Name: Geç Embriyonik ve Yenidoğan Farelerde Ölçüm Sol Ventrikül Basınç (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-02-23T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 15 s
Description: Öğrenin, geç embriyonik ve yenidoğan farelerde ultrason rehberliğiyle sol ventrikül basıncı ölçüm yöntemini. Bu teknik, erken gelişim döneminde kardiyak fonksiyonu hassas şekilde değerlendirmeyi sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma NIH hibe HL087653 ve HL105314 tarafından kısmen finanse edildi. Bazı yöntemler Tıp Washington Üniversitesi Okulu&#39;nda Robert Mecham laboratuvarında geliştirildi.

1. Ultrason ve basınç sistemi <ol><li> Üretici talimatlarına (VEVO 770, Visualsonics) göre ultrason sistemi başlatın. Saf su ile ve ultrason sistemi bağlanmak - Uygun prob (P7 = modeli 708, yaş&gt; P7 = modeli 707B yaş E18) doldurun. LV apeks enjeksiyon kolu işaret etti, böylece görüntüleme platformu üzerine monte edilmiş bir fare için bir LV uzun eksen görünümü elde etmek için gerekli yaklaşık yöneltme de ayarlanabilir stand probu yerleştirin. </li><li> Basınç sistemi bir sıvı dolu basınç dönüştürücü, köprü amplifikatör, veri toplama sistemi ve veri kayıt yazılımı (LabChart) oluşur. Bağlantıları, üç yollu stopcocks, boru, luer kilitler ve hortum barbuslar oluşur. Bir 20 mL şırınga bir ucunda fışkırtma için% 10 heparinize tuzlu su ile doldurulur. Diğer ucu bir iğne bağlanır ve bir 3 mL şırınga gövdesi enjeksiyon kolu (Şekil 1) iğne boru tutmak için bir mahfaza olarak kullanılmak üzere modifiye edilir. </li><li&gt; bir manometre ile basınç dönüştürücü sistemi kalibre. </li><li> Ultrason sisteminin enjeksiyon kolunda iğne tüp ve kasa takın. Görüntüleme platformu yaklaşık yükseklikte bir halka standında basınç dönüştürücü Kelepçe. Iğne hortuma - fare yaş (P3 = 30G, yaş&gt; P3 = 25G yaş E18) için uygun bir iğne takın. Daha küçük iğneler kolay, göğüs duvarı ile ilerlemek ve daha yavaş bir tepki süresine sahip olan daha zordur tıkanmış olsun. Bu nedenle, LV lümen sığan büyük iğne boyutu her yaş için kullanılır. </li><li> Görüntüleme platform üzerinde ultrason jeli bir tümsek yerleştirin ve dikkatli bir iğne görüntüleme prob (Şekil 2) ile merkezi altında jel içine doğrudan ileri edilebilir, böylece ayarlanabilir stand kullanılarak prob hizaya. İğne yeterince prob altında olmalıdır Delmeyiniz sonda kapağı, ama sonda odak derinliği içinde olması yeterince yakın. Gerekirse bu th kalır, böylece iğne elle bükülerek edilebilironun seyahat boyunca e doğru düzlemi. </li><li> Hizalama bakımı, iğne geri çekin ve görüntüleme platformu üzerinde bir fare yerleştirmek için görüntüleme probu yükseltmek. Ucu girmiş olabilir herhangi bir jel ortadan kaldırmak için iğne yıkayın. </li></ol> 2. Fare hazırlığı <ol><li> Bu protokolde gösterilen tüm yöntemler Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından onaylanmıştır. % 1.5 izofluran sürekli Solunduğunda - zamanlanmış bir hamile anne (E18) veya neonatal fare (20 P1) uyutmak. Boru erken bir doğan fare (- 15 P1) küçük bir kafa barındırmak için standart bir burun koni içine sokulabilmektedir. </li><li> LV apeks enjeksiyon kolu doğru bakacak şekilde dorsal dekübit pozisyonunda ultrason sistemi