Intracellular Refolding Assay

Tamara Vanessa Walther; Danilo Maddalo

doi:10.3791/3540

JoVE Journal
Biology

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Biology

Intracellular Refolding Assay

Hücre içi Refolding Testi

Full Text

14,779 Views

07:18 min

January 24, 2012

DOI: 10.3791/3540-v

Tamara Vanessa Walther¹, Danilo Maddalo¹

¹Institute of Toxicology and Genetics,Karlsruhe Institute of Technology

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Bu protokol ısı şok sonra hücre içi protein refolding ölçmek için bir yöntem açıklanmıştır. Bu yöntem, faaliyetlerini etkilemek için moleküler şaperonlar ve bunların eş-faktörleri veya bileşikleri gibi foldases incelemek için kullanılabilir. Firefly lusiferaz aktivitesini muhabir olarak hastabakıcı refolding aktivitesini ölçmek için kullanılır.

Aşağıdaki deneyin genel amacı, ısı şokundan sonra yeniden katlanan şaperona bağımlı hücre içi proteini ölçmektir. Bir lusiferaz raportörü kullanarak, önce hücreleri, lusiferaz raportör genini ve ilgilenilen şaperonu kaplayan plazmitlerle transfekte edin. Ardından, deneysel tasarımda kurtarma zaman noktaları için transfekte edilmiş hücreleri bölün.

Ertesi gün, proteinin açılmasını sağlamak için hücrelere ısı şoku verir. Hücre içi protein katlanmasını yeniden kazanmak için iyileşmeye izin verin ve ardından lusiferaz raportör aktivitesini ölçün. Sonuçlar, lusiferaz testine dayalı olarak zamana bağlı ve şaperona bağımlı protein yeniden katlanmasını ölçer.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos