Name: Xpert MTB / RIF Testi ile Akciğer Tüberkülozu Tanısı (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-04-09T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 10 s
Description: Öğrenin, Xpert MTB/RIF testiyle akciğer tüberkülozu ve rifampisin direncini iki saat içinde nasıl tespit edeceğinizi. Bu yöntem, Mycobacterium tuberculosis için hızlı ve güvenilir tanı sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Yazarlar dikkatle atılırlar WJ Looney kabul ediyorsunuz.

Akciğer TB şüphesi olan tüm hastalarda bakteriyolojik inceleme için en az iki balgam örneği sunmaları konusunda Verem Bakım devletler için Uluslararası Standartlar Standart 2. Balgam yüksek verim sahiptir, bu zamanda toplanan olarak mümkün olduğunda, en az bir sabah erken numune alınması gerekir. 11 Xpert MTB / assay RIF olarak indüklenen ya ekspektore balgamlari hazırlanan balgam örnekleri veya teksif çökel uygulanabilmektedir . olumlu veya olumsuz aside dirençli basil (ARB) yayma 6, 12, 13 deney var olan akciğer TB klinik şüphesi olduğu hastaların gelen örnekleri ile kullanılmak üzere tasarlanmıştır: 1) anti-tüberküloz tedavisi, 2 almamış ) &lt;7 tedavisinin gün, veya 3) Son 60 gün içinde tedavi almadım vardı. Bakteriyel DNA antimikrobiyal tedavi sonrası devam, çünkü ilaç tedavisi 7 etkilerinin izlenmesi için kullanılmaması gerektiğini unutmayın etmeyin. <pclass enfeksiyon ajanlar bula kapasitesine kullan kartu da dahil olmak klinik davran b giyen koruyucu tek eldivenler laboratuar ve g gibi uygun kurumunuzun prosed y izleyin.> 1. Ekspektore Balgam örnekleri Not: olduğu gibi Süreç tek seferde birçok örneği gibi, GeneXpert Dx Sistem testi çalıştırmak için kullanılabilir modülleri! <ol><li> Ilgili örnek kimliği ile her Xpert MTB / RIF kartuş etiketleyin. </li><li> Transferi 1.0 ml steril bir transferi pipet kullanarak konik, vidalı kapaklı tüpe balgam ekspektore. Alternatif olarak, tüm numune orijinal sızdırmaz balgam toplama kabı işlenebilir. </li><li> Steril bir aktarım pipet kullanılarak ekspektore balgam etmek; 2.0 ml Xpert MTB / RIF Örnek Reaktif (v / v 02:01) eklenir. </li><li> Kapağı değiştirin ve gayretle 10 tüp sallayın-20 Kez. Alternatif olarak, karışımın (30 sn) santrifüja edilebilir. </li><li> Tüp oda sıcaklığında 5 dakika boyunca dik bekletin. </li><li> Şiddetle 10-20 kat tüpü çalkalayın. Alternatif olarak, (30 sn) bir girdap kullanın. </li><li> Tüp oda sıcaklığında bir 10 dakika dik bekletin. </li><li> Örnekleri inceleyin: Numune balgam hiçbir görünür kümeleri ile sıvılaştırılmış edilmelidir. </li></ol> 2. Konsantre Sedimanlar Not: Süreç sadece GeneXpert Dx Sistemi olduğu gibi aynı anda çok sayıda numune olarak testleri çalıştırmak için kullanılabilir modülleri! <ol><li> Ilgili örnek kimliği ile her Xpert MTB / RIF kartuş etiketleyin. </li><li> Steril bir aktarım pipet kullanarak konik, vidalı kapaklı tüpe 1,5 ml Xpert MTB / RIF Örnek Reaktif aktarın. </li><li> Steril bir pipet kullanarak transferi Örnek Reaktif içeren tüp için en az 0.5 ml konsantre sediment ekleyin. </li><li> Kapağı değiştirin ve tüp v sallayınigorously 10-20 kat. Alternatif olarak, (30 sn) bir girdap kullanın. </li><li> Tüp oda sıcaklığında 5 dakika boyunca dik bekletin. </li><li> Şiddetle 10-20 kat tüpü çalkalayın. Alternatif