Name: Yanal-flow teknolojisi kullanılarak Hematolojik Malignite Hastalarda invaziv pulmoner aspergillozis Algılama (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-03-22T12:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 1 s
Description: Öğrenin, yanal akış teknolojisiyle invaziv pulmoner aspergillozisi hızlıca nasıl tespit edeceğinizi. Bu yöntem serum ve BAL örneklerinde Aspergillus antijenlerini 15 dakikada saptar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Pfizer Limited Dr Thornton fon minnetle kabul edilmektedir.

1. Toplama, Depolama ve Serum ve Bronkoalveoler Lavaj Akışkanlar hazırlanması <ol><li> 4 pıhtılaşmasına kullanmak ° C, ve -20 azından alikotları olarak deposu serum ° C&#39;ye önceden kan izin vererek tedavi edilmemiş kan örneklerinden serum Collect. Bronkoalveoler lavaj sıvıları (BAL) de -20 ° C&#39;de alikotları olarak saklanmalıdır Not: Depolama serum ve alikotları tekrar test sırasında numunelerin donma-çözülme tekrarlanan tarafından hedef antijen bozulması için potansiyel sınırlar olarak BAL. </li><li> Çözülme örnekler ve 14,000 rpm&#39;de 1 dakika vorteks ve santrifüj ile iyice serum ve BAL örnekleri karıştırın. </li><li> Insan serum numuneleri rutin testi için, doku kültürü ortamı (TCM) ile serum 01:01 (v / v) seyreltik. TCM RPMI-1640 ortamı, 10% (v / v) fetal buzağı serumu, 200mm L-glutamin solüsyonu 1% (v / v) ve koruyucu madde olarak, sodyum azid (% 0.02 w / v) oluşur. Orta önceden hazırlanmış ve birkaç ay süreyle 4 ° C&#39;de saklanabilir. Dilut 100 ul uygulayınLFD için ed serum. </li><li> Insan BAL sıvılarında, ve hayvan modelleri BAL sıvılarında için, hiçbir tedavi öncesi ile, LFD için düzgün numune 100 ul geçerlidir. </li><li> Hayvan modellerinde serum için, fosfat EDTA, kaynar su banyosunda, 14.000 rpm&#39;de 5 dakika boyunca santrifüj 3dk için ısı% 4 (w / v) içeren tamponlu salin ile serum 01:02 (v / v) seyreltilmiş ve 100 uygulamak LFD cihaza düzgün süpernatan ul. </li></ol> 2. Yanal akış Aygıt serum ve BAL Uygulama <ol><li> Oda sıcaklığında (23 ° C) yanal akış cihazlar depolamak. Bu sıcaklıkta, cihazlar 12 ay stabildir. Bir yüzey üzerinde kendi keseleri ve yerden aygıtları kaldırın. </li><li> Steril bir pipet ucu kullanarak, cihazının açıklaması portuna önişlemli serum veya neat BAL Örnek 100 ul uygulanır. </li><li> Assay testlerin sonuçları kaydedilmiş hangi bir zamanda oda sıcaklığında 15 dakika boyunca çalışmasına izin verir. Not: saniye içinde sıvı se olacaktırtr gözlem penceresinde Nitroselüloz zar boyunca kılcal hareket ile geçirmek. </li></ol> 3. LFD Sonuçlar kaydedilmesi ve yorumlanması <ol><li> LFD bir iç kontrol hattı (plastik gövde üzerinde C harfi ile gösterilir) ve bir test çizgisi (T harfi ile gösterilir) oluşur. Kontrol çizgisi her zaman serum veya BAL örneğinde bakılmaksızın Aspergillus antijeni görünmelidir. Bu tahlil doğru çalıştığını gösterir. </li><li> Aspergillus antijeni serum veya BAL örnek varsa, test çizgisi de örnek uygulama 15 dakika içinde görünür. Test çizgisi yoğunluğu örnek Aspergillus antijeni mevcut miktarı ile orantılı olduğundan, test çizgisi (+) zayıf pozitif olarak görünebilir, orta pozitif (+ +) veya gibi güçlü bir pozitif (+ + +) . Ancak, herhangi bir pozitif test çizgisi ne olursa olsun, şiddeti, örnek Aspergillus antijeni varlığı işaret eder. ThAspergillus antijeni e yokluğunda, hiçbir test çizgi görünür, ve sonuç negatif olarak kaydedilir (-). </li></ol> 4. Temsilcisi Sonuçlar BAL ve serum numuneleri negatif, zayıf bir pozitif, orta pozitif ve güçlü bir pozitif LFD sonuçlar için temsili örnekler, Şekil 1 &#39;de gösterilmiştir. (AML) hastalarda EORTC / MSG tanı kriterlerine göre tanı akut myeloid lösemi BAL sıvılarında kullanarak antijeni pozitif LFD testleri (güçlü ve zayıf) veya negatif LFD testlerin sonuçları Tablo 1&#39;de verilmiştir. Ilgili klinik ve mikolojik (galaktomannan ve kültür) verileri ve her hasta için St Bartholomews Hastanesi&#39;nde 8 de geliştirilen bir Aspergillus spesifik PCR testinin sonuçları bu tabloya eklenmiştir. Hastalığın tanısı ana faktörler (nötropeni, kortikosteroidlerin uzun süreli kullanımı, diğer tanınan T-hücre immunos ile tedavi dayanmaktadıruppressants), klinik kriterler ve BAL için GM pozitifliği (burada bir GM endeks değeri&gt; 0.8 olarak tanımlanır). 