Name: Fare kullanarak Trakeal Konstrüksiyon in vitro ölçümleri ise (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-06-25T12:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 20 s
Description: Öğrenin fare trakea düz kas kasılabilirliğini in vitro tensiyometri ile ölçme yöntemini. Bu teknik hava yolu düz kası farmakolojik ve fizyolojik mekanizmalarını araştırmak için güvenilir bir yaklaşım sunar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma Önleme Yenilik Merkezi ve Havayolu Hastalıkları, NINDS hibe (NS052574), Tedavi gelen ve Astım Araştırma Sandler Programı bir hibe ile finanse edildi.

1. Ekipman Bir daralma ölçüm cihazı temel bileşenler) Şekil 2A şematik olarak gösterilmiştir. <ol><li> Bir doku banyo. Doku banyo sıcak sıcaklığında oksijenli fizyolojik çözümü tutar. Farelerin trakea halkaları için bir ısınma çözümü, bir fritli cam balonu oksijen girişi (% 95 /% 5 O 2 / CO 2 karışımı) ve giriş ve değiştirmek için çıkış portu dolaştırmak için bir su ceketi içeren 10 ml organ banyosu kullanın çözümler. A rezervuar PSS çözeltisi% 95 arasında sabit bir köpürme 37 ° C&#39;de su banyosunda (gösterilmemiştir). In /% 5 O 2 / CO 2 karışımı ile saklanır Çözüm borsaları, PSS çözümü nispeten hızlı çözüm döviz izin rezervuar yaklaşık 100 ml başına dakikada doku banyo girişi (alt noktası) pompalanır. Çözüm çıkış doku yarasa sabit hacim (~ 10 ml) sağlayan bir taşma noktası (üst noktası) aracılığıylaçözüm değişimi sırasında h. Biz (37 ° C korumak için) organ banyosuna ceket ile sıcak su pompalamak için bir Haake ısıtma sirkülatör kullanın. Doku banyoları tedarikçileri bir dizi elde edilen ve araştırmacının deney ihtiyaçlarına uygun boyutları ve stilleri çeşitli gelir edilebilir. </li><li> Bir kuvvet dönüştürücü. Izometrik gerilim ölçmek için, trakeanın tüp iki paslanmaz çelik çubuklar (Şekil 2A) L-biçimli uçları üzerinde dişli. Bakım biyolojik madde ile uyumlu bir paslanmaz çelik türünü kullanmak alınmalıdır. Üst çubuk izometrik kuvvet dönüştürücü bir kelepçe ile bağlanır. Alt rot sabit bir konumda tutar trakea, ve pasif gerginlik ve / veya kas uzunluğunun ayarlanması için bir mikrometre üzerine monte edilmiştir. Trakeanın daralma preamplifier bir gerilim sinyaline dönüştürülür kuvvet dönüştürücü, üzerindeki gerginlik yaratır. Alt çubuğun ayrıca iki dikdörtgen platin levhalar (4 apart mm) t katmak için yapılandırılabilir<html> şapka kanadını trakea (Şekil 2B). Platin plaklar trakea boyunca bir elektrik alan iletim sağlayan bir Ot S88 stimülatörü için kablolu vardır. Açık telleri ve lehim banyo solüsyonu içine metallerin liç önlemek için, Sylgard (Sylgard 184 Silikon Elastomer, Dow Corning Corp, Midland) ile kaplanmıştır. </li><li> A / D dönüştürücüsü, bilgisayar ve toplama yazılımı. Sinyalleri preamplifikatörler bir MacLab 8 A / D sisteme kaydedilmektedir. Bu, mevcut ADInstrument Powerlab donanım eski bir sürümü. Biz deney boyunca gerilimin sürekli kayıt sağlayan programı tablosu (ADInstruments) kullanın. Trakea kas gerginliği nesil oldukça yavaştır ve bu yüzden saniyede 100 puan kazanımları yeterli bulacaksınız. Tansiyon ölçümü, her deneyden önce bilinen ağırlıkları (5 gram) kullanılarak kalibre edilir. Benzer sistemler diğer venders (örneğin, BIOPAC, GW Instruments) edinilebilir. </li></ol>başlık &quot;&gt; 2. Trakea İzolasyon <ol><li> Doku daha önce izole kuvvet dönüştürücü bilinen ağırlıkları ile kalibre edilir, ve organ banyosunda (bakınız Tablo I) normal PSS ile doldurulur. Hava giriş O 2 / CO 2 hafif bir akış elde etmek için ayarlanır. </li><li> İki ay veya daha eski farelerin Tracheas optimal. Genç hayvanları kullanılan fakat bu elde tracheas büyük beceri çünkü kendi küçük boyutu kuvvet dönüştürücü teller monte gerektirir olabilir. Diseksiyon önce, fareler derinden izofluran ile sedatize edilir. Forseps ile bir ayak-tutam, bir yanıt ortaya çıkarmak için mümkün olduğunda sedasyon uygun seviyeye ulaşılır. Fare hemen dör edilir Önemli bir not:. Biz Avertin (Tribromoethanol), yaygın olarak farelerde kullanılan sakinleştirici bir hava yolu düz kas gevşetici üzerinde güçlü etkileri vardır ve bu nedenle trakea daralma çalışmaları için kullanılmaması gerektiğini gözlemledim. </li><li> Cilt (ve kürk) toraks gelen boğaz kaldırılır. Ribs sternumun tabanından, yanal (her iki tarafta) kalbin üst kesilir. Sternum ve kaburga sonra kalp / akciğer, timus, trakea (ventral) ve özefagus (- ve nefes borusu ile dorsal bağlı) ortaya çıkarmak için boğazına öne çekilir. </li><li> Trakea bronş çatallanma altında ve yutak yukarıda keserek eksize edilir. Trakea bir buz gibi soğuk oksijenli (95/5) PSS çözeltisi (Tablo I de verilen bileşimi) içine yerleştirilir. </li><li> Trakea çevreleyen dokuların temiz disseke edilir. Temizlik sırasında trakea yutak veya çatallanma altında tutulabilir. Ancak, dikkatli doğrudan trakea kendisine forseps uygulamamaya dikkat edilmelidir. Güzel makas çevre dokulara kesmek için kullanılabilir, ancak kesim her zaman zarar vermemek için trakea paralel yapılmalıdır. Trakea hazırlık Sylgard kaplı tabağa çatallanma altında ve yutak yukarıda tutturulmuş ise prosedürü bu bölümü (Sylgard 184 Silikon kolaylaştırılırElastomer, Dow Corning Corp, Midland). </li><li> Çevre doku çıkarıldıktan sonra, trakea yutak altında ve bronşiyal bifurkasyon üzerinde kesilir ve hafifçe kuvvet dönüştürücü kablo üzerine monte. </li><li> Trakea iki L-şekilli metal dişleri (Şekil 2A) içinde akıtılan edilir. Bir ucu izometrik gerilim sürekli kayıt için bir kuvvet-yerdeğiştirme transdüktör bağlanmıştır. Başka bir ucu bir mikrometre bağlanmıştır. Doku banyo sonra trakea PSS batırılır böylece ortaya çıkar. Trakea montajı trakea PSS dışında tutulur süreyi en aza indirmek için mümkün olduğunca çabuk yapılmalıdır. Uygulama ile, trakea montaj bir dakika içinde yapılır ama biz genellikle canlılık kaybını önlemek için kat daha uzun süre 3 dakikadan daha kaçınmak olabilir. </li><li> Mikrometre yavaş ~ 10 mN (~ 1 gram-kuvveti) pasif bir gerilim elde etmek için ayarlanır. Optimal istirahat gerginliği ampirik olarak belirlendi ve ~ 5 arasında bir pasif gerginliği bulduk - 1Yüksek potasyum stimülasyon eşdeğer, maksimal yanıt 0 mN sonuçları. Bu durum, bu aralık içinde bir pasif 16,17,18 gerginliği kullanan diğer bir dizi çalışma ile tutarlıdır. İlk 5-10 dakika içinde, trakea pasif gerilimin biraz azalması (stres gevşeme fenomeni) ve mikrometre dengeleme sırasında ~ 10 mN için pasif gerginliği ayarlamak için kullanılır eğilimindedir. Trakea deneysel zorlukları önce en az 1 saat dengelenmeye izin verilir. </li></ol> 3. Yüksek Potasyum Stimülasyon Aşağıdaki dengelenme, trakea yüksek potasyum PSS solüsyonu (67 mM KCl, Tablo I) ile iki kez meydan. Kasılması genellikle organ banyosu tamamen trakea dinlenmek için normal bir PSS ile birkaç kez yıkanır kararlı durum hangi zaman ulaşmak için 5-10 dakika gerekir. Potasyum kasılması, ikinci bir kez tekrarlanır ve tekrarlanabilir kasılmaları kadar üçüncü bir kez (gerekirse) elde edilir. <pclass = &quot;jove_title&quot;&gt; 4. Elektrik stimülasyonu ile Uyarılmış Daralma Trakea hazırlık elektrik alan stimülasyonu (EFS) izin veren iki dikdörtgen platin levhalar (elektrotları) arasında yer alır. EFS kasılma cevapları frekans ve gerilim bir fonksiyonudur. Aynı zamanda bu elektrot alanı ve aralarındaki mesafe gibi fiziksel parametreler tarafından etkilenir. Stimülatör gücü özellikleri de yüksek gerilim ve akım çıkışları da stimülatör maksimum ulaşabileceğiniz gibi yanıtları etkiler. Herhangi bir EFS sistemin özellikleri uyaran süreleri, frekansları, gerilimler ve darbe süreleri farklı olarak kas kasılmaları incelenerek tespit edilmelidir. Bizim deney düzeneği için, ~ 4 mm ile ayrılmış elektrotlar ve 44 V (0.5 ms baklagiller) ve 30 Hz uyarımı genliği tekrarlanabilir yakın maksimum kasılma cevapları elde etmek için en uygun bulduk. 5.. Daralma EvKolinerjik Stimülasyon tarafından oked Eksojen olarak uygulanan bileşikler trakea yanıt kümülatif doz moda ilacın birden eklemelerle, ilgi ilacın tek bir dozunun ek ile değerlendirilir veya edilir. Trakea, bizim laboratuar rutin asetilkolin aksine, karbakol asetilkolinesteraz tarafından bozulmuş değildir, çünkü kolinerjik reseptörleri aktive karbakol kullanılır. Makul bir doz-yanıt aralığı 10 -8 10 -5 M karbakol etmektir. Log takılması bir Hill-tipi denklemi [karbakol]-kontraktil yanıt eğrisi kolinerjik 19 trakeal daralma hassasiyet ölçüsüdür EC 50 (yarı maksimal etkin konsantrasyon) bir tahmin sağlar. Bu karbakol&#39;ün belirli bir dozda kümülatif doz yanıt eğrisinin bir parçası olarak değil, tek bir doz olarak biraz daha fazla cevap verecektir dikkati çekiyor. 6. Temsilcisi Sonuçlar </p&gt; Potasyum, yüksek bir kontraktil tepkisi bir örneği Şekil 3A &#39;de gösterilmiştir. Daralma yaklaşık 10 dakika içinde maksimuma ulaşır, ancak daha sonra küçük bir düşüş gösterebilir. Yüksek potasyum erken yıkanma sırasında, kas çözüm hatlarında ısıtmasız PSS çözümün küçük hacimli geçici hazırlık perfuses sıra sıcaklık düşüşü nedeniyle daralma geçici bir artış gösterebilir. Bu ısıtmalı PSS rezervuar ve doku banyo bağlayan boru minimum ölü hacme sahip en aza indirilebilir, hem de nispeten hızlı bir şekilde çözüm alışverişi yaparak (genellikle biz ml / dk 100 çözümler pompa) olabilir. Her hazırlık kas kütlesi veya diseksiyon sırasında oluşan hasar farklılıklar nedeniyle kontraktil yanıt olarak bazı farklılıklar olacaktır. Şekil 3B yüksek potasyum ve karbakol ile meydan farklı kas kütlesi iki tracheas gösterir. Kolinerjik-uyarılmış kasılmaları farklı olmasına rağmen,y normalleşme sonra yüksek potasyum solüsyonu (Şekil 3C) ile yanıt benzer. Şekil 4, tek doz (A) ve kümülatif bir artış (B) kullanılarak bir karbakol (kolinerjik) uyarılmış kasılması bir örneğini göstermektedir. Karbakol çözümler banyo doğrudan eklendi ve kabarmış gaz hızlı karıştırma yardımcı olur edilir. Tek doz (yani 1 uM, Şekil 4A) Buna ek fazlalaştı kümülatif doz-yanıt eğrisi (1 uM, Şekil 4B) sırasında eşdeğer konsantrasyon göre biraz