Name: Kök-ur Nematod ile Yüksek ve Düşük Throughput Ekranlar Meloidogyne spp. /em (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-03-12T12:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 46 s
Description: Öğrenin, Meloidogyne spp. ile bitki tarama yöntemlerini; yüksek verimli ekranlar, az alan gereksinimi ve üreme programları için direnç değerlendirmesi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Kaloshian laboratuar Araştırma Gıda ve Tarım Birleşik Devletleri Ulusal Enstitüsü (2007-35607-17765) bir hibe ile finanse edilmektedir. Roberts laboratuarında Araştırma Uluslararası Kalkınma Birleşik Devletleri Ajansı hibe (GDG-G-00-02-00012-00 ve EDH-A-00-07-00005) ve Kaliforniya Kuru Fasulye Danışma Kurulu tarafından finanse edilmektedir.

1. Tencere ve Kaset Domates Fide Gelişimi <ol><li> Için pot deneyleri, bu Sunshine karışımı olarak organik bir zengin toprak tek bir saksı içinde domates tohumu. 22-28 bir serada koruyun ° C Çimlenme sonra, Miracle-Gro ile haftada bir kez döller. </li><li> Yaklaşık iki hafta çimlenme sonrası, iki gerçek yaprak aşamasında,% 90 kum ve% 10 organik karışımı içeren steril kumlu toprakla doldurulmuş kaplar (10 cm çapında ve derin 17 cm) içine tek tek fidan nakli. Yavaş salınımlı gübre Osmocote ve iki hafta boyunca 22-28 ° C&#39;de bir serada muhafaza ekleyin. Miracle-Gro ile haftada bir kez bitki dölleme devam edin. </li><li> Yüksek verimli ekranlar için, doğrudan kumlu topraklarda kasetlere bitki tohumları çimlenme kadar plastik örtü ile tepsisi kapağı ve yukarıda belirtildiği gibi korumak. Çimlenme sonra, yavaş salınımlı gübre Osmocote ve Miracle-Gro ile haftada bir kez gübrelemek ekleyin. </li></ol> 2. Fide Torbalar içinde Börülce Büyüme <ol><li> Seeds ya, bir Petri kabındaki çimlenmiş Kimwipe birçok kağıt tabakaları ile kaplı ve çantaları için tek başına transfer veya kese kağıdı oluk içine doğrudan yerleştirilen ve çimlenmiş edilir. </li><li> Klasör başına bir plastik asılı dosya klasörü, iki poşet yerleştirin ve dik bir konumda rafa klasörleri düzenlemek. 25-28 bir sıcaklık ° C ve 16 saat aydınlık / 8 saat karanlık döngüsü tutulan kontrollü bir-çevre odasındaki rafa yerleştirin. Racklar ayrıca bir serada korunur, fakat mantar açısından potansiyel azaltmak için, bir folyoya ya da bitki gövdesinin her iki tarafında raf üzerine yerleştirilir sert kağıt kapak ihtiyaç olabilir. </li><li> Reverse osmosis su ile bir veya iki kez günlük su torbası. Ekim sonrası yaklaşık 10 ile 14 gün, üçüncül kök uçları ile yeterli bir kök sistemi meydana geldiğinde (Şekil 1), fide aşılama için hazırız. </li></ol> 3. Nematodu Yumurta çıkarımı E çıkarımıEnfekte köklerinden ggs Hussey ve Barker (1973) tarafından geliştirilen bir protokol üzerinden değiştirilebilir. <ol><li> Üç dört gün nematod aşılamadan önce, enfekte domates köklerinden kök-ur nematod yumurtaları ayıklamak. Yumurta çıkarma başlamadan önce, kontaminasyonu önlemek için sıcak su ile iyice çalışma alanı yıkayın. Ayrıca sıcak suda yıkayın bir blender, iki kova, bir tel örgü desteği, lastik tokmak, 425 üç elekler, 90 ve 25 mikron diyafram, bir Mezür ve makas. </li><li> 425, 90 ve 25 mikron diyafram: aşağıdaki sırayla yukarıdan aşağıya doğru elekler biriktirin. Yumurta altındaki 25 mikron elek üzerinde toplanır. Bir lavabo desteklenen bir hasır üzerinde elekler koyun. Çalışma ile çözüme toplamak için hasır altında bir kova koyun. </li><li> Inokulum kaynağı olarak kullanılan hastalıklı bitki (ler) üstleri, kesin ve atın. Dikkatlice pottan bitki çıkarın. Su dolu bir kovaya daldırma kökleri yıkayın. Çalıştırmak altında başka kökleri durulayıntoprak parçacıkları köklerinden yıkanmasını kadar su ning. </li><li> Küçük parçalar halinde makasla kökler kesilir. Kazık kök atın. </li><li> Kapaklı bir büyük plastik kavanoza tek bir bitki kıyılmış kök koyun, kökleri kapağı ve kapağı kapatmak için yeterli% 10 çamaşır suyu ekleyin. </li><li> 2 dakika kökleri içeren kavanozu çalkalayın. </li><li> Jar açın ve üst elek üzerine kökleri dökün ve bir sisleme nozul takılı bir hortumla yıkayın. Tüm çamaşır suyu kokusu bitene kadar iyi yıkanmalıdır. Elek gözeneklerin tıkanmasını önlemek için elekler kenarlarına dokunun bir çekiç kullanın. </li><li> Üst elek kaldırın ve ikinci elek üzerinde enkaz durulayın. </li><li> İkinci elek çıkarın ve son elek yumurta içerir ince enkaz toplamak. Bir şişe su bir yumuşak akışı ile, elek bir yana enkaz taşıyın. Su minimum miktarda temiz bir behere enkaz ve yumurta toplayın. </li><li> Elek bir kez daha su içinde toplanankaçmış olabilecek yumurta toplamak için 25 mikron elekten kova. Su ile iyice durulayın ve aynı behere koyunuz. </li><li> Üst elek bitki artıkları atın ve basınçlı su ile iyice üç elekler yıkayın. Bu gözenek boyutu bozabilir olarak elekler örgü parçası dokunmayın. </li></ol> 4. Kuluçka Nematodu Yumurta <ol><li> Hat temiz bir metal Kimwipe kağıt bir kaç kat sepeti ve bir cam petri sığmaktadır. Sepeti ve tabağın tabanına arasında 1 cm mesafe bırakın. </li><li> Tel sepet içinde kağıda çıkarılan nematod yumurtaları dökün. Tel sepet alt su yüzeyine çarpar ama suya batırılır değil ki yeterince sıvı ekleyin. Plastik bir kapak ile üst kapak. </li><li> Her gün su buharlaşmasını kontrol ve sepet altında su temas böylece petri biraz su ekleyin. Bu kurumasını yumurta önleyecektir. </li><li> Her gün, wa toplamakBir behere Petri gelen J2S içeren ter. Derhal kullanılmadığı takdirde, bir akvaryum pompası tarafından üretilen bir laboratuvar hava veya hava ile oda sıcaklığında toplanan inokulum havalandırır. 2 gün içinde gazlı inokulum kullanın. J2S 6-8 günlük bir süre boyunca ayarlamak kuluçka elde edilebilir. </li></ol> 5.. Tencere veya Tepsiler ve Enfeksiyon Değerlendirilmesinde Domates Kök Enfeksiyon <ol><li> Bir sayma slayt veya çanak J2S sayısını saymak için toplanan nematod üç alikotları kullanın, ortalamasını ve aşılama için istenen hacmi belirler. Genellikle 3000 J2S tencere ve fide tepsiler yetiştirilen bitkiler için 500 J2S bitki başına kullanılır. </li><li> Düşük hızda bir manyetik karıştırma plaka üzerinde inokulum karıştırın. </li><li> Eğer bitkiler aşılamak önce, toprağı nemli ama çok ıslak olmadığından emin olun. Pot aşılama için (Şekil 2, bir kalem yardımıyla her domates kök sistemi etrafında kum yaklaşık yarım kap derinliği üç delik açmak </strong&gt;). Bir pipet kullanarak üç delik içine J2S sunarak her bitkinin inoküle. Daha sonra, delikler kapsamaktadır. </li><li> Tepsilerde yüksek verimlilik ekranlar için, toprağa J2S teslim etmek için bir pipetter boyunca 5 ml pipet ucu (Şekil 3) yapıştırılmış tarafta delikli bir modifiye kapalı uçlu iğne kullanın. Alternatif olarak, nematod adım 5.3 olarak teslim edilebilir. </li><li> 24-27 bir sera bitkileri korumak ° C altı ila sekiz hafta boyunca. Miracle-Gro ile ayda iki kez gübrelemek için devam edin. </li><li> Enfeksiyon değerlendirilmesi için, dikkatle tencere gelen bitkiler kaldırmak ve kökleri (as adım 3.3 &#39;de açıklandığı gibi) yıkayın. </li><li> 15 dakika boyunca, 1 mg / L erioglaucine içinde kökler daldırarak mavi yumurta kütleler leke. </li><li> Su kökleri durulayın ve bireysel kök sistemine lekeli yumurta kitleler sayarak değerlendirmek. Bir ışıklı masa büyüteci yumurta kitlelere görselleştirmek yardımcı olmak için kullanılabilir. </li><li> Elenmiş bitkiler daha g için gerekli iseenetic çalışmaları, değerlendirme için kökleri yıkamadan önce üstleri kesmeyiniz. Yumurta kitleler boyama ve sayım sonrası, bir serada, organik toprak fide nakli terlemeyi azaltmak için yoğun üstleri budamak ve korumak. </li></ol> 6. Torbalar ve Enfeksiyon Değerlendirilmesinde Börülce Kök Enfeksiyon <ol><li> Nematod inokulum sayın ve daha önce açıklandığı gibi bir manyetik karıştırma plaka üzerinde karıştırın. </li><li> Yatay bir yüzey üzerinde asılı klasörler ve yerden torbalar çıkarın. 5 ml 1500 J2S ile birlikte her bir kılıf inoküle. Torba plastik kapağını kaldırın ve köklerin yüzeyi üzerinde eşit biçimde nematodlar dağıtmak. </li><li> Işık dışarıda karanlık kağıt kaplı aşılama, 24 saat sonra bir yatay konumda torbalar tutun, daha sonra büyüme odasında asılı klasörleri geri dönün. </li><li> Tablo 1; yarım gücü Hoagland çözümü (Hoagland ve Arnon, 1950 ile bir kez ya da günde iki kez gerektiği gibi su bitkileri, </strong&gt;) gübre bir yanıt elde edilinceye kadar, tipik olarak gelişmiş yeşillik yeşillendirilmesi ve daha dinç sürgün büyümesi. Genellikle bitkilerin üst üste yarım gücü Hoagland 3 gün ile sulandırılmıştır. Daha sonra su ile torbalar nemli tutmak. </li><li> Yaklaşık 30 gün (dağılım 28-35 gün) aşılama sonra, 75 mg / L erioglaucine 10-20 ml kadar her kese süzülür. Gecede yatay konumda boya ile sular altında torbalar tutun. </li><li> Torbalar boşaltın ve ışıklı masa büyüteci altında yumurta kitleler sayarak kök sistemleri değerlendirmek. </li><li> Ekranlı bitkiler ve genetik çalışmalar veya ıslah çalışmaları için gerekli ise, dikkatli bir serada saksıda organik toprak kağıt, nakil gelen kökleri çekin ve korumak. </li></ol> 7. Temsilcisi Sonuçlar Açıklanan iki sistemleri için nematodu aşılar için domates ve börülce bitkilerin uygun bir aşamada şekillerde gösterilmiştir1 ve 2. Buna ek olarak, domates ve börülce arasında iyi enfekte kökler örnekler Şekil 4 ve 5 de gösterilmiştir. Çoğu hastalık direnci ekranlarda olduğu gibi, enfeksiyon oranı ortalama hesaplamak için nematod aşılama için genotip için en az 6-10 bitkilerin kullanılması tavsiye edilir. Bitkiler arasındaki nematod enfeksiyonu farklılık, aynı genotip, üniforma tesis büyüklüğü ve doğru miktarda ve inokulum teslim kullanılarak azaltılabilir. Tepsiler ve büyüme torbaların kullanımı küçük bir büyüme alanı bitkilerin binlerce yüz tarama sağlar. Büyüme torbalar da çamaşır kökleri (Şekil 4) gerek olmadan kök-ur nematod enfeksiyonlarının hızlı ve etkili tahribatsız değerlendirme sağlar. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/3629/3629fig1.jpg" /> Şekil 1. Iki haftalık börülce bitki kese yetişen ve kök-ur nema için hazıraşılama Tode. <img alt="Şekil 2" src="/files/ftp_upload/3629/3629fig2.jpg" /> Şekil kök-ur nematodu aşılama için 2. Üç haftalık domates bitkisi hazır. <img alt="Şekil 3" src="/files/ftp_upload/3629/3629fig3.jpg" /> Şekil 3. Nematodların yüksek verimlilik inokülasyon için kullanılan modifiye bir iğne ve pipet. Bir iğne alt imzalandı ve deliklerin üç set bir lazer ışını kullanarak iğne sondaj gerçekleştirmiştir. Daha sonra, değiştirilen bir iğnenin bir 5 ml pipet ucu yapıştırılmış edildi. <img alt="Şekil 4" src="/files/ftp_upload/3629/3629fig4.jpg" /> Şekil 4. Kök-ur nematodları ile enfekte bir domates kök sistemi. <img alt="Şekil 5," src="/files/ftp_upload/3629/3629fig5.jpg" /> Şekil 5. 30 gün sonrası aşılama büyüdü erioglaucine ile boyanmış yumurta kitlesi olan bir börülce kök sistemi28 ° C.

