations%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Nat.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Trapping the mouse genome to hunt human alternations.</a> Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A. 104, 7737-7738 (2007).</li>
<li>McGrady, B. J., McCormick, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+murine+model+of+intracranial+invasion%3A+morphological+observations+on+central+nervous+system+invasion+by+melanoma+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Exp.+Metastasis%22%5BJournal%5D)">A murine model of intracranial invasion: morphological observations on central nervous system invasion by melanoma cells.</a> Clin. Exp. Metastasis. 10, 387-393 (1992).</li>
<li>Fei, X., Zhang, Q., Dong, J., Diao, y, Wang, Z., Li, R., Wu, Z., Wang, A., Lan, Q., Zhang, S., Huang, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+clinically+relevant+orthotopic+xenograft+mouse+model+of+metastatic+lung+cancer+and+glioblastoma+through+surgical+tumor+tissues+injection+with+trocar%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Experimental+%26+Clinical+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Development of clinically relevant orthotopic xenograft mouse model of metastatic lung cancer and glioblastoma through surgical tumor tissues injection with trocar.</a> Journal of Experimental & Clinical Cancer Research. 29, 84-84 (2010).</li>
<li>Fujita, M., Zhu, X., Sasaki, K., Ueda, R., Low, K., Pollack, I., Okada, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+STAT3+Promotes+the+Efficacy+of+Adoptive+Transfer+Therapy+Using+Type-1+CTLs+by+Modulation+of+the+Immunological+Microenvironment+in+a+Murine+Intracranial+Glioma%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Inhibition of STAT3 Promotes the Efficacy of Adoptive Transfer Therapy Using Type-1 CTLs by Modulation of the Immunological Microenvironment in a Murine Intracranial Glioma.</a> J. Immunol. 180, 2089-2098 (2008).</li>
<li>Candolfi, M., Curtin, J. F., Nichols, W. S., Muhammad, A. K. M. . G., King, G., Pluhar, G. D., McNiel, G. E., Ohlfest, E. A., Freese, J. R., Moore, P. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracranial+glioblastoma+models+in+preclinical+neuro-oncology%3A+neuropathlogical+characterization+and+tumor+progression%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurooncol%22%5BJournal%5D)">Intracranial glioblastoma models in preclinical neuro-oncology: neuropathlogical characterization and tumor progression.</a> J. Neurooncol. 85, 133-148 (2007).</li>
<li>Kaye, A., Morstyn, G., Gardner, I., Pyke, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+xenograft+glioma+model+in+mouse+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Development of a xenograft glioma model in mouse brain.</a> Cancer Research. 46, 1367-1373 (1986).</li>
<li>Zhao, Y., Xiao, A., diPierro, C., Carpenter, J., Abdel-Fattah, R., Redpath, G., Lopez, M., Hussaini, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+Extensive+Invasive+Intracranial+Human+Glioblastoma+Xenograft+Model%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Pathology%22%5BJournal%5D)">An Extensive Invasive Intracranial Human Glioblastoma Xenograft Model.</a> American Journal of Pathology. 176, 3032-3049 (2010).</li>
<li>Learn, C., Grossi, P., Schmittling, R., Xie, W., Mitchell, D., Karikari, I., Wei, Z., Dressman, H., Sampson, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+Analysis+of+Intracranial+Tumors+in+a+Murine+Model+of+Glioma+Demonstrate+a+Shift+in+Gene+Expression+in+Response+to+Host+Immunity%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neuroimmunol%22%5BJournal%5D)">Genetic Analysis of Intracranial Tumors in a Murine Model of Glioma Demonstrate a Shift in Gene Expression in Response to Host Immunity.</a> J. Neuroimmunol. 182, 63-72 (2007).</li>
<li>Martens, T., Laabs, Y., Günther, H., Kemming, D., Zhu, Z., Witte, L., Hagel, C., Westphal, M., Lamszus, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+Glioblastoma+Growth+in+a+Highly+Invasive+Nude+Mouse+Model+Can+Be+Achieved+by+Targeting+Epidermal+Growth+Factor+Receptor+but+not+Vascular+Endothelial+Growth+Factor+Receptor-2%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Inhibition of Glioblastoma Growth in a Highly Invasive Nude Mouse Model Can Be Achieved by Targeting Epidermal Growth Factor Receptor but not Vascular Endothelial Growth Factor Receptor-2.</a> Clin. Cancer Res. 14, 5447-5458 (2008).</li>
<li>Purow, B., Schiff, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+the+genetics+of+glioblastoma%3A+are+we+reaching+critical+mass%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Neurol%22%5BJournal%5D)">Advances in the genetics of glioblastoma: are we reaching critical mass.</a> Nat. Rev. Neurol. 5, 419-426 (2009).</li>
</ol>