2002 EORTC / MSG kılavuzlar 10, hastalar 12, 13 ve 16 altında konak faktörleri ve klinik kriterleri ya da GM pozitifliği temelinde &#39;mümkün&#39; IA tanısı konuldu. Sırasıyla klinik veriler ve mikoloji gelen destekleyici kanıt eşliğinde sürece gözden geçirilmiş (2008) EORTC / MSG kurallarına 2, konak faktörleri ve GM pozitifliği tek başına veya konak faktörleri ve sadece klinik kriterlerine göre &#39;olası&#39; invaziv fungal enfeksiyon belirtisi değildir. Hasta 6 çünkü ana faktörler, majör ve minör klinik özellikleri ve GM pozitifliği hem de 2002 ve 2008 kuralları uyarınca &quot;muhtemel&quot; IA tanısı kondu. Not, bu LFD ya PCR ne de henüz EORTC / MSG kılavuzlar dahil edilir ise, örnek olarak BAL Aspergillus antijen ve nükleik asit varlığında gösteren iki deneyleri ve ticari galaktomannan test arasında güçlü bir uyum olduğu<html> Hastaların 6 ve 12 ile s. IPA tanısında LFD ve PCR etkinliğini ortaya koyan çalışmaların Ek sonuçların Johnson ve ark 8 bulunabilir. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/3721/3721fig1.jpg" /> Şekil 1. Serum ve BAL kullanarak LFD testlerin sonuçları (kontrol ve test çizgisi) Negatif (sadece kontrol hattı) ve pozitif. Test hattı reaksiyon yoğunlukları ve serum numuneleri BAL hedef antijene konsantrasyonları ile orantılıdır. Reaksiyonlar tipik olarak aralıktan zayıf bir (+) orta yoluyla (+) kuvvetli (+ + +). Ne olursa olsun test hattı yoğunluğu, her üç serum pozitif reaksiyon kan Aspergillus antijeni dolaşan varlığı nedeniyle invaziv pulmoner aspergillozis hastalığı işaret eder. Pozitif BAL reaksiyonlar (zayıf, orta veya güçlü) sporlar ve akciğerlerde potansiyel patojen hif gelişme çimlenme işaret eder. &quot;pdflinebreak&gt; <table border="1"><tbody><tr><td> Hasta hayır. </td><td> Patient bilgi </td><td> Klinik kriterler 1 </td><td> BAL kültürü 2 </td><td> GM ÇED endeksi 3 </td><td> EORTC / MSG (2002) 4 </td><td> EORTC / MSG (2008) 5 </td><td> Aspergillus PCR sonucu </td><td> LFD sonucu </td></tr><tr><td> 6 </td><td> - </td><td> Binbaşı CT bulguları (nodül ve halo) ve küçük bir </td><td> Negatif </td><td> 0.9 (pozitif) </td><td> Muhtemel </td><td> Muhtemel </td><td> Pozitif </td><td> (+) Pozitif Zayıf </td></tr><tr><td> 12 </td><td> Presumed önceki mantar enfeksiyonu </td><td> Minör majör bir </td><td> Candida glabrata </td><td> 6.43 (kuvvetli pozitif) </td><td> Mümkün </td><td> Hiçbiri </td><td> Pozitif </td><td> Güçlü pozitif (+ + +) </td></tr><tr><td> 13 </td><td> Koagülaz-negatif Staphylococcus ve E. Kanda coli </td><td> Hayır majör, iki minör </td><td> Negatif </td><td> 0,25 (negatif) </td><td> Mümkün </td><td> Hiçbiri </td><td> Negatif </td><td> Negatif (-) </td></tr><tr><td> 16 </td><td> Akciğer enfeksiyonu </td><td> Yeni sızmak artı çoğul efüzyon dahil 3 minör kriterin </td><td> Negatif </td><td> 0,16 (negatif) </td><td> Mümkün </td><td> Hiçbiri </td><td> Negatif </td><td> Negatif (-) </td></tr></tbody></table> Bilgisayarlı tomografi 1 Nodüller veya haleler mantar enfeksiyonu düşündürür Bu normal insan florasının 9 parçası olarak izole ikinci en sık görülen maya olarak BAL sıvısında 2 Candida glabrata bir kirletici olarak kabul edilir BAL GM ÇED test&gt; 0.8 3 indeks Aspergillus enfeksiyonunun göstergesidir 4 &#39;yaklaşıma uygun olan 2002 EORTC / MSG tanı kriterlerine göree &#39;,&#39; olası &#39;veya&#39; kanıtlanmış invaziv mantar hastalığıdır 10 5 &#39;olası&#39; için gözden geçirilmiş (2008) EORTC / MSG tanı kriterleri, &#39;olası&#39; veya &#39;kanıtlanmış&#39; invaziv mantar hastalığıdır 2 dayanarak Tablo 1. LFD muhtemel IPA ile ve kontrol AML hastalarında (enfeksiyon bulgusu) akut myeloid lösemi hastalarının BAL örneklerinin testleri, ve enfeksiyon EORTC / MSG tanı sonuçları.

<ol><li>Thornton, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+invasive+aspergillosis%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Appl.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Detection of invasive aspergillosis.</a> Adv. Appl. Microbiol. 70, 187-216 (2010).</li>
<li>De Pauw, B., Walsh, T. J., Donnelly, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revised+definitions+of+invasive+fungal+disease+from+the+European+Organization+for+Research+and+Treatment+of+Cancer%2FInvasive+Fungal+Infections+Cooperative+Group+and+the+National+Institute+of+Allergy+and+Infectious+Diseases+Mycology+Study+Group+%28EORTC%2FMSG%29+concensus+group%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Revised definitions of invasive fungal disease from the European Organization for Research and Treatment of Cancer/Invasive Fungal Infections Cooperative Group and the National Institute of Allergy and Infectious Diseases Mycology Study Group (EORTC/MSG) concensus group.</a> Clin. Infect. Dis. 46, 1813-1821 (2008).</li>
<li>Thornton, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tracking+the+emerging+human+pathogen+Pseudallescheria+boydii+by+using+highly+specific+monoclonal+antibodies%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Vacc.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Tracking the emerging human pathogen Pseudallescheria boydii by using highly specific monoclonal antibodies.</a> Clin. Vacc. Immunol. 16, 756-764 (2009).</li>
<li>Pickering, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+a+%281+-%3E+3%29-%CE%B2-D-glucan+assay+for+diagnosis+of+invasive+fungal+infections%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Evaluation of a (1 -> 3)-β-D-glucan assay for diagnosis of invasive fungal infections.</a> J. Clin. Microbiol. 43, 5957-5962 (2005).</li>
<li>Thornton, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+an+immunochromatographic+lateral-flow+device+for+rapid+serodiagnosis+of+invasive+aspergillosis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Vacc.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Development of an immunochromatographic lateral-flow device for rapid serodiagnosis of invasive aspergillosis.</a> Clin. Vacc. Immunol. 15, 1095-1105 (2008).</li>
<li>Verweij, P. E., Mennink-Kersten, M. A. S. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Issues+with+galactomannan+testing%5BTitle%5D)+AND+%22Med.+Mycol%22%5BJournal%5D)">Issues with galactomannan testing.</a> Med. Mycol. 44, 179-183 (2006).</li>
<li>Wiederhold, N. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+lateral+flow+technology+and+galactomannan+and+%281+-%3E+3%29-%CE%B2-D-glucan+assays+for+detection+of+invasive+pulmonary+aspergillosis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Vacc.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Comparison of lateral flow technology and galactomannan and (1 -> 3)-β-D-glucan assays for detection of invasive pulmonary aspergillosis.</a> Clin. Vacc. Immunol. 16, 1844-1846 (2009).</li>
<li>Johnson, G. L., Bibby, D., Bustin, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Detection+of+Aspergillus+in+broncho-alveolar+lavage+fluid+using+two+biological+assays%3B+evidence+of+active+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Mycoses%22%5BJournal%5D)">Detection of Aspergillus in broncho-alveolar lavage fluid using two biological assays; evidence of active infection.</a> Mycoses. 54, Suppl 2. 130-131 (2011).</li>
<li>Malani, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Candida+glabrata+fungemia%3A+experience+in+a+tertiary+care+centre%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Candida glabrata fungemia: experience in a tertiary care centre.</a> Clin. Infect. Dis. 41, 975-981 (2005).</li>
<li>Ascioglu, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+opportunistic+invasive+fungal+infection+in+immunocompromised+patients+with+cancer+and+hematopoietic+stem+cell+transplants%3A+an+international+concensus%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Defining opportunistic invasive fungal infection in immunocompromised patients with cancer and hematopoietic stem cell transplants: an international concensus.</a> Clin. Infect. Dis. 34, 71-74 (2002).</li>
<li>Denning, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Early+diagnosis+of+invasive+aspergillosis%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Early diagnosis of invasive aspergillosis.</a> Lancet. 355, 423-424 (2000).</li>
<li>Greene, R., Shibuya, K., Ando, T. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGreene%2C+R+%22Aspergillus+fumigatus+and+Aspergillosis%22">Aspergillus fumigatus and Aspergillosis</a>. Latge, J. -P., Steinbach, W. J. , ASM Press. 353-363 (2009).</li>
<li>Klont, R. R., Mennink-Kersten, M. A. S. H., Verweij, P. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Utility+of+Aspergillus+antigen+detection+in+specimens+other+than+serum+samples%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Infect.+Dis%22%5BJournal%5D)">Utility of Aspergillus antigen detection in specimens other than serum samples.</a> Clin. Infect. Dis. 39, 1467-1474 (2004).</li>
<li>Iweala, O. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HIV+diagnostic+tests%3A+an+overview%5BTitle%5D)+AND+%22Contraception%22%5BJournal%5D)">HIV diagnostic tests: an overview.</a> Contraception. 70, 141-147 (2004).</li>
<li>Ketema, F., Zeh, C., Edelman, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+the+performance+of+a+rapid%2C+lateral+flow+assay+for+the+detection+of+antibodies+to+HIV%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Acquir.+Immune+Defic.+Syndr%22%5BJournal%5D)">Assessment of the performance of a rapid, lateral flow assay for the detection of antibodies to HIV.</a> J. Acquir. Immune Defic. Syndr. 27, 63-70 (2001).</li>
<li>Moody, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rapid+diagnostic+tests+for+malaria+parasites%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Microbiol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Rapid diagnostic tests for malaria parasites.</a> Clin. Microbiol. Rev. 15, 66-78 (2002).</li>
<li>Parkash, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Performance+of+a+lateral+flow+test+for+the+detection+of+leprosy+patients+in+India%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Med.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Performance of a lateral flow test for the detection of leprosy patients in India.</a> J. Med. Microbiol. 57, 130-132 (2008).</li>
<li>Sharma, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+lateral-flow+Clostridium+botulinum+neurotoxin+detection+kits+for+food+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Appl.+Environ.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Evaluation of lateral-flow Clostridium botulinum neurotoxin detection kits for food analysis.</a> Appl. Environ. Microbiol. 71, 3935-3941 (2005).</li>
<li>Smits, H. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lateral-flow+assay+for+rapid+serodiagnosis+of+human+leptospirosis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Diagn.+Lab.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Lateral-flow assay for rapid serodiagnosis of human leptospirosis.</a> Clin. Diagn. Lab. Immunol. 8, 166-169 (2001).</li>
<li>Faulstich, K. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFaulstich%2C+K+%22Lateral+Flow+Immunoassay%22">Lateral Flow Immunoassay</a>. Wong, R., Tse, H. , Humana Press. 157-185 (2009).</li>
</ol>

Biz ifşa hiçbir şey yok.

IPA tanımlanmasından sadece gerçekten biyopsi örnekleri etyolojik etkenin izolasyonu ile elde edilebilir, ancak uygun örneklerin kurtarma çok hasta hastalarda çoğu kez mümkün değildir ve Aspergillus kandan nadiren kurtarılabilir olabilir. Büyük gelişmeler IPA tanısında göğüs tarama bilgisayarlı tomografi kullanımı konusunda yapılmış iken, bu &quot;halo&quot; ya da &quot;hava-hilal&quot; işaretleri olarak pulmoner IPA düşündüren özellikler ya geçici ya da nefes eserler isnat edilebilir veya diğer mantar enfeksiyonları 11,12. Bu veriler bu nedenle hastanın serum içinde dolaşan veya BAL sıvılarında, balgam ve idrar örnekleri 13 mevcut olduğunu mantarlardan imza moleküller (GM ve β-glukan) tanımlamak amacı serolojik teknikler ile takviye edilir. Bu testlerin tatmin edici hassasiyet gösterilecek, bunlar belirli koşullar altında 1,6 yeterli özgüllük eksikliği veya parazit muzdarip </sup&gt;. IPA tespiti için LFD testi burada sunulan en meşhuru, virüsler, bakteriler, parazitler ve toksinler 14-19 tespiti için testler güncel ve kullanılır olmuştur IPA ve istismarlara teknoloji &#39;nokta-bakım&#39; tanı sağlar İlk 1988 yılında Unipath tarafından tanıtılan sınar ev gebelik için. Burada anlatılan Aspergillus LFD olarak, Aspergillus spesifik MAb JF5 gözenekli bir nitroselüloz membran üzerinde bir yakalama bölgesi (test çizgisi) için immobilize edilir. Ayrı bir bölgede zarı immobilize anti-fare immunglobulin bir iç kontrol (kontrol çizgisi) olarak görev yaptı. Serbest limana serum veya BAL sıvı ilavesi, serbest pad MAb JF5-koloidal altın konjugat hedef antijene bağlanır ve karmaşık sonra kapiler gözenekli zar boyunca geçer. Yakalama bölgesinde immobilize MAb JF5 kırmızı bir test hattı elde JF5-koloidal altın-antijen kompleksine bağlanır. Herhangi bir ilişkisiz JF5-koloidal altınkonjuge tahlil doğru çalıştığını gösteren iç kontrol bağlar. Kırmızı bir kontrol hattı ile sonuçlanır. Testi gerçekleştirmek için yalnızca 15 dakika alarak, hızlı, GM ve β-glukan algılama dayalı serum ve BAL testleri ile karşılaştırıldığında ucuz ve pahalı cihazlar veya çalıştırmak için kapsamlı laboratuar olanakları gerektirmez. Ayrıca, MAb JF5 GM ve β-glukan testleri 1,4,6 yanlış pozitif reaksiyona neden olduğu gösterilmiştir ilaçlar ya da kirletici ile çapraz reaksiyon vermez. Mevcut tanı testleri üzerinden ilave bir büyük avantajı Aspergillus türlerinin invaziv büyüme göstergesidir aktivitesini tespit LFDs yeteneğidir. LFD prosedürü içinde kritik bir safha, cihaza serum veya BAL numunenin uygulama sonrası sonuç 15 dak okumak için ihtiyaç vardır. Bu testi mayıs önyargı sonucu interpretati gibi, sonuçları kaydetmeden önce uzun 15 dakika bırakılmamalıdırüzerinde. Bir zayıf reaksiyon inkübasyon periyodu uzatarak geliştirilmiş olmayacak. Enfeksiyon hayvan modellerinde serum ısıl işlemi testi duyarlılığını artırmak için tespit edilmiştir. Test bir sınırlaması niteliksel olması ve pozitifliği öznel bir değerlendirme yapmak için operatör dayanır. Test hattının yoğunluğu ve serum numuneleri BAL (Şekil 1) antijeni içeriğine göre değişir. Ancak, herhangi bir pozitif reaksiyon (bilinen negatifleri ile karşılaştırılarak belirlenir) Aspergillus antijeni ve bu nedenle enfeksiyon varlığını gösterir. LFD testlerin öznelliği sınırlamak için, el cihazları LFD test hattı yoğunluğu ölçümü izin ve antijen saptama 20 için eşik değerlerin kurulmasını sağlamak hangi mevcuttur. LFD gelecekteki gelişmeleri ticarileştirilmesi ve diğer invaziv fungal patojenlerin aynı anda saptanması sağlayan bir multipleks LFD gelişimi bulunmaktadırçok özel Mablar 3 kullanarak.

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> Aspergillus LFD </td><td> University of Exeter </td><td></td><td> Istek üzerine yazarın edinilebilir </td></tr><tr><td> RPMI-1640 </td><td> Sigma </td><td> R0883 </td><td></td></tr><tr><td> L-Glutamine </td><td> Sigma </td><td> G7513 </td><td></td></tr><tr><td> Fetal buzağı serumu </td><td> Biosera </td><td> S9100 </td><td> Fetal dana serumu ve diğer kaynaklardan TCM hazırlanmasında kullanılabilirler </td></tr><tr><td> EDTA </td><td> Fisher Scientific </td><td> BPE120-1 </td><td></td></tr></tbody></table>

yanal-flow teknolojisi kullanılarak hematolojik malignite hastalarda invaziv pulmoner aspergillozis algılama

Detection of Invasive Pulmonary Aspergillosis in Haematological Malignancy Patients by using Lateral-flow Technology

İnvazif pulmoner aspergilloz (İPA) morbidite ve hematolojik malignite hasta ve hematopoetik kök hücre nakli, 1 ölüm önde gelen nedenidir. IPA Algılama zorlu bir tanısal zorluk temsil eder ve bir &#39;altın standart&#39; yokluğunda, klinik verileri ve mikrobiyoloji ve histopatoloji makul bir arada dayanmaktadır. IPA Tanı Araştırma ve Tedavi Kanser ve, &quot;kanıtlanmış&quot;, &quot;olası&quot;, ve &quot;mümkün&quot; invaziv fungal hastalıklar 2 tanımlayan Alerji ve Bulaşıcı Hastalıklar Mikoloji Çalışma Grubu (EORTC / MSG) uzlaşma Ulusal Enstitüsü için Avrupa Organizasyonu uygun olmalıdır . Günümüzde, nükleik asit bazlı testler dışarıdan IPA algılama ve böylece polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) için onaylanmıştır mevcut EORTC / MSG tanı kriterleri dahil değildir. Histolojik kesitlerde Aspergillus belirlenmesi nedeniyle simi sorunlu olduğunudiğer invaziv fungal patojenlere 3, ve kanıtlanmış tanımlama ile hifal morfolojileri kolay değildir saf kültür etyolojik ajan izolasyonu gerektirir. Kültür-temelli yaklaşımlar biyopsi örneklerinin durumu güveniyor, ancak bu her zaman hasta hasta erişilebilir değildir ve elde edilen her zaman kültür için geçerli propagules verim yok. Aspergillus patogenezinde önemli bir özelliği, anjiyo-işgali, serum ve bronkoalveoler lavaj (BAL) sıvısında karakteristik antijenik imzalar molekülleri tespit testleri kullanılarak immünolojik mantar izlemek için olanak sağlayan bir özelliktir. Bu, Aspergillus galaktomannan ve korunmuş mantar hücre duvarı bileşeni algılar (1 → 3)-β-D-a &#39;Pan-fungal&#39; deneyi (Fungitell testi) algılar Platelia enzim immunoassay geliştirilmesi (GM-EIA) neden olmuştur glukan, ancak kendi hücre duvarlarını 1,4 Bu bileşenin eksikliği mucorales içinde. Mınesil monoklonal antikor son gelişme (mAb) bazlı enfeksiyonu 1,5 taşıyıcı belirteç tespit deneyleri yol açmıştır, bu testler 1,4-6 doğruluğunu çevreleyen Sues. Thornton 5 son zamanlarda IPA noktası bakımı (POC) tanısı için immuno-kromatografik yanal akış cihazı (LFD) geliştirmek için hibridoma teknolojisi ve kullanımı kullanarak bir Aspergillus spesifik MAb (JF5) üretimi nitelendirdi. LFD önemli bir avantajı MAb JF5 mantar sadece 5 aktif büyümenin sırasında salgılanan ekstraselüler glikoprotein antijenine bağlanır yana aktivitesini tespit yeteneğidir. Böyle Aspergillus sporları solunan havanın ortak bir bileşen olduğundan IPA tanısı için akciğer BAL gibi sıvıları kullanarak bu önemli bir husustur. IPA teşhisinde cihazın yardımcı LFD geliştirilmiş duyarlılık ve Spec gösterilmiştir enfeksiyon bir hayvan modeli kullanılarak kanıtlanmıştırificity Platelia GM ve Fungitell (1 → 3)-β-D-glukan deneyleri 7 ile karşılaştırıldığında. Burada, insan serum ve BAL sıvılarında Aspergillus antijeni tespit etmek için basit bir LFD prosedürü sunuyoruz. Onun hız ve doğruluk hematolojik malignite hastalarında İPA tanısı için yeni bir ek noktası bakım test sağlar.

Invaziv pulmoner aspergillozis için hızlı ve hassas noktası bakım testi sunulmaktadır. Bir bağlanan bir monoklonal antikor kullanılarak yanal-akış teknolojisi yararlanır<em&gt; Aspergillus</em&gt; Antijen akciğer enfeksiyonları sırasında salgılanan. Testi serum ve brochoalveolar lavaj ile uyumlu ve hastalık tanısı için yeni bir ek testi temsil eder.

Yanal-flow teknolojisi kullanılarak Hematolojik Malignite Hastalarda invaziv pulmoner aspergillozis Algılama

İnvaziv pulmoner aspergillozis (IPA), hematolojik malignitesi olan hastalarda ve hematopoetik kök hücre...

Bu prosedürün genel amacı, insan serumunda ve BAL sıvılarında aspergillus tanı antijeninin hızlı tespiti için bir lateral akış cihazının kullanımını göstermektir. Bu işlem, öncelikle serum veya BAL örneğinin lateral akış cihazının salım portuna uygulanmasıyla gerçekleştirilir. İkinci adım ise çözeltinin membran boyunca ilerlemesine izin vermektir.Bir sonraki adım, iç kontrol çizgisini inceleyerek testin geçerli olup olmadığını belirlemektir. Son adım ise test çizgisini inceleyerek test sonucunu yorumlamaktır. Nihayetinde, lateral akış cihazı, serum veya BAL sıvılarında aspergillus diyagnostik antijeninin varlığını saptamak için kullanılır.Aspergillus LFD, invaziv pulmoner aspergillozis tanısında yardımcı bir test olarak kullanılabilir. Bu tekniğin aspergillus, galakto, Manan enzim immünosayımı, panf, fundal, beta glukan testi ve aspergillus PCR testi gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, minimum laboratuvar imkanları ve eğitim gerektiren hızlı bir hasta başı tanı testi olmasıdır. LFD, aspergillus türlerinin saptanması için geliştirilmiş olsa da, lateral akış teknolojisi cetosporium, fusarium ve riser türleri gibi diğer enfeksiyöz patojenlerin saptanması için de uygulanabilir.Bu organizmalara özgü monoklonal antikorların dahil edilmesiyle, bu yöntemin görsel olarak gösterilmesi kritik önem taşımaktadır. LFD sonuçlarının yorumlanması, analiz formatına aşinalık gerektirdiğinden; tedavi edilmemiş kan örneklerinden serum toplamak için kanın 4 °C'de pıhtılaşmasına izin verilmelidir; serum ve bronkoalveoler lavaj veya BAL sıvıları, kullanım öncesinde -20 °C'de alikotlar halinde saklanmalıdır. Alikotlar şeklinde saklama, tekrarlanan testler sırasında örneklerin sürekli dondurma-çözme işlemine maruz kalmasıyla hedef antijenin bozunma potansiyelini sınırlar. Serum ve BAL örneklerini teste hazırlamak için örnekleri oda sıcaklığında çözün ve ardından buz üzerinde tutun; vorteksleyerek iyice karıştırın ve ardından 14.000 RPM'de bir dakika boyunca santrifüjleyin. İnsan örneklerinin rutin testi için serumu doku kültürü ortamı ile bire bir oranında seyreltin; alternatif olarak, hedef antijeni serum immün komplekslerinden ayırmak için serumu %4 EDTA içeren PBS ile bire iki oranında seyreltin, kaynayan su banyosunda üç dakika ısıtın ve 14.000 RPM'de beş dakika boyunca santrifüjleyin.İnsan BAL sıvıları ön işlem gerektirmez. Vortexlenmiş ve santrifüjle çözülmüş bir BAL örneği, lateral akış cihazına doğrudan uygulanabilen saf bir örnektir. Test için, lateral akış cihazları veya LFD'ler, 12 ay boyunca stabil kaldıkları oda sıcaklığında veya 23 °C'de saklanır.Analize başlamak için cihazları poşetlerinden çıkarın ve düz bir yüzeye yerleştirin. Steril bir pipet ucu kullanarak, 100 microliters ön işlemden geçirilmiş serumu birkaç saniye içinde cihazın salım portuna uygulayın. Sıvı, gözlem penceresindeki nitroselüloz membran boyunca kılcal hareketle ilerlemelidir.Aynı şekilde, cihazın salım portuna 100 µL saf BAL örneği uygulayın. Analizin oda sıcaklığında 15 dakika boyunca çalışmasına izin verin; bu sürenin sonunda test sonuçları kaydedilmelidir. Sonuçlar kaydedilmeden önce test 15 dakikadan daha uzun süre bekletilmemelidir.Bu durum sonuçların yorumlanmasında