<ol><li>Bhattarai, K. K., Xie, Q. G., Mantelin, S., Bishnoi, U., Girke, T., Navarre, D. A., Kaloshian, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tomato+susceptibility+to+root-knot+nematodes+requires+an+intact+jasmonic+acid+signaling+pathway%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Plant+Microbe+Interact%22%5BJournal%5D)">Tomato susceptibility to root-knot nematodes requires an intact jasmonic acid signaling pathway.</a> Mol. Plant Microbe Interact. 21, 1205-1214 (2008).</li>
<li>Ehlers, J. D., Matthews, W. C., Hall, A. E., Roberts, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inheritance+of+a+broad-based+form+of+root-knot+nematode+resistance+in+cowpea%5BTitle%5D)+AND+%22Crop+Sci%22%5BJournal%5D)">Inheritance of a broad-based form of root-knot nematode resistance in cowpea.</a> Crop Sci. 40, 611-618 (2000).</li>
<li>Hoagland, D. R., Arnon, D. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+water-culture+method+for+growing+plants+without+soil%5BTitle%5D)+AND+%22Calif.+Agric.+Exp.+Stn.+Circ%22%5BJournal%5D)">The water-culture method for growing plants without soil.</a> Calif. Agric. Exp. Stn. Circ. 347, (1950).</li>
<li>Hussey, R. S., Barker, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+methods+of+collecting+inocula+of+Meloidogyne+spp.%2C+including+a+new+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Dis.+Rep%22%5BJournal%5D)">A comparison of methods of collecting inocula of Meloidogyne spp., including a new technique.</a> Plant Dis. Rep. 57, 1025-1028 (1973).</li>
<li>Martinez de Ilarduya, O., Moore, A. E., Kaloshian, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+tomato+Rme1+locus+is+required+for+Mi-1-mediated+resistance+to+root-knot+nematodes+and+the+potato+aphid%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+J%22%5BJournal%5D)">The tomato Rme1 locus is required for Mi-1-mediated resistance to root-knot nematodes and the potato aphid.</a> Plant J. 27, 417-425 (2001).</li>
<li>Matkin, O. A., Chandler, P. A. The U.C.-type soil mixes. In: The U.C. system for producing healthy container-grown plants. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMatkin%2C+OA+%22Calif.+Agric.+Exp.+Stn.+Manual%22">Calif. Agric. Exp. Stn. Manual</a>. Baker, K. F. 23, 68-85 (1957).</li>
<li>Omwega, C. O., Roberts, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inheritance+of+resistance+to+Meloidogyne+spp.+in+common+bean+and+the+genetic+basis+of+its+sensitivity+to+temperature%5BTitle%5D)+AND+%22Theor.+Appl.+Genet%22%5BJournal%5D)">Inheritance of resistance to Meloidogyne spp. in common bean and the genetic basis of its sensitivity to temperature.</a> Theor. Appl. Genet. 83, 720-726 (1992).</li>
<li>Omwega, C. O., Thomason, I. J., Roberts, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+nondestructive+technique+for+screening+bean+germplasm+for+resistance+to+Meloidogyne+incognita%5BTitle%5D)+AND+%22Plant+Dis%22%5BJournal%5D)">A nondestructive technique for screening bean germplasm for resistance to Meloidogyne incognita.</a> Plant Dis. 72, 970-972 (1988).</li>
<li>Perry, R. N. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPerry%2C+RN+%22Root-Knot+Nematodes%22">Root-Knot Nematodes</a>. Moens, M., Starr, J. L. , CABI Publishing. Wallingford. (2009).</li>
<li>Starr, J. L., Cook, R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aStarr%2C+JL+%22Resistance+to+Parasitic+Nematodes%22">Resistance to Parasitic Nematodes</a>. Bridge, J. , CABI Publishing. Wallingford. (2002).</li>
</ol>

