Yanal-flow teknolojisi kullanılarak Hematolojik Malignite Hastalarda invaziv pulmoner aspergillozis Algılama

Bu prosedürün genel amacı, insan serumu ve BAL sıvılarında aspergillus tanı antijeninin hızlı tespiti için bir yanal akış cihazının kullanımını göstermektir. Bu, önce serum veya BAL numunesinin yanal akış cihazının serbest bırakma portuna uygulanmasıyla gerçekleştirilir. İkinci adım, çözeltinin zar boyunca hareket etmesine izin vermektir.

Bir sonraki adım, iç kontrol çizgisini inceleyerek testin geçerli olup olmadığını belirlemektir. Son adım, test çizgisini inceleyerek test sonucunu yorumlamaktır. Sonuç olarak, yanal akış cihazı, serum veya BAL sıvılarında aspergillus tanı antijeninin varlığını tespit etmek için kullanılır.

Aspergillus LFD, invaziv pulmoner aspergilloz tanısı için yardımcı bir test olarak kullanılabilir. Bu tekniğin aspergillus, galakto, Manan enzim immunoassayi, panf, fundal, beta glukan testi ve aspergillus PCR testi gibi mevcut yöntemlere göre en büyük avantajı, minimum laboratuvar olanakları ve eğitim gerektiren hızlı bir bakım noktası tanı testi olmasıdır. LFD, aspergillus türlerinin tespiti için geliştirilmiş olsa da, yanal akış teknolojisi, cetosporium, fusarium ve yükseltici türler gibi diğer bulaşıcı patojenlerin tespitine de uygulanabilir.

Bu organizmalara özgü monoklonal antikorları dahil ederek, bu yöntemin görsel olarak gösterilmesi kritik öneme sahiptir. LFD sonuçlarının yorumlanması tahlil formatına aşina olmayı gerektirdiğinden, tedavi edilmemiş kan örneklerinden serum toplamak için kanın dört santigrat derecede pıhtılaşmasına izin verin, serum ve bronkoalveoler lavaj veya BAL sıvıları, kullanımdan önce eksi 20 santigrat derecede alikotlar olarak saklanmalıdır, çünkü alikotlar, serum ve BAL numunelerini test için hazırlamak için tekrar test sırasında numunelerin tekrar tekrar serbest depolanması yoluyla hedef antijenin bozunma potansiyelini sınırlar, Numuneleri oda sıcaklığında çözün ve daha sonra vorteksleme ile iyice buz karışımına tutun ve ardından 14.000 RPM'de bir dakika santrifüjleyin İnsan numunelerinin rutin testleri için, serumu alternatif olarak doku kültürü ortamı ile bire bir seyreltin ve hedef antijeni serum bağışıklık komplekslerinden ayırın. Kaynar su banyosunda üç dakika boyunca% 4 EDTA ısı içeren PBS ile serum bir ila iki seyreltin ve beş dakika 14.000.RPM santrifüjleyin.

İnsan BAL sıvıları ön işlem gerektirmez. Bir BAL numunesi girdap çözülmüştür ve santrifüj, doğrudan yanal akış cihazına uygulanabilen temiz bir numunedir. Test için, yanal akış cihazları veya LFD, 12 ay boyunca stabil kaldıkları oda sıcaklığında veya 23 santigrat derecede saklanır.

Tahlillere başlamak için cihazları poşetlerinden çıkarın ve düz bir yüzeye yerleştirin. Steril bir pipet ucu kullanarak, 100 mikrolitre ön işlem görmüş serumu saniyeler içinde cihazın serbest bırakma portuna uygulayın. Sıvı, gözlem penceresindeki nitröz selüloz zarı boyunca kılcal hareket ile göç etmelidir.

Aynı şekilde, cihazın serbest bırakma portuna 100 mikrolitre temiz bir BAL numunesi uygulayın. Tahlilin oda sıcaklığında 15 dakika çalışmasına izin verin, bu sırada testin sonuçları kaydedilmelidir. Sonuçlar kaydedilmeden önce test 15 dakikadan daha uzun süre bırakılmamalıdır.