olarak, (30 sn) bir girdap kullanın. </li><li> Tüp oda sıcaklığında bir 10 dakika dik bekletin. </li><li> Örnekleri inceleyin: Numune balgam hiçbir görünür kümeleri ile sıvılaştırılmış edilmelidir. </li></ol> 3. Xpert MTB / RIF Kartuş Yükleme Not: Kartuş için örnek ekleyerek 30 dakika içinde test başlayın! <ol><li> Xpert MTB / RIF kartuş ve numune ID etiketlerini kontrol edin. </li><li> Kartuş kapağını açın. </li><li> Sağlanan steril transferi pipet kullanarak, menisküs asgari işaretinin üstüne kadar transferi pipet içine sıvılaştırılmış örnek aspire ve Xpert MTB / RIF kartuş açık portuna örnek aktarmak. </li></ol> Not:Aerosol oluşumu riski en aza indirmek için yavaş yavaş dağılır! <ol start="4"><li> Kartuş kapağını kapatın. </li></ol> 4. Test Başlangıç Not: Teste başlamadan önce, GeneXpert Dx Sistemi GX2.1 yazılımı ile donatılmış olduğundan emin olun ve Xpert MTB / RIF testi yazılımı alınır 9! <ol><li> Bilgisayarınızı açın ve sonra GeneXpert Dx enstrüman açın. </li><li> Windows masaüstünde, GeneXpert Dx kısayol simgesine çift tıklayın. </li><li> Kullanıcı adı ve şifrenizi kullanarak GeneXpert Dx Sistemi yazılımı oturum açın. </li><li> GeneXpert Dx Sistem penceresinde, test Oluştur'u tıklatın. Tarama Kartuş Barkod iletişim kutusu görüntülenir. </li><li> Örnek kimlik kutusuna tarama veya örnek kimliğini yazın. </li><li> Xpert MTB / RIF kartuş üzerindeki barkodu tarayın. Oluştur Testi penceresi görüntülenir. </li><li> Testi Başlat </li><li> Yanıp sönen yeşil ışık ile cihaz modülü kapağını açın ve yazıcı kartuşu yükleyin. </li><li> Kapağını kapatın. Testi başlar ve ışık yanıp sönmek yerine sürekli yeşil kalır. Test tamamlandığında, ışığı söner. </li><li> Sistemin çalışma sonunda kapı kilidi serbest bırakana kadar bekleyin, sonra modül kapı açın ve kartuşu çıkarın. </li><li> Kurumunuzun standart uygulamalara göre uygun çöp konteynerleri kullanılan kartuş atın. </li></ol> 5.. Temsilcisi Sonuçlar Her Xpert MTB / RIF kartuş MTB kompleksi ve RIF direncinin algılama gibi hedef bakteriler, yeterli işlem için kontrol etmek ve PCR reaksiyonunda inhibitörü varlığında (ler) izlemek için bir örnek işleme kontrolü (SPC) için reaktifler içeren . Prob Check Control (PCC) PCR tüp dolum, reaktif rehidrasyon doğrularkartuşu, prob bütünlüğü ve boya kararlılık. Xpert MTB / RIF testinde 9 primerler 81 baz çifti "çekirdek" bölgesini içeren rpoB geni bir kısmını yükseltmek. Moleküler işareti olarak bilinir Beş farklı renkte Flourogenik nükleik asit hibridizasyon probları, tüm 81-bp çekirdekli sorgularız. 14 Her moleküler işaret hedef dizisi vahşi tip rpoB farklıysa bu hedefine bağlamak değil, böylece özel olarak tasarlanmıştır Bir tek nükleotid ikamesi gibi azar dizisi. Bunlar, hedeflerine, yani, yabanıl tür rpoB sekansı bağlanmıştır yalnızca moleküler işaretçileri floresansı yana deneyde, beş renklerin her birinin yokluğu ile ilişkili olan çekirdek bölgede korunmuş yabani tipteki sekansı ve mutasyonlar arasındaki ayrım RIF direnci. 6 SPC olumsuz bir örnek pozitif olmalı ve pozitif bir örnek negatif veya pozitif olabilir. TestSPC negatif test tespit değilse sonuç "geçersiz" olacaktır. PCR reaksiyonu başlamadan önce, GeneXpert Dx Sistemi boncuk rehidrasyon, reaksiyon-tüp dolum, prob bütünlüğü ve boya istikrarı izlemek için problardan floresans sinyal ölçer. Problardan floresans sinyal atanan kabul kriterlerini karşılıyorsa, PCC geçer. Ölçülen sonuçlar floresan sinyalleri ve gömülü hesaplama algoritmaları GeneXpert Dx Sistem tarafından yorumlanır ve Sonuçları penceresinde 9 görüntülenir, aşağıda belirtilmiştir: MTB Tespit: MTB hedef DNA tespit edildiğinde; her iki denetim, SPC ve PCC, atanan kabul kriterleri karşılamaktadır. Alt Ct değerlerini DNA örneğinin daha yüksek bir başlangıç ​​konsantrasyonu temsil eder; yüksek Ct değerlerini DNA örneğinin daha düşük bir konsantrasyon temsil eder. MTB DETECTED sonuçlarında "RIF Direniş DETECTED" (Şekil 1A), ("RIF direnç saptanmamıştır" MTB Algılanmadı: MTB hedef DNA tespit değildir; her iki denetim, SPC ve PCC, atanan kabul kriterleri (Şekil 2) buluşuyor. Geçersiz: MTB varlığı veya yokluğu tespit edilemeyen: SPC kabul kriterlerine uymuyorsa, yani örnek düzgün işlenmedi, veya PCR inhibe edilmiştir (Şekil 3). Not: Ekstra numune ile tekrar test! Hata: (FAIL) başarısız PCC sonuçlarından biri veya daha fazlası. MTB ve SPC Hem NO SONUÇ gösterilecek. Not: Ekstra numune ile tekrar test! PCC (PASS) geçerse, hata bir sistem bileşeni hatası neden olmaktadır. Şekil 1: MTB hedef DNA tespit edildiğinde; her iki denetim, SPC ve PCC, atanan kabul kriterleri karşılamaktadır. Alt Ct değerleri daha yüksek bir başlangıç ​​temsilDNA örneğinin konsantrasyonu; yüksek Ct değerlerini DNA örneğinin daha düşük bir konsantrasyon temsil eder. MTB DETECTED sonuçlarında "BELİRSİZ RIF Direniş" ayrı bir satırda gösterir (Şekil 1B) "RIF Direniş DETECTED", ya da, (Şekil 1A) "RIF direnç saptanmamıştır." <img alt="Şekil 1A" src="/files/ftp_upload/3547/3547fig1A.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Şekil 1A"> . Şekil 1A MTB DETECTED; RIF Direnç 81-bp RIF rpoB geni direnç belirleyici bölgesi (RRDR) yani sadece yabani tip nükleik asit dizisi, DETECTED DEĞİL mevcuttu 6. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/3547/3547fig1A.jpg" target="_blank">büyük rakam görmek için buraya tıklayın</a> . <img alt="Şekil 1B" src="/files/ftp_upload/3547/3547fig1B.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Şekil 1B"> . Şekil 1B MTB DETECTED; RIF Direnç algılandı. Pozisyonları kapsayan, Probe B (ok) terk tamamlayın R 513-517 RpoB geni RDR. 6 örnekte, kısmi sıralama rpoB gen mutasyonu D516V tespit edildiğini ortaya koymuştur. 8 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/3547/3547fig1Blarge.jpg" target="_blank">büyük rakam görmek için buraya tıklayın</a> . <img alt="Şekil 2" src="/files/ftp_upload/3547/3547fig2.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Şekil 2"> Şekil 2 MTB hedef DNA tespit edilmedi;.. Her iki denetim, SPC ve PCC, atanan kabul kriterlerini karşılayan <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/3547/3547fig2large.jpg" target="_blank">büyük rakamı görmek için buraya tıklayın</a> . <img alt="Şekil 3" src="/files/ftp_upload/3547/3547fig3.jpg" data-altupdatedat="1788238805000" data-alt="Şekil 3"> Örnek düzgün işlenmiş değil çünkü, SPC kabul kriterlerine uymayan ya da PCR inhibe çünkü:. MTB Şekil 3 Geçersiz test sonucu, yani varlığı veya yokluğu tespit edilemez.3547fig3large.jpg "target =" _blank "&gt; büyük rakamı görmek için buraya tıklayın. </pclass>

