Name: Ex vivo İzole İskelet mikrodamar Hazırlık (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-04-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min
Description: Öğrenin, grasilis kasından direnç arteriyollerini izole edip çift kanülasyonla ekz vivo vasküler reaktiviteyi değerlendirin. Bu yöntem, damar fonksiyonu ve disfonksiyon mekanizmalarını incelemek için güvenilir bir yaklaşım sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma, Amerikan Kalp Derneği (ÇED 0740129N) ve NIH T32 HL90610 tarafından desteklenmiştir.

<ol><li>Goodwill, A. G., Frisbee, S. J., Stapleton, P. A., James, M. E., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+Chronic+Anticholesterol+Therapy+on+Development+of+Microvascular+Rarefaction+in+the+Metabolic+Syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Impact of Chronic Anticholesterol Therapy on Development of Microvascular Rarefaction in the Metabolic Syndrome.</a> Microcirculation. , 1-18 (2009).</li>
<li>Goodwill, A. G., James, M. E., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+vascular+thromboxane+generation+impairs+dilation+of+skeletal+muscle+arterioles+of+obese+Zucker+rats+with+reduced+oxygen+tension%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Increased vascular thromboxane generation impairs dilation of skeletal muscle arterioles of obese Zucker rats with reduced oxygen tension.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 295, H1522-H1528 (2008).</li>
<li>Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth-dependent+changes+in+endothelial+factors+regulating+arteriolar+tone%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Growth-dependent changes in endothelial factors regulating arteriolar tone.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 292, H207-H214 (2007).</li>
<li>Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrogen+peroxide+emerges+as+a+regulator+of+tone+in+skeletal+muscle+arterioles+during+juvenile+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Hydrogen peroxide emerges as a regulator of tone in skeletal muscle arterioles during juvenile growth.</a> Microcirculation. 15, 151-161 (2008).</li>
<li>Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+myogenic+responsiveness+of+skeletal+muscle+arterioles+with+juvenile+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Increased myogenic responsiveness of skeletal muscle arterioles with juvenile growth.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 294, 2344-2351 (2008).</li>
<li>Dacey, R. G., Duling, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+study+of+rat+intracerebral+arterioles%3A+methods%2C+morphology%2C+and+reactivity%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">A study of rat intracerebral arterioles: methods, morphology, and reactivity.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 243, H598-H606 (1982).</li>
<li>Fredricks, K. T., Liu, Y., Lombard, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Response+of+extraparenchymal+resistance+arteries+of+rat+skeletal+muscle+to+reduce+PO2%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Response of extraparenchymal resistance arteries of rat skeletal muscle to reduce PO2.</a> Am. J. Physiol. 267, H706-H715 (1994).</li>
<li>Durand, M. J., Raffai, G., Weinberg, B. D., Lombard, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Angiotensin-%281-7%29+and+low-dose+angiotensin+II+infusion+reverse+salt-induced+endothelial+dysfunction+via+different+mechanisms+in+rat+middle+cerebral+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Angiotensin-(1-7) and low-dose angiotensin II infusion reverse salt-induced endothelial dysfunction via different mechanisms in rat middle cerebral arteries.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 299, H1024-H1033 (2010).</li>
<li>LeBlanc, A. J., Cumpston, J. L., Chen, B. T., Frazer, D., Castranova, V., Nurkiewicz, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoparticle+inhalation+impairs+endothelium-dependent+vasodilation+in+subepicardial+arterioles%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Toxicol.+Environ.+Health+A%22%5BJournal%5D)">Nanoparticle inhalation impairs endothelium-dependent vasodilation in subepicardial arterioles.</a> J. Toxicol. Environ. Health A. 72, 1576-1584 (2009).</li>
<li>Jernigan, N. L., LaMarca, B., Speed, J., Galmiche, L., Granger, J. P., Drummond, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+salt+enhances+benzamil-sensitive+component+of+myogenic+constriction+in+mesenteric+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Dietary salt enhances benzamil-sensitive component of myogenic constriction in mesenteric arteries.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 294, H409-H420 (2008).</li>
<li>Stapleton, P. A., Goodwill, A. G., James, M. E., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+mechanisms+of+endothelium-dependent+dilation+in+skeletal+muscle+arterioles+with+genetic+hypercholesterolemia%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Regul.+Integr.+Comp.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Altered mechanisms of endothelium-dependent dilation in skeletal muscle arterioles with genetic hypercholesterolemia.</a> Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 293, R1110-R1119 (2007).</li>
<li>Goodwill, A. G., Stapleton, P. A., James, M. E., d'Audiffret, A. C., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+arachidonic+acid-induced+thromboxane+generation+impairs+skeletal+muscle+arteriolar+dilation+with+genetic+dyslipidemia%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Increased arachidonic acid-induced thromboxane generation impairs skeletal muscle arteriolar dilation with genetic dyslipidemia.</a> Microcirculation. 15, 621-631 (2008).</li>
<li>Baumbach, G. L., Hadju, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanics+and+composition+of+cerebral+arterioles+in+renal+and+spontaneously+hypertensive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Mechanics and composition of cerebral arterioles in renal and spontaneously hypertensive rats.</a> Hypertension. 21, 816-826 (1993).</li>
<li>Uchida, E., Bohr, D. F., Hoobler, S. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+studying+isolated+resistance+vessel+from+rabbit+mesentery+and+brain+and+their+responses+to+drugs%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">A method for studying isolated resistance vessel from rabbit mesentery and brain and their responses to drugs.</a> Circ. Res. 4, 525-536 (1967).</li>
<li>Davis, M. J., Kuo, L., Chilian, W. M., Muller, J. M. I. solated Chapter 23. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDavis%2C+MJ+%22Isolated%2C+perfused+microvessels.+In%3A+Clinically+Applied+Microcirculation+Research%22">Isolated, perfused microvessels. In: Clinically Applied Microcirculation Research</a>. Barker, J. H., Anderson, G. L., Menger, M. D. 32, CRC Press, Inc. 435-456 (1995).</li>
<li>Lombard, J. H., Liu, Y., Fredricks, K. T., Bizub, D. M., Roman, R. J., Rusch, N. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electrical+and+mechanical+responses+of+rat+middle+cerebral+arterieal+to+reduced+PO2+and+prostacyclin%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Electrical and mechanical responses of rat middle cerebral arterieal to reduced PO2 and prostacyclin.</a> Am. J. Physiol. 276, H509-H516 (1994).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Bu genel teknik kolaylıkla en dokular için uygulanabilir olmasına rağmen sunulan protokolü, bir iskelet kası mikrodamar izolasyonu, çıkarma ve çift kanül açıklanmaktadır. Mevcut yazı için dönem &quot;arteriyol&quot; da önemli bir bir organ perfüzyon direnç düzenlemesine katkı sağlayan veya dinlenen aktif ton altında çapı 70-120 mikron arasında değişen bir direnç damarı tanımlamak için yazarlar tarafından kullanılmıştır doku. Bazı değişikliklerle, bu sistem spesifik araştırıcı için birden faz...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktifler ve Ekipmanları </td><td> Şirket </td><td> Yorumlar / Katalog # </td></tr><tr><td> Gemi Odası </td><td> Özel </td><td> Dave Eick (MCW) </td></tr><tr><td> Isıtmalı Sirkülasyon Su Banyosu </td><td> PolyScience ve Haake </td><td> Haake DC 10 </td></tr><tr><td> Pipetleri </td><td> Frederick Haer &amp; Co </td><td> Kılcal Boru 2,0 mm OD x 1.0 mm ID (27-33-1) </td></tr><tr><td> Basınç Monitörü </td><td> Dünya Hassas Aletler </td><td></td></tr><tr><td> Su Ceketli Rezervuar </td><td> Özel </td><td></td></tr><tr><td> Dış Işık Kaynağı </td><td> Dünya Hassas Aletler </td><td> Novaflex </td></tr><tr><td> Pipetleyin Çektirme </td><td> Mikro veri Aletleri </td><td> PMP102 mikropipet Çektirme </td></tr><tr><td> Tam Complecerrahi aletler Ment </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> Dumont </td></tr><tr><td> Ultra İnce Forseps </td><td> Güzel Bilim Araçları </td><td> Inox # 5 </td></tr><tr><td> İpek Sütür Konu </td><td> Ethilon </td><td> # 10-0 veya 9-0 </td></tr><tr><td> Stereo Mikroskop </td><td> Olympus </td><td> Olympus SZ-11 </td></tr><tr><td> Analog Video Kumpaslar </td><td> Boeckeler </td><td> Via Kontrolörü (Via-100) </td></tr><tr><td> Yüksek Çözünürlüklü Analog Kamera </td><td> Panasonic </td><td> GP-MF 602 </td></tr><tr><td> Oksijen Tankı </td><td> Bölgesel </td><td> % 21 denge azot ve% 5 CO 2 dengesi azot </td></tr><tr><td> Borular </td><td> Tygon </td><td></td></tr><tr><td> Pompa boşaltın </td><td> Cole Parmer Instrument Co </td><td></td></tr><tr><td> Modifiye Rat PSS </td><td> Aşağıda tarifi bak </td><td></td&gt; </tr><tr><td> Van Breemen en Relaxant PSS </td><td> Aşağıda tarifi bak </td><td></td></tr></tbody></table> Tablo 1. Rakamlar sunulan izole mikrodamar istasyonu kurulumu en önemli bileşenlerinden bir listesi. <table border="1"><tbody><tr><td> Modifiye Rat PSS tarifi </td><td> PSS iki litre yapmak için </td><td> 20X Tuz Stok (2L) </td><td> 20X Tampon Stok (2L) </td></tr><tr><td> NaCl </td><td></td><td> 278.0 g </td><td></td></tr><tr><td> KCl </td><td></td><td> 14.0 g </td><td></td></tr><tr><td> MgSO 4-7H 2 O </td><td></td><td> 11.5 g </td><td></td></tr><tr><td> CaCI2-H2O </td><td></td><td> 9.4 g </td><td></td></tr><tr> &lt;td&gt; NaHCO 3 </td><td></td><td></td><td> 80.8 g </td></tr><tr><td> EDTA </td><td></td><td></td><td> 0.4 g </td></tr><tr><td> NaH 2 PO 4 </td><td> 0.28 g </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Glikoz </td><td> 1.98 g </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x Tuz Stok </td><td> 100 mL </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x Tampon Stok </td><td> 100 mL </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Distile Su </td><td> 1800 mL </td><td></td><td></td></tr></tbody></table> Tablo 2. Izole mikrodamar protokolleri kullanılan standart fizyolojik tuz çözeltisi (PSS) için tarifi. Tarif Hakkında Yorum: Tuz Stok 2 L ve Tampon Stok 2 L olun. Bunlar cBir kullanılmadığı zaman buzdolabında, ama iyi ve çoğu PSS hazırlarken önce onları sallayın. Ilave maddeler nihai PSS hazırlanması sırasında eklendi. <table border="1"><tbody><tr><td> Van Breemen en Relaxant PSS </td><td> PSS 2 litre yapmak için </td><td> 20X Tuz Stok (1L) </td><td> 20X Tampon Stok (1L) </td></tr><tr><td> NaCl </td><td></td><td> 107.4 g </td><td></td></tr><tr><td> KCl </td><td></td><td> 7.0 g </td><td></td></tr><tr><td> MgSO 4-7H 2 O </td><td></td><td> 5.76 g </td><td></td></tr><tr><td> MgCl 2-6H 2 O </td><td></td><td> 81.32 g </td><td></td></tr><tr><td> NaHCO 3 </td><td></td><td></td><td> 40.4 g </td></tr><tr><td> EDTA </td><td></td><td></td><td> 0.2 g </td></tr><tr><td> EGTA </td><td></td><td></td><td> 15.22 </td></tr><tr><td> NaH 2 PO 4 </td><td> 0.28 g </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Glikoz </td><td> 1.98 g </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x Tuz Stok </td><td> 100 mL </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x Tampon Stok </td><td> 100 mL </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Distile Su </td><td> 1800 mL </td><td></td><td></td></tr></tbody></table> Tablo 3. Sıfır aktif ton arasında koşullar altında izole mikrodamar protokoller kullanılır Van Breemen en gevşetici fizyolojik tuz çözeltisi (PSS) için tarifi. Tarif Comments on: Bir Tuz Stok 1 L olunTampon Stok nd 1 L. Bunlar kullanılmadığı zaman buzdolabında, ama iyi ve çoğu PSS hazırlamadan önce onları sarsamaz. Ilave maddeler nihai gevşetici PSS hazırlanması sırasında eklendi.

ex vivo</emvasküler reaktivite incelenmesi için> İzole İskelet mikrodamar hazırlık

The ex vivo Isolated Skeletal Microvessel Preparation for Investigation of Vascular Reactivity

İzole mikrodamar hazırlanması, böylece perfüzyon direnci 1-5 farklı faktöre katkı kontrol eden damar çapı incelenmesi için izin veren bir ex vivo hazırlanması, ve. Bu başlangıçta. 15 birkaç yıl önce Uchida ve ark, büyük ölçüde, olduğu klasik bir deney preparatıdır. Bu ilk açıklama kapsamlı öncelikle Virginia 6-8 Üniversitesi&#39;nde Dr Brian Duling laboratuvarında, değiştirilmiş ve geliştirilmiş oldu teknikleri için temel oluşturmuştur ve biz sayfalarda güncel bir yaklaşımla sunmak. Bu preparasyon özellikle tercih mikrodamar gibi bir sıçan gracilis arteriyol bakınız, ancak bazik hazırlanması kolay türler arasında yaklaşık 9-13 başka doku veya organ izole damarlarının uygulanabilir. Izole mikrodamarlar Mekanik (yani boyutlu) değişiklikleri kolayca değerlendirilebilirfizyolojik (örneğin, hipoksi, damar içi basınç veya kesme) veya farmakolojik zorluklar ve sağlam bir entegre yanıtları oluşan mekanik elemanlar içgörü sağlayabilir, ancak ex vivo, doku geniş bir dizi yanıt olarak. Bu yöntemin önemi de damar içi basınç (miyojenik), otonomik innervasyonu, hemodinamik de dahil olmak üzere, diğer kaynaklardan gelen katkıların çoğunun kontrolü için izin verirken o, mikrodamar çapında entegre regülasyonu üzerine etkilerinin kolay manipülasyon için izin vermesidir ( makaslama stresi), endotel bağımlı veya bağımsız uyaranlar, hormonal ve parankimal etkileri, kısmi bir liste sunmak için. Uygun deneysel koşullar altında ve uygun hedefleri ile, bu in vivo ya da kolayca geniş sistemik değişkenlerin uyduruk kontrolü için izin vermez yerinde doku / organ hazırlıklarda, üzerinde bir avantaj olarak hizmet verebilir. MaBu hazırlığın jor sınırlama aslında onun güçlü yönlerinden sonucudur. Tanım olarak, bu gemilerin davranışları vasküler rezistans düzenlenmesinde en önemli katkıda bulunan birçok Gibi, nöral humoral, metabolik, vb dahil olmak üzere, kaldırılmış koşullarda çalışılmaktadır, araştırmacı önlemek için aşırı ihtar verilir yorumlanması ve bu hazırlık kullanılarak toplanan verilerin ekstrapolasyonu. Bu hazırlık ile ilgili endişe diğer önemli alan bu tür endotelinde veya damar düz kas gibi hücresel bileşenlere zarar çok kolay olabilir yani, hata bu tür değişken kaynak sokulabilir. Kuvvetle bireysel araştırmacı deney başlangıcında ve periyodik bir protokol boyunca hem hazırlık kalitesini sağlamak için uygun ölçümler kullanmak önerilir.

Bir<em&gt; Ex vivo</em&gt; Hazırlık vasküler vazoaktif uyaranlara tepkiler ve pasif duvar mekaniği ile temel yapısal özelliklerinin değerlendirilmesi hem de sorgulama için büyük gracilis kas direnci arteriol izolasyonu için açıklanmıştır.

Ex vivo</emVasküler Reaktivite incelenmesi için> İzole İskelet mikrodamar Hazırlık

İzole mikrodamar preparatı, damar kontrolünü sağlayan faktörlerin farklı katkılarının incelenmesine olanak tanıyan ex vivo bir preparattır...

