Standart Mürekkep Püskürtmeli Yazıcı Kullanımı Geçici Hücre Zarı Gözenekler oluşturma

Bu prosedürün genel amacı, mürekkep püskürtmeli baskı kullanarak hücre zarlarında geçici gözenekler oluşturmaktır. Bu, önce standart bir mürekkep püskürtmeli yazıcıyı değiştirerek gerçekleştirilir. İkinci adım, biyo mürekkebin yerleştirilmesine izin vermek için stok yazıcı mürekkep kartuşunu boşaltıp temizlemektir.

Daha sonra, ilgilenilen hücreler, biyo mürekkep çözeltisini oluşturmak için floresan etiketli akton monomerleri ve PBS'den oluşan bir çözelti içinde süspanse edilir. Son adım, değiştirilmiş yazıcı ve kartuşu kullanarak biyo mürekkebi mikroskop slaytlarına yazdırmaktır. Sonuç olarak, floresan mikroskobu, Fluor dört konjuge G aktin monomerinin, geçici zar gözenekleri yoluyla basılı hücreler tarafından içselleştirildiğini göstermek için kullanılabilir.

Bu tekniğin standart transfeksiyon ve hücre mikroenjeksiyon tekniklerine göre en büyük avantajı, bu baskı tekniğinin kullanımının kolay olması ve yüksek hücre canlılığı sağlamasıdır. Bu teknik genetik hakkında bilgi sağlayabilse de, hücre biyofiziğinde hücre biyofiziği ve doku mühendisliği gibi diğer çalışma alanlarına da uygulanabilir. Bu teknik, hücre göçü sırasında bir hücrenin hücre iskeletini kolayca izlemek için kullanılabilir.

Bu yöntem için ilk olarak, hücrelere uygulanan kuvvetler nedeniyle hücre iskeleti düzenlemesindeki değişiklikleri görselleştirebilmek istediğimizde aklımıza geldi. Yazıcının alt tabanındaki plastik klipslerin kilidini açarak başlayın ve ardından üst plastik kasayı yavaşça kaldırın. Ardından, düğme ekran ışığı panelini yazıcının üst kısmından ayırın ve yazıcının ana kartına bağlı bırakın.

Kim mendil ve etanol kullanarak. Yazıcının içini, özellikle mürekkep kartuşunun dayandığı ve yazdırmanın gerçekleştiği alanları temizleyin. Ardından, HP desk Jet 500 için kağıt besleme mekanizmalarına güç sağlayan kabloyu bulun.

Ön tarafın solundaki kağıt tepsisinin hemen altındalar ve kabloları anakarttan çıkarıyorlar. Şimdi kağıt algılama mekanizmasını bulun ve manuel tutamak görevi görmesi için baskı kağıdı besleme mekanizmasının üstünde ve arkasında bulunan gri plastik kola bir tel halka sabitleyin, buraya bir sahne yerleştirin. 15 santrifüj tüpü için köpük nakliye tutucusu, istenen baskı slaytlarını kartuş baskı kafasının hemen altındaki bir seviyeye getirmek için kağıt besleme mekanizmasının önündeki baskı bölgesinde yerine bantlanmış birkaç mikroskop lamı ile kullanılır.

Son olarak, aseptik tekniği korumak için yazıcıyı bir laminer akış başlığının içine yerleştirin. Kartuşu ambalajından çıkararak, yazıcı temas noktalarını ve yazıcı kafasını kaplayan koruyucu bandı bırakarak başlayın. Kartuşun gövdesini bir cl ile sabitleyinamp el tipi bir döner kesme aleti kullanarak yeşil üst kısmı herhangi bir engelden uzak tutun.

Kartuşun yeşil üst kısmını kesin, haznede kalan mürekkebi boşaltın ve ardından yazıcı temas noktalarını ve yazıcı kafasını kaplayan plastik koruyucu bandı çıkarın. Bu işlem sırasında büyük olasılıkla yazıcı kafasından su sızacaktır, ancak kartuşa herhangi bir zarar vermez. Su berraklaştığında kartuşun kurumasını bekleyin.

Temiz bir baskı ortamı sağlamak için, kartuşu deiyonize suyla dolu bir behere tamamen batırarak başlayın ve ardından kartuşu 15 dakika boyunca sonikleştirin. Sonikasyondan sonra, kartuşu çıkarın ve fazla suyu sallayın. Daha aseptik bir ortam oluşturmak için kartuşa %70 etanol püskürtün.