Bu, sonuçların yorumlanmasını yanlıca etkileyebileceğinden, kuluçka süresi uzatılarak bir haftalık reaksiyon artmayacaktır. LFD, plastik mahfaza üzerinde C harfi ile gösterilen bir dahili kontrol çizgisinden ve T harfi ile gösterilen bir test çizgisinden oluşur. Bu, serum veya BAL örneğinde aspergillus antijeni mevcutsa testin doğru şekilde çalıştığını gösterir.

Test çizgisi, numune uygulamasından sonraki 15 dakika içinde de görünecektir. Testin yoğunlukları, Lyme reaksiyonları, serum ve VAL örneklerindeki hedef antijenin konsantrasyonları ile orantılıdır. Bu prosedürün en zorlu yönü, test sonuçlarının yorumlanmasıdır.

LFD sonuçları 15 dakikada okunmalı ve test sonucu burada gösterilen temsili örnekle karşılaştırılmalıdır, Bu şekilde gösterilenler, BAL ve serum numuneleri ile zayıf, pozitif, orta pozitif ve güçlü pozitif LFD sonuçlarının temsili örnekleridir. Yoğunluktan bağımsız olarak serum numunesindeki herhangi bir pozitif test çizgisi, kan dolaşımında dolaşan aspergillus antijeninin varlığına bağlı olarak invaziv pary aspergilloz veya IPA hastalığını gösterecektir. Yoğunluğundan bağımsız olarak pozitif BAL reaksiyonları, sporların çimlenmesini ve akciğerlerde potansiyel olarak patojenik hijyen gelişimini gösterir.

Aspergillus antijeninin yokluğunda, herhangi bir test çizgisi görünmez ve sonuç negatif olarak kaydedilir. Bu tablo, Avrupa Kanser Araştırma ve Tedavi Örgütü ve Ulusal Alerji ve Enfeksiyon Hastalıkları Çalışma Grubu'nun tanı kriterlerine göre tanı konulan akut miyeloid lösemi veya ML hastalarından alınan BAL sıvıları kullanılarak yapılan LFD testlerinin sonuçlarını göstermektedir. Bu tabloya, ilgili klinik ve psikolojik verilerin yanı sıra her hasta için ASPERIA'ya özgü bir PCR testinin sonuçları dahildir.

2002 E-O-R-T-C-M-S-G kılavuzları uyarınca, 12, 13 ve 16 numaralı hastalara, konak faktörleri ve klinik kriterler veya GM pozitifliği temelinde olası IPA teşhisi kondu. Gözden geçirilmiş 2008 E-O-R-T-C-M-S-G kılavuzlarına göre, konak faktörleri ve GM pozitifliği tek başına veya konak faktörleri ve klinik kriterler tek başına klinik verilerden ve mikolojiden destekleyici kanıtlar eşlik etmedikçe olası invaziv mantar enfeksiyonunu göstermez. Altıncı hastaya, konak faktörleri, majör ve minör klinik özellikler ve GM pozitifliği nedeniyle hem 2002 hem de 2008 kılavuzlarına göre olası IPA tanısı konuldu.

Son olarak, ne LFD testi ne de PCR testi şu anda altı ve 12 numaralı hastaların BAL örneklerinde E-O-R-T-C-M-S-G kılavuzlarına dahil edilmese de, iki test ile ticari gala manin testi arasında güçlü bir uyum olduğunu unutmayın. İnvaziv mantar hastalığını doğrulamak için Pella Glactomannan enzimi amino testi, panf, mantar beta-glukan testi veya aspergillus PCR testleri gibi diğer yöntemler paralel olarak gerçekleştirilebilir. İnsan kanı, serum ve BAL sıvıları ile çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini ve cihaz operatörlerinin her zaman hepatit B ve tüberküloz gibi hastalıklara karşı aşılanması gerektiğini unutmayın.