Biz ifşa hiçbir şey yok.

Gibi glioblastoma multiforme Malign gliom, en sık rastlanan primer beyin tümörleri temsil ve kasvetli bir prognoz 4 var. GBM etkilenen hastaların sağkalım cerrahi, radyasyon ve kemoterapi 5 gelişmelere rağmen (9-12 yani ay sonrası tanı) son on yılda hemen hemen hiç değişmedi. Hücrelerinin, insan gliom histolojik özellikleri mümkün olduğunca yakın benzerlik olmalıdır;; tahmin edilebilir bir büyüme olmalıdır glioma muamele çalışma için uygun bir model özellikleri tekrarlanabilir bir tümör büyümesi ko...

<table border="1"><tbody><tr><td> Lab Standart Stereotaksik Instrutment </td><td> Fare ve Rat Adaptör Stoelting </td></tr><tr><td> Betadine </td><td> % 100 EtOH </td></tr><tr><td> % 70 EtOH </td><td> % 50 aseton </td></tr><tr><td> 6 &quot;Q-ipuçları </td><td> Alkol swablar </td></tr><tr><td> Hamilton enjektörü 80.008 </td><td> Ethicon 5-0 PD </td></tr><tr><td> 1701 SN 31-33G / 1 &quot;/ PT3 iğne </td><td> 1 ml şırınga </td></tr><tr><td> 25G iğne </td><td> Isıtma pedi </td></tr><tr><td> Suni gözyaşları Merhem </td><td> Çok ince uçlu kalıcı bir kalem </td></tr></tbody></table>

bir ortotopik fare beyin tümörü modelinde kombinasyon radyoterapi

Combination Radiotherapy in an Orthotopic Mouse Brain Tumor Model

Glioblastoma multiforme (GBM) 1 en yaygın ve agresif erişkin primer beyin tümörlerdir. Son yıllarda da, tümör mekaniğinin anlaşılması konusunda önemli ilerleme olmuştur ve tümörün doğrudan intraserebral inokülasyonu fizyolojik olarak uygun ortamda 2 invaziv süreci gözlemleme fırsatı sağlar etti. Bildiğim kadarıyla insan beyin tümörleri ile ilgili olarak, mevcut ortotopik modelleri karmaşık bir kraniotomi prosedürü 3 ile tümörün sağlam bir parça hücre süspansiyonları veya implantasyon stereotaksik enjeksiyon yoluyla kurulur. Bizim teknik olarak beynin doğrudan implant kullanılan bir hücre süspansiyonu oluşturmak için doku kültürü hücreleri toplamak. Cerrahi süresi yaklaşık 30 dakika ve fare sabit bir cerrahi düzlemi içinde olması gerekmektedir olarak, enjekte edilebilir bir anestezik kullanılır. Fare Stoetling (Şekil 1) tarafından yapılan bir stereotaksik jig yerleştirilir. Kıçtaer cerrahi alan temizlenir ve hazırlanır, bir kesi yapılır ve bregma kraniotomi yerini belirlemek için yer almaktadır. Kraniotomi yeri sağ 2 mm ve bregma için rostral 1 mm&#39;dir. Derinliği kafatası yüzeyinden 3 mm&#39;dir ve hücreler 2 ul her bir 2 dakika arasında bir hızla enjekte edilir. Cilt 5-0 PDS ile sütüre edilir ve farenin bir ısıtma yastığı uyanmak için izin verilir. Bizim deneyim, hücre serisine bağlı olarak, cerrahi tedavi sonrası 7-10 gün arasında yer alabilir. İlaç dağıtım ilaç bileşimi bağlıdır. Radyasyon tedavisi için fareler anestezi, ve jig yapılan özel koymak. Kurşun farenin vücudu kaplar ve farenin sadece beynin ortaya koyar. Tümörogenez ve GBM için yeni tedavilerin değerlendirilmesi çalışması doğru ve tekrarlanabilir beyin tümörü hayvan modelleri gerektirir. Böylece YÜRÜRLÜK test etmek, beynin mikro ve tümörün etkileşimi incelemek için bu ortotopik beyin modeli kullanınradyasyon olan ve olmayan farklı terapötik ajanların ess.