görüntüleme platformu için fareyi sabitleyin. Hamileler için, ekli EKG dedektör ile kalp atışlarının izlenmesi ve vücut ısısının geri bildirim kontrolü için rektal termometre eklemek için ultrason jeli tatbik edin. Yenidoğan farelerde çok küçük fveya bu dedektörler, bu nedenle kalp hızı basıncı ölçümleri sırasında izlenir ve vücut sıcaklığı harici bir ısı lambası ile korunur. </li><li> Tüy dökücü krem ​​ile genç fare hamile anne veya göğüs karın saç çıkarın. Yenidoğan farelerde (P1 - 10) herhangi bir epilasyon gerekmez. </li><li> Hamileler için, diseksiyon makas ve kavisli bir forseps kullanarak karın kesip açmak. Gazlı bez, bir uterin boynuz ve yerine ılık tuzlu su çözeltisi ile nemlendirilmiş yansıtmak. Dikkatle ultrason probu ile LV bir parasternal uzun eksenden elde etmek için uygun pozisyona bir embriyo işleyebilirsiniz. Diğer uterin boynuz uygulamadan önce bu taraftaki her embriyolarda basıncını ölçün. Tüm embriyolar ve ılık serum fizyolojik periyodik Ayrıca nemli annenin karın tutun. </li></ol> 3. Basınç ölçme <ol><li> Yer embriyonik veya yenidoğan fare, vakum gazından arındırılmış ultrason jeli ısıtması. D olmamıştır Yenidoğan farelerdeepilasyon kalan ultrason jel kuplaj geliştirmek için uygulanmadan önce bunların göğüs üzerine ovma ultrason jel küçük bir miktar olmalıdır. Görüntüleme probu indirin ve optimal LV parasternal uzun eksen görünümü elde etmek için görüntüleme platformu açısını ayarlayın. İğnenin hizasını kaybolur, çünkü prob açısını ayarlamak etmeyin. </li><li> Ultrason ekranında AG görüntüyü izlerken bu probun altına yakın olana kadar yavaş yavaş iğne ilerlemek. Hizalama vardiya düzeltmek için, gerekirse, iğne ve prob konumunu ayarlayın. Yavaşça salinle iğne yıkayın. Kayıt basınç veri başlatın ve LabChart yazılımı ile basınç dönüştürücü sıfır. Transdüktör sıcaklık ve konum ile sürükleniyor, bu nedenle her bir farenin basınç ölçümünden önce sadece sıfıra önemlidir. </li><li> Yavaş yavaş ultrason görüntüsünü kenarında görülebilir kadar iğne ilerlemek, ama henüz SV. İğne konumunu ayarlamak, gerektiği takdirde, at LV girmekapeks. İğne net bir görüntü sağlamak için prob pozisyonu, gerektiği takdirde, ayarlayın. Basıncı verilerin kayıt ve ultrason görüntüsü iğne konumu izlerken, LV lümen (Şekil 3) içine iğne ilerletin. Basınç dönüştürücü gelen pulsatil kayıtların başlangıç ​​LV lümen (Şekil 4) içindeki konumunu teyit etmektedir. </li><li> Iğne LV lümeninde gibi görünen, ama bir basınç artışı (yaklaşık 5 - 10 uL hacmi) tespit edildiğinde sadece kadar basınç kayıtları, şırınga pistonu hafif bir musluk ile aynı hizada pulsatil değilseniz. Bu doğru bir okuma engelliyor olabilir herhangi bir takunya temizlemek gerekir. Basıncı okumaları hala pulsatil değilseniz, iğne doğru düzlem üzerinde veya altında olabilir ve LV lümenine eklenemez. Yine tuzlu ve avans ile yıkayın, iğne geri çekin. Pulsatil okumalar hala elde değilse, sonraki fare geçmek. Her fare için yeni bir iğne kullanın. </li><li> Başarılı bir basınç değerleri% 75 elde edilebilirembriyonik ve yenidoğan farelerde denedi. Okumalar 5 almalıdır - kalp hızları beklenen önemli ölçüde farklı ise, her 10 dakika ve bir fare için basınç verilerine dahil edilmemelidir (Şekil 5A). Kalp hızı kardiyovasküler önlemler üzerinde önemli bir etkiye sahiptir ve bozulmuş kalp hızı kalp sıkıntının göstergesidir. Embriyonik sıkıntı genellikle 1 oluşur - 1.5 saat rahim ilk dışsallaştırılmasını sonra, yani hızı bütün çöp baskıları ölçmek için önemlidir. </li></ol> 4. Temsilcisi Sonuçlar Tüm sonuçlar gösterilmiştir C57BL6J fareler için bulunmaktadır. Şekil 3&#39;te gösterildiği gibi bir P1 fare LV lümendeki iğnenin bir görüntüsüdür. Iğne göğüs duvarı için gerekli ve küçük LV lümen erişmek, ancak önemli ölçüde basınç sisteminin tepki süresi artar. Basınçta yaklaşık bir adım artış elle sistemi uygulandığında, maksimum basınç% 67 ulaşmak için 0,067 kez se olduğuSadece (basıncı adım uygulamak için gerçek zaman büyük olasılıkla gösterge) boru ile c, bir 30 G iğne ile bir 25 G iğne ve 0,529 sec ile 0,105 san. Maksimum basınç ulaşmada gecikme Şekil 4A ve 4C gösterilen tam iz görülebilir. Tepki süresi 30G iğne ile daha yavaş olmasına rağmen kalp hızı farelerde 5 yaş ile artar, çünkü dalga daha iyi, embriyonik ve erken neonatal aşamada yakalanır. Bu sınırlamaya rağmen, sistolik basınç gerçek LV diyastolik (en az) basıncı sıfır varsayılarak hesaplanır ve sistolik (maksimum) LV basınç iki kez kararlı durumda okumaları (Şekil 4B ve 4D tespit ortalama LV basıncı edilebilir ) 6. Genellikle sol ventrikül sistolik ve ortalama arter basınçları eşit olduğu varsayılır. E18 ve P14 arasında çeşitli yaş için kalp hızları ölçülen ve hesaplanan sol ventrikül basınçları Şekil 5&#39;te gösterilmiştir. <img src="/files/ftp_upload/3756/3756fig1.jpg" /> Şekil 1. Ekli üç yollu stopcocks, erkek (M) ve kadın (F) Luer kilit bağlantıları, hortum barbuslar, tüp, şırınga ve iğne ile basınç dönüştürücü resmi. <img src="/files/ftp_upload/3756/3756fig2.jpg" /> Şekil 2. Resmi görüntüleme probu (A) ile iğne hizalamak için kurulmuştur. Görüntüleme platformu farenin sol ventrikül apeks enjeksiyon kol bakacak şekilde döndürülür. Prob, bir LV uzun ekseni görüntü elde etmek için gerekli olan yaklaşık yönü de ayarlanabilir stand monte edilir. İğne boru gövdesi püskürtme kolu içinde monte edilmiştir. İğne görüntüleme prob (B) göre düzgün bir açısı ve dikey ve yatay konumunu belirlemek için görüntüleme platform üzerinde ultrason jeli bir tümsek içine ilerletilir. <img src="/files/ftp_upload/3756/3756fig3.jpg" /> Şekil 3. Iğne (N) Görüntü göğüs duvarı (CW) ile gelişmiş veP1 fare LV lümenine. Ölçek çubuğu = 0,1 mm. <img src="/files/ftp_upload/3756/3756fig4.jpg" /> Şekil 4. Iğnenin bir E18 (A) ve P14 (C) fare LV girer olarak Örnek pulsatil basınç okuma. Iğne takılı olan sistem tepki süresi nedeniyle kararlı bir duruma ulaşan bir gecikme var. Kararlı durumda okumaların zoom kez B ve asgari E18 LV basınçları sıfıra yakın olduğunu D. Not gösterilir, ancak sıfırdan maksimum basınç tam dalga P14 farelerin yüksek kalp hızına kaydedilemez. Ortalama basınçlar kararlı okumalarından ölçülür ve sol ventrikül sistolik basıncı = 2 x ölçülen basınç anlamına varsayılır. <img src="/files/ftp_upload/3756/3756fig5.jpg" /> Şekil 5. Ölçülen kalp hızı (A) ve (B) E18 için hesaplanan LV sistolik basıncı -. P14 fareler. N P3 P1, 22 için E18, 5 = 7, P14 için P7 için 23 ve 16 <sup&gt; 5-7.

<ol><li>Ji, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Onset+of+cardiac+function+during+early+mouse+embryogenesis+coincides+with+entry+of+primitive+erythroblasts+into+the+embryo+proper%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Onset of cardiac function during early mouse embryogenesis coincides with entry of primitive erythroblasts into the embryo proper.</a> Circ. Res. 92 (2), 133-135 (2003).</li>
<li>Ishiwata, T., Nakazawa, M., Pu, W. T., Tevosian, S. G., Izumo, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Developmental+changes+in+ventricular+diastolic+function+correlate+with+changes+in+ventricular+myoarchitecture+in+normal+mouse+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Developmental changes in ventricular diastolic function correlate with changes in ventricular myoarchitecture in normal mouse embryos.</a> Circ. Res. 93 (9), 857-865 (2003).</li>
<li>Huang, Y., Guo, X., Kassab, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Axial+nonuniformity+of+geometric+and+mechanical+properties+of+mouse+aorta+is+increased+during+postnatal+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Axial nonuniformity of geometric and mechanical properties of mouse aorta is increased during postnatal growth.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 290 (2), H657-H664 (2006).</li>
<li>Ishii, T., Kuwaki, T., Masuda, Y., Fukuda, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Postnatal+development+of+blood+pressure+and+baroreflex+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Auton.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Postnatal development of blood pressure and baroreflex in mice.</a> Auton. Neurosci. 94 (1-2), 34-41 (2001).</li>
<li>Le, V. P., Knutsen, R. H., Mecham, R. P., Wagenseil, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decreased+aortic+diameter+and+compliance+precedes+blood+pressure+increases+in+postnatal+development+of+elastin-insufficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Decreased aortic diameter and compliance precedes blood pressure increases in postnatal development of elastin-insufficient mice.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. , (2011).</li>
<li>Wagenseil, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reduced+vessel+elasticity+alters+cardiovascular+structure+and+function+in+newborn+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Circ.+Res%22%5BJournal%5D)">Reduced vessel elasticity alters cardiovascular structure and function in newborn mice.</a> Circ. Res. 104 (10), 1217-1224 (2009).</li>
<li>Wagenseil, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+importance+of+elastin+to+aortic+development+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">The importance of elastin to aortic development in mice.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 299 (2), H257-H264 (2010).</li>
<li>Ramirez, F., Sakai, L. Y., Rifkin, D. B., Dietz, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+microfibrils+in+development+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cell.+Mol.+Life+Sci%22%5BJournal%5D)">Extracellular microfibrils in development and disease.</a> Cell. Mol. Life Sci. 64 (18), 2437-2446 (2007).</li>
<li>Li, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Elastin+point+mutations+cause+an+obstructive+vascular+disease%2C+supravalvular+aortic+stenosis%5BTitle%5D)+AND+%22Hum.+Mol.+Genet%22%5BJournal%5D)">Elastin point mutations cause an obstructive vascular disease, supravalvular aortic stenosis.</a> Hum. Mol. Genet. 6 (7), 1021-1028 (1997).</li>
<li>Roth, D. M., Swaney, J. S., Dalton, N. D., Gilpin, E. A., Ross, J. Jr <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+anesthesia+on+cardiac+function+during+echocardiography+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Impact of anesthesia on cardiac function during echocardiography in mice.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 282 (6), H2134-H2140 (2002).</li>
<li>Phoon, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Imaging+tools+for+the+developmental+biologist%3A+ultrasound+biomicroscopy+of+mouse+embryonic+development%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr.+Res%22%5BJournal%5D)">Imaging tools for the developmental biologist: ultrasound biomicroscopy of mouse embryonic development.</a> Pediatr. Res. 60 (1), 14-21 (2006).</li>
</ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Burada sunulan protokolü geç embriyonik ve erken Neonatal farelerde LV basıncı ölçmek için bir yöntem sağlar. Bu protokolün ana sınırlama basınç sisteminin zamansal çözünürlük. Bu dönüştürücü iğne ile LV gelen seyahat ve sadece basınç değerleri kaydedilebilir ortalama olarak basınç sinyali sönümlü edilir. Sönümleme mümkün olan en geniş iğne kullanılarak minimize edilebilir, ancak iğne farklı yaşlı farelerde için LV lümen içinde sığması gerekir. Diastolik basınç sıfır olarak yaklaşılabilir Çünkü, AG ve dolayısıyla arteri...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif / ekipman Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> Yüksek çözünürlüklü ultrason sistemi </td><td> Visualsonics </td><td> VEVO 770 </td><td> Veya diğer uygun ultrason sistemi </td></tr><tr><td> Yüksek frekanslı ultrason probları </td><td> Visualsonics </td><td> 708 ve 707B </td><td></td></tr><tr><td> Görüntüleme platformu ve enjeksiyon kol </td><td> Visualsonics </td><td> Görüntüleme Station 2 </td><td> EKG ve platform sıcaklık geri besleme kontrolü ile </td></tr><tr><td> Basınç detektörler </td><td> AD Aletleri </td><td> MLT 844 </td><td></td></tr><tr><td> Köprü amplifikatör </td><td> AD Aletleri </td><td> ML221 </td><td></td></tr><tr><td> Veri toplama sistemi </td&gt; <td> AD Aletleri </td><td> ML866 </td><td></td></tr><tr><td> Veri kayıt yazılımı </td><td> AD Aletleri </td><td> LabChart </td><td></td></tr><tr><td> Halka stand ve kelepçe </td><td> Çeşitli tedarikçiler </td><td></td><td> Ölçümleri sırasında basınç dönüştürücü tutun </td></tr><tr><td> Luer bağlantıları ile 3-yollu stopcocks, erkek kilit </td><td> Cole Parmer </td><td> 30600-02 </td><td></td></tr><tr><td> 1/16 &quot;ID Tygon Boru </td><td> Cole Parmer </td><td> 06408 </td><td></td></tr><tr><td> Erkek ve kadın luers w / 1/16 &quot;hortum barb </td><td> Cole Parmer </td><td> 45510-50 45510-00 </td><td></td></tr><tr><td> Her sonunda erkek ve dişi luer ile 24 &quot;boru </td><td> Cole Parmer </td><td> 30600-60 </td><td></td></tr><tr><td> 3 ve 10 mL şırınga </td><td> BD Biosciences </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 30 ve 25G iğneler </td><td> BD Biosciences </td><td></td><td> Uzunluğu 1.5 inç </td></tr><tr><td> Big Ben manometre </td><td> Riester </td><td> 1456-100 </td><td></td></tr><tr><td> Tuzlu </td><td> Çeşitli tedarikçiler </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Heparin </td><td> Çeşitli tedarikçiler </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Ultrason jeli </td><td> Parker </td><td> Aquasonic 100 </td><td></td></tr><tr><td> Tüy dökücü losyon </td><td> Nair </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

geç embriyonik ve yenidoğan farelerde Ölçüm sol ventrikül basınç

Measuring Left Ventricular Pressure in Late Embryonic and Neonatal Mice

Kan basıncı omurgalı hayvanlarda embriyonik ve postnatal gelişim sırasında önemli ölçüde artırır. Fare, kan akışı embriyonik gün (E) 8,5 1 etrafında birinci bulgulanabilir. Sistolik sol ventrikül (LV) basınç E9.5 az 2 mmHg ve E14.5 2 11 mmHg. Kaburga ve deri tam gelişmiş değil çünkü bu orta embriyonik aşamalarında, LV invaziv basınç ölçümleri için göğüs duvarına doğru olduğu açıkça görülebilir. E14.5 ve doğum (yaklaşık E21) arasındaki görüntüleme yöntemleri LV görüntülemek için kullanılmalıdır. 35 3 - postnatal gün (P) 2 ila 70 mmHg - Doğumdan sonra, 30 arteriyel basınç artar anlamına gelir. P20 ötesinde, kan basıncı solid-state kateterler (yani Millar veya Scisense) ile ölçülebilir. Özel sıvı dolu basınç dönüştürücüler 3 veya cam mikropipetler att bağlı plastik kateterler çekti ile P20 önce, bu kateterler fare arterler ve kan basıncı geliştirmek için çok büyük ölçülmelidirservo boş basınç dönüştürücüler 4 ağrıyordu. Bizim son çalışma kan basıncı en büyük artış 5-7 farelerde erken postnatal döneme geç embriyonik sırasında oluşur göstermiştir. Kan basıncında Bu büyük artış gelişmekte olan arterlerde düz kas hücresi (SMC) fenotipi etkileyen ve önemli mechanotransduction olayları tetikleyebilir. Gelişmekte olan arterlerin mekanik özellikleri dışı matriks proteinleri (örneğin Marfan Sendromu 8 ve Supravalvüler Aort darlığı 9) kusurlar olarak bağdaştırılır insan hastalığı, bu dönemde kan basıncında hızlı değişiklikler mechanotransduction değişiklikler yoluyla hastalık fenotipi ve şiddetine katkıda bulunabilir sinyalleri. Bu nedenle, insan hastalık fare modellerinde geç embriyonik ve yenidoğan döneminde kan basıncı değişiklikleri ölçmek için edebilmek önemlidir. Biz geç ölçüm LV basınç için bir yöntem tarifembriyonik (E18) ve postnatal (P1 - 20) fareler. Bir sıvı dolu bir basınç transdüktörüne bağlı bir iğne ultrason eşliğinde LV sokulur. Bakım özellikle embriyonik fareler için, deneysel protokol sırasında normal kalp fonksiyonları korumak için alınır. Temsilcisi veriler sunulmuş ve protokol sınırlamaları tartışılmıştır.

Embriyonik ve yenidoğan farelerde Ölçme sol ventrikül basıncı (LV) tarif edilir. Basınç ultrason eşliğinde LV içine bir sıvı dolu transdüktörüne bağlı bir iğne sokarak ölçülür. Bakım deneysel protokol sırasında normal kalp fonksiyonları korumak için alınması gerekir.

Geç Embriyonik ve Yenidoğan Farelerde Ölçüm Sol Ventrikül Basınç

Omurgalı hayvanlarda, embriyonik ve postnatal gelişim sırasında kan basıncı önemli ölçüde artar. Farede, kan akışı ilk kez ... şeklinde tespit edilebilir.

Bu prosedürün genel amacı, geç embriyonik ve neonatal farelerde sol ventrikül veya LV basıncını ölçmektir. İlk olarak, ekipman hazırlanır. Bir basınç dönüştürücüye bağlı olan iğne, bir ultrason probu ile hizalanmalıdır.Ardından bir fare hazırlanır ve sol ventrikülünün (LV) ultrasonla görüntüsü alınır. Sonrasında iğne, LV lümenine ilerletilir ve pulsatil basınç ölçümleri kaydedilir. Sonuç olarak, bu ultrason kılavuzlu sıvı dolgulu kateterizasyon yöntemi kullanılarak geç embriyonik ve erken neonatal farelerdeki sistolik basınçlar gösterilmektedir.Bu tekniğin servo, basınç ölçümü yapılmayan veya katı hal kateterler gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, geç embriyonik ve neonatal farelerde basıncın sağlam ve tekrarlanabilir bir şekilde ölçülebilmesidir. Genellikle, bu tekniği ilk kez uygulayan kişiler, embriyonun dönmesi nedeniyle embriyonik kese içindeki yönelimini korumakta zorlanacaklardır. Ultrason probu uygulanırken, incelenecek farenin aşamasına bağlı olarak, uygun bir prob seçin ve içi distile su ile doldurun.Probu, ultrason sisteminin ayarlanabilir standına yerleştirin. Standı, platforma monte edilmiş farenin LV uzun eksen görüntüsünü sağlayacak ve LV apeksi enjeksiyon koluna doğru bakacak şekilde ayarlayın. Basınç sistemi; sıvı dolu bir basınç transduseri, köprü amplifikatörü, veri toplama sistemi ve lab chart'tan oluşmaktadır.Bir yazılım paketi ve tüpleri yıkamak için %10 heparinli serum fizyolojik ile doldurulmuş 20 mililitrelik bir şırınga kullanılır. Tüplerde veya transduser üzerinde hava kabarcığı kalmadığından emin olun. Transduserle bağlantı; üç yollu musluklar, luer kilitler ve hortum rakorları aracılığıyla sağlanır.Basınç dönüştürücü sistemini bir manometre ile kalibre edin, iğne tüpünü ve kılıfı enjeksiyon koluna monte edin. Manometreyi, tüpü enjeksiyon koluna sabitleyecek bir kılıfla değiştirin. Kılıf, basitçe modifiye edilmiş üç mililitrelik bir şırınga gövdesidir.Basınç dönüştürücüsünü bir halka ile sabitleyin. Tıkanmaları önlemek için görüntüleme platformunun yaklaşık yüksekliğinde durun. İğne tüpüne takılabilecek en büyük boyutlu iğneyi takın ve birkaç damla gelene kadar heparinli salin enjekte edin.İğneyi tekrar çıkarın. Tüplerde veya transducer üzerinde hava kabarcığı kalmadığından emin olun. Şimdi, görüntüleme platformunun üzerine bir miktar ultrason jeli sürün.İğnenin eğimli ucunun yukarı bakacak şekilde üç mililitrelik şırınga gövdesinden çevirin. Ardından, ayarlanabilir standı kullanarak, iğnenin doğrudan jelin içine ilerleyebileceği şekilde probu dikkatlice hizalayın. Görüntüleme probunun merkezinin altında olan iğne, prob kapağını delmeyecek kadar aşağıda, ancak probun odak derinliği içinde olacak kadar yakın olmalıdır.Gerektiğinde, iğne, tüm hareketi boyunca doğru düzlemde kalacak şekilde elle bükülebilir. Hizalamayı koruyarak iğneyi geri çekin ve görüntüleme platformuna bir fare yerleştirmek için görüntüleme probunu kaldırın. Fareyi anestezi altına almadan önce iğneyi yeniden yerleştirin.Zamanlanmış gebe bir anne veya neonatal fare, %1,5 izofluranın sürekli inhalasyonu ile anesteziye alınır; erken dönem neonatal farelerin küçük başlarına uyum sağlaması için standart bir burun konisine tüp yerleştirilebilir. Neonatal fareler için, sol ventrikül (LV) apeksi enjeksiyon koluna bakacak şekilde, fareyi ultrason sisteminin görüntüleme platformuna dorsal dekubitus pozisyonunda sabitleyin. Neonatal farelerin vücut sıcaklığını harici bir ısı lambası ile koruyun.Gebe fareler daha fazla hazırlık gerektirir. Bağlı olan ECG dedektörü ile etkileşimi sağlamak için ekstremitelere ultrason jeli uygulayın ve kalp atış hızını izleyin. Geri bildirim almak için rektal termometreyi yerleştirin.Vücut ısısının kontrolü. Karın bölgesindeki tüyler epilasyon kremi ile temizlenir ve suyla durulanır. Karın bölgesi, diseksiyon makası ve eğri pens kullanılarak açılır.Bir uterus kornunu dışarı çıkarın ve sıcak salin ile nemlendirilmiş bir gazlı bez ped üzerine yerleştirin. Bu prosedür boyunca, tüm embriyoları ve annelerinin abdomenini nemli tutun. Periyodik olarak sıcak salin ekleyerek, LV'nin parasternal uzun eksen görüntüsünü elde etmek için bir embriyoyu dikkatlice uygun konuma getirin. Ultrason probunu kullanırken, embriyonun yönelimini korumaya yardımcı olmak için bir rulo gazlı bez kullanılabilir.Diğer uterus kornuna geçmeden önce, bir uterus kornundaki tüm embriyolarda basınç ölçümü işlemini gerçekleştirin. Önce, embriyonik veya neonatal fare üzerine önceden ısıtılmış Degas ultrason jeli sürerek başlayın. Optimal parasternal LV uzun eksen görünümü elde etmek için görüntüleme probunu indirin ve görüntüleme platformunun açısını ayarlayın.İğne hizalaması bozulacağı için probun açısını ayarlamayın. Ultrason ekranında LV görüntüsünü izlerken, iğneyi probun tabanına yaklaşana kadar yavaşça ilerletin. Hizalama kaymalarını düzeltmek için gerekirse iğne ve prob konumunu ayarlayın.Yenidoğan fareden alınan görüntü, embriyo ile elde edilmesi zor olan lv için ideal bir yönelim göstermektedir. Basınç verilerini kaydetmeye başlayın. İğneyi nazikçe salin ile yıkayın ve 20 mililitrelik şırıngaya giden yolu ve atmosfere açılan stopcock'u kapatın.Basıncı gözlemleyin. İğneye minimum basınç uygulandığından emin olmak için programdaki ayarı artırın. İğne, ultrason görüntüsünün kenarında görülene kadar, ancak henüz lv içine girmemiş olacak şekilde yavaşça ilerletin.Gerekirse, iğnenin sol ventriküle (LV) apeks kısmından girmesi için konumunu ayarlayın. İğnenin net görüntüsünü korumak için gerekirse prob konumunu ayarlayın. Basınç verilerini kaydederek ve ultrason görüntüsünde iğne konumunu izleyerek iğneyi LV lümenine doğru ilerletin.Basınç transdüserinden gelen pulsatif kayıtların başlaması, iğnenin LV lümeni içindeki konumunu doğrular. İğne LV lümeninde görünmesine rağmen basınç kayıtları pulsatif değilse, basınç artışı tespit edilene kadar şırınga pistonuna hafifçe vurarak iğneyi yıkayın. Basınç ölçümleri sırasında kalbin davranışının değişmesini önlemek için sıvı yıkama işlemi minimum düzeyde tutulmalıdır.Basınç okumaları hâlâ pulsatil değilse, iğne doğru düzlemin üzerinde veya altında olabilir ve LV lümenine girmemiş olabilir. İğneyi geri çekin, serum fizyolojik ile yıkayın ve tekrar ilerletin.Eğer hala pulsatif okumalar elde edilemiyorsa, bir sonraki fareye geçin ve her yeni fare için daima taze bir iğne kullanın. Deney süresince embriyoların ve yenidoğanların stresini en aza indirmek için tüm prosedür mümkün olduğunca hızlı bir şekilde gerçekleştirilmelidir. C 57 Black six J farelerinin ventriküler basıncı, bir E 18 faresinde ölçülmüştür.Beklendiği gibi, iğne LV dışındayken basınç sıfıra yakındı ve yaşlı bir P 14 faresinin LV içindeyken basınç okuması pulsatif bir seyir gösterdi. Basınç büyüklüğü daha fazla ve kalp hızı daha yüksek olduğu için basınç okuması sönümlenmişti. Kalp hızları, E 18 ile P 14 arasındaki çeşitli yaşlar için pulsatif basınç okumalarının frekansından belirlendi.Kalp hızları ölçüldü ve sistolik LV basınçları hesaplandı. Bu prosedür gerçekleştirilirken, embriyoların periyodik olarak nemlendirilmesinin ve annenin durumunun kontrol edilmesinin önemli olduğunu hatırlamak gerekir. Bu teknik, kardiyovasküler fizyoloji alanındaki araştırmacıların gelişmekte olan farelerdeki kan basıncı değişikliklerini incelemelerinin önünü açmaktadır.