daha büyük tepki var iyisidir. Şekil 4C kasılma gücünün bir komplo gösterir Şekil 4B verileri kullanarak karbakol konsantrasyonları bir fonksiyonu olarak. Karbakol&#39;ün Etkileri 10 -5 M konsantrasyonda doyurabilecek. Kolinerjik agonistler kalsiyum salınımını mekanizmalar aracılığıyla kasılma başlatır rağmen, daralmanın önemli bir bileşeni de depolarizasyon aracılık ve birGerilime-bağlı kalsiyum kanalları 20 aktivasyonu. Şekil 5A EFS-uyarılmış kasılmaların bir örnek gösteriyor. Tracheas kasılmalar bir plato (inset a1 bakınız) ulaşana kadar 0.5 milisaniye süresi, 40 Volt pulslar kullanılarak uyarılır. Stimülasyon sıklığında bir artış artan bir kasılma cevapları (frekans cevabı eğrisi Şekil 5B çizilir) neden olur. Elektrik alan stimülasyonu presinaptik sinirleri aktive ederek ağırlıklı olarak kasılmalar uyandırmak için gösterilmiştir. Bu botulinum toksini, trakea 21 EFS-uyarılmış kasılmaların çoğunluğu bloke nörotransmitter sürüm bir engelleyici etkisi ile kanıtlanır. Ayrıca, tetrodotoxin, bloklar Na + kanalları da sinir aktivitesini inhibe ettiğini ve EFS için trakeanın yanıt ortadan kaldırdığı bir ajan. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/3703/3703fig1.jpg" /> Şekil 1. T Diyagramıo bir izole trakea hazırlık sinyal yollarının büyük. Gösterilen bir trakeal düz kas hücresi innerve eden kolinerjik akson terminali. Önemli sinyal yolları IP3 reseptörleri (M3) ve cAMP azaltma (M2) yoluyla kalsiyum salınımına neden M3-ve M2-muskarinik asetilkolin reseptör aktivasyonu (mACHR) vardır. M2 reseptörleri (ve M3 reseptörleri bazı katkısı) de L-tipi voltaj bağımlı kalsiyum kanalları ve kalsiyum girişini aktive kolinerjik-uyarılmış depolarizasyon neden olur. Yaygın kontraktil ajanlar ve bunların efektörlerinin 1 vardır. yüksek potasyum (düz kas hücresi ve kolinerjik akson depolarize), 2. elektrik alan stimülasyonu (EFS, kolinerjik akson depolarizes) ve 3. Böyle asetilkolin veya karbakol gibi kolinerjik ilaçların eksojen uygulaması (doğrudan muskarinik reseptörleri aktive eder). <img alt="Şekil 2" src="/files/ftp_upload/3703/3703fig2.jpg" /> Şekil 2. Trakeal kasılmaları ölçmek için kullanılan ekipman Diyagramı. A. kuvvet dönüştürücü, mikrometre ve doku banyo vida klemensleri üzerinden çubuklar destek üzerine monte edilir. Trakeal halka üst ve alt çubuklar üzerinde dişli. Diyagramda, organ banyosunda (kuvvet dönüştürücü üzerine trakea montaj sırasında, yani) hazırlanması altında konumlandırılmıştır. Daralma çalışmaları sırasında, organ banyosu hazırlanması yıkanmak için dikey olarak taşınır. Elektrik alan stimülasyonu alt çubuğun B. trakea tutma tel yanal monte edilmiş iki platin levha içerecek şekilde değiştirilir. Platin plakalar bir uyarıcı elektrik telleri ile birbirine bağlanmıştır. <img alt="Şekil 3" src="/files/ftp_upload/3703/3703fig3.jpg" /> Şekil 3. Yüksek potasyum örnekleri (67 mM) trakeanın kasılma cevapları. (A), yüksek potasyum yinelenen, tekrarlanabilir tepkilerini gösterir. (B), iki farklı tracheas of karbakol için kontraktil tepkisi örnekleri. Normalize zaman (C) B tracheas cevapları benzeryüksek potasyum yanıt d. <img alt="Şekil 4" src="/files/ftp_upload/3703/3703fig4.jpg" /> Şekil 4. Karbakol indüklenen kasılmaları örnekleri. (A), tek doz kullanılarak Karbakol indüklenen kasılmaları yıkanmaya izledi. A. trakea (C) B&#39;den Tepe kasılmaları için (B) Örnek kümülatif doz-yanıt eğrisi karbakol konsantrasyonunun işlevi olarak çizilen. <img alt="Şekil 5," src="/files/ftp_upload/3703/3703fig5.jpg" /> Şekil 5. Elektrik alan stimülasyonu ile uyarılmış kasılmaları örnekleri. 0.5 ms darbe, 40 volt, ve çeşitli stimülasyon frekansları kullanarak trakea kasılması (A) Elektrik alan stimülasyonu olarak gösterilir. Ankastre 30 Hz&#39;de zaman genişletilmiş kasılmasıdır. (B) A dan Tepe kasılmaları plotte vardırstimülasyonu frekansının bir fonksiyonu olarak d. Normal PSS <table border="1"><tbody><tr><td> Tuz </td><td> Conc. (MM) </td><td> Miktarı (gram / ​​2 L) </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> 119 </td><td> 13.91 </td></tr><tr><td> KCl </td><td> 4.7 </td><td> 0.7 </td></tr><tr><td> KH 2 PO 4 </td><td> 1.18 </td><td> 0.32 </td></tr><tr><td> MgSO 4 x 7H 2 O </td><td> 1.17 </td><td> 0.58 </td></tr><tr><td> NaHCO 3 </td><td> 18 </td><td> 3.02 </td></tr><tr><td> EDTA </td><td> 0.026 </td><td> 0.5 M, 0.1 mL </td></tr><tr><td> Glikoz </td><td> 11 </td><td> 3.96 </td></tr><tr><td> Sakaroz </td><td> 12.5 </td><td> 8.56 </td></tr><tr><td> CaCI2 </td><td> 2 </td><td> 10 mM, 400 ml </td></tr></tbody></table> Yüksek K + PSS (NACl ve KCl ayarlamaları) <table border="1"><tbody><tr><td> Tuz </td><td> Conc. (MM) </td><td> Miktarı (gram / ​​2 L) </td></tr><tr><td> NaCl </td><td> 56.7 </td><td> 6.628 </td></tr><tr><td> KCl </td><td> 67 </td><td> 9.991 </td></tr></tbody></table> . PSS çözümleri için Tablo 1 Reçete Not:. Çözümler ultra saf su kalitesi ile, haftalık taze yapılır, ve büyüme kirlenmesini önlemek için 5 gün daha uzun süre buzdolabında saklanır.

<ol><li>Lloyd, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Building+better+mouse+models+of+asthma%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Allergy+Asthma+Rep%22%5BJournal%5D)">Building better mouse models of asthma.</a> Curr. Allergy Asthma Rep. 7, 231-236 (2007).</li>
<li>Hausding, M., Sauer, K., Maxeiner, J. H., Finotto, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+models+in+allergic+responses%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Drug+Targets%22%5BJournal%5D)">Transgenic models in allergic responses.</a> Curr. Drug Targets. 9, 503-510 (2008).</li>
<li>Eglen, R. M., Hegde, S. S., Watson, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscarinic+receptor+subtypes+and+smooth+muscle+function%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol+Rev%22%5BJournal%5D)">Muscarinic receptor subtypes and smooth muscle function.</a> Pharmacol Rev. 48, 531-565 (1996).</li>
<li>Ehlert, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contractile+role+of+M2+and+M3+muscarinic+receptors+in+gastrointestinal%2C+airway+and+urinary+bladder+smooth+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Contractile role of M2 and M3 muscarinic receptors in gastrointestinal, airway and urinary bladder smooth muscle.</a> Life Sci. 74, 355-366 (2003).</li>
<li>Hall, I. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Second+messengers%2C+ion+channels+and+pharmacology+of+airway+smooth+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+Respir.+J%22%5BJournal%5D)">Second messengers, ion channels and pharmacology of airway smooth muscle.</a> Eur. Respir. J. 15, 1120-1127 (2000).</li>
<li>Berridge, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inositol+trisphosphate+and+calcium+signalling%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Inositol trisphosphate and calcium signalling.</a> Nature. 361, 315-325 (1993).</li>
<li>Ehlert, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacological+analysis+of+the+contractile+role+of+M2+and+M3+muscarinic+receptors+in+smooth+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Receptors+Channels%22%5BJournal%5D)">Pharmacological analysis of the contractile role of M2 and M3 muscarinic receptors in smooth muscle.</a> Receptors Channels. 9, 261-277 (2003).</li>
<li>Sankary, R. M., Jones, C. A., Madison, J. M., Brown, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscarinic+cholinergic+inhibition+of+cyclic+AMP+accumulation+in+airway+smooth+muscle.+Role+of+a+pertussis+toxin-sensitive+protein%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+Rev.+Respir+Dis%22%5BJournal%5D)">Muscarinic cholinergic inhibition of cyclic AMP accumulation in airway smooth muscle. Role of a pertussis toxin-sensitive protein.</a> Am. Rev. Respir Dis. 138, 145-150 (1988).</li>
<li>Widdop, S., Daykin, K., Hall, I. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+muscarinic+M2+receptors+in+cultured+human+airway+smooth+muscle+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Respir.+Cell+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Expression of muscarinic M2 receptors in cultured human airway smooth muscle cells.</a> Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 9, 541-546 (1993).</li>
<li>Karaki, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Calcium+movements%2C+distribution%2C+and+functions+in+smooth+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Calcium movements, distribution, and functions in smooth muscle.</a> Pharmacol. Rev. 49, 157-230 (1997).</li>
<li>Somlyo, A. V., Somlyo, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Electromechanical+and+pharmacomechanical+coupling+in+vascular+smooth+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pharmacol+Exp.+Ther%22%5BJournal%5D)">Electromechanical and pharmacomechanical coupling in vascular smooth muscle.</a> J. Pharmacol Exp. Ther. 159, 129-145 (1968).</li>
<li>Fryer, A. D., Jacoby, D. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Muscarinic+receptors+and+control+of+airway+smooth+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Respir.+Crit.+Care+Med%22%5BJournal%5D)">Muscarinic receptors and control of airway smooth muscle.</a> Am. J. Respir. Crit. Care Med. 158, 154-160 (1998).</li>
<li>Fernandez-Rodriguez, S., Broadley, K. J., Ford, W. R., Kidd, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+muscarinic+receptor+activity+of+airway+smooth+muscle+isolated+from+a+mouse+model+of+allergic+asthma%5BTitle%5D)+AND+%22Pulm.+Pharmacol.+Ther%22%5BJournal%5D)">Increased muscarinic receptor activity of airway smooth muscle isolated from a mouse model of allergic asthma.</a> Pulm. Pharmacol. Ther. 23, 300-307 (2010).</li>
<li>Garssen, J., Loveren, H. V. an, Van Der Vliet, H., Nijkamp, F. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+isometric+method+to+study+respiratory+smooth+muscle+responses+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Pharmacol.+Methods%22%5BJournal%5D)">An isometric method to study respiratory smooth muscle responses in mice.</a> J. Pharmacol. Methods. 24, 209-217 (1990).</li>
<li>Vass, G., Horvath, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adenosine+and+adenosine+receptors+in+the+pathomechanism+and+treatment+of+respiratory+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Med.+Chem%22%5BJournal%5D)">Adenosine and adenosine receptors in the pathomechanism and treatment of respiratory diseases.</a> Curr. Med. Chem. 15, 917-922 (2008).</li>
<li>Borchers, M. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methacholine-induced+airway+hyperresponsiveness+is+dependent+on+Galphaq+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Lung+Cell+Mol.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Methacholine-induced airway hyperresponsiveness is dependent on Galphaq signaling.</a> Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 285, 114-120 (2003).</li>
<li>Sausbier, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduced+rather+than+enhanced+cholinergic+airway+constriction+in+mice+with+ablation+of+the+large+conductance+Ca2%2B-activated+K%2B+channel%5BTitle%5D)+AND+%22Faseb.+J%22%5BJournal%5D)">Reduced rather than enhanced cholinergic airway constriction in mice with ablation of the large conductance Ca2+-activated K+ channel.</a> Faseb. J. 21, 812-822 (2007).</li>
<li>Scheerens, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Long-term+topical+exposure+to+toluene+diisocyanate+in+mice+leads+to+antibody+production+and+in+vivo+airway+hyperresponsiveness+three+hours+after+intranasal+challenge%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Respir.+Crit.+Care.+Med%22%5BJournal%5D)">Long-term topical exposure to toluene diisocyanate in mice leads to antibody production and in vivo airway hyperresponsiveness three hours after intranasal challenge.</a> Am. J. Respir. Crit. Care. Med. 159, 1074-1080 (1999).</li>