Bu prosedürün genel amacı, bireysel direnç arteriyollerini cerrahi olarak izole etmek, çıkarmak ve çift taraflı olarak kanüle etmektir. Ex vivo bir ortamda inceleme yapmak için bu işlem, öncelikle anestezi altındaki bir hayvanda mikro damarların tanımlanması ve cerrahi olarak izole edilmesiyle gerçekleştirilir. Mikro damarlar bir damar odasına aktarıldıktan sonra, mikro damarların hem proksimal hem de distal uçları kanüle edilir.Son olarak, damarın kendisine özgü olan fonksiyon veya disfonksiyonun altında yatan mekanizmaları değerlendirmek amacıyla, mikrodamarlar farmakolojik veya fizyolojik zorlanmalara ve deneysel müdahalelelere maruz bırakılır. Nihayetinde sonuçlar, uygun şekilde hedeflenmiş uyaranlar ve müdahaleler aracılığıyla, izole bir ortamda vasküler reaktivitenin altında yatan paternleri ve katkıda bulunan mekanizmaları ortaya koyar. Genel olarak, bu yöntemde yeni olan kişiler zorluk yaşayacaktır; çünkü bu preparasyon, yalnızca mikroskop altında gerçekleştirilecek mükemmel cerrahi becerilerin geliştirilmesini değil, aynı zamanda sıklıkla yüz mikronun çok daha altında olan bir çapa sahip izole bir mikrodamarı çift taraflı kanüle etmek için gereken sabrı ve ince motor kontrolünü de gerektirir.Bu işlem, damara verilen travma mutlak minimum düzeyde tutularak yapılmalıdır; aksi takdirde tüm prosedür yalnızca yanıtsız bir damarla sonuçlanacaktır. Prosedürü uygulamak olan kişi, laboratuvarımdan lisansüstü öğrencisi Joshua Butcher olacaktır. İzole mikro damarlar üzerinde çalışmaya başlamadan önce hazırlık aşamasına geçiniz. Önceden hazırlanmış cam mikro pipetleri bir bütan alevi üzerinde ısıtarak uygun bir konfigürasyona getirmekle başlayınız. Ardından, uçları uygun bir çapta kırmak için ince pensler kullanınız.İki mikro pipeti, uçları kap alanı içinde aynı dikey ve yatay düzlemde olacak şekilde konumlandırarak, mikro kaplar bölmesi için ayrılmış pipet tutuculara karşılıklı olarak yerleştirin. Ardından, bir fizyolojik tuz solüsyonu veya PSS hazırlayın ve pH değerinin spesifik deneysel koşullar için uygun seviyelerde olduğunu kontrol edin. Damar çapını ölçmek için kullanılacak dijital video kumpaslarını, bir hemositometre veya mikroskop sahne mikrometresi kullanarak kalibre edin.Mikrodamarları pipetlere tutturmak için tek uçlu halkalar hazırlamak amacıyla sekiz sıfır veya daha küçük oftalmik sütür kullanın. Halkaları, deney gününde bir petri kabı içerisinde, bir mikroskop lamına sarılmış küçük bir bant şeridi üzerinde saklayın. Damar haznesindeki ve PERFUSE sekiz ile SUSE sekiz rezervuarlarındaki dengeleme gazlarını açın.Tüm rezervuarları, tüpleri ve odacıkları PSS çözeltisi ile doldurun. Gerektiğinde, pipetin tıkalı olmadığını ve tamamen dolduğunu doğrulamak için bir şırınga kullanarak PSS'yi pipet boyunca nazikçe itin. Basınç dönüştürücülerine zarar vermemek için giriş basıncını makul sınırlar içinde tutun.Hayvan anesteziye alındıktan ve mikrovasküler yapılar açığa çıkarıldıktan sonra, dış kısmı tutmak için ince pensler kullanarak ve damar boyunca keserek mikrovasküleri çıkarın. Damarı asılmamasına veya çekilmemesine aşırı dikkat edin. Ardından, damarı dolu su banyosuna yerleştirin ve bir çift ince pens ile düşük bir perfüzyon hızı kullanarak, proksimal damar lümen duvarının her iki yanını tutun ve proksimal ucu giriş pipetine kanüle edin.Ardından kabı kanül uçlarına geçirin ve kabı, T döngüleri kabı sabitleyebilecek noktaya kadar uç üzerinde ilerletin. Kabın distal ucu için T döngüsünü yerleştirin ve bunu çıkış pipetine kanüle ederek T döngüleri ile sabitleyin. Kaptaki deformasyon minimuma inene ve kap in vivo uzunluğa yaklaşana kadar kanülü ayarlayın.Uygun gaz karışımını veren küçük bir difüzör taşı banyoya yerleştirin. Mikroskop lensine sıçramaları önlemek için haznenin üzerine streç film veya cam bir kapak kapatın. Kabın içinde basınç oluşup oluşmadığını belirlemek için çıkış borusunu periyodik olarak kıskaçla sıkıştırın.Damardaki basıncı artırıp ardından çıkış ve giriş hatlarını klempleyerek damarlarda sızıntı olup olmadığını kontrol edin. Eğer intralüminal basınç sabitse, belirgin bir sızıntı yoktur. Eğer damarda sızıntı yapan küçük bir yan dal varsa, mikro damarların kanülasyonundan, dengelenmesinden ve doğrulanmasından sonra burayı tek döngü 10-0 oftalmik sütür ile bağlayın; ardından başlangıç kontrol yanıtlarını belirlemek için deneye başlayın.Örneğin, miyojenik aktivasyon veya basınca bağlı daralma gibi fizyolojik bir stimulus için, intralüminal basıncı istenen bir aralıkta rastgele değiştirin ve damarın bu uyarana yanıt vermesi için zaman tanıyın; fenilefrini farklı konsantrasyonlarda rastgele bir sırayla uygulayın. Uygun bir müdahale süresinden sonra, ek müdahaleler gerçekleştirerek veya başlangıç çözeltisini yıkayarak ya da fizyolojik uyaranı kaldırıp damarın denge durumuna döndüğünü doğrulayarak ikinci bir veri toplama turuna başlayın. Damar aktif tonusunu kaybettiğinde deneyi sonlandırın veya istenirse damar duvarının mekaniği üzerine veriler toplayın.Deney tamamlandığında, tüm hatları ve odacıkları PSS ve bol miktarda distile veya deiyonize su ile yıkayın, ardından tamamen kurumalarını bekleyin. Burada, hem giriş hem de çıkış pipetlerine sahip kanüle edilmiş bir mikro damar ve yüksek büyütmede halkalar gösterilmektedir. Dijital kumpas kullanılarak belirlenen yüz 12 mikronluk iç çap burada açıkça görülmektedir.Dengeleme işleminin ardından kanüle edilmiş bir mikro damar gösterilmektedir. Burada, asetilkolin ile yapılan uyarılmaya yanıt olarak genişlemiş aynı damar görülmektedir. Ve son olarak, fenilefrin ile yapılan uyarılma sonrası daralmış damar yer almaktadır.Bu grafikler, izole edilmiş mikro damarların kontrol koşulları altında hipoksiye, artan asetilkolin konsantrasyonlarına veya intravasküler basınç değişimlerine verdiği yanıtları özetlemektedir. Ardından, kalsiyumsuz PSS varlığındaki yanıtlar gösterilmiştir. Bu teknik kavrandığında, uygun şekilde uygulandığı takdirde yaklaşık bir saat içinde tamamlanabilir ve damar, uygun sıcaklık, gaz ve besleme veya perfüzyon koşulları korunduğunda oda içerisinde birçok saat boyunca kolaylıkla canlı kalabilir.