<ol><li>Sudre, P., Dam, ten, Chan, G., C,, Kochi, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tuberculosis+in+the+present+time%3A+a+global+overview+of+the+tuberculosis+situation%5BTitle%5D)+AND+%22World+Health+Organisation+Document+WHO%2FTUB%2F91%22%5BJournal%5D)">Tuberculosis in the present time: a global overview of the tuberculosis situation.</a> World Health Organisation Document WHO/TUB/91. 158, 1-47 (1991).</li>
<li>World Health Organisation. Global tuberculosis control: epidemiology, strategy, financing. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22WHO+report+2010%22">WHO report 2010</a>. , (2010).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22The+global+plan+to+stop+TB%2C+2006-2015%22">The global plan to stop TB, 2006-2015</a>. , World Health Organization. Geneva. (2006).</li>
<li>Morris, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+mechanisms+of+multiple+drug+resistance+in+clinical+isolates+of+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Molecular mechanisms of multiple drug resistance in clinical isolates of Mycobacterium tuberculosis.</a> J. Infect. Dis. 171, 954-960 (1995).</li>
<li>Traore, H., Fissette, K., Bastian, I., Devleeschouwer, M., Portaels, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+rifampicin+resistance+in+Mycobacterium+tuberculosis+isolates+from+diverse+countries+by+a+commercial+line+probe+assay+as+aninitial+indicator+of+multidrug+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Tuberc.+Lung+Dis%22%5BJournal%5D)">Detection of rifampicin resistance in Mycobacterium tuberculosis isolates from diverse countries by a commercial line probe assay as aninitial indicator of multidrug resistance.</a> Int. J. Tuberc. Lung Dis. 4, 481-484 (2000).</li>
<li>Helb, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+Detection+of+Mycobacterium+tuberculosis+and+Rifampin+Resistance+by+Use+of+On-Demand+Near-Patient+Technology%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Rapid Detection of Mycobacterium tuberculosis and Rifampin Resistance by Use of On-Demand Near-Patient Technology.</a> J. Clin. Microbiol. 48, 229-237 (2010).</li>
<li>Blakemore, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+Analytical+Performance+of+the+Xpert+MTB%2FRIF%5BTitle%5D)+AND+%22Assay.+J.+Clin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the Analytical Performance of the Xpert MTB/RIF.</a> Assay. J. Clin. Microbiol. 48, 2495-2501 (2010).</li>
<li>Telenti, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+rifampicin-resistance+in+Mycobacterium+tuberculosis%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Detection of rifampicin-resistance in Mycobacterium tuberculosis.</a> Lancet. 341, 647-650 (1993).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22GeneXpert+Dx+System+Operator+Manual%22">GeneXpert Dx System Operator Manual</a>. , Cepheid Inc. Sunnyvale, CA, USA. (2011).</li>
<li>Foundation for new innovative diagnostics [Internet]. , Geneva, Switzerland. Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.finddiagnostics.org/about/what_we_do/successes/find-negotiated-prices/xpert_mtb_rif.html">http://www.finddiagnostics.org/about/what_we_do/successes/find-negotiated-prices/xpert_mtb_rif.html</a> (2011).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22International+Standards+for+Tuberculosis+Care+%28ISTC%29%22">International Standards for Tuberculosis Care (ISTC)</a>. , Tuberculosis Coalition for Technical Assistance. The Hague. (2009).</li>
<li>Boehme, C. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+Molecular+Detection+of+Tuberculosis+and+Rifampin+Resistance%5BTitle%5D)+AND+%22N.+Engl.+J.+Med%22%5BJournal%5D)">Rapid Molecular Detection of Tuberculosis and Rifampin Resistance.</a> N. Engl. J. Med. 363, 1005-1015 (2010).</li>
<li>Marlowe, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+the+Cepheid+Xpert+MTB%2FRIF+assay+for+the+Direct+Detection+of+Mycobacterium+tuberculosis+Complex+from+Respiratory+Specimens%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Evaluation of the Cepheid Xpert MTB/RIF assay for the Direct Detection of Mycobacterium tuberculosis Complex from Respiratory Specimens.</a> J. Clin. Microbiol. 49, 1621-1623 (2011).</li>
<li>El-Hajj, H. H., Marras, S. A. M., Tyagi, S., Kramer, F. R., Alland, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+rifampin+resistance+in+Mycobacterium+tuberculosis+in+a+single+tube+with+molecular+beacons%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Detection of rifampin resistance in Mycobacterium tuberculosis in a single tube with molecular beacons.</a> J. Clin. Microbiol. 39, 4131-4137 (2001).</li>
<li>Hillemann, D., Ruesch-Gerdes, S., Boehme, C., Richter, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+molecular+detection+of+extrapulmonary+tuberculosis+by+automated+GeneXpert+MTB%2FRIF+system%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Rapid molecular detection of extrapulmonary tuberculosis by automated GeneXpert MTB/RIF system.</a> J. Clin. Microbiol. 49, 1202-1205 (2011).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Xpert MTB / RIF test bir tek, ekspektore balgam veya konsantre sediment ya, MTB ve RIF direncinin aynı anda saptanması için numune dekontaminasyon, eller serbest kullanım, on-board örnek işleme ve ultra-hassas hemi-nested PCR entegre , sistem kullanımı kolay. Testin tespit analitik sınır 131 CFU / ml balgam olduğu bulunmuştur. 6 Ct değerleri ve MTB hücrelerin sayısı arasında log-doğrusal bir ilişki 10 Şubat-10 Temmuz CFU / ml &#39;den balgam geçerlidir sunulmaktadır. Klinik MTB konsantrasyonlarda test lineer aralığındaki tüm düşmek gibi, tahlil bakteri yükünün yarı-niceliksel tahminler sağlar. 7 testi sadece orta laboratuar altyapı ve eğitim gerektirir. Tespit sınırı konvansiyonel mikroskopi göre daha düşük bir büyüklükte en az iki siparişler yatmaktadır. 6 Spesifiklik mükemmeldir. Dahası, RIF-DAYANIKLI eşzamanlı algılamat MTB ilaca dirençli TB çağında nokta-bakım test ortamında önemli bir avantajdır. 3 Klinik pulmoner TBC tanısı için test performansı üzerinde sadece sınırlı yayınlanan verilerin bugüne kadar mevcut 12;. 13 kültürüne göre şüpheli pulmoner TB hastalarının balgam MTB tespit Xpert MTB / RIF testi genel klinik duyarlılık% 97.6 oldu referans olarak. Ve 1462 hasta toplam bu beş çalışma alanlarında (; Baku, Azerbaycan;; Cape Town ve Durban, Güney Afrika Mumbai, Hindistan, Lima, Peru) yer prospektif çok merkezli çalışmanın bulguları vardı. Çalışma grubundaki kültür ile doğrulanmış TB genel test öncesi olasılığı% 50.7 idi. Duyarlılığı yayma ve kültür pozitif vakaları için% 99.8 ve smear-negatif, kültür pozitif vakalar için% 90.2 idi. Akciğer TB ile HIV pozitif hastalar arasında, MTB / RIF testinin hassasiyeti gibi% 98.4 ile karşılaştırıldığında,% 93.9 oldu. Kültür göre HIV-negatif hastaların düşük TB prevalansının bir ortamda 12, MTB tespiti için genel anlaşma% 89 idi; duyarlılığı sırasıyla, yayma negatif örnekler için yayma pozitif ve% 72 için% 98 idi ve özgüllük mükemmel oldu. 13 tedavi edilmemiş balgam testleri ve konsantre çökeller üzerinde olanlar arasında duyarlılık açısından belirgin bir fark yoktu. 12 Aynı çalışmada, MTB / RIF testte 209 211 hastada (% 99.1 duyarlılık) ve in RIF direnci tespit sıralama sonuçları dikkate alınmıştır RIF duyarlılık ile tüm 506 hastada (% 100 özgüllük). 12 Yazarlar bulgular muhtemel olduğunu öne sürerek, vaka tespiti ve RIF direnci ayrımcılık, hem de performans farklı siteler arasında benzer olduğunu bulundu yaygın olarak uygulanabilir. Ayrıca 12 gibi bronko-alveolar lavaj ve bronş gibi balgam dışında solunum yolu örneklerinde konsantre çökelleri,l salgıları, benzer duyarlılık ve özgüllük ile test edilmiştir. test performansı üzerinde 13 Veri ekstra pulmoner TBC test ortaya çıkmaktadır. 15 Küresel TB kontrolü acilen noktası bakım ayarları. MTB algılamak için kullanılan 3 Şu nükleik asit çoğaltma yöntemleri, emek-yoğun karmaşık hızlı yeni TB olgularının tanı ve evrensel erişim RIF dirençli MTB algılanmasına izin etkili araçlara ihtiyacı ve teknik olarak zor. Xpert MTB / RIF testi bunu göze mümkün olacak şartıyla, bu ayarlara TB ve ilaç direnci, her ikisi için de, standart hassas ve çok özel tanı testi getirmek için bir potansiyele sahiptir. Erişimini kolaylaştırmak amacıyla, Yenilikçi Diagnostics (BUL) Vakfı Xpert MTB / RIF testi için önemli fiyat indirimleri konusunda çalışmalar yapmaktadır. Indirim için uygun ülkeler listesinde birlikte Şu BUL-anlaşmalı fiyatları, web üzerinde mevcuttur. 10 </sup&gt;