Biz ifşa hiçbir şey yok.

Oldukça enfektif inokulum ve uygun gelişim aşamasında bitkileri kullanarak hazırlanması: Başarılı bir nematod ekran için iki önemli adım vardır. Kök-ur nematodu yumurta açılma oranı 5 arasında oldukça değişken ve aralıkları - 50%. Bu nedenle kapak ve yüksek infektif J2S optimum seviyeleri elde etmek için, yakın ilgi ve kuluçkalık yumurta çıkarma işlemlerine ödenmelidir. Yumurta en az bir süre için ağartıcı maruz edilmeli ve ağartıcı kök karışımından de yıkanır edilmelidir. Kuluçka sırasında yumurta, yumurta içeren bulamaç suya edilmemelidir. Buna ek olarak, yumurtadan yavru toplanır yatan Petri tabağı içine dökülüp yumurta önlemek. Kuluçka işlemi sırasında yumurta dökülmesini önlemek için bir yolu kağıt bozabilecek olarak Kimwipe doğrudan su eklemek değildir. Bunun yerine Petri kabı doğrudan su ekleyin. En iyi sonuç için, taze yumurtadan J2S kullanın. Eğer hatch oranı düşüktür ve daha inokulum gerektirir, J2S uzun bir süre için 15 ° C&#39;de saklanabilir. Aşılama öncesi nematodların canlandırmak için oda sıcaklığında saklanan inokulum ısıtın. Ancak, hatta 15 yaşında uzun süre J2S saklamiyoruz ° C hasret J2S verimli enfekte olmayacak gibi. Genç fidanlar kök-ur nematodu aşılama için en iyi gelişim aşaması vardır. Ancak, bu J2S için giriş noktaları olarak kök uçları yeterli sayıda sağlayan yeterli bir kök sistemi oluşumu ile dengeli olmalıdır. Optimal bitki gelişimi durumu korunması da ekranlar için önemlidir. Özel poşetler içinde büyüyen bu aşırı sulanma bitkilerin kaçının. Torbalar Aşırı sulama, mantar gibi büyüme teşvik ve kök sağlık azaltabilir, kese dibinde su birikintileri ile gösterilir. Testler daha nematod enfeksiyonunun değerlendirilmesi ve yumurta / kök sistemi ve yumurta sayısının hesaplanmasında her ikisi ile / gram freSH kök gerçekleştirilebilir. Domates testlerde, bireysel kökler tartılır ve çıkarılan yumurta gibi inokulum hazırlanması (bölüm 3) nitelendirdi. Bitki örneklerinin çok sayıda işlerken, bireysel kök sistemleri yumurta çıkarılması için bir blender kullanılarak yumuşatılır olabilir. Yumurta sayısı en azından üç alikots içinde sayılır ve taze kök sistemi yumurta / gram hesaplanan edilmelidir. Kese testlerde, kök sistemi, kağıt ekleme çıkardı tartılır ve yumurta elde edilir.

kök-ur nematod ile yüksek ve düşük throughput ekranlar meloidogyne spp.</em

High and Low Throughput Screens with Root-knot Nematodes Meloidogyne spp.