<li>Kenakin, T. P. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aKenakin%2C+TP+%22A+pharmacology+primer+%3A+theory%2C+applications%2C+and+methods%22">A pharmacology primer : theory, applications, and methods</a>. , 3rd edn, Academic Press/Elsevier. (2009).</li>
<li>Semenov, I., Wang, B., Herlihy, J. T., Brenner, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BK+Channel+%7Bbeta%7D1+Subunits+Regulate+Airway+Contraction+Secondary+to+M2+Muscarinic+Acetylcholine+Receptor+Mediated+Depolarization%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">BK Channel {beta}1 Subunits Regulate Airway Contraction Secondary to M2 Muscarinic Acetylcholine Receptor Mediated Depolarization.</a> J. Physiol. , 1803-1817 (2011).</li>
<li>Moffatt, J. D., Cocks, T. M., Page, C. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+the+epithelium+and+acetylcholine+in+mediating+the+contraction+to+5-hydroxytryptamine+in+the+mouse+isolated+trachea%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Role of the epithelium and acetylcholine in mediating the contraction to 5-hydroxytryptamine in the mouse isolated trachea.</a> Br. J. Pharmacol. 141, 1159-1166 (2004).</li>
<li>Bachar, O., Adner, M., Uddman, R., Cardell, L. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nerve+growth+factor+enhances+cholinergic+innervation+and+contractile+response+to+electric+field+stimulation+in+a+murine+in+vitro+model+of+chronic+asthma%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Exp.+Allergy%22%5BJournal%5D)">Nerve growth factor enhances cholinergic innervation and contractile response to electric field stimulation in a murine in vitro model of chronic asthma.</a> Clin. Exp. Allergy. 34, 1137-1145 (2004).</li>
<li>Weigand, L. A., Myers, A. C., Meeker, S., Undem, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mast+cell-cholinergic+nerve+interaction+in+mouse+airways%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Mast cell-cholinergic nerve interaction in mouse airways.</a> J. Physiol. 587, 3355-3362 (2009).</li>
<li>Kao, J., Fortner, C. N., Liu, L. H., Shull, G. E., Paul, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ablation+of+the+SERCA3+gene+alters+epithelium-dependent+relaxation+in+mouse+tracheal+smooth+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Ablation of the SERCA3 gene alters epithelium-dependent relaxation in mouse tracheal smooth muscle.</a> Am. J. Physiol. 277, 264-270 (1999).</li>
<li>Krane, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aquaporin+5-deficient+mouse+lungs+are+hyperresponsive+to+cholinergic+stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Aquaporin 5-deficient mouse lungs are hyperresponsive to cholinergic stimulation.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 98, 14114-14119 (2001).</li>
<li>Semenov, I., Wang, B., Herlihy, J. T., Brenner, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BK+channel+beta1-subunit+regulation+of+calcium+handling+and+constriction+in+tracheal+smooth+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Lung.+Cell+Mol.+Physiol%22%5BJournal%5D)">BK channel beta1-subunit regulation of calcium handling and constriction in tracheal smooth muscle.</a> Am. J. Physiol. Lung. Cell Mol. Physiol. 291, L802-L810 (2006).</li>
<li>Fortner, C. N., Breyer, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((EP2+receptors+mediate+airway+relaxation+to+substance+P+ATP%2C+and+PGE2%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Lung+Cell+Mol.+Physiol%22%5BJournal%5D)">EP2 receptors mediate airway relaxation to substance P ATP, and PGE2.</a> Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 281, 469-474 (2001).</li>
<li>Hay, D. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+modulation+of+endothelin+ligand-induced+contraction+in+isolated+tracheae+from+endothelin+B+%28ET%28B%29%29+receptor+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Differential modulation of endothelin ligand-induced contraction in isolated tracheae from endothelin B (ET(B)) receptor knockout mice.</a> Br. J. Pharmacol. 132, 1905-1915 (2001).</li>
<li>Stengel, P. W., Yamada, M., Wess, J., Cohen, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((M%283%29-receptor+knockout+mice%3A+muscarinic+receptor+function+in+atria%2C+stomach+fundus%2C+urinary+bladder%2C+and+trachea%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Regul.+Integr.+Comp+Physiol%22%5BJournal%5D)">M(3)-receptor knockout mice: muscarinic receptor function in atria, stomach fundus, urinary bladder, and trachea.</a> Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp Physiol. 282, R1443-R1449 (2002).</li>
<li>Trevisani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+in+vitro+expression+of+B1+receptor+in+the+mouse+trachea+and+urinary+bladder%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Evidence for in vitro expression of B1 receptor in the mouse trachea and urinary bladder.</a> Br. J. Pharmacol. 126, 1293-1300 (1038).</li>
<li>Mehats, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((PDE4D+plays+a+critical+role+in+the+control+of+airway+smooth+muscle+contraction%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">PDE4D plays a critical role in the control of airway smooth muscle contraction.</a> FASEB J. 17, 1831-1841 (2003).</li>
<li>Kumar, R. K., Herbert, C., Foster, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+%22classical%22+ovalbumin+challenge+model+of+asthma+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Curr.+Drug+Targets%22%5BJournal%5D)">The "classical" ovalbumin challenge model of asthma in mice.</a> Curr. Drug Targets. 9, 485-494 (2008).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Burada sunulan protokol yolu kas fonksiyonunu değerlendirmek için fizyolojik bir hazırlık sağlar. Biz genellikle aynı anda 3-4 organı banyo müstahzarları faaliyet Ancak, paketlenmiş sistemleri 8 preparatları (ADInstruments, Dünya Hassas Aletler ve Harvard Apparatus) kadar eş zamanlı ölçümler izin tedarikçileri bir dizi edinilebilir. Biz eşdeğer sonuçları ile kuvvet dönüştürücüler ve doku organ banyolarına bir dizi kullanmış olurlar. Ancak, elektrik alan stimülasyonu uyarıcı elektrotlar boyutu, elektrot plakalar arası uz...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> Analog-Dijital Dönüştürücü </td><td> ADInstruments </td><td> PowerLab 4/35 </td><td></td></tr><tr><td> Karbakol (Carbamoylcholine Klorür) </td><td> Sigma-Aldrich </td><td> C4832 </td><td> Su içinde 10 -2 M (-20 ° C&#39;de saklanabilir) </td></tr><tr><td> Grafik Yazılımı </td><td> ADInstrtuments </td><td> LabChart </td><td></td></tr><tr><td> Isıtma Sirkülatör </td><td> Haake </td><td> Mikser Mill MM400 </td><td></td></tr><tr><td> İzometrik Kuvvet Dönüştürücü </td><td> Kent Bilimsel </td><td> TRN001 </td><td></td></tr><tr><td> Stimülatör </td><td> Çim Teknolojileri </td><td> S88 Çift Çıkış SquNabız Stimulatörü vardır </td><td></td></tr><tr><td> Doku Banyosu </td><td> TEFE </td><td> 47264 </td><td></td></tr></tbody></table>