yanlılığa neden olabileceğinden, inkübasyon süresini uzatmak zayıf bir reaksiyonu güçlendirmeyecektir. LFD, plastik gövde üzerinde C harfi ile belirtilen bir iç kontrol hattı ve T harfi ile belirtilen bir test hattından oluşur. Kontrol hattı, serum veya BAL örneğinde aspergillus antijeni olup olmadığına bakılmaksızın her zaman görülmelidir. Bu, serum veya BAL örneğinde aspergillus antijeni mevcutsa analizinin doğru şekilde gerçekleştiğini gösterir.Test çizgisi de numune uygulamasından sonraki 15 dakika içinde görünecektir. Test ve Lyme reaksiyonlarının yoğunlukları, serum ve VAL numunelerindeki hedef antijen konsantrasyonları ile orantılıdır. Bu prosedürün en zorlayıcı yönü, test sonuçlarının yorumlanmasıdır.LFD sonuçları 15. dakikada okunmalı ve test sonucu burada gösterilen temsili örnekle karşılaştırılmalıdır. Bu şekilde, BAL ve serum örnekleri ile elde edilen zayıf pozitif, orta derecede pozitif ve güçlü pozitif LFD sonuçlarının temsili örnekleri gösterilmiştir. Serum örneğindeki yoğunluktan bağımsız olarak herhangi bir pozitif test çizgisi, kan dolaşımındaki aspergillus antijeninin varlığı nedeniyle invaziv pary aspergillozis veya IPA hastalığına işaret eder. Yoğunluktan bağımsız olarak pozitif BAL reaksiyonları, sporların çimlendiğini ve akciğerlerde potansiyel olarak patojenik hiflerin geliştiğini gösterir.Aspergillus antijeninin yokluğunda, test çizgisi oluşmaz ve sonuç negatif olarak kaydedilir. Bu tablo, akut miyeloid lösemi veya Avrupa Kanser Araştırma ve Tedavi Organizasyonu ile Ulusal Alerji ve Bulaşıcı Hastalıklar Enstitüsü Çalışma Grubu'nun tanı kriterlerine göre tanı konmuş ML hastalarından alınan BAL sıvıları kullanılarak gerçekleştirilen LFD testlerinin sonuçlarını göstermektedir. Bu tabloya, her bir hasta için karşılık gelen klinik ve psikolojik verilerin yanı sıra ASPERIA spesifik PCR testi sonuçları da dahil edilmiştir.2002 E-O-R-T-C-M-S-G kılavuzları uyarınca, 12, 13 ve 16 numaralı hastalar; konak faktörleri ve klinik kriterler veya GM pozitifliği temelinde olası IPA tanısı almışlardır. Revize edilmiş 2008 E-O-R-T-C-M-S-G kılavuzlarına göre, yalnızca konak faktörleri ve GM pozitifliği veya yalnızca konak faktörleri ve klinik kriterler, sırasıyla klinik verilerden ve mikolojiden gelen destekleyici kanıtlar eşlik etmediği sürece olası invaziv fungal enfeksiyonu göstermemektedir. Altı numaralı hastaya, konak faktörleri, majör ve minör klinik özellikler ile GM pozitifliği nedeniyle hem 2002 hem de 2008 kılavuzları altında muhtemel IPA tanısı konulmuştur.Son olarak, LFD analizinin veya PCR analizinin şu an için E-O-R-T-C-M-S-G kılavuzlarında yer almamasına rağmen, 6. ve 12. hastaların BAL örneklerinde, bu iki analiz ile ticari galaktomanan testi arasında, aspergillus antijeninin ve nükleik asidinin varlığını gösteren güçlü bir uyum olduğu kaydedilmelidir. Bu prosedürün ardından, invaziv fungal hastalığı doğrulamak için Pella Glaktomannan enzim immün analizi, panf, fungal beta-glukan testi veya aspergillus PCR testleri gibi diğer yöntemler paralel olarak uygulanabilir. İnsan kan serumu ve BAL sıvılarıyla çalışmanın son derece tehlikeli olabileceğini ve cihaz operatörlerinin hepatit B ve tüberküloz gibi hastalıklara karşı her zaman aşılanmış olması gerektiğini unutmayın.

detection-invasive-pulmonary-aspergillosis-haematological-malignancy

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Burada, canlı hücre bir video mikroskobu ile birlikte floresan Aspergillus raportör konidyalarını kullanarak gerçek zamanlı olarak birincil insan bağışıklık hücrelerinin antifungal aktivitesini değerlendirmek ve akım sitometri bir protokol açıklar. Oluşturulan veriler, fungisit aktivite, fagositoz, hücre göçü ve mantar büyüme inhibisyonu olarak ana bilgisayarın hücreye Aspergillus etkileşimleri ilişkin bilgi sağlar.