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif / Ekipman </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td></tr><tr><td> Xpert MTB / RIF testi </td><td> Sefeid </td><td> GXMTB/RIF-10 </td></tr><tr><td> Transferi pipetler </td><td> Sarstedt </td><td> 86.1172.001 </td></tr><tr><td> Konik tüpleri, 15 mL, 120 x 17 mm, PS </td><td> Sarstedt </td><td> 62.553.542 </td></tr></tbody></table>

xpert mtb / rif testi ile akciğer tüberkülozu tanısı

Diagnosing Pulmonary Tuberculosis with the Xpert MTB/RIF Test

Mycobacterium tuberculosis (MTB) nedeniyle Tüberküloz (TB) önemli bir halk sağlığı sorunu olmaya devam etmektedir: enfeksiyon dünya nüfusunun 1 üçte birine kadar etkiler ve yaklaşık iki milyon insan her yıl TB tarafından öldürülüyor yüksek kaliteli 2 Evrensel erişim. , tüm TB hastalar için hasta odaklı tedavi Stop TB Stratejisinin DSÖ&#39;nün vurgulanıyor. 3 güvenilir ilaç direnci test sonuçlarına göre solunum yolu örneklerinde ve ilaç tedavisi ile MTB hızlı tespiti, bu stratejinin başarılı bir şekilde uygulanması için bir önkoşuldur. Ancak, dünyanın birçok alanda, TB tanısı hala duyarsız, kötü standart balgam mikroskop yöntemle gerçekleştirilir. Etkisiz TB algılama ve ilaca dirençli MTB suşların ortaya çıkması ve iletim giderek küresel TB kontrol aktivitelerinin tehlikeye. 2 Küresel ölçekte - - stand akciğer TB Etkin tanı durumu gerektirirardized, MTB kompleks ve rifampisin (RIF) gibi önemli antibiyotik direnç hem doğrudan algılama sağlayacak, kullanımı kolay ve güçlü tanılama araçları. İkinci sonuç çok ilaca dirençli MTB (MDR TB) için bir belirteç olarak hizmet verebilir ve güvenilir test sonuçları hızlı kullanılabilirliği&gt; MDR-TB izolatların% 95. 4, 5 bildirilmiştir Sesi doğrudan hasta yönetimi çevirmek olasıdır sonuçta, her hasta tedavi ve toplumda TB bulaşma zincirini kıracak kararlar. 2 Sefeid Kullanıcı (Sunnyvale, CA, USA) Xpert MTB / RIF testi 6, 7, dikkat çekici bir şekilde yukarıda belirtilen taleplerini karşılar. It) balgam veya teksif sedimentlerde MTB karmaşık DNA tespiti 1 için bir nükleik asitlerin amplifikasyon testidir ve 2) rpoB geni RIF direnci ile ilişkili mutasyonların tespiti 8 Bu Sefeid Kullanıcı GeneXpert Dx ile kullanılmak üzere tasarlanmıştır. Sistem thde entegre ve örnek işleme, nükleik asit amplifikasyon ve real-time PCR ve ters transkriptaz PCR kullanarak hedef dizilerinin tespiti otomatikleştirir. Sistem bir enstrüman oluşur, kişisel bilgisayar, barkod tarayıcı ve testleri çalışan ve sonuçları görüntülemek için önceden yüklenmiş yazılımlar. 9 Bu PCR&#39;da tutun ve PCR işlemi ev sahipliği atılabilir Xpert MTB / RIF kartuşları tek kullanım kullanmaktadır. Kartuşları bağımsız olduğu için, örnekleri arasında çapraz kontaminasyon elimine edilir. MTB algılamak için kullanılan 6 Şu nükleik asit çoğaltma yöntemleri, karmaşık emek-yoğun, ve teknik olarak zor vardır. Xpert MTB / RIF testi bunu göze mümkün olacak şekilde, evrensel erişim noktası ayarlarını bakımı 3 TB ve ilaç direnci hem de, standart hassas ve çok özel tanı testi getirmek için bir potansiyele sahiptir. Erişimini kolaylaştırmak amacıyla, Yenilikçi Diagnostics Vakfı (BUL) anlamlı müzakere etticant fiyat indirimleri. Indirim için uygun ülkeler listesinde birlikte Şu BUL-anlaşmalı fiyatları, web üzerinde mevcuttur. 10

Xpert MTB / RIF testi aynı anda tespiti için numune dekontaminasyon, eller serbest kullanım, on-board örnek işleme ve ultra-hassas hemi-nested PCR entegre<em&gt; Mycobacterium tuberculosis</emYaklaşık iki saat içinde ekspektore balgam veya teksif sediment ya&gt; ve rifampisin direnci,. Test standardize ve sadece orta laboratuvar altyapı ve eğitim gerektirir.

Xpert MTB / RIF Testi ile Akciğer Tüberkülozu Tanısı

Mycobacterium tuberculosis (MTB) kaynaklı tüberküloz (TB), temel bir halk sağlığı sorunu olmaya devam etmektedir: enfeksiyon, dünya nüfusunun üçte birine kadar olan kesimi etkilemektedir...