fare kullanarak trakeal konstrüksiyon in vitro ölçümleri ise

In vitro Measurements of Tracheal Constriction Using Mice

Transgenik ve knockout farelerde havayolu 1,2 fizyolojisi ve patofizyolojisi soruşturma için güçlü araçlar olmuştur. Izole trakea preparatlarında in vitro tensometry olarak havayolu düz kas (ASM) genetiği değiştirilmiş farelerde kontraktil yanıt yararlı bir test olduğu kanıtlanmıştır. In vitro trakea preparatlarında Bu nispeten basit, sağlam bir yanıt sağlamak ve fonksiyonel kolinerjik sinir uçlarını ve kas yanıtları, hatta uzun inkubasyon sonrasında korurlar. Trakeal tensometry da düz kas kasılması etkileyen ikincil haberci sinyal yolunun çeşitli çalışmak için işlevsel bir test sağlar. Trakeada daralma başta ASM (Şekil 1) üzerine asetilkolin serbest olduğunu parasempatik kolinerjik sinirler aracılığıyla olur. Büyük ASM asetilkolin reseptörlerini sırasıyla G i / o ve Gq reseptörler vardır muskarinik M2 ve M3 olan <sup&gt; 3,4,5. M3 reseptörleri fosfolipaz C, sarkoplazmik retikulum 3,6,7 gelen artış IP3 üretim ve IP3 aracılı kalsiyum salınımını aktive Gq için kaplin tarafından daralma çağrıştırıyor. M2 / G i / o sinyalizasyon cAMP düzeyleri 5,8,9,10 bir azalmaya yol adenilat siklaz inhibisyonu ile kasılmaları kazandırdığı düşünülmektedir. Bu yollar, hava yolu düz kas 11 sözde &quot;farmakoekonomi daralma kaplin&quot; oluşturmaktadır. Buna ek olarak, M2 reseptörleri ile kolinerjik sinyalleşme (ve M3 sinyal ile modüle) sırasıyla L-tipi, Gerilime-bağlı kalsiyum kanalları (Şekil 1) ve bu nedenle &quot;eksitasyon-kasılması kuplaj&quot; olarak adlandırılan kalsiyum girişini (aktive olan ASM depolarize yolları içerir ) 4,7. Havayollarındaki konstriksiyon kontrol sinyal yolları hakkında daha detaylı değerlendirme 4,12 bulunabilir. Yukarıdaki yolları fare ve diğer türler arasındaki korunacak görünür. Ancak, fare tracheas diğer türlerden farklı in Biraz sinyal yolları. En önemli histamin ve adenozin 13,14 ile kasılma cevapları, insan ve diğer türler 5,15 hem tanınmış ASM modülatörleri onların eksikliğidir. Burada fare trakeal halkalar izolasyonu için protokoller ve kontraktil çıkışı in vitro ölçüm sunuyoruz. Dahil donanım konfigürasyonu açıklamaları vardır, trakea halkası izolasyonu ve kasılma ölçümleri. Örnekler voltaj bağımlı kalsiyum girişini etkinleştirmek için, yüksek potasyum sinirlerin uyarımı ve doğrudan ASM kas depolarizasyon kullanarak dolaylı kasılmaları çağrıştıran için verilmiştir (1. Yüksek K +, Şekil 1). Buna ek olarak, yöntemleri elektrik alanı stimülasyonu (2. EFS, Şekil 1) eksojen nörotransmiter kullanılarak ASM kas, ya doğrudan uyarılması banyosunda (3. Eksojen Ach, Şekil 1) ile tek başına uygulandığında sinirlerin uyarılara için sunulmuştur. Bu dsyaxibility ve hazırlama kolaylığı izole trakea halkası modeli havayolu düz kas kasılmasına yer çağlayanlar sinyal bir dizi için sağlam ve fonksiyonel testi vermektedir.

Transgenik farelerin genleriyle fizyolojik fonksiyonu atfedilmesi de son derece yararlı olmuştur. Genel olarak böyle, araştırma ve hava yolunun fonksiyonel çalışmalar gibi, özellikle, sıçan modellerinde doğru dikkate değer bir değişim geçirmiş. Burada protokolleri sağlamak<em&gt; In vitro</em&gt; Trakea daralması çalışmalarda fare hava yolu düz kas fonksiyonunu değerlendirmek için.

Fare kullanarak Trakeal Konstrüksiyon in vitro ölçümleri ise

Transgenik ve nakavt fareler, hava yollarının fizyolojisi ve patofizyolojisinin araştırılmasında güçlü araçlar olmuştur1,2. ...'nın in vitro tensometrisi...

Bu prosedürün genel amacı, farelerin trakeal düz kaslarının kontraktilitesini ölçmektir. Bu işlem, öncelikle doku banyolarının hazırlanması ve izometrik kuvvet dönüştürücünün kalibre edilmesiyle gerçekleştirilir. Ardından, fare trakesi izole edilir ve kuvvet dönüştürücü çubuklarına monte edilir.Ardından trake uyarılır ve ortaya çıkan gerilim ölçülüp analiz edilir. Sonuçlar, izometrik kuvvet ölçümleri aracılığıyla trake kasının kontraktilitesini gösterebilir. Bu tekniğin, havayolu direncinin in vivo ölçümleri gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, in vitro gerilim ölçümlerinin düz kas kontraktilitesi için daha doğrudan bir analiz sağlamasıdır.Bu tekniğin dezavantajı, bir organ banyosu hazırlığı olmasıdır ve bu nedenle, in vivo ortamda düz kas kontraktilitesini etkileyebilecek dolaşan faktörler in vitro hazırlıkta bulunmayabilir. Bu yöntem fare trakeal düz kası hakkında bilgi sağlayabilse de; büyük damarlar, çeşitli bağırsak ve mesane düz kasları gibi, kas halka preparatlarının kuvvet transduser tellerine monte edilebilecek kadar büyük olduğu diğer düz kas dokularına da uygulanabilir.Kasılma ölçüm cihazının iki bileşeninin burada açıklanması gerekmektedir: doku banyosu ve kuvvet dönüştürücü. Doku banyosu, fare trakea halkaları için oksijenle zenginleştirilmiş fizyolojik bir çözeltiyi sıcak bir sıcaklıkta tutar. Sıcaklık için su ceketine, oksijen kabarcıkları oluşturmak için cam girişe ve saklanan çözeltileri değiştirmek için giriş ve çıkış portlarına sahip 10 mililitrelik bir doku banyosu kullanılır.Çözelti değişimleri için, oksijenle havalandırılan ve bir su banyosu ile 37 °C'de tutulan bir PSS çözeltisi rezervuarı bulunmaktadır. PSS çözeltisi, rezervuardan doku banyosu girişine yaklaşık 100 mL/dakika hızında pompalanır. Bu sırada, ısıtmalı bir sirkülasyon pompası, doku banyosu ceketinden 37 °C'deki suyu geçirir.İlgilenilen ikinci ekipman kuvvet transduseridir. Bu, trakeadaki izometrik gerilimi ölçmek için kullanılır. Trake tüpü, paslanmaz çelik gibi biyoyumlu malzemeden yapılmış iki çubuğun L şeklindeki uçlarına geçirilir.Üst çubuk, bir klips aracılığıyla izometrik bir kuvvet transduserine bağlanmıştır. Alt çubuk, trakeyi sabit bir konumda tutar ve pasif tansiyonun ve/veya kas uzunluğunun ayarlanması için bir mikrometre üzerine monte edilmiştir. Trakenin kasılması, kuvvet transduseri üzerinde bir gerilim oluşturur ve bu gerilim, elektriksel stimülasyon için ön yükselticide bir voltaj sinyaline dönüştürülür.Alt çubuk, aralarında dört milimetre mesafe olacak şekilde yerleştirilmiş iki dikdörtgen platin plaka ile yapılandırılmıştır. Trakeayı çevrelemek için kullanılır. Platin plakalar, Grass S 88 gibi geleneksel bir stimülatöre bağlanmıştır.Bu hazırlıkta, metallerin banyo çözeltisine sızmasını önlemek için açık teller lehimlenmeli ve koruyucu ile kaplanmalıdır. Ek ekipmanlar arasında bir AD dönüştürücü bilgisayar ve veri toplama yazılımı yer almaktadır. Ön amplifikatörlerden gelen sinyaller, bir Mac Lab eight AD sistemine kaydedilir.Doku izolasyonuna başlamadan önce, doku banyosu normal PSS ile doldurulmalı ve hava girişi hafif bir oksijen akışı sağlayacak şekilde ayarlanmalıdır. Ayrıca, kuvvet transduser tellerine bilinen ağırlıklar yerleştirerek kuvvet transduserlerini kalibre edin ve veri toplama yazılımını buna göre ayarlayın.Genç farelerin daha küçük olan trakealarının diseksiyonu ve montajı daha zor olduğu için, en az iki aylık fareleri sakrifiye edin. Farelerde yaygın olarak kullanılan aine triol sedatifin, üst solunum yolu düz kasları üzerinde güçlü gevşetici etkileri olduğunu gözlemledik; bu nedenle trakea kontraksiyon çalışmaları için kullanılmamalıdır. Trakeayı izole ettikten sonra, izole edilen trakeayı buz gibi soğuk, oksijenlendirilmiş PSS çözeltisi içeren, sigara şeklinde kaplanmış bir kaba yerleştirin.Trakeayı, bir diseksiyon mikroskobu altında, bifurkasyonun altından ve farinksin üstünden altındaki kaba sabitleyin. Çevredeki dokuları pensetle temizleyin. Trakeayı farinksten veya bifurkasyonun altından tutun; penseti asla doğrudan trakeanın kendisine uygulamayın.Benzer şekilde, dokuları ayırırken, çevre dokuları temizledikten sonra yalnızca trakeaya paralel kesiler yapın. Trakeayı, farenksin altından ve bronşial bifurkasyonun üzerinden diklemesine kesin. Trakea artık cihaza monte edilebilir.Trakeanın montajı, trakeanın PSS dışında kaldığı süreyi en aza indirmek için mümkün olduğunca hızlı yapılmalıdır; trakeayı iki L şeklinde metal çıkıntıya dikkatlice ancak hızlıca geçirin. Ardından, trakeayı sıcak PSS içine daldırmak için doku banyosunu hızlıca kaldırın. Trakea tekrar PSS içine girdikten sonra, yaklaşık beş ila 10 milinewton veya yarım ila bir gramlık bir pasif gerilim elde etmek için mikrometreyle yavaşça ayarlama yapın.Bu, sonraki beş ila 10 dakika boyunca optimal dinlenme gerginliğidir. Gerginlik azalacaktır, bu nedenle stabilize olana kadar istenen gerginliği korumak için ayarlamalar yapmaya devam edin. Stabil hale geldikten sonra, deneysel olarak kontraksiyonları uyarmadan önce trakeanın en az bir saat boyunca dengelenmesine izin verin.Dengeleme işlemini takiben, potasyum, elektriksel alan stimülasyonu veya ilgili ilaçlar ile kontraksiyonlar uyarılabilir. Potasyum stimülasyonunu kullanmak için trakeyi yüksek potasyumlu PSS çözeltisi ile uyarın. Genellikle beş ila 10 dakika sonra kontraksiyonlar kararlı bir duruma ulaşır; bu aşamada, trakeyi tamamen gevşetmek için banyoyu normal PSS ile birkaç kez yıkayın.Ardından, yüksek potasyumlu PSS çözeltisine tekrar geçişler yapın. Tekrarlanabilir kasılmalar elde edilene kadar, genellikle üç banyodan fazlasına gerek duyulmaz. Elektriksel alan stimülasyonu, trakeanın her iki yanındaki platin plakalar aracılığıyla uygulanır.Kontraktil yanıt, elektrotların alanından ve aralarındaki mesafeden etkilenir. Stimülatörün güç karakteristikleri nedeniyle, akım çıkışları yüksek voltajlarda maksimuma ulaşır. 0,5 millisecond pulslar veya 30 hertz aralıklarla verilen 44 volt kullanılarak maksimuma yakın bir yanıt elde edilebilir.Ancak bu durum sistemler arasında farklılık gösterecektir ve ampirik olarak belirlenmelidir. Sistem ayrıca, trakeaya dışarıdan uygulanan bir ilaca karşı trakeanın verdiği yanıtın ölçülmesine de olanak tanır. Banyo solüsyonu, tek doz ilaç uygulamaları veya kümülatif doz şeklinde uygulanan çoklu ilaç eklemeleri değerlendirilebilir.Örneğin, kolinerjik reseptörleri aktive etmek için karbahol kullanılabilir. Asetilkolinden farklı olarak asetilkolinesteraz tarafından yıkılmaz ve daha stabil bir yanıt oluşturur. Sonuçların hill tipi bir denklemle logaritmik yanıt eğrisine uydurulması, yarı maksimal etkili konsantrasyonun veya C 50 değerinin tahmin edilmesine olanak tanır.Bir trakeal preparat, yüksek potasyumlu bir banyo ile stimüle edilmiştir. Kasılma, yaklaşık 10 dakika içinde maksimuma ulaşmıştır. Yüksek potasyumun erken yıkama aşamasında, sıcaklık düşüşüne bağlı olarak kasılmada geçici bir artış gözlemlenmiştir.Isıtılmamış PSS çözeltisinin küçük bir hacmi olarak. Çözelti hatlarında, preparat geçici olarak perfüze edildi. Ardından, farklı kas kütlelerine sahip iki trake yüksek potasyum ve karbahol ile uyarıldı.Kolinerjik olarak uyarılan kontraksiyonlar farklılık gösterse de, yüksek potasyum çözeltisine verilen yanıta göre normalizasyon sonrası benzer hale geldiler. Ardından, tek dozlar ve kümülatif artışlar kullanılarak kontraksiyon uyarmak için karbahol uygulandı. OL çözeltileri doğrudan banyoya eklendi.Tek doz eklemesinin, kümülatif doz yanıtta eşdeğer konsantrasyona göre biraz daha büyük bir yanıt oluşturduğuna dikkat çekmek gerekir. Kasılma kuvvetinin karbahol konsantrasyonlarının bir fonksiyonu olarak çizilmesi, karbahol etkilerinin 10⁻⁵ M konsantrasyonda doygunluğa ulaştığını göstermiştir; trakealar, kasılmalar bir platoya ulaşana kadar 0,5 milisaniyelik 40 voltluk darbeler kullanılarak EFS'ye tabi tutulmuştur. Stimülasyon frekansındaki artış, kasılma yanıtında bir artışa neden olmuştur.Bu durum, EFS'nin esas olarak presinaptik sinirleri aktive ederek kontraksiyonları uyardığının gösterilmiş olmasından kaynaklanıyor olabilir. Örneğin, botulinum toksini trakeanın EFS ile uyarılmış kontraksiyonlarının çoğunu bloke eder. Ayrıca, tetrodotoksin sinir aktivitesini inhibe eder ve trakeanın EFS'ye verdiği yanıtı ortadan kaldırır.Bu teknikte uzmanlaşıldığında, uygun şekilde uygulandığı takdirde yaklaşık bir buçuk saatte tamamlanabilir. Bununla birlikte, log deneylerinde trakealar organ taşıma kutusunda birçok saat boyunca canlı kalabilir. Gereksiz.

in-vitro-measurements-of-tracheal-constriction-using-mice

Research

JoVE Journal

Medicine

Tıp

Kemirgen solunum fizyolojisi ve solunum yolu inflamatuar hücrelerin örnekleme tekrarlanan ölçümler arzu edilir, ancak genellikle mümkün değildir. Burada sözlü havayolu inflamatuar hücrelerin havayolu hiperreaktivite ve örnekleme tekrarlanan ölçümler izin verir fareler Entübasyon için tekrarlanabilir bir yöntem açıklanmaktadır.

Havayolu Direnci Ölçümleri ve Fare Bronkoalveolar Lavaj Sıvısı Örnekleme için, geri dönüşümlü, Non-invaziv Yöntemi

Fare Enine aort daralma (TAC), kalp hipertrofisi ve kalp yetmezliği gelişme yatan mekanizmaları incelemek için yaygın olarak kullanılan bir deneysel model. Burada, prosedürler, farelerde kalp hipertrofisi tekrarlanabilir bir derece oluşturmak için aort sıkmak için açıklanmaktadır.

Farelerde Enine Aort Konstrüksiyon

Biz 2.0 mm spekulum ile bir otoskop kullanarak direkt laringoskopi yoluyla farelerde entübasyon için, basit, güvenilir ve nispeten ucuz bir yöntem geliştirdik. Bu teknik, atravmatik ve kronik deneylerde tekrarlanan ölçümler için de kullanılabilir. Biz üstün trakeostomi veya daha önce cerrahi dışı teknikler bildirdi bulabilirsiniz.

Farelerde Endotrakeal Entübasyon<em&gt; Via</emBir Otoskop Kullanma&gt; Doğrudan Larengoskopi

Bu yazıda akciğer fonksiyonu ölçümleri veya fareler kurtarmak için ve daha sonraki dönemlerde de incelenebilir sağlar pulmoner instilasyon için fare entübasyon bir striaghforward ve etkili bir yöntem açıklanır. Işlem doğrudan soluk borusu yanması pahalı olmayan bir fiber optik ışık kaynağı içerir.

Fare Akciğer Entübasyonun Basit Bir Yöntem

Endotelyal endotel / glycocalyx yüzey tabakası ideal intravital mikroskobu kullanılarak incelenmiştir. Intravital mikroskop teknik gibi akciğer gibi hareketli bir organ zordur. Biz eş zamanlı aydınlık ve floresan mikroskop serbestçe-hareket eden endotel yüzey tabakasının kalınlığını belirlemede nasıl kullanılabileceğini...

Fare Pulmoner Endotelyal Yüzey Katman in vivo ölçümü olarak

Bu protokolün amacı, KOAH'ın bir fare modelinde kronik akciğer patolojilerini ölçmek için otomatik yöntemler sağlamaktır. Protokol, fareleri sigara dumanına (CS) maruz bırakmayı, pulmoner fonksiyonu ölçmeyi, akciğerleri şişirmeyi ve farelerde amfizem ve küçük hava yolu yeniden şekillenmesini ölçmek için morfometri yöntemlerinin kullanılmasını içerir.

Sigara Duman maruz kalan Fare Akciğer Amfizem ve Küçük Havayolu Yaptırma otomatik ölçüm

Bu makalede, entübasyon yoluyla fare trakea içine doğrudan bleomisin yönetmek için hızlı ve basit bir yöntem sunar. Bu yöntemin en önemli avantajları usta son derece tekrarlanabilir kolay ve özel ekipman ya da uzun iyileşme süreleri gerektirmez vardır.

Farelerde Trakea hızlı intübasyon için geliştirilmiş bir yöntem

Burada, transvers aort daralma (TAC) lateral Torakotomi ile bir protokol mevcut. Bu teknik basınç aşırı yük ve kalp yetmezliği standart TAC laboratuvar ayarları kullanan farelerde benzetimini yapmak için amaçlayan bir minimal invaziv, kapalı göğüs cerrahi işlemdir.

Transvers aort daralma farelerde ikna etmek için kapalı-göğüs manken

Bu makalenin amacı, laboratuvar faresinin entübasyonunun rafine bir yöntemini açıklamaktır. Yöntem noninvaziv ve bu nedenle, solunum fonksiyonu ve / veya akciğer içine tedavilerin indaşseri izleme gerektiren çalışmalar için idealdir.

Farelerde Tekrarlanan Orotracheal Entübasyon

Konjenital diyafram fıtığı ve fetal trakeal tıkanıklık gibi çeşitli hayvan modelleri etik konular, maliyet, cerrahi zorluk, boyut, sağkalım oranları ve genetik araçların mevcudiyeti ile ilgili avantaj ve dezavantajlar sürmektedir. Bu model, hem trakeal tıkanıklık hem de artan ışık basıncının akciğer gelişimi üzerindeki etkisini incelemek için yeni bir araç sağlar.

Farelerde Transuterin Fetal Trakeal Oklüzyon Modeli

Burada, noninvaziv orofaringeal endotrakeal entübasyon yoluyla intratrakeal lipopolisakkarit (LPS) doğumu için bir protokol öneriyoruz. Bu yöntem, hayvan için cerrahi prosedürün travmasını en aza indirir ve LPS'yi trakeaya ve daha sonra akciğerlere doğru bir şekilde iletir.

Farelerde Noninvaziv İntratrakeal Lipopolisakkarit Damlatma

Öğrenin fare trakea düz kas kasılabilirliğini in vitro tensiyometri ile ölçme yöntemini. Bu teknik hava yolu düz kası farmakolojik ve fizyolojik mekanizmalarını araştırmak için güvenilir bir yaklaşım sunar.

Fare kullanarak Trakeal Konstrüksiyon in vitro ölçümleri ise

Daha fazla video keşfet