Name: Sinir Yanıtları Kayıt ve Tarayıcıları enjekte için bir Awake Fare hazırlanması (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-06-26T12:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 6 s
Description: Öğrenin uyanık farelerde tek nöron yanıtlarını kaydetme ve sinir yollarını izlemek için boya enjeksiyonu yöntemini. Stereotaksik cerrahi ve kraniyotomi kullanarak anestezi etkileri olmadan beyin fonksiyonlarını inceleyin.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

NSF hibe 0920060, NIH hibe DC004395, NHMRC hibe 1.009.482, Bilim ve Tıp Araştırmaları NSW ve Garnett Passe ve Rodney Williams Memorial Foundation tarafından desteklenmektedir.

1. Kafalığı Genel Bakış <ol><li> Özel-yerleşik kafa yazılan birleştirmek için, bir haç oluşturacak şekilde paslanmaz çelik çubuk &quot;a 3/32 açılan bir delik içine dik paslanmaz çelik rulo-pin&quot; 1/16 yerleştirin. Kafa-sonrası dikey parçanın yaklaşık 20 mm ile 15 mm kadar çapraz yatay parçanın olmalıdır. Bir # 1-72 vida kabul dikey çubuğun bir ucundan dokunun. (Şekil 1). </li><li> Cerrahi ve kayıt sırasında, baş-sonrası bir # 1-72 vida (Şekil 2) ile özel-yerleşik pirinç veya alüminyum montaj çubuğu sabitlenir. Montaj çubuğunun uzun bir parça yaklaşık 90 mm uzunluğunda ve geniş 5-10 mm olmalıdır. Kafa-sonrası 45 derece açılıdır uzun bar kapalı bir 15 mm uzatma bir oluk kesme sığar. Montaj çubuğunun altında küçük bir oyuk içine baş dönmesi, baş-sonrası yuvalanmış olan lentolar önlemek için. </li><li> De montaj çubuğu sonra ısmarlama alüminyum montaj blokuna bağlık (Şekil 3). Yerleştirme bloğu yaklaşık 30 mm x 30 mm x 25 mm. Bu, bağlantı bloğundan kafası-sonrası pozisyonu doğru orta hat boyunca ve bregma yerleştirilmiş olabilir böylece bir mikromanipülatör eklenir. Yerleştirme bloğu vidalar ile donatılmış iki parçadan oluşur. Blok bir cut-out montaj çubuğunda kaydırın ve vidaları ile sabitlenmelidir sağlar. Montaj çubuğu tablosu yüzeye paraleldir. Kayıt sırasında, özel bir stereotaksik frame (Şekil 4) çubuğu sabitleyin. Stereotax cerrahisi sırasında yerleştirme bloğu ile aynı konumda çubuğu monte etmek için tasarlanmıştır. Bu düzenleme, fare her zaman deneysel oturumlar boyunca stereotaksik çerçeveye uyumlu olacağını garanti eder. </li><li> 45 ° C&#39;de yaklaşık 1 mm eğilmiş olan, yaklaşık 5 mm uzunluğunda bir tungsten çubuk (çapı 0,010 &quot;) kesilir. Bu çubuğu yerde pimi (Şekil 1) olarak görev yapar. </li></ol> 2. Stereotaksik AlKraniyotomi için ignment Not: Tüm işlemler aşağıdaki standart aseptik cerrahi teknikler takip özetlenen ve Washington Eyalet Üniversitesi Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi ve Garvan Enstitüsü Hayvan Etik Komitesi tarafından onaylanmıştır. <ol><li> % 5 izofluran ile bir indüksiyon odasında koyarak fare uyutmak. Kuyruk ve / veya ayak tutam bir reaksiyon olmaması hayvan tam anestezi olmasını sağlar. </li><li> Bir fare adaptörü (Stoelting) ile donatılmış bir kemirgen stereotaksik çerçeve içinde fare yerleştirin. Fareyi doğru şekilde yönlendirmek için, ısırık çubuğunun delik içinde diş yerleştirin ve rahat bu yüzden burun kelepçe sıkın. Gibi düz mümkün snack bar ve burun kıskacı içinde fare yerleştirin. Farenin burnunun üzerinde lateks eldiven parçası yapılmış bir yüz maskesi yerleştirin ve farenin solunum hızı yaklaşık 1 nefes / sn kadar% 5 izofluran tutun. 1.5 izofluran çevirin -% 2.0. T ile baş sabitleyindiye kulak çubukları Delmeyiniz kulak zarının için dikkatli olmak. Barlar snug olabilir ama kulak kanalları içine daha derine nüfuz olmamalıdır. </li><li> Farenin altında bir ısıtma yastığı yerleştirin. </li><li> Kurumasını önlemek için göz oftalmik merhem uygulayın. </li><li> Kadar küçük bir tıraş makinesi ya da ince noktası makasla göz kulak arasından kafa derisi Tıraş. </li><li> Temizleyin ve alkol izledi klor-hexidine (veya betadin) fırçalama 3 kez tekrar durulama silerek derisi sterilize edin. </li><li> Kafatasının üst üzerinde cilt kaldırmak için başın arkasından gözleri orta hat boyunca bir kesi yapmak. </li><li> Bistüri ile kesi kenarları periost kazıyın. Gerektiğinde (deneysel hedef bağlı olarak), dikkatle kas kanama en aza indirmek için fasiküller boyunca gözyaşı sağlayan, forseps ile boyun arkasındaki kas geri çekin. Nem en aza indirmek ve kafatası üzerinde hareket gelen cilt önlemek için kafa derisi altına doku gelfoam uygulayın. </li><li> Pamuk uçlu aplikatör ile kafatası yüzeyi kafatası yerlerinden görselleştirme artırmak için izopropil alkol ile ıslatılmış kuru. </li><li> Standart stereotaksik koordinatları 13 kafatası hizalayın. Elektrot tutucu bir ince noktası probu yerleştirin ve stereotaksik mikromanipülatör ekleyin. Bir bilenmiş metal çubuk bu amaçla (Şekil 5) için de çalışıyor. </li><li> Kafatası üzerinde bregma (Şekil 5A) ve Lambda (Şekil 5B) tanımlamak için noktasını kullanın. Her konum için lateral-medial koordinat fazla 50 mikron tarafından farklı olduğunu kontrol, bu noktalar arasında geri ve ileri-prob taşıyın. Dikkatli yanal baş ve kulak-bar değişen ve kulak çubukları retightening, kulak çubukları sökerek gerektiği gibi kafa konumlandırın. </li><li> Her yerde dorsal-ventral yüksekliği en fazla 50 mikron göre değişir doğrulayın. Burun-kelepçe yüksekliğini ayarlayın, hangi, kulak çubukları ekseni etrafında kafatası dönecektirkafatası gerekirse sahaya düzleştirmekti. Kulak çubuğunun yüksekliği de ayarlanması gerekebilir. </li><li> Bregma göre ilgi hedefin (Şekil 5C) koordinatlarını tanımlamak için bir Atlas 13 kullanabilir. Hedefin üzerinde kafatası işaretleyin (örneğin, bir &quot;X&quot; veya bir kare nokta dört köşe Türkiye mürekkep kullanın) kraniotomi (Şekil 5D) yapılacaktır nerede. </li></ol> 3. Head-sonrası ve Zemin Pin Kurulum <ol><li> Kafatası temizlemek için etch jel kullanın. Yüzey (10 sn) üzerinden etch jel fırçalayın ve yaymak için aplikatör kullanın. Su ile yıkayın ve tamamen kurulayın. Aplikatör kullanılarak kafatası yüzeye diş çimento astar uygulayın. Yeni aplikatör ile yapıştırıcı sürün. UV ışık-gun (1 döngü) ile yapıştırıcı Cure. </li><li> Hedef siteye distal toprak pimi için bir konum seçin. Dikkatle zemin p kısa sonu için sadece yeterince geniş bir # 65 miniblade neşter ucunu kullanarak kafatasında küçük bir delik delikgirmek ve meninksler üzerine dinlenmek için. Bu bregma ve (Şekil 6A) baş-sonrası gelecekte uzak bakacak şekilde toprak pimi odaklı olmalıdır. </li><li> Montaj çubuğuna baş sonrası emniyete ve engellemek ve mikromanipülatör iliştirin. Üç boyutlu mikromanipülatör hareket ettirerek, sadece kafatası (Şekil 6B) dokunmadan, bregma üzerine kafa sonrası konumlandırmak. Baş-post tabanı kafatası üzerinde düz durmalıdır. </li><li> Diseksiyon problar kullanarak, baş-posta ve toprak pimi (Şekil 6C) etrafında diş çimento az miktarda uygulayın. Kafatası ile iyi temas sağlamak için çimento bastırın. Not: Çok fazla çimento kullanmayın ya da eşit sertleşmesine bulamayabilirsiniz. UV ışık-gun (çoklu açılardan 3-4 siklus) ile çimento Cure. </li><li> Çimento ikinci aşamasında uygulayın ve kafa-sonrası etrafında temel oluşturmak ve baş-post oluklara (Şekil 6D) kapsamaktadır. </li></ol> 4. Kraniotomi <ol><li> Kısmen astar tarafından gizlenmiş olacaktır kraniotomi referans işareti, bulun. Bu site etrafında x 3 mm kare 3 mm işaretlemek ve hassasiyeti azaltmak ve kanamayı en aza indirmek için lidokain bir damla uygulamak için # 65 neşter kullanın. </li><li> (Şekil 7A) kemik yoluyla ve beyin içine kesmemeye dikkat ederek, meydanın her tarafı (10 gibi) birden fazla puan olun. </li><li> Kemik flep gevşek olduktan sonra, (Şekil 7B) duramater zedelemeden, onu gözetlemek neşter ucu kullanın. </li><li> Kemik mum ile kaplayın. </li></ol> 5.. Post-cerrahi <ol><li> Gaz anestezi kapatın ve stereotaksik çerçeve fare çıkarın. </li><li> Yara yerinde hissi törpülemeye maruz kalan deri çevresinde Lidokain merhem uygulamak için bir pamuk uçlu bir aplikatör kullanın. Maruz kalan cilde Neosporin uygulamak için başka bir pamuk uçlu bir aplikatör kullanın. Ketoprofen (bireysel IACUC veteriner hekim tercihine göre 5 mg / kg IM veya IP) olarak enjekteBir ameliyat sonrası analjezik. Fare genellikle yukarı olması ve gaz bırakma dakika içinde hareket edecektir. </li><li> Sıcak bir kafes ve monitör yer fare, bu hayvan barınağı dönmek için hazır olana kadar. </li><li> Bu ameliyat kurtarıldı sonra hayvan günde en az bir kez kontrol edilmelidir. Kötü beslenme ve / veya içme ve dikkatsiz davranışlar bekleyin. Ağrı şüpheleniliyorsa, hafifletilebilir kadar her 24 saatte bir (aynı doz sonrası cerrahi sonunda gibi) ketoprofen sağlar. Lidokain yerel hayvan kaşıma ise yara uygulanan veya rahatsızlık belirtileri gösteriyor olabilir. Hayvanlar, genellikle komplikasyon veya ağrı olmadan ameliyatın. </li></ol> 6. Kayıt ve Boya Enjeksiyon <ol><li> Kayıtları için fare kullanmadan önce baş-son ameliyattan sonra en az bir gün bekleyin. </li><li> Bir köpük-frenlenmesinin cihazı koyun fare fare vücuduna şekillendirdi. Fare zaten böylece kendi kaygıyı azalttığı, bu cihaz için adapte edilmiştir. Tipik adaptasyonuameliyat ve deneyler için önceden sütten sonra ve yaklaşık bir hafta süreyle her gün fare işlemek için, 1-5 dakika için köpük cihazda fare yerleştirin. Stereotaksik frame (Şekil 4) cihazı Askıya. </li><li> Artık stereotaksik çerçevenin (Şekil 4) sabitlenir montaj çubuğu, baş-sonrası güvenli. </li><li> Künt 22-gauge derialtı iğne ucu ile sonlandırılmış bir tel ile toprak pimi bağlanın. </li><li> Kraniotomi üzerinde kemik mum çıkarın. Bir miniblade neşter ucunu kullanarak gerekirse dura çıkarın. </li><li> Uygun stereotaksik yere elektrot Sürücü ve (Şekil 8) kaydetmeye başlarsınız. Sadece elektrofizyolojik için, elektrotların farklı kullanılabilir. Elektrotun tercih gerekli kayıtların konumu ve türüne bağlıdır. Uyanık fare kayıtları için elektrodun seçimi bir araştırmacı, bir anestezi fare kullandığı gibi aynı olacaktır. Kombine elektrofizyolojik kayıtlar içinboya / izleyici enjeksiyonları, mikropipet elektrot 10 kullanılır. Mikropipet bunun iontophoretically elektrofizyolojik deneyler sonunda enjekte edilebilir, böylece tercih edilen boya / izleyici ile doldurulur. Multibarrel elektrotlar farmakolojik manipülasyonlar yapılabilir, böylece de kullanılabilir. Multibarrel elektrod bir tek kayıt mikropipet (Şekil 8) üzerine monte edilir. Bu teknikler literatüründe standart ve anestezi karşı uyanık kayıtları için farklı değildir. </li><li> Kayıtlar 3-4 ardışık gün içinde 4-5 saat yapılabilir. </li><li> Kayıt oturumu sonunda, boya / izleyici enjekte edilebilir. Beyinde herhangi bir ağrı reseptörleri olduğundan, beyin içine boya veya izleyicinin iyontoforetik enjeksiyon rahatsızlığa neden düşüktür. Enjeksiyon yapılacak olan bölgenin elektrofizyolojik tepkisi özellikleri karakterize edilir kez Ancak, hayvan izofluran f ile anestezi olabilirveya enjeksiyon. Bu, herhangi bir potansiyel istenmeyen duyumlar ortadan kaldıracaktır. Boya / izleyici mikropipet zaten olduğundan, aktif ve toprak uçları iontophoretically boya / izleyici enjekte etmek için mevcut jeneratör elektrofizyolojik kayıt kurulumdan değiştirilebilir. Elektrot boya / izleyici için uygun protokol kullanın. Headpost kısıtlama ve vücudu kısıtlama gelen hayvan çıkarın ve ev kafese döner. </li><li> Deney sonunda ötenazi ve enjeksiyon ve etiketleme kurtarmak için doku işleme için uygun protokol izleyin. </li></ol> 7. Temsilcisi Sonuçlar Kafa-sonrası başarılı bir şekilde monte deneyci birden gün boyunca bir unanesthetized, uyanık fareden tek ve multiunit yanıtları kaydetmenize olanak verir. Bağlama sistemi beynindeki nöronlar, tek stabil elektrofizyolojik sağlar. Tek bir birim ve güçlü tepkiler t Mükemmel izolasyono uyaran fare aşağı kollikulus (; 9B Şekil, günde iki Şekil 9A, günde bir), örneğin birden fazla gün boyunca aynı beyin yapısından kaydedilebilir. İyi bir kafa sonrası kurulumu sayesinde, her fare sürekli stereotaksik cihazları ve özellikle beyin çekirdeklerinin güvenilir lokalizasyonu sonucu fare stereotaksik atlas, 13 hizalanır. Bu güvenilir lokalizasyonu birden fazla kayıt gün sonra özel yapıları içine boyalar ve izleyiciler enjeksiyonu sağlar. Örneğin, işitsel beyin sapı işitsel Ortabeyin gelen projeksiyonlar azalan değerlendirmek için, elektrofizyolojik olarak enjeksiyon yerinde nöronal yanıt özelliklerini belirleme sonra fareyi aşağı kollikulus (Şekil 10A) enjekte edilebilir dekstran amin (kromajen görselleştirilmiştir kullanarak diaminobenzidin) biyotinile (Şekil. 10A, bir nöron 51 kHz frekans ile en iyi kaydedilmiştir) ve doku işlenmesinden sonra, birkontrlateral dorsal koklear nükleus içinde nterograde etiketleme ve görselleştirmişti (Şekil 10B) işlenmiştir olabilir. Yüksek çözünürlükte fotomikrografı da anterogradely etiketli aksonlar ve terminaller (Şekil 10C) görüntülemek için elde edilebilir. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/3755/3755fig1.jpg" /> Şekil 1.. <img alt="Şekil 2" src="/files/ftp_upload/3755/3755fig2.jpg" /> Şekil 2. <img alt="Şekil 3" src="/files/ftp_upload/3755/3755fig3.jpg" /> Şekil 3. <img alt="Şekil 4" src="/files/ftp_upload/3755/3755fig4.jpg" /> Şekil 4. <img alt="Şekil 5," src="/files/ftp_upload/3755/3755fig5.jpg" /> Şekil 5. <img alt="Şekil 6" src="/files/ftp_upload/3755/3755fig6.jpg" /> <sTrong&gt; Şekil 6. <img alt="Şekil 7" src="/files/ftp_upload/3755/3755fig7.jpg" /> Şekil 7. <img alt="Şekil 8" src="/files/ftp_upload/3755/3755fig8.jpg" /> Şekil 8. <img alt="Şekil 9" src="/files/ftp_upload/3755/3755fig9.jpg" /> Şekil 9. <img alt="Şekil 10" src="/files/ftp_upload/3755/3755fig10.jpg" /> 10 Şekil.

<ol><li>Evans, E. F., Nelson, P. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+responses+of+single+neurones+in+the+cochlear+nucleus+of+the+cat+as+a+function+of+their+location+and+the+anaesthetic+state%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">The responses of single neurones in the cochlear nucleus of the cat as a function of their location and the anaesthetic state.</a> Exp. Brain Res. 17, 402-427 (1973).</li>
<li>Joris, P. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Response+classes+in+the+dorsal+cochlear+nucleus+and+its+output+tract+in+the+chloralose-anesthetized+cat%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Response classes in the dorsal cochlear nucleus and its output tract in the chloralose-anesthetized cat.</a> J. Neurosci. 18, 3955-3966 (1998).</li>
<li>Populin, L. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anesthetics+change+the+excitation%2Finhibition+balance+that+governs+sensory+processing+in+the+cat+superior+colliculus%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Anesthetics change the excitation/inhibition balance that governs sensory processing in the cat superior colliculus.</a> J. Neurosci. 25, 5903-5914 (2005).</li>
<li>Young, E. D., Brownell, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Responses+to+tones+and+noise+of+single+cells+in+dorsal+cochlear+nucleus+of+unanesthetized+cats%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurophysiol%22%5BJournal%5D)">Responses to tones and noise of single cells in dorsal cochlear nucleus of unanesthetized cats.</a> J. Neurophysiol. 39, 282-300 (1976).</li>
<li>Donoghue, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contrasting+properties+of+neurons+in+two+parts+of+the+primary+motor+cortex+of+the+awake+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Contrasting properties of neurons in two parts of the primary motor cortex of the awake rat.</a> Brain Res. , 333-3173 (1985).</li>
<li>Westby, G. W., Wang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+floating+microwire+technique+for+multichannel+chronic+neural+recording+and+stimulation+in+the+awake+freely+moving+rat%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci.+Methods%22%5BJournal%5D)">A floating microwire technique for multichannel chronic neural recording and stimulation in the awake freely moving rat.</a> J. Neurosci. Methods. 76, 123-133 (1997).</li>
<li>Suga, N., O'Neill, W. E., Manabe, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cortical+neurons+sensitive+to+combinations+of+information-bearing+elements+of+biosonar+signals+in+the+mustache+bat%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Cortical neurons sensitive to combinations of information-bearing elements of biosonar signals in the mustache bat.</a> Science. 200, 778-781 (1978).</li>
<li>O'Neill, W. E., Suga, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Target+range-sensitive+neurons+in+the+auditory+cortex+of+the+mustache+bat%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Target range-sensitive neurons in the auditory cortex of the mustache bat.</a> Science. 203, 69-73 (1979).</li>
<li>Suga, N., O'Neill, W. E., Manabe, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Harmonic-sensitive+neurons+in+the+auditory+cortex+of+the+mustache+bat%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Harmonic-sensitive neurons in the auditory cortex of the mustache bat.</a> Science. 203, 270-274 (1979).</li>
<li>Portfors, C. V., Felix, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((2nd+Spectral+integration+in+the+inferior+colliculus+of+the+CBA%2FCaJ+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">2nd Spectral integration in the inferior colliculus of the CBA/CaJ mouse.</a> Neuroscience. , 136-1159 (2005).</li>
<li>Felix, R. A. 2nd, Portfors, C. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Excitatory%2C+inhibitory+and+facilitatory+frequency+response+areas+in+the+inferior+colliculus+of+hearing+impaired+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Hear+Res%22%5BJournal%5D)">Excitatory, inhibitory and facilitatory frequency response areas in the inferior colliculus of hearing impaired mice.</a> Hear Res. 228, 212-229 (2007).</li>
<li>Portfors, C. V., Jonson, K. G., Roberts, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Over-representation+of+species-specific+vocalizations+in+the+awake+mouse+inferior+colliculus%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Over-representation of species-specific vocalizations in the awake mouse inferior colliculus.</a> Neuroscience. 162, 486-500 (2009).</li>
<li>Franklin, K. B. J., Paxinos, G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aFranklin%2C+KBJ+%22The+Mouse+Brain+in+Stereotaxic+Coordinates%22">The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates</a>. , 3rd edn, Academic Press. NY. (2007).</li>
</ol>

Biz ifşa hiçbir şey yok.

Fare elektrofizyolojik ve nöroanatomik deneyler için kafa sonrası koltuk sisteminin avantajı deneyler anestetik ilaçlara bağlı olası cevabı kirliliği ortadan kaldırarak, unanesthetized, uyanık fare ile yapılabilir olmasıdır. Buna ek olarak, bir kümesini daha verimli bir hayvan kullanım için izin vermek için birden çok gün boyunca kullanılabilir. Kafa-sonrası için en bileşenleri off-the-raf mevcuttur. Sadece baş-sonrası ve montaj aparatları ısmarlama olduğu, inşa etmek oldukça basit ve yenide...

<table border="1"><tbody><tr><td> Isim </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> Diş çimento önce kafatası temizlik için Etch jel </td><td> Henry Schein </td><td> 101-5396 </td><td> 1.2 ml şırınga ile 12/pk </td></tr><tr><td> Diş çimento için astar </td><td> Kerr Optibond&#39;un </td><td> 25881 </td><td> 8 mL şişe </td></tr><tr><td> Diş çimento Yapıştırıcı </td><td> Kerr Optibond&#39;un </td><td> 25882 </td><td> 8 mL şişe </td></tr><tr><td> Diş çimento Aplikatörler </td><td> Kerr Optibond&#39;un </td><td> 24680 </td><td> 200/pk </td></tr><tr><td> Diş Çimento </td><td> Karizma, Heraeus Kulzer </td><td> 66000085 </td><td> 4GM Şırınga Dolum </td></tr><tr><td> Tungsten Rod (Ground Pin) </td><td> AM Sistemleri </td&gt; <td> 717200 </td><td> 0.010 &quot;çaplı </td></tr><tr><td> Ekonomi UV Kür Işık </td><td> Henry Schein </td><td> CU-80 </td><td></td></tr><tr><td> Head-sonrası </td><td> In-house Dahili </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Montaj çubuğu </td><td> In-house Dahili </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Yerleştirme bloğu </td><td> In-house Dahili </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Stereotaksik Çerçeve </td><td> David Kopf Aletleri </td><td> 902 </td><td></td></tr><tr><td> Fare ve Yenidoğan Rat Adaptör </td><td> Stoelting </td><td> 51625 </td><td></td></tr><tr><td> İzotermal Pad Deltaphase </td><td> Braintree Scientific, Inc </td><td> 39DP </td><td></td></tr></tbody></table>

sinir yanıtları kayıt ve tarayıcıları enjekte için bir awake fare hazırlanması

Preparation of an Awake Mouse for Recording Neural Responses and Injecting Tracers

Biliyorsunuz anestezi, beynin çeşitli bölgelerinde nöral cevabı özelliklerini değiştirir olduğu bilinmektedir. 13. Işitme sistemi olarak, eşik, frekans özgüllük ve inhibitör sidebands dahil olmak üzere beyin sapı nöronları temel yanıtı özellikleri anestezi altında 1-2 belirgin şekilde değişmiş. Bu gözlemler fizyolojistleri anestezi kirletici etkisi olmayan tek nöronlardan kaydetmek için yollar aramaya sevk etti. Bir sonuç beyin sapı tamamen Ortabeyin 4 seviyesinde transeksiyon bir decerebrate hazırlanması, idi. Bu hazırlık sakıncaları müthiş bir ameliyat, ön beyin gelen projeksiyonlar inen ortadan kaldırılması ve orta beyin yukarıdaki yapıları incelemek için duyusal stimülasyon kullanmak için bir yetersizlik vardır. Farklı bir stratejiye hayvan uyanık ve / veya 5,6 davranışlar ise tek nöronlar ve multiunit kümelerden kaydetmek için kronik elektrod dizileri implant olmuştur </sup&gt;. Bu teknikler Bununla beraber ilk elektrofizyolojik bir beyin yapısını karakterize sonra izleyici boya enjekte ile uyumlu değildir. Tek nöronlardan gelen elektrofizyolojik yanıt özellikleri kaydederken anestezi ile nöral yanıt özelliklerinin değişmesini önlemek için, biz uzun fare 10-12 yarasalar 7-9 kullanılan bir kafalık tekniği adapte var. Bu yöntemi kullanarak, biz unanesthetized farenin birkaç gün içinde elektrofizyolojik yapabiliyoruz. Kayıt seansları sonunda, biz sonra elektrot pozisyonları ve kayıt siteleri yeniden ya ve kayıt lokus gelen yolları tespit edilebilir, böylece bir izleyici enjekte etmek için bir boya enjekte edebilir. Bu yöntem kullanımı anestezi olmadan birden fazla gün boyunca iyi izole tek nöron kayıtları için izin verir.

Nöronal yanıtların Elektrofizyolojik karakterizasyonu beyin fonksiyonu anlamak için ve yol izleme için boyaların yerleştirme yönlendirmek için önemlidir. Bununla birlikte, birçok çalışma anestetize hayvanlarda gerçekleştirilir. Anestezi olmadan beyin fonksiyonu anlamak için, nöronal yanıtı özellikleri kaydetmek ve uyanık fare boya enjekte etmek için bir yöntem geliştirdi.

Sinir Yanıtları Kayıt ve Tarayıcıları enjekte için bir Awake Fare hazırlanması

Anestezinin beynin çeşitli bölgelerindeki nöral yanıt özelliklerini değiştirdiği iyi bilinmektedir.13. İşitsel sistemde, temel yanıt...

Bu prosedürün genel amacı, uyanık bir faredeki tekil nöronlardan gelen yanıtları kaydetmektir. Bu işlem, öncelikle farenin izofloran inhalasyonu ile anestezi altına alınması, rodent stereotaksik çerçeveye yerleştirilmesi ve kafatasının açığa çıkarılmasıyla gerçekleştirilir. İkinci adım, stereotaksik koordinatlar kullanılarak ilgilenilen beyin bölgesinin belirlenmesi ve bu bölgenin sonraki kraniyotomi işlemi için işaretlenmesidir.Ardından, özel yapım bir kafa postu kafatasına monte edilir ve kafa postu, stereotaksik cihazdaki bir mikro manipülatöre bağlı olan bir montaj çubuğuna yerleştirilir. Son adım, bir elektrodun beyne yerleştirilmesine olanak sağlamak için kraniyotomi gerçekleştirmektir. Fare cerrahi işlemden sonra iyileştiğinde, bir köpük blok içerisinde sabitlenir.Baş sabitleyicisi tekrar montaj çubuğuna yerleştirilir ve özel yapım bir stereotaksik aparata bağlanır; ardından beyne bir mikro pipet elektrodu yerleştirilebilir. Bu prosedür, tekil ünitelerin izole edilmesine olanak tanır. Aynı beyin yapısından günlerce güçlü uyaran yanıtları kaydedilebilir ve izler, fizyolojik olarak tanımlanmış bölgelere giden çıkan veya inen projeksiyonları incelemek için veya yanıtlar anestet

preparation-an-awake-mouse-for-recording-neural-responses-injecting

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Sinirbilim

Bu video, fare beyninin işitsel uyaranları işleyen belirli bir bölgesindeki nöronal aktivitenin çalışmasını göstermektedir. Teknik, inhibe edici bir nörotransmisyon blokerinin uygulanmasını ve ilacın lokalize beyin bölgesine uygulanmasından önce ve sonra işitsel uyaranlara nöronal tepkilerin karşılaştırılmasını içerir.

İnhibitör Nörotransmitter Bloker Varlığında Uyanık Bir Farede İşitsel Nöronal Tepkilerin İncelenmesi

Bu videoda, bir fare beynine bir elektrot düzeneği yerleştirme tekniği gösterilmektedir. Düzenek, hipokampustan aktiviteyi kaydetmek için bipolar elektrotlar ve beyincikten temel aktivite elde etmek için bir referans elektrot içerir. Anestezi uygulanmış bir fare stereotaksik bir çerçeve üzerine yerleştirilir ve elektrot düzeneği hedef beyin bölgesine implante edilir. Daha sonra elektrofizyolojik kayıt yapılmadan önce hayvanın iyileşmesine izin verilir.

Elektrofizyolojik Kayıt için Bir Fare Beynine Bir Elektrot Düzeneğinin İmplantasyonu

Kaynak: Moore, J. D., et al. Juxtacellular Uyanık, Başı Kısıtlanmış Sıçanların Subkortikal Beyin Yapıları İçindeki Tek Nöronların İzlenmesi ve Lokalizasyonu. J. Vis. Uzm. (2015)Bu video, kısıtlanmış, uyanık bir sıçanda yan yana hücresel kayıt ve boyama yöntemini göstermektedir. Prosedür, nöronlardan gelen sinyallerin kaydedilmesini ve kayıt bölgesini tam olarak lokalize etmek için boya enjekte edilmesini içerir. Bu teknik, nöral aktivitenin beynin anatomik yapısına doğru bir şekilde...

Uyanık bir sıçanda nöral aktivitenin hassas haritalanması için juxtacellular kayıt ve boyama 

Serbest davranan farelerde elektroensefalogram (EEG) ve elektromiyogram (EMG) kaydı, davranış ve fizyolojiyi uyku ve uyanıklık ile ilişkilendirmek için kritik bir adımdır. Burada açıklanan deneysel protokol, farelerde EEG ve EMG kayıtlarını elde etmek için kablo tabanlı bir sistem sağlar.

Farelerde Uyku Ölçüm Basım Kayıt Prosedürü

Uyanık farelerde hücre dışı nöral aktiviteyi aynı anda kaydetmek ve kayıt bölgelerinin yakınında birden fazla nöroaktif madde salmak için elektrotların yapımı için yöntemler sunuyoruz. Bu teknik, ilgilenilen nörona varsayılan yerel sinaptik girdilerin ayrıntılı analizine izin verir.

Uyanık Farelerde Nöroaktif Maddelerin Microiontophoretic Uygulaması ile birlikte Nöronal Faaliyet dışı Kaydı

Bu eser bir optogenetic tek-unit güvenilir özel yapım cam optrode kullanarak uyanık bir fareden kayıt gerçekleştirmek için bir yöntem sunar.

Bir cam Optrode uyanık farelerde nöronal türüyle Optogenetics tanımlaması

Burada biz bir doku takas, floresan etiketleme ve büyük ölçekli görüntüleme sağlayan, böylece, görselleştirme yeni korteksimiz hücre tiplerinin üç boyutlu kuruluşun fare beyin dokusunun açıklayınız.

Hücresel Örgütü fare yeni korteksimiz yılında büyük ölçekli üç boyutlu görüntüleme

Bu protokol, nöro-glio-vasküler yapıların uzunlamasına görüntülemesi, hem sağlıklı hem de hastalıklı koşullarda fonksiyon ve fonksiyon için kullanılabilecek kronik bir kafatası pencere implantasyon tekniğini açıklamaktadır. Genellikle tercih edilirken bazı kritik sınırlamalara sahip olan transkraniyal görüntüleme yaklaşımına tamamlayıcı bir alternatif olarak hizmet vermektedir.

Farelerde Nöro-İmmün Dinamiğin Vivo Görüntülemesinde Tekrarlayan Performans için Hassas Beyin Haritalaması

Burada, uyanık farelerde mikroglial dinamiklerin ve nöronal aktivitenin eşzamanlı görüntülenmesi için adeno ilişkili virüs enjeksiyonunu kraniyal pencere implantasyonu ile birleştiren bir protokolü tanımladık.

Uyanık Farelerde Mikroglial Dinamiğin ve Nöronal Aktivitenin Eşzamanlı Görüntülenmesi

Elektrot üretimi için basitleştirilmiş ve uygun maliyetli bir yaklaşım geliştirdik ve serbestçe hareket eden farelerde birden fazla bölgede sinyallerin kayıtlarını gerçekleştirdik. Çok bölgeli elektrofizyoloji ve kalsiyum sinyal kaydının yanı sıra optogenetiğin kullanılması, nöbet tutuşturma modelinde bölgeler arasında nöronal aktivitelerin ortaya çıkarılmasını sağladı.

Çok Bölgeli İn Vivo Kayıt için Esnek ve Kullanışlı Elektrofizyolojik Seçenekler Hazırlamak için Entegre Bir Yöntem

Bu protokol, kafasına sabitlenmiş farelerin beyin sapından in vivo, yüksek yoğunluklu tek nöron kayıtları elde etmek için bir yöntemi açıklar. Bu yaklaşım, genel anestezi öncesinde ve sırasında Hızlı Göz Hareketi (REM) uykusu sırasında aktif olmayan bir beyin sapı bölgesi olan ventrolateral periakuaduktal grideki nöronların aksiyon potansiyel ateşlemesini ölçmek için kullanılır.

Kafası Sabit Farelerin Beyin Sapından Akut Tek Üniteli Çoklu Elektrot Kayıtları

Öğrenin uyanık farelerde tek nöron yanıtlarını kaydetme ve sinir yollarını izlemek için boya enjeksiyonu yöntemini. Stereotaksik cerrahi ve kraniyotomi kullanarak anestezi etkileri olmadan beyin fonksiyonlarını inceleyin.

Sinir Yanıtları Kayıt ve Tarayıcıları enjekte için bir Awake Fare hazırlanması

Daha fazla video keşfet