Bu prosedürün genel amacı; ekspektorat balgamında veya konsantre balgam sedimentlerinde mycobacterium, tuberculosis ve rifampisin direncini iki saat içinde eş zamanlı olarak tespit etmektir. Basit ve yüksek etkili bir örnek dekontaminasyon protokolü ile başlayın. Ardından, işlenmiş her bir örneği, PCR reaktiflerini içeren ve PCR sürecine ev sahipliği yapan tek kullanımlık atılabilir expert, M-T-B-R-I-F kartuşuna aktarın.Kartuşları bir gene expert DX sistemine yerleştirin ve mycobacterium tuberculosis ile rifampisin direncinin eş zamanlı tespiti için ultra hassas HEMI nested PCR'ı başlatın. Son olarak, test sonuçlarını okuyun ve hekime raporlayın. Expert MTPR testi, pulmoner tüberküloz klinik şüphesi olan ve şirket metninde belirtilen kriterleri karşılayan hastalardan alınan örneklerle kullanım için tasarlanmıştır.İlaç tedavisinin etkilerini izlemek için kullanılmaması gerektiğine dikkat edin.Kristal. Laboratuvarımdaki bir teknisyen, tüberküloz bakımı için uluslararası standartların ikincisine uygun olarak protokolü şimdi gösterecektir. Pulmoner tüberküloz olduğundan şüphelenilen her hastadan bakteriyolojik inceleme için iki örnek toplayın.Her bir test örneği için bir GeneXpert DX sistem modülü ayırın ve her kartuşu örnek kimliği ile etiketleyin. Şimdi her bir örnek analizi için, başka bir steril transfer pipeti yardımıyla bir mililitre balgamı 15 mililitrelik konik vidalı kapaklı bir tüpe aktarın. İki mililitre M-T-B-R-I-F örnek reaktifi ekleyin.Kapağı sıkıca kapatın. Tüpü 10 ila 20 kez çalkalayın. Ardından, tüpü şiddetli şekilde çalkaladıktan sonra oda sıcaklığında beş dakika boyunca dik konumda bekletin.Tekrar, oda sıcaklığında 10 dakika boyunca dengeleyin. Tüm numune örneklerinin, görünür balgam topakları içermeyen bir ED olduğunu doğrulayın. İlk olarak kartuşları, her bir balgam sediment numunesinin numune kimliği ile etiketleyin; her sediment numunesine 1,5 milliliters M-T-B-R-I-F numune reaktifi ekleyin ve 0,5 milliliters miktarı 15 milliliters konik vidalı kapaklı bir tüpe aktarın. Kapağı kapatın, 30 saniye boyunca vorteksleyin ve ikinci bir aşamadan sonra tüpü beş dakika boyunca dik konumda bekletin.Vorteks ile karıştırdıktan sonra tüpü 10 dakika boyunca dik konumda bekletin. Sıvılaşmış örnekleri, balgam kümelerinin bulunmadığını doğrulamak için inceleyin. Tüpler üzerindeki etiketleri ilgili kartuşlarla eşleştirin.Testi gerçekleştirmeye hazır olana kadar kartuşu açmayın ve kartuş kapağını açtıktan sonra kartuşu 30 dakika içinde kullanın. Steril transfer pipetini kullanarak, menisküs minimum işaretinin üzerine çıkana kadar sıvılaştırılmış örneği aspire edin. Örneği yavaşça kartuşa yükleyin.Kartuş kapağını kapatın. Testi, numunenin kartuşa eklenmesinden sonraki 30 dakika içinde başlatın. Önce bilgisayarı, ardından masaüstündeki cihazı açın.Gene expert DX simgesine çift tıklayın. Sistem yazılımına giriş yapın. Tarama kartuşu barkod iletişim kutusunu açmak için test oluştur seçeneğini belirleyin.Ardından örnek kimliğini girin ve kartuş üzerindeki barkodu taratın. Test oluşturma penceresi göründüğünde, testi başlat'a tıklayın ve iletişim kutusuna şifreyi girin. Şimdi cihaz modülü kapısını açın ve kartuşu yerleştirin.Testi başlatmak için kapıyı kapatın. Yeşil ışık söndüğünde test tamamlanmış demektir. Sistem kapı kilidini açtığında, modül kapısını açın ve kartuşu çıkarın.Son olarak, kullanılmış kartuşları uygun atık konteynerlerine atın. Her test kartuşu, Mycobacterium tuberculosis kompleks rifampisin direncinin QPCR analizi için gerekli reaktifleri ve uygun deneysel kontrolleri içerir. Prob kontrolü; reaktiflerin rehidrasyonunu, kartuş içindeki PCR tüplerinin dolumunu, prob bütünlüğünü ve boya stabilitesini doğrular.Numune işleme eğrisi, hedef bakterilerin yeterli şekilde işlendiğine dair pozitif kontrol görevi görür ve ayrıca herhangi bir PCR inhibitörünün varlığını belirtir. Primerler, konserve edilmiş vahşi tip sekans ile RIF direncine ilişkili RPOB geninin çekirdek bölgesindeki mutasyonları ayırt edecek şekilde tasarlanmıştır. CT değerleri, test numunesindeki hedef M-T-B-D-N-A kalıp konsantrasyonu ile ters orantılıdır.Test sonucu iletişim kutusu, bu hasta örneğinde MTB hedef DNA'sının saptandığı ve RIF direncinin saptanmadığı sonucunu vermektedir. MTB hedef DNA'sı, rifampisin direnci belirtisiyle düşük seviyelerde saptanmıştır. Hem SPC hem de PCC kontrolleri, belirlenen kabul kriterlerini karşılamaktadır.SPC negatif olduğu ve PCR ürünleri bulunmadığı için bu analiz sonucu geçersiz sayılır. Ya örnek uygun şekilde işlenmemiştir ya da PCR inhibe olmuştur. Analizi tekrarlayın.Video testinde gördüğünüz üzere, işlem standartlaştırılmıştır ve yalnızca orta düzeyde laboratuvar altyapısı ile eğitim gerektirmektedir. Bu nedenle, uzman M-T-B-R-F analizinin, hem tüberküloz hem de rifampisin direnci için standartlaştırılmış, hassas ve oldukça spesifik tanısal testleri, evrensel erişimli bakım noktası ayarlarına getirme potansiyeline sahip olduğuna inanıyorum.

diagnosing-pulmonary-tuberculosis-with-the-xpert-mtbrif-test

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Mikroskopik gözlem ilaç duyarlılık (MODS) tayini, düşük maliyetli, yüksek performanslı bir algılama tüberküloz (TB) ve çoklu ilaca dirençli tüberküloz (MDRTB) düşük teknolojili bir araçtır. Bu video MODS sıvı medya kültürü yöntemi açıklanmıştır.