Bu makalenin amacı, kemoradyoterapi çalışmaları için ortotopik glioblastoma modelinin kullanımı tanımlamaktır. Bu makale implante, hücre işleme rağmen gitmek ve bir intrakraniyal modeli kullanarak farenin radyoterapi olacaktır.

Bir Ortotopik Fare Beyin Tümörü Modelinde Kombinasyon Radyoterapi

Glioblastoma multiforme (GBM), erişkinlerde görülen en yaygın ve agresif primer beyin tümörleridir1. Son yıllarda ... konusunda önemli ilerlemeler kaydedilmiştir.

Bu prosedürün genel amacı, bir fare beynine intrakraniyal olarak implante edilen glioblastom hücrelerini tanımlamak, göstermek ve tedavi etmektir. Bu işlem, öncelikle hücrelerin hazırlanması ve ardından hücrelerin fare beynine implante edilmesiyle gerçekleştirilir. Cerrahi prosedürden sonra, beyinde çeşitli tedavilerle deneyler yapılabilecek bir tümör gelişir.Nihayetinde, bir sağkalım eğrisi tedavinin etkili olup olmadığını gösterebilir. Bu tekniğin doğurguları, ilaçlar ve radyasyon gibi yeni tedavilerin doku kültürüyle karşılaştırıldığında test edilmesi için daha etkili bir yol olabileceği için glioblastoma tedavisine kadar uzanmaktadır. U 87 hücreleri gibi ilgili hücreleri %80 konfluense ulaşana kadar büyüterek başlayın. %10 FBS içeren DMEM ile bir adet 225 cm³'lük flask, beş fareye implantasyon yapmak için yeterli hücre sağlayacaktır; hücrelerin üzerindeki medyumu aspire edin ve hücreleri 10 mL kalsiyum veya magnezyum içermeyen PBS ile manuel sallama yöntemiyle kısaca yıkayın.Yıkama solüsyonu aspire edildikten sonra, 10 ila 15 dakika sonra hücrelere tripsin uygulanır, ardından tripsin 15 mililitre besiyeri ile nötralize edilir. Şimdi tüm hücreler ve besiyeri 50 mililitrelik konik bir tüpe aktarılır. İki flasktaki hücreler tek bir tüpe sığacaktır.Hücreleri 1600 RPM'de yedi dakika boyunca santrifüjleyin ve süpernatantı aspirasyon yoluyla tamamen uzaklaştırın. Pellet'i 10 mililitre soğuk PBS içinde yeniden süspanse edin ve hücreler homojen, bulanık bir süspansiyon oluşturana kadar çözelti içinde nazikçe pipetleyerek yıkayın. Hücre konsantrasyonunu bir hücre sayacı kullanarak ölçtükten sonra, optimal tümör büyümesi için PBS yıkama işlemini tekrarlayın.U 87 hücrelerinin final konsantrasyonunu mikrolitre başına 200, 000 hücre olacak şekilde ayarlayın. Diğer hücre hatları, optimal tümör büyümesi için farklı bir konsantrasyon gerektirebilir. Enjeksiyon için hazırlanan hücreleri buz üzerinde tutun ve hayvanın hazırlanmasına geçin.Konak farelere anestezik uygulayarak fareleri hazırlamaya başlayın. Yaklaşık 15 dakika sonra, ayak parmağı sıkıştırma testi ile farelerin ağrıya duyarsızlaştığını kontrol edin. Anestezi uygulandıktan sonra, gözlerin kurumasını önlemek için gözlere merhem sürün.Ardından fareyi stereotaksik çerçeve yatağına yerleştirin. Dişleri ağız barındaki çentiğe takın. Daha sonra yatağı çerçeveye konumlandırın.Şimdi başı sabitlemek için fareye bir burun koruyucusu takın ve ardından kulak barlarını nazikçe kulak kanallarına yerleştirin. Kafatası kırılabileceği veya fare boğulabileceği için bu barlardan herhangi birini çok sıkı takmayın. Bu noktada, başın düz olduğundan emin olun.Son hazırlık aşamasında, baş bölgesi alkol ve iyot ile sırasıyla üçer kez silinmeli ve işlem dördüncü bir alkol uygulamasıyla tamamlanmalıdır. İmplantasyon cerrahisine, sağ gözün arkasından başlayıp kafatasının sol arka kısmına doğru diyagonal olarak uzanan bir insizyonla başlayın. İnsizyon yaklaşık 10 ila 15 milimetre uzunluğunda olmalıdır.Kafatası açığa çıkacak şekilde insizyonu yavaşça ayırmak için bir pamuklu aplikatör kullanın, kafatası ile deri arasındaki membranı silin ve kanı veya aşırı kanamayı tamponla temizleyin. Şimdi, bgma'yı görselleştirin ve keçeli kalem kullanarak üzerine 10 µL'lik bir cam Hamilton şırıngasının konumunu belirleyin. bgma'nın 2 mm sağına ve ön sutür hattına yakın 1 mm önüne bir işaret koyun.Şimdi şırıngayı çıkarın ve kafatasında işaretlenen konumda küçük bir delik açın. Matkap ucu, 22 gauge iğne boyutundadır. Delme işleminin kafatasında kendiliğinden gerçekleşmesine izin verin.Ek bir basınca gerek yoktur. 30 ila 33 gauge iğne uçlu bir şırınga kullanarak, şırıngayı iyi karıştırılmış hücrelerden 5 µL ile doldurun ve ardından şırıngayı çerçeveye yeniden takın. İğneyi kafatasındaki delikle hizalayın ve kafatası yüzeyinden başlayarak yüzeye doğru indirin.İğneyi üç milimetre aşağı indirin ve iki dakika bekleyin. Bu bekleme süresi travma olasılığını azaltır. Hücreleri dakikada yaklaşık bir mikrolitre hızla implante etmek için pistonu yavaşça bastırın.Hücrelerin sonuncusu implante edildikten sonra herhangi bir geri akış olmamasına dikkat edin. Tüm hücrelerin yerleşmesine izin vermek için iğneyi iki dakika daha yerinde bırakın. Bekleme süresinin ardından iğneyi beyinden nazikçe geri çekin ve deliği bir pamuklu aplikatör ile dikkatlice temizleyin.Şimdi 5-0 PBS sütür kullanarak, insizyonu yaklaşık üç dikişle kapatın. Fareyi bir ısıtma pedine yerleştirin ve gerekirse göz pomadını tekrar uygulayın.Fare başını kaldırdığında veya omuzlarını hareket ettirdiğinde, onu kendi kafesine geri koyun. Anestezi enjeksiyonundan itibaren bu prosedür 30 ile 60 dakika arasında sürer. Fare 90 dakika sonra hala kıpırdamamışsa, fare iyileşmeyebilir ve ötanazi etkili bir alternatif olabilir.Ayrıca, işlem sırasında herhangi bir noktada aşırı kanama olması veya kafatasının çatlaması durumunda ötanazi önerilir. Hücre hattına bağlı olarak, farelerin radyasyon tedavisi implantasyondan beş ila yedi gün sonra gerçekleştirilebilir. Örneğin, radyasyon tedavisi için bir ortho voltage radyoterapi ünitesi kullanılabilir.Fareleri deney gruplarına rastgele ayırmadan önce, tümörü görüntülemek için B-L-I-M-R-I veya BT gibi görüntüleme teknikleri kullanın. Hücre implantasyonundan sonra, tümörler kullanılan hücre hattına bağlı olarak genellikle iki ila dört hafta içinde oluştu. Ölüm gerçekleştiğinde, tümörü incelemek için beyin dokuları üzerinde boyama işlemi gerçekleştirildi.Tedavi etkinliğinin önemli bir değerlendirme yöntemi, Kaplan-Meier sağkalım eğrisinin çizilmesidir. Bu yöntem; ilaç tedavisi, radyasyon tedavisi veya kombine tedavi uygulanan hayvanların enjeksiyon sonrası ortalama yaşam sürelerini karşılaştırır. Bu gelişmenin ardından, söz konusu teknik, onkoloji alanındaki araştırmaların beyin tümörleri ve fareler üzerindeki tedavileri keşfetmesinin önünü açmıştır.