Kök-ur nematodları (cinsi Meloidogyne) zorunlu bitki parazitlerdir. Bunlar son derece Polifag ve ekonomik açıdan en önemli bitki paraziti nematod biri kabul edilir. Yumurta bir kez tüy dökerler mikroskopik ikinci etap juvenil (J2), enfektif aşamasıdır. J2S, yumurtaları kırmayı bir su filmi içinde toprakta serbestçe hareket ve uygun bitki türlerinin kök uçları bulun. Bir yemleme sitesi kurmak ve onların stileleri kullanarak beslenmesi başlatırsak bitki kök nüfuz sonra, vasküler silindir doğru göç ederler. Çok hücreli besleme sitesi sitokinez olmadan karyokinesis (mitoz tekrarlanır) yapılan hücrelerden oluşur &#39;dev hücreler&#39; olarak adlandırılan birkaç genişlemiş multinükleer hücreler oluşur. Komşu pericycle hücreleri bölmek ve büyüklüğü tipik bir safra veya kök düğüm, kök-ur nematod enfeksiyonunun karakteristik belirti yol vererek büyütmek. Sonra beslenme başlanır, J2S sedanter ve un halineyetişkin olmak için üç ek molts dergo. Yetişkin kadın kök yüzeyi üzerinde veya altında jelatinimsi bir matris içinde 150-250 yumurta bırakır. Yumurtadan yeni enfektif J2S yumurtadan çıkar ve yeni bir döngü başlayacak. Kök-ur nematodu ömrü 26-28 az 4-6 hafta içinde tamamlanır ° C Burada kök-ur nematodları ve yüksek işlem deneyleri için iki yöntem ile saksıda yetiştirilen bitkiler, bulaştırmak için geleneksel protokolü sunarız. İkinci tür börülce ve fasulye gibi büyük tohum bitkilerinden için ise ilk yüksek verimli yöntem, domates gibi küçük tohumları ile bitkiler için kullanılır. Büyük tohum az besin takviyesi ile genişletilmiş fide büyümeyi desteklemektedir. İlk yüksek çıktı assay ikinci bir test bitkilerin toprağın yokluğunda torbalar içinde yetiştirilen ederken tepsilerde kum yetiştirilen fideler kullanmaktadır. Fide kılıf çekirdek veya fidelerinin yerleştirildiği bir 2-cm-derin çukur oluşturmak için üst kısmında katlandığında, bir 15.5 x 12.5cm kağıt fitil yapılmıştır.kağıt fitil şeffaf plastik poşet içinde bulunan. Bunlar büyüme poşetler şeffaf bir torba yüzeyinin altında, kök ve yumurta seri üretim incitici nematod enfeksiyonu semptomları, doğrudan gözlem sağlar. Her iki yöntem de üretim geçme ya tohumu, fenotipleme sonra, elenmiş bitkilerin kullanımına izin verir. Poşet rafları düzenlenen plastik asılı klasörlerde saklanır çünkü büyüme torbaların kullanımının bir avantajı küçük bir yer gereksinimi olduğunu.

Kök-ur nematodları ile ekran bitkiler için iki farklı yöntem tarif edilmiştir. Açıklanan yaklaşımlar ıslah programlarında bu bitkilerin kullanımı kolaylaştıran bir zarar vermeden nematodlar ile yüksek verimlilik ekranlar yer alıyor.

Kök-ur Nematod ile Yüksek ve Düşük Throughput Ekranlar Meloidogyne spp.</em

Kök-ur nematodları (Meloidogyne cinsi) zorunlu bitki parazitleridir. Son derece polifagdırlar ve ekonomik açıdan en önemli ... olarak kabul edilirler.

