Geç Embriyonik ve Yenidoğan Farelerde Ölçüm Sol Ventrikül Basınç

Bu prosedürün genel amacı, geç embriyonik dönemdeki ve neonatal farelerde sol ventrikül veya LV basıncını ölçmektir. İlk olarak, ekipman hazırlanır. Bir basınç transduserine bağlı olan iğne, bir ultrason probu ile hizalanmalıdır.

Ardından bir fare hazırlanır ve LV'si ultrason ile görüntülenir. Sonrasında iğne LV lümenine ilerletilir ve pulsatif basınç ölçümleri kaydedilir. Sonuçlar, bu ultrason kılavuzlu sıvı dolu kateterizasyon yöntemi kullanılarak geç embriyonik ve erken neonatal farelerdeki sistolik basınçları göstermektedir.

Bu tekniğin servo, basınç ölçümü yapılmayan veya katı hal kateterleri gibi mevcut yöntemlere göre temel avantajı, geç embriyonik ve neonatal farelerde basıncın sağlam ve tekrarlanabilir bir şekilde ölçülebilmesidir. Genel olarak, bu tekniğe yeni başlayan kişiler, embriyonun dönmesi nedeniyle embriyonik kese içindeki yönelimini korumakta zorlanacaklardır. Ultrason probunