Xpert MTB / RIF Testi ile Akciğer Tüberkülozu Tanısı

Bu prosedürün genel amacı; ekspektorat balgamında veya konsantre balgam sedimentlerinde mycobacterium, tuberculosis ve rifampisin direncini iki saat içinde eş zamanlı olarak tespit etmektir. Basit ve yüksek etkili bir örnek dekontaminasyon protokolü ile başlayın. Ardından, işlenmiş her bir örneği, PCR reaktiflerini içeren ve PCR sürecine ev sahipliği yapan tek kullanımlık atılabilir expert, M-T-B-R-I-F kartuşuna aktarın.

Kartuşları bir gene expert DX sistemine yerleştirin ve mycobacterium tuberculosis ile rifampisin direncinin eş zamanlı tespiti için ultra hassas HEMI nested PCR'ı başlatın. Son olarak, test sonuçlarını okuyun ve hekime raporlayın. Expert MTPR testi, pulmoner tüberküloz klinik şüphesi olan ve şirket metninde belirtilen kriterleri karşılayan hastalardan alınan örneklerle kullanım için tasarlanmıştır.

İlaç tedavisinin etkilerini izlemek için kullanılmaması gerektiğine dikkat edin.Kristal. Laboratuvarımdaki bir teknisyen, tüberküloz bakımı için uluslararası standartların ikincisine uygun olarak protokolü şimdi gösterecektir. Pulmoner tüberküloz olduğundan şüphelenilen her hastadan bakteriyolojik inceleme için iki örnek toplayın.

Her bir test örneği için bir GeneXpert DX sistem modülü ayırın ve her kartuşu örnek kimliği ile etiketleyin. Şimdi her bir örnek analizi için, başka bir steril transfer pipeti yardımıyla bir mililitre balgamı 15 mililitrelik konik vidalı kapaklı bir tüpe aktarın. İki mililitre M-T-B-R-I-F örnek reaktifi ekleyin.

Kapağı sıkıca kapatın. Tüpü 10 ila 20 kez çalkalayın. Ardından, tüpü şiddetli şekilde çalkaladıktan sonra oda sıcaklığında beş dakika boyunca dik konumda bekletin.

Tekrar, oda sıcaklığında 10 dakika boyunca dengeleyin. Tüm numune örneklerinin, görünür balgam topakları içermeyen bir ED olduğunu doğrulayın. İlk olarak kartuşları, her bir balgam sediment numunesinin numune kimliği ile etiketleyin; her sediment numunesine 1,5 milliliters M-T-B-R-I-F numune reaktifi ekleyin ve 0,5 milliliters miktarı 15 milliliters konik vidalı kapaklı bir tüpe aktarın. Kapağı kapatın, 30 saniye boyunca vorteksleyin ve ikinci bir aşamadan sonra tüpü beş dakika boyunca dik konumda bekletin.

Vorteks ile karıştırdıktan sonra tüpü 10 dakika boyunca dik konumda bekletin. Sıvılaşmış örnekleri, balgam kümelerinin bulunmadığını doğrulamak için inceleyin. Tüpler üzerindeki etiketleri ilgili kartuşlarla eşleştirin.

Testi gerçekleştirmeye hazır olana kadar kartuşu açmayın ve kartuş kapağını açtıktan sonra kartuşu 30 dakika içinde kullanın. Steril transfer pipetini kullanarak, menisküs minimum işaretinin üzerine çıkana kadar sıvılaştırılmış örneği aspire edin. Örneği yavaşça kartuşa yükleyin.

Kartuş kapağını kapatın. Testi, numunenin kartuşa eklenmesinden sonraki 30 dakika içinde başlatın. Önce bilgisayarı, ardından masaüstündeki cihazı açın.

Gene expert DX simgesine çift tıklayın. Sistem yazılımına giriş yapın. Tarama kartuşu barkod iletişim kutusunu açmak için test oluştur seçeneğini belirleyin.

Ardından örnek kimliğini girin ve kartuş üzerindeki barkodu taratın. Test oluşturma penceresi göründüğünde, testi başlat'a tıklayın ve iletişim kutusuna şifreyi girin. Şimdi cihaz modülü kapısını açın ve kartuşu yerleştirin.

Testi başlatmak için kapıyı kapatın. Yeşil ışık söndüğünde test tamamlanmış demektir. Sistem kapı kilidini açtığında, modül kapısını açın ve kartuşu çıkarın.

Son olarak, kullanılmış kartuşları uygun atık konteynerlerine atın. Her test kartuşu, Mycobacterium tuberculosis kompleks rifampisin direncinin QPCR analizi için gerekli reaktifleri ve uygun deneysel kontrolleri içerir. Prob kontrolü; reaktiflerin rehidrasyonunu, kartuş içindeki PCR tüplerinin dolumunu, prob bütünlüğünü ve boya stabilitesini doğrular.

Numune işleme eğrisi, hedef bakterilerin yeterli şekilde işlendiğine dair pozitif kontrol görevi görür ve ayrıca herhangi bir PCR inhibitörünün varlığını belirtir. Primerler, konserve edilmiş vahşi tip sekans ile RIF direncine ilişkili RPOB geninin çekirdek bölgesindeki mutasyonları ayırt edecek şekilde tasarlanmıştır. CT değerleri, test numunesindeki hedef M-T-B-D-N-A kalıp konsantrasyonu ile ters orantılıdır.

Test sonucu iletişim kutusu, bu hasta örneğinde MTB hedef DNA'sının saptandığı ve RIF direncinin saptanmadığı sonucunu vermektedir. MTB hedef DNA'sı, rifampisin direnci belirtisiyle düşük seviyelerde saptanmıştır. Hem SPC hem de PCC kontrolleri, belirlenen kabul kriterlerini karşılamaktadır.

SPC negatif olduğu ve PCR ürünleri bulunmadığı için bu analiz sonucu geçersiz sayılır. Ya örnek uygun şekilde işlenmemiştir ya da PCR inhibe olmuştur. Analizi tekrarlayın.

Video testinde gördüğünüz üzere, işlem standartlaştırılmıştır ve yalnızca orta düzeyde laboratuvar altyapısı ile eğitim gerektirmektedir. Bu nedenle, uzman M-T-B-R-F analizinin, hem tüberküloz hem de rifampisin direnci için standartlaştırılmış, hassas ve oldukça spesifik tanısal testleri, evrensel erişimli bakım noktası ayarlarına getirme potansiyeline sahip olduğuna inanıyorum.