İlgilenilen hücreleri topladıktan sonra, hücreleri 15 mililitrelik bir konik santrifüj tüpünde oda sıcaklığında 250 kez G'de beş dakika boyunca beş mililitre taze ortamda santrifüjleyin. Daha sonra, ortamı aspire edin ve ardından hücreleri taze hazırlanmış floresan G aktin stok çözeltisinde mililitrede 10 ila beşinci hücre arasında bir kez yeniden süspanse edin Biyo mürekkep oluşturmak için, 250 mikrolitre biyo mürekkebin burada gösterilen çizgi deseniyle üç kapak fişi yazdırdığını unutmayın. Yazıcı açıldıktan ve ısındıktan sonra, istenen baskı yüzeyini buraya yerleştirin, önceden monte edilmiş tablanın merkezinde 22 milimetreye 22 milimetre kapak fişleri kullanılır.

Ardından, bir çizim yazılım programı açın ve istediğiniz deseni seçin. Şimdi yaklaşık 100 ila 120 mikrolitre hücre süspansiyonunu kartuş bölmesinin altındaki küçük dairesel kuyucuğa pipetleyin. Yazıcı tekrar ısınırken dosyayı yazdırın, kartuş hazır konumuna hareket edecektir.

Kartuş mürekkebin hafifçe soluna doğru hareket ettiğinde, iyice damla ve orada kalır. Kağıt besleme mekanizmasını yukarı çekin, tel ve baskı başlayacaktır. Yazıcı, bir G aktin monomer çözeltisi içinde bir fibroblast hücre süspansiyonundan oluşan bir biyo mürekkepli bir HP desk jet 500 yazıcı kullanarak baskı aşamasının ortasına yerleştirilen kapak fişine baskı yapacaktır.

Bir HP 26 serisinin içinde, mürekkep kartuşu hücreleri cam mikroskop kapak fişlerine basıldı. Bu şekil, birleştirilmiş floresan aktin monomerlerini gösteren basılı fibroblast hücrelerinin temsili bir sonucunu göstermektedir. Bu model, mikroskop lamının çoğunluğu boyunca sürekli bir baskı çözeltisi çizgisi oluşturmak için önceki şekilde kullanılmıştır.

Bu şekilde, biyolink ve hücrelerin karşılıklı olarak biriktirildiği düz çizgi gösterilmektedir. Baskıdan hemen sonra, arka plan floresansında bir artış olduğunu unutmayın, çünkü hücrelerin süspanse edildiği biyolink çözeltisi, baskıdan sonra hücreleri yaklaşık 10 dakika inkübe eden serbest fazla floresan aktin monomerleri içerir, slayta yapışmayı kolaylaştırır, fazla monomer çözeltisinin substrattan taze büyüme ortamı ile yıkanmasına izin verir, arka plan floresansını önemli ölçüde azaltır. Burada, baskıdan 15 dakika sonra çekilen bir hücrenin bu floresan mikroskopi fotografında gösterildiği gibi, lokalize bir baskı bölgesinde basılmış üç T üç fibroblastın temsili bir görüntüsü, yeşil renkte giin, mavi renkte çekirdek ve hem GI aktin hem de nükleer boyanın kaplamasını gösterir.

Sonraki iki görüntü, baskıdan üç saat sonra bir çizgi deseninde iki fibroblastın floresan mikroskobunu göstermektedir. Bu ilk görüntü, hücrelerin içindeki floresan etiketli aktin monomerlerini göstermektedir. Bu ikinci görüntü, sol alt köşedeki slaytta bir miktar kalıntı olmasına rağmen floresan yaymadığını göstermek için floresan kanalın arka plan görüntüsüyle yer değiştirmesidir.

Son olarak, floresan etiketli monomerlerle üç saat boyunca inkübe edilen basılı olmayan hücrelerden oluşan bir kontrol grubu, monomerlerin hücre baskısı ile zar nüfuzu olmadan hücre zarına nüfuz edemeyeceğini göstermek için burada sunulmaktadır. Bu prosedürü denerken, yazıcının tıkanması bu tekniği yavaşlatan sorunlardan biri olduğu için birkaç kartuşun temizlenmesi ve kullanıma hazır hale getirilmesi önemlidir. Bu videoyu izledikten sonra, standart bir masaüstü yazıcıyı canlı hücreleri yazdırmak için nasıl dönüştüreceğinizi iyi anlamış olmalısınız, bu da geçici zar kuvveti oluşturmaya yardımcı olur.