Bu prosedürün genel amacı, kök ur nematodları ile enfekte olmuş bitkileri taramaktır. İlk olarak, kumlu toprakta veya büyüme torbalarında sağlıklı fideler yetiştirin. Ardından, kök ur nematodlarının yüksek düzeyde enfekte olmuş ikinci evre juvenilerinden oluşan bir inokülum hazırlayın.Ardından fideleri uygun şekilde inoküle edin ve enfekte edin. Son olarak, konukçu kök sistemindeki nematod yumurta kütlelerinin gelişimini değerlendirin. Kökleri olan bitkilerle, nematodlarla değil, yüksek ve düşük kapasiteli taramaları göstereceğiz.Yüksek kapasiteli sistemin temel avantajları, bitki büyümesi için sınırlı alan gereksinimi ve enfeksiyon değerlendirmesinin kolaylığıdır. Bu yaklaşımlar; tekrarlanabilir ve tekdüze bir enfeksiyona, yani bitki köklerinin nematod enfeksiyonuna ve dolayısıyla bitkinin konukçu durumunun daha iyi değerlendirilmesine olanak tanıyacaktır. Genel olarak, kökleri nematodlar ile değerlendirme konusunda deneyimsiz kişiler, kökleri nematodlarla enfekte etmek için uygun gelişim aşamasını kullanmadıkları için zorluk yaşayabilirler.Ayrıca, genellikle düşük enfektiviteye sahip olan birkaç günlük enfektif evre juvenilyle kullanılarak, prosedürün uygulanması lisans ve lisansüstü öğrencilere gösterilecektir. Laboratuvarımda, saksı deneyleri için büyüme keselerinde tarama yapma prosedürünü göstereceğim. Domates tohumlarını, Sunshine Mix gibi organik maddece zengin bir toprakla doldurulmuş tek bir saksıya ekin ve çimlenmeden sonra serayı 22 ile 28 °C arasında tutun.Çimlenmeden yaklaşık iki hafta sonra, iki gerçek yaprak aşamasındayken haftada bir kez Miracle-Gro ile gübreleyin; tekil fideleri %90 kum ve %10 organik madde içeren steril kumlu toprakla doldurulmuş saksılara şaşırtın. OsmoCoat yavaş salınımlı gübre ekleyin ve iki hafta boyunca 22 ila 28 °C sıcaklıktaki bir serada tutun. Haftada bir kez Miracle-Gro ile gübrelemeye devam edin.Yüksek kapasiteli taramalar için, bitki tohumlarını kumlu toprak içeren tepsilere doğrudanlekin. Çimlenme gerçekleşene kadar plastik filmle örtün ve daha önce açıklanan şekilde muhafaza edin. Çimlenmeden sonra, Osmo coat yavaş salınımlı gübre ekleyin ve haftada bir kez miracle grow ile gübreleyin; tohumları, bir inkübatörde 25 ila 28 °C'de tutulan ve birkaç kat Kim White kağıdı ile kaplanmış bir Petri kabında çimlendirin ve ardından fideleri bireysel poşetlere aktarın.Alternatif olarak, tohumları doğrudan bireysel poşetlerde çimlendirmek için kağıt oluğa yerleştirin. Poşetleri, her klasöre birer tane gelecek şekilde plastik asılabilir dosyalara yerleştirin ve dosyaları bir rafa dikey konumda düzenleyin.Rafı, 25 ila 28 derece Celsius sıcaklıkta ve 16 saat ışık, sekiz saat karanlık döngüsünün korunduğu kontrollü bir ortam odasına yerleştirin. Ekimden yaklaşık 10 ila 14 gün sonra torbaları günde bir veya iki kez ters osmoz suyu ile sulayın. Tersiyer kök uçlarına sahip yeterli bir kök sistemi geliştiğinde, fideler inokülasyon için hazır hale gelir. Yumurta ekstraksiyonuna başlamadan önce, kontaminasyonu önlemek için çalışma alanını ve tüm aletleri sıcak suyla iyice yıkayın.Çözeltiyi geçirmek için lavaboya bir kova yerleştirin ve üst kısmına tel örgü destek konumlandırın. Yumurtaların 25 mikronluk elekte toplanması için üç eleği, gözenek boyutları yukarıdan aşağıya doğru azalan şekilde üst üste dizin. Enfekte bitkilerin üst kısımlarını kesin ve dikkatlice atın.Bitkiyi saksıdan çıkarın ve su dolu plastik bir kovaya daldırarak kökleri yıkayın. Toprak partikülleri temizlenene kadar kökleri akan su altında daha fazla durulayın. Ardından, enfekte domates köklerinden kök ur nematod yumurtalarını ekstrakte edin.İlk olarak, makas kullanarak kökleri küçük parçalar halinde kesin ve kazık kökü atın. Tek bir bitkiden elde edilen doğranmış kökleri kapaklı büyük bir plastik kavanoza koyun ve kökleri örtecek kadar %10'luk çamaşır suyu çözeltisi ekleyin. Kapağı kapatın ve kavanozu iki dakika boyunca çalkalayın.Kavanozu açın, kökleri üst süzgece dökün ve püskürtme uçlu bir hortumla yıkayın. Tüm çamaşır suyu kokusu gidene kadar iyice yıkayın. Süzgecin tıkanmasını önlemek için süzgeçlerin yanlarına bir tokmakla hafifçe vurun.Duraklatın, üstteki eleği çıkarın ve kalıntıları durulayın. Ardından ikinci eleği çıkarın ve bir su şişesinden gelen hafif bir akışla, önceki elekten gelen yumurtaları da içeren ince kalıntıları toplayın.Kalıntıları eleğin bir yanına itin. Kalıntıları ve yumurtaları minimum miktarda su ile temiz bir behere toplayın. Kaçmış olabilecek yumurtaları toplamak için kovada biriken suyu 25 mikronluk elekten geçirin.Su ile iyice durulayın ve aynı beherde toplayın. Temiz bir metal sepeti birkaç kat Kim wipe kağıdı ile kaplayın ve sepetin altı ile petri kabı arasında bir santimetre mesafe kalacak şekilde cam bir petri kabına yerleştirin.Ekstrakte edilen nematod yumurtalarını kağıdın üzerine dökün. Tel sepetin içine. Tel sepetin tabanı su yüzeyine temas edecek ancak suyun içine gömülmeyecek kadar sıvı ekleyin.