combination-radiotherapy-in-an-orthotopic-mouse-brain-tumor-model

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Beyin tümörlü hastalarda rutin kranial radyoterapi ve zayıflatıcı bilişsel işlev bozukluğu yararlı, bu tedavi genellikle sonuç. Bu ciddi bir çözülmemiş sorun, şu anda herhangi bir klinik rücu ve radyasyona bağlı bilişsel azaltır kurtarma için kök hücre temelli tedaviler hazırlamak için çabalarımızı tahrik vardır.

Kranial Radyoterapi neden Bilişsel Disfonksiyon Restorasyon Kök Hücre Transplantasyon Stratejileri

Biz çıplak farelerin ve sonraki seri beyinlerine insan glioblastoma multiforme hücrelerinin hassas, stereotaktik implantasyon için tümleşik bir yöntem...

Stereotaktik intrakranial implantasyon ve<em&gt; In vivo</emGlioblastoma Multiforme bir Mouse Model Sistemde Tümör Xenografts arasında&gt; Bioluminescent Görüntüleme

Video, bir fare modelinde meme kanseri ortotopik aşılama tekniğini göstermektedir. Bu teknik, deri altı veya cerrahi olmayan enjeksiyona kıyasla tümör boyutu ve şeklinde daha az değişkenlik ile yüksek bir tümör oluşumu oranı üretir.

Ortotopik Enjeksiyon: Dokuya Özgü Kanser Hücrelerinin Yetişkin Bir Fareye İmplante Edilmesi

Bu video, intrakraniyal enjeksiyon yapılarak fare beynine tümör hücrelerinin implantasyonunu göstermektedir.

İntrakraniyal Ortotopik Model: Fare Beynine Kanser Hücrelerini İmplante Etme Prosedürü

Geçmişte, küçük hayvan ışınlama genellikle iyi arasındadır tümör cilt hedef yeteneği olmadan gerçekleştirildi. Sıçanlarda insan glioblastoma tedavisinde taklit etmek için hedefi oldu. Küçük hayvan ışınlama platformu kullanarak, evde beslenen hayvan tabanlı alt birim preklinik bir ortamda artırılması ile MRI destekli 3D açıkorur ışınlama gerçekleştirilen.