MODS tüberküloz tanısı için yöntem ve dirençli tüberküloz ilaca

Mycobacterium tuberculosis Antimikrobiyal duyarlılık testi zor ama hasta bakımı için kritik. Bu mikrotiter plate formatı 12 antimikobakteriyel ilaçların test sunar ve uygun tedavi yardımcı olacak minimum inhibitör konsantrasyon (MİK) değerleri sağlar.

Microtiter Plate Format Broth Seyreltme Birinci ve İkinci Line İlaçları Mycobacterium tuberculosis kompleksi Antimikrobiyal Duyarlılık Testi

Bu videoda akciğer dışı tüberkülozun saptanması için bir teknik gösterilmektedir. Mycobacterium'a özgü antikorlarla konjuge edilen süperparamanyetik demir oksit (SPIO) nanoprobları, daha önce Mycobacterium bovis BCG ile enfekte olmuş bir fareye enjekte edilir, granülom etiketlenir ve tespiti için daha iyi bir görüntüleme kontrastı sağlar.

Süperparamanyetik Nanoproblar ile Ekstrapulmoner Tüberkülozu Tespit Etme Tekniği

Bir amplifikasyon mikrodizi önemli ölçüde son kullanıcı için mikro-dizi iş akışını tek bir oda içine asimetrik PCR amplifikasyonu ve mikrodizi hibridizasyon birleştirir. Mikrodizi iş akışı basitleştirilmesi rutin alt-kaynak ortamlarda kullanılabilir mikroarray tabanlı tanı oluşturmak için gerekli bir ilk adımdır.

Çok ilaca dirençli Demonstrating<em&gt; Mycobacterium tuberculosis</em&gt; Amplifikasyon Microarray

Mycobacterium tuberculosis antijenleri için serolojik tanı testlerini geliştirmek için ekstrapulmoner tüberkülozu tespit etmek için süperparamanyetik demir oksit nanoprobları geliştirdik.

Ekstrapulmoner Tüberküloz Tespiti için Süperparamanyetik Demir Oksit Nanoprobukların Sentezi, Karakterizasyonu ve Uygulanması

Balgamın ısı inaktivasyonundan sonra yapılan tüberküloz moleküler bakteriyel yük testini tanımladık. Isı inaktivasyonu balgam örneklerini enfeksiyöz olmayan hale getirir ve tüberküloz moleküler testleri için 3 laboratuvarları kapsama ihtiyacını ortadan kılmaktadır.

Tüberküloz Moleküler Bakteriyel Yük Analizi (TB-MBLA)

Mycobacterium tuberculosis'in aşağı akış hedefli yeni nesil dizilemesi için manyetik boncuk saflaştırması ile birleştirilmiş matris tabanlı bir ekstraksiyon yöntemi kullanarak dekontamine balgamdan DNA ekstraksiyonu için optimize edilmiş bir yöntem sunuyoruz.

Dekontamine Balgam Örneklerinde Hedeflenen Yeni Nesil Dizileme için Matris Tabanlı DNA Ekstraksiyonu

Belli koşullarda kültüre zaman Mycobacterium tuberculosis ilaç hoşgörülü biyofilm oluşturmaktadır. Burada kültür M. yöntemleri tarif tuberculosis biyofilmler ve ilaç tolerans persisters sıklığını belirlenmesi. Bu protokoller M. ilaç hoşgörü mekanizmalarına daha sonraki çalışmalar için faydalı olacaktır tüberküloz.

Büyüme Mycobacterium tuberculosis Biyofilmler

Aynı anda sağ kalp fonksiyonu, akciğer iltihabı ve bağışıklık yanıtı araştırmak için bir özel ve hızlı bir protokol bir öğrenme aracı olarak tanımlanmaktadır. Video ve rakamlar büyük ölçekli çalışmalara küçük kullanılmak üzere uyarlanabilir bir organize ekip yaklaşımı, fizyoloji ve mikrodiseksiyon teknikleri anlatıyoruz.

Akciğer ve Fareler immün Doku Örneklerinde Hasat ile kombinasyon Sağ Ventrikül Sistolik Basınç Ölçümleri

Tüberküloz ve sıtma insan ve tropik yoksul toplumlarda morbidite ve mortalitenin önemli nedenlerinden en yaygın enfeksiyonlardan ikisidir. Bu enfeksiyon, doğal yoldan hem patojenler ile yüklemeden sonra farelerde sıtmaya tüberküloz koenfeksiyonu sonucunu çalışma deneysel bir model sistemi kurulmuştur.

Doğal İletim üzerine Tüberküloz-Sıtma Koenfeksiyonu Çalışması için Deneysel Bir Model Mycobacterium tuberculosis Ve Plasmodium berghei</i

Öğrenin, Xpert MTB/RIF testiyle akciğer tüberkülozu ve rifampisin direncini iki saat içinde nasıl tespit edeceğinizi. Bu yöntem, Mycobacterium tuberculosis için hızlı ve güvenilir tanı sağlar.

Xpert MTB / RIF Testi ile Akciğer Tüberkülozu Tanısı

Daha fazla video keşfet