the-ex-vivo-isolated-skeletal-microvessel-preparation-for

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Mikrodolaşımında gözlem için yeni bir çok yönlü bir yöntem sunulmuştur. Bu uzun vadeli bir gözlem için uygun olduğu düşünülen ve pharmacophysiological veya moleküler biyolojik müdahaleler ile birlikte.

İskelet kas-içi hayati Mikroskopi in vivo Mikro sirkülasyon Ölçümü

Biz yerli, sağlam mikrovasküler endotel kalsiyum sinyalizasyon görselleştirme ve işlemek için bir hazırlık mevcut. Endotel tüpler taze iskelet kası komşu hücreleri içinde ve arasında vivo morfolojisi ve dinamik sinyalizasyon korumak besleyen fare direnç arterlerinin izole. Endotelyal tüp, diğer doku ve organların kılcal hazırlanabilir.

Fare Direnç arterlerden mikrovasküler endotel Tüpler İzolasyonu

Ince bağırsak sık sık kan akışını etkileyen ve olumsuz besin emilimini etkileyebilir toksinler maruz kalmaktadır. , Bileşikleri veya ilgi duyulan bir toksin multimyograph ve mezenterik arter ve damar izole kullanarak vazoaktiviteye için taranabilir.

Bir Biyoassay olarak Sığır Mezenterik Arter ve Ven Bölüm yalıtma ve kullanma İnce Barsak vazoaktiviteye için Test

Biz matris jel fiş anjiyogenez testinin bir varyasyon kullanarak fare insan endotel-pericyte etkileşimleri incelemek için bir protokol mevcut.

Fare Matrix Jel Plug Test kullanma İnsan endotel-pericyte Etkileşim Vivo Çalışmasında

Fare karotid arteri ve aortanın yüz öncesi hazırlıkları yapmak için bir prosedür anlatılmıştır. Bu preparatlar, immünofloresan olarak spesifik antikorlarla boyandığında, konfokal mikroskopi ile proteinlerin lokalizasyonu ve tüm vasküler duvar içindeki hücre tiplerinin tanımlanmasını sağlar.

Fare Kan Gemilerinin Yüz Yüzey Hazırlığı

Videomicroscopy sistemleri izole yağ dokusu arteriyoller fizyolojik ve farmakolojik uyaranlara yanıt olarak fonksiyonel özelliklerini incelemek için kullanılır. Bu teknik obez insanlarda farklı yağ dokusu etki alanlarındaki mikrovasküler fenotipleri incelemek için kullanılabilir.

İnsan yağ dokusu mikrovasküler işlevini kullanarak Videomicroscopy değerlendirilmesi

Bu el yazması sıçan beyin direnç arterlerin vasküler işlevinde değerlendirilmesinde vitro video mikroskobu iletişim kurallarını açıklar. El yazması da microvessel yoğunluğu fluorescently etiketli lektin ve doku perfüzyon lazer Doppler Flowmetry kullanarak değerlendirmek için teknikler açıklanır.

Sıçan izole direnç arter Video mikroskobu kullanan vasküler kontrol mekanizmalarının değerlendirilmesi

Bu el yazması arteriyoller elektrofizyolojik, kalsiyum görüntüleme ve baskı myography çalışmalarda kullanılan fare retina üzerinden yalıtım için basit bir protokol açıklar.

Retina arteriyoller yalıtım Ex Vivo Hücre fizyolojisi çalışmaları için

Burada, doğrudan fare aort endotel hücrelerini gözlemlemek için immünofloresan boyama için bir protokol sıyoruz. Bu teknik, endotel hücrelerinin farklı akış desenlerinde hücresel ve moleküler fenotiplerini incelerken ve ateroskleroz gelişiminde yararlıdır.

Vasküler Endotel Hücrelerini Doğrudan Gözlemlemek Için En Yüz İmmünofloresan Boyama

Bu protokolün amacı lissencephalic ve gyrencephalic omurgalıların merkezi sinir sisteminin birden fazla bölgesinden mikrodamarları izole etmektir.

Beş Omurgalı Grubu Arasında Merkezi Sinir Sistemi Mikrodamarlarının Güvenilir İzolasyon

Serebral parankimal arteriollerden sağlam fare serebral endotelyal "tüplerinin" yoğun bir şekilde hazırlanması, serebral kan akışı regülasyonunu incelemek için gösterilmiştir. Ayrıca, bu endotel çalışma modelinin floresan görüntüleme ve anahtar hücresel sinyal yollarının elektrofizyoloji ölçümü için, hücre içi [Ca2+] ve membran potansiyelindeki değişiklikler de dahil olmak üzere deneysel güçlerini gösteriyoruz.

Fare Beyin Parankiminin Arteriyolar Endotelinin İzolasyonu ve Fonksiyonel Analizi

Öğrenin, grasilis kasından direnç arteriyollerini izole edip çift kanülasyonla ekz vivo vasküler reaktiviteyi değerlendirin. Bu yöntem, damar fonksiyonu ve disfonksiyon mekanizmalarını incelemek için güvenilir bir yaklaşım sunar.

Ex vivo İzole İskelet mikrodamar Hazırlık

Daha fazla video keşfet