Üst kısmı her gün plastik bir kapakla kapatın. Su buharlaşmasını kontrol edin ve sepetin tabanı suya değecek şekilde Petri kabına bir miktar su ekleyin. Yumurtaların kurumasını önlemek için, altı ila sekiz gün boyunca gün aşırı olarak, ikinci evre juvenileri veya J2'leri içeren suyu Petri kabından bir behere toplayın.Kullanılmayacaksa, toplanan inokülümü laboratuvar hava kaynağı veya akvaryum pompasıyla üretilen hava kullanarak oda sıcaklığında hemen havalandırın. Bir sonraki adıma, inokülümü düşük hızda bir manyetik karıştırıcı plaka üzerinde karıştırarak başlayın. Toplanan nematodların üç alikvotunu kullanın.Muhasebe işlemlerindeki J ikililerinin sayısını belirlemek için lam veya kap kullanın, ortalamayı hesaplayın ve inokülasyon için gereken hacmi belirleyin. Bunlar, mikroskop altında görüntülenen J ikilileridir.Genellikle, saksılardaki bitki başına 3000 J twos ve fide tepsilerinde yetiştirilen bitkiler için 500 J twos kullanılır. Bitkileri inoküle etmeden önce, toprağın nemli olduğundan ancak çok ıslak olmadığından emin olun. Saksı inokülasyonu için, her domates kök sisteminin etrafındaki kuma, yaklaşık saksı derinliğinin yarısı kadar üç delik açın.Bir kurşun kalem kullanarak, J twos'u bir pipet yardımıyla üç deliğe aktararak her bir bitkiyi inoküle edin. Ardından, tepsilerdeki yüksek verimli taramalar için delikleri kapatın. Yan kısımlarında delikler bulunan ve beş mililitrelik bir pipete yapıştırılmış, modifiye edilmiş sızdırmaz uçlu bir iğne kullanın.J twos'u toprağa iletmek için bir pipetleyiciyi eğiniz. Bitkileri altı ila sekiz hafta boyunca 24 to 27 °C sıcaklıktaki bir serada tutunuz. Ayda iki kez miracle grow ile gübrelemeye devam ediniz.Enfeksiyon değerlendirmesi için. Üst kısımları kesin, bitkileri saksılardan dikkatlice çıkarın ve kökleri yıkayın. Ardından, kökleri litre başına bir miligram çözeltiye daldırarak yumurta kütlelerini maviye boyayın.15 dakika boyunca Aerio ile parlatma işlemi yapın. Kökleri suyla durulayın ve tekil kök sistemleri üzerindeki boyanmış yumurta kitlelerini sayarak değerlendirme yapın. Yumurta kitlelerini görüntülemek, nematodları saymak, inokulumu hazırlamak ve daha önce açıklandığı üzere manyetik karıştırıcı plaka üzerinde karıştırmak için aydınlatmalı bir stereo mikroskop kullanılabilir.Keseleri askılı dosyalardan çıkarın ve yatay bir yüzeye yerleştirin. Her bir keseye, beş mililitrede 1.500 J2 inoküle edin. Kesenin plastik kapağını kaldırın ve nematodları köklerin yüzeyine eşit şekilde dağıtın.İnokülasyondan sonra poşetleri, ışığı engellemek için koyu renkli kağıtla örtülmüş şekilde 24 saat boyunca yatay pozisyonda tutun. Ardından poşetleri, büyüme odasındaki suyun içinde bulunan asılı dosyalara geri yerleştirin. Gübreye karşı bir yanıt gözlemlenene kadar bitkilerin, yaklaşık üç gün boyunca günde bir veya iki kez yarı konsantrasyonlu Hoagland çözeltisi ile beslenmesi gerekir.Genellikle artmış yaprak yeşilliği ve daha güçlü sürgün büyümesi görülür. Üç gün sonra, torbaları su ile nemli tutun. İnokülasyondan yaklaşık 30 gün sonra, her torbaya yaklaşık 10 ila 20 mililitre 75 miligram liter infüze edin.Hava ile parlatma. Torbaları gece boyunca yatay pozisyonda boya ile dolu tutun. Ertesi gün torbaları boşaltın ve aydınlatmalı bir masa altında yumurta kütlelerini sayarak kök sistemlerini değerlendirin.Burada büyütülmüş olarak gösterilenler, yaygın mavi boyalı yumurta kütleleri içeren, yoğun şekilde enfekte olmuş bir domates bitkisinin kökleridir. Tepsilerin kullanımı, küçük bir yetiştirme alanında yüzlerce bitkinin taranmasına olanak tanır. Yetiştirme torbaları ayrıca, kökleri yıkamaya gerek kalmadan, köklerin ve nematod enfeksiyonlarının hızlı ve yeterli şekilde tahribatsız değerlendirilmesine imkan sağlar.Bu yöntem ayrıca, küçük bir büyüme alanında binlerce bitkinin yüksek verimli taranmasına olanak tanır. Burada, bir poşette yetiştirilen bir cow P bitkisinin kök sistemi, inokülasyon sonrası maviye boyanmış yumurta kütlelerini göstermektedir. Nematodlarla yapılan bitki deneylerinde enfeksiyon zamanlaması oldukça kritiktir.Bu nedenle, enfeksiyonun sadece birkaç gün geciktirilmesi bile enfeksiyon seviyelerinin çok düşük olmasına yol açabilir. Bu videoyu izledikten sonra, bitkilerin kök ur nematodları ile nasıl enfekte edileceği ve değerlendirileceği konusunda artık iyi bir anlayışa sahip olmalısınız. Nematodla enfekte olmuş köklerin uygun şekilde işlenmesi gerektiğini unutmayın.Köklerin imha edilmeden önce otoklavlanması, nematodun yayılmasını sınırlayacaktır. Ayrıca, yüksek dozlarda kullanıldığı için havayolu glisinin kullanımı sırasında dikkatli olun. Kanserojendir.Bu nedenle, hem bu kimyasalla enfekte olmuş kökleri işlerken hem de bu kimyasalın hazırlanması sırasında eldiven kullanmanız gerekir.