Bir mikro-irradiator kullanarak Glioblastoma fare modeli ışınlama güdümlü evde beslenen hayvan ve MRI

Burada, orthotopic insan birincil beyin tümörü taşıyan immünyetmezligi farelerde hazırlık ve allojenik insan lenfosit stereotaksik yönetim için bir iletişim kuralı mevcut. Bu çalışmada bir kanıtı-of-concept fizibilite ve hücresel immunotherapies intrabrain teslim antitümör etkinliği için sağlar.

Orthotopic insan Glioblastoma Multiforme Xenografts fare modelleri sitotoksik bağışıklık hücrelerinin stereotaksik evlat edinen Transfer

Pluripotent kök hücre kaynaklı teratomas tedavi stratejileri araştırma kök hücre tedavisi klinik çeviri için önemlidir. Burada, ilk olarak, fare ve daha sonra seçmeli olarak hedef için kök hücre kaynaklı teratomas oluşturmak ve bu tümörler içinde bir küçük-hayvan irradiator kullanarak vivo görmek için bir protokol açıklayın.

Pluripotent kök hücre kaynaklı Teratomas Dış Beam radyasyon bir küçük-hayvan modelinde kullanarak hedeflenen ve seçici tedavisinde

İntrakraniyal beyin metastazı modellemesi, tümör boyutunun izlenememe ve tedaviye tam ve zamanında yanıt verilememesi ile karmaşıktır. Sunulan metodoloji çiftler manyetik rezonans görüntüleme analizi ile intrakranial tümör enjeksiyonu, kombine edildiğinde, hassas ve tutarlı enjeksiyonlar, gelişmiş hayvan izleme ve doğru tümör hacmi ölçümleri yetiştirir.

İntrakraniyal Enjeksiyon ve Manyetik Rezonans Görüntüleme Ile Beyin Metastazlarının Modellenmesi

Burada, doğruluk ve verimliliği optimize etmek için şirket içinde geliştirilen algoritmaları kullanarak bir sıçan glioblastoma modelinde preklinik pozitron emisyon tomografisi tabanlı radyoterapi yapmak için bir protokol sunuyoruz.

Küçük Hayvan Radyasyonu Araştırma Platformu kullanılarak Glioblastoma Rat Modelinde Pozitron Emisyon Tomografi tabanlı Doz Boyama Radyasyon Tedavisi

Burada, genetiği değiştirilmiş fare modeli tümörlerinden türetilen hücrelerin intrakraniyal enjeksiyonu ile kurulan GBM için klinik öncesi bir ortotopik fare modelini tarif ediyoruz. Bu model, insan GBM'sinin hastalık özelliklerini gösterir. Translasyonel çalışmalar için, fare beyin tümörü in vivo MRG ve histopatoloji ile izlenir.

Glioblastoma multiforme'un Translasyonel Ortotopik Modelleri

Ortotopik pediatrik beyin tümörü modellerinin geliştirilmesi, kanser hücrelerini hassas bir şekilde implante etmek için stereotaksik bir cihaz kullanarak titiz bir hassasiyet gerektirir. Burada sunulan metodoloji, beyin tümörü hücrelerinin hazırlanması, intrakraniyal enjeksiyonların gerçekleştirilmesi ve beyin tümörü aşılanmasını değerlendirmek için ameliyat sonrası bir izleme sisteminin uygulanmasında yer alan adımları özetlemektedir.

Stereotaksik Cihaz Kullanılarak Beyin Tümörleri İçin Ortotopik Hasta Kaynaklı Ksenogreft Modellerinin Oluşturulması

Öğrenin, fare beynine glioblastoma hücreleri implantasyonu ve kombinasyon radyoterapi uygulamalarını. Bu yöntem, yeni tedavi stratejilerinin değerlendirilmesi için güvenilir bir ortotopik model sunar.

Bir Ortotopik Fare Beyin Tümörü Modelinde Kombinasyon Radyoterapi

Daha fazla video keşfet