Cevabı İnsan İlköğretim nötrofiller ve monositler tarafından Antifungal Faaliyet Canlı Görüntüleme<em&gt; A. fumigatus</em

Burada tarif biz miktar histolojik bölümlerde boyama Gomori'nın değiştirilmiş methanamine gümüş tarafından invazif aspergillosis ile farelerde akciğer mantar yükünü belirlemek için bir iletişim kuralı. Bu yöntemin kullanılması için mantar yükünün değerlendirmesi akciğer mantar DNA kantitatif PCR ile karşılaştırıldığında daha az hayvan ile karşılaştırılabilir sonuçlarında sonuçlandı.

Deneysel aspergilloz akciğer mantar yükünü belirlemek için histolojik miktar

Bu protokol, aspergillus fumigatus conidia'nın fagositozunu akış sitometrisi kullanarak insan primer fagositler tarafından nicel olarak ölçmek ve konidianın fagositozunu sadece aparatlardan lökositlere ayırmak için hızlı ve güvenilir bir yöntem sunmaktadır.

Akış Sitometrisi Kullanılarak İnsan Lökositler tarafından Aspergillus fumigatus Conidia Fagositozunun ölçülmesi

Aspergillus fumigatus conidia'nın (3 μm boyutunda) farelerin hava yollarında dağılımının nicel analizi için yöntemi açıklıyoruz. Yöntem ayrıca çeşitli patolojik durum modellerinde hava yollarındaki mikropartiküllerin ve nanopartikül aglomera dağılımının analizi için de kullanılabilir.

Tüm Mount Optik Olarak Temizlenmiş Fare Akciğerinde Aspergillus fumigatus Conidia Dağılımının Konfokal Lazer Tarama Mikroskopi Tabanlı Nicel Analizi

Çeşitli bakteriyel patojenler, doğru bir şekilde tespit edilmez ve derhal tedavi edilmezse solunum yolu enfeksiyonlarına neden olabilir ve ciddi sağlık sorunlarına yol açabilir. Döngü aracılı izotermal amplifikasyon yoluyla bu patojenlerin hızlı ve doğru tespiti, klinik ortamlarda solunum yolu enfeksiyonlarının etkili bir şekilde yönetilmesini ve kontrol edilmesini sağlar.

Mikroakışkan çip bazlı döngü aracılı izotermal amplifikasyon yoluyla alt solunum yolu enfeksiyonlarına neden olan bakteriyel patojenlerin hızlı tespiti

Bu protokol, yoğun bakım ünitesindeki hastalarda alt solunum yolu enfeksiyonlarına yol açan 15 patojenin bir saat içinde hasta başında tespit edilmesini sağlayan, tamamen entegre mikroakışkan çip tabanlı bir LAMP yöntemini açıklamaktadır.

YBÜ Hastalarında Alt Solunum Yolu Enfeksiyonlarına Yol Açan Patojenlerin Hasta Başı Hızlı Tespiti

Burada, fare Kapkaççı lökosit homing çalışmada non-invaziv bir iki foton (2P) mikroskopi yaklaşımı açıklar. Biz, bizim doku görüntüleme hazırlık teknik yönlerini tartışmak ve yürütme ve veri toplama için kurulmuş ilk tipik bir deney yoluyla okuyucu yürümek.

Lökosit Homing Göç ve non-invaziv Görüntüleme In vivo</em

Bu protokol, ardından hızlı bir şekilde tüm hücre algılama, domates ve diğer taze ürün yüzeyler örnekleme için basit bir yapışkan bant tabanlı yaklaşım,...

Yapışkan bant tabanlı Örnekleme ve Floresans kombinasyonu In situ</emHızlı Algılama> Hibridizasyon Salmonella Taze üretin

Bu protokol, polietilen glikol yağış yoluyla, özellikle yumurta sarısı toplam IGY çıkarma açıklar ve, IGY teknolojisi hakkında genel bilgi verir.

IGY Teknoloji: Yumurta Sarısı Tavuk Antikorlar çıkarımı Polietilen Glikol (PEG) Yağış

Bir roman olarak lusiferaz ve in vivo görüntüleme sistemleri (IVIS) olarak kullanılması klinik gelişmeler ortaya çıkmadan hastalığın bitiş noktaları tespit etmek anlamına gelir. IVIS bizim gelecekteki çalışma için daha doğru bir hastalık modeli sağlayan, gerçek zamanlı olarak birden fazla gün içinde encephalitic virüs istilasına görselleştirmek için izin verdi. Bu da bize daha hızlı şu anda kullanılan hayvan modellerinde daha antiviral ve aşıların potansiyel koruyucu özellikleri tanımlamak için...

Bir Nöro-İnvazif encephalitic Virüs Vivo Görüntüleme Sistemleri (IVIS) Algılama

Öğrenin, yanal akış teknolojisiyle invaziv pulmoner aspergillozisi hızlıca nasıl tespit edeceğinizi. Bu yöntem serum ve BAL örneklerinde Aspergillus antijenlerini 15 dakikada saptar.

Yanal-flow teknolojisi kullanılarak Hematolojik Malignite Hastalarda invaziv pulmoner aspergillozis Algılama

Daha fazla video keşfet