high-low-throughput-screens-with-root-knot-nematodes-meloidogyne

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Floresan Mikroskobu kullanılarak Nematodlar Bakteriler görselleştirme

Bu videoda, küçük moleküllü nematisitlerin nematodlara karşı etkinliğini belirlemek için bir tarama testi gösteriyoruz. Nematisitler, maruziyetten sonra numunedeki mobil nematod sayısında bir azalmaya neden olurlarsa etkili kabul edilirler.

Küçük Moleküllü Nematisit Tarama Deneyi: Potansiyel Nematisitleri Ditylenchus dipsaci'ye Karşı Taramak İçin Orta Verimli Bir Yöntem

Entomopatojenik nematodlar böcek geniş bir yelpazede parasitize toprakta yaşayan yuvarlak solucan bulunmaktadır. Sırasıyla toprak örneklerinin ve enfekte olmuş böcek kadavra, nematod geri kazanılması için böcek kızdırma ve modifiye edilmiş beyaz tuzak: iki teknikler kullanılarak topraktan bu nematod izolasyonu için kullanılan örnekleme yöntemlerini göstermektedir.

Toprak Örnekleme ve Entomopatojenik Nematodlar İzolasyonu (Steinernematidae, Heterorhabditidae)

Burada, reniform Nematot direnci için pamuk genotiplerinin hızlı yıkıcı olmayan taramasında bir protokol sunulmuştur. Protokol, enfeksiyon tepkisi belirlemek için Nematode enfekte pamuk fide kökleri görsel olarak inceleyerek içerir. Her bitkinin vejetatif çekimi daha sonra tohum üretimi için bitkiler kurtarmak için yayılır.

Reniform Nematode direnci için pamuk Genotürleri eleme

Bu protokol, alandaki doğal substratlardan canlı nematodları verimli bir şekilde çıkarmak için bir yöntem özetler.

Baermann Huni tarafından Vahşi Nematodların Hızlı İzolasyonu

Mevcut protokol, Ditylenchus dipsaci'nin kültürlenmesi, toplanması ve taranması için güvenilir ve basit bir yöntem tanımlamaktadır.

Bitki Parazitik Nematodu Ditylenchus dipsaci Kültürleme ve Eleme

Burada, gen fonksiyonlarının incelenmesini kolaylaştırmak için Bursaphelenchus xylophilus'ta RNA girişiminin ayrıntılı bir ıslatma yöntemini tanıtıyoruz.

RNA Girişiminin Çam Ağacı Nematodunda Uygulanması, Bursaphelenchus xylophilus

Protokol, Solanum tuberosum köklerinin in vivo sera koşullarında bitki parazitik nematodları ve optik mikroskopi ile kök yapısının histokimyasal analizi için patates in vitro transgenik kökleri ile enfeksiyonunu açıklar.

İndüklenen Yapısal Değişikliklerin Değerlendirilmesi için Patates Köklerinin Bitki Paraziti Nematodlarla İn vivo ve İn vitro Enfeksiyonu

Çiftçilere entomopatogenik nematodları biyo-böcek ilaçları olarak toplu olarak yaymaları için iki yöntem sunuyoruz. İlk yöntem, nematod kültürleme alt tabakası olarak poliakrilamid jel kullanırken, ikinci yöntem kültür substratı olarak polimer kaplı pamuk yünü kullanır. Her iki yöntem de böcek kadavralarında nematodların in vivo yayılmasına dayanır.

Yetiştirici Temelli Entomopatotik Nematodların In Vivo Yayılması

Bu yöntem, yüksek hassasiyet enfekte olmuş fareler bronkoalveoler lavaj (BAL) sıvısında H1N1 tespiti için Kızılötesi boya temelli görüntüleme sisteminin kullanımı açıklanmaktadır. Bu metodoloji, bir 96 veya plaka 384-iyi, test malzemesi &lt;10 ul hacmi gerektirir ve birden fazla patojenlerin eşzamanlı tarama için bir potansiyele sahiptir.

Gribi için yüksek verimlilik Tespit Yöntemi

Öğrenin, Meloidogyne spp. ile bitki tarama yöntemlerini; yüksek verimli ekranlar, az alan gereksinimi ve üreme programları için direnç değerlendirmesi sağlar.

Kök-ur Nematod ile Yüksek ve Düşük Throughput Ekranlar Meloidogyne spp.

Daha fazla video keşfet