measuring-left-ventricular-pressure-late-embryonic-neonatal

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Biyomühendislik

Kalp gelişimini etkileyen genetik değişiklikler incelenirken Fetal ve perinatal ölüm ortak bir özelliktir. Yüksek frekanslı ultrason görüntüleme 2-D çözünürlüğü artmıştır ve erken kardiyak gelişimi mükemmel bilgi sağlayabilir ve önceden ölüm kalp yapısı ve fonksiyonu üzerine etkisini tespit etmek için ideal bir yöntemdir.

Mürin Fetal Ekokardiyografi

Aynı anda sağ kalp fonksiyonu, akciğer iltihabı ve bağışıklık yanıtı araştırmak için bir özel ve hızlı bir protokol bir öğrenme aracı olarak tanımlanmaktadır. Video ve rakamlar büyük ölçekli çalışmalara küçük kullanılmak üzere uyarlanabilir bir organize ekip yaklaşımı, fizyoloji ve mikrodiseksiyon teknikleri anlatıyoruz.

Akciğer ve Fareler immün Doku Örneklerinde Hasat ile kombinasyon Sağ Ventrikül Sistolik Basınç Ölçümleri

Bu makalede, sağ ventrikül boyut ve farelerde pulmoner hipertansiyon ekokardiyografik değerlendirilmesi için bir protokol sağlar. Uygulamalar transgenik ve kardiyomiyopati ve pulmoner vasküler hastalığı toksin kaynaklı fare modellerinde fenotip kararlılık ve seri değerlendirmesini içerir.

Farelerde Sağ Kalp Ekokardiyografik Değerlendirilmesi

Sağ ventrikül (RV) işlev bozukluğu, kardiyovasküler hastalığın patojenezine önemli olan, ancak sınırlı yöntemler ile değerlendirilmesi için kullanılabilir. Ultrason görüntülemede son gelişmeler boyuna RV çalışmada non-invaziv bir ve doğru bir seçenek sunar. Bu yazıda, detay RV basıncı aşırı bir fare modeli kullanılarak bir adım-adım ekokardiyografi yöntemi.

Transtorasik Ekokardiyografi ile Pulmoner Arter Konstrüksiyon Fare Modeli sağ ventrikül yapı ve fonksiyonlarının değerlendirilmesi

Kalp yetersizliği hastaneye yatışların önde gelen nedeni ve mortalitenin önemli bir nedenidir. Miyokard enfarktüsü sonrası ventriküler yeniden şekillenme ve kardiyak disfonksiyonu araştırmak için farelerde sol ön inen koroner arterin kalıcı ligasyonu modeli uygulanır. Farelerde invaziv hemodinamik ölçüm tekniği sunulmuştur.

Farelerde Sol Ön İnen Koroner Arter Daimi ligasyonu: Post-miyokard Enfarktüs Remodelling ve Kalp Yetmezliği Bir Model

Bu makale, farklı kalp atış hızlarında basınç/hacim analizi yoluyla murin sol ventrikül fonksiyonunun ölçümünü açıklamaktadır.

Bowditch Efekt incelenmesi: Basınç Hacim İlişkisi Tedbir Fare Kardiyak Kateterizasyon

Bu el yazması fare basınç-volüm verilerinin toplanması için ayrıntılı bir protokol açıklar.

Fare Basınç Hacim Döngüler Ölçme

Aşağıdaki protokol farelerde Sol Atriyal Hacmi (LAV), Aort (Ao) çapı ve Pulmoner Arter (PA) çapı elde etmek için kullanılan ekokardiyografik görüntülerin elde edilmesi ve analizi için yöntem anlatılmaktadır. Bu teknik kardiyopulmoner fonksiyonun değerlendirmesini sağlayan bir non-invaziv olmayan terminal işlemdir.

Sol Atrium, Aort ve Pulmoner Arter Murin Ekokardiyografi

Yüksek frekanslı ultrason görüntüleme fetal fare görüntüleme çözümü geliştirdi ve hassas bir non-invaziv kalp geliştirme ve yapısal kusur karakterizasyonu sağlar. Burada özetlenen Protokolü gerçek zamanlı fetal fareler Ekokardiyografi vivo içindegerçekleştirmek için tasarlanmıştır.

Fetal fare bir yüksek frekans ultrason (30/45 MHZ) sistemi kullanarak Imaging kardiyovasküler

Burada tarif ve farelerde apikal dört odası görünümü elde etmek için iki pozisyon karşılaştırmak. Bu pozisyonlar sağ ventrikül fonksiyonunun ölçülmesini sağlar, karşılaştırılabilir sonuçlar sağlar ve birbirinin yerine kullanılabilir.

Fareyle sağ ventriküler diyastolik parametrelerin ekokardiyografik ölçümü

Bu protokol, 7 günlük yenidoğan farelerde sol ventrikül morfolojisinin, fonksiyonunun ve koroner kan akımının ekokardiyografik değerlendirmesini açıklamaktadır.

Yenidoğan Farelerde Sol Ventrikül Yapısının, Fonksiyonunun ve Koroner Akımın Ekokardiyografik Karakterizasyonu

Öğrenin, geç embriyonik ve yenidoğan farelerde ultrason rehberliğiyle sol ventrikül basıncı ölçüm yöntemini. Bu teknik, erken gelişim döneminde kardiyak fonksiyonu hassas şekilde değerlendirmeyi sağlar.

Geç Embriyonik ve Yenidoğan Farelerde Ölçüm Sol Ventrikül Basınç

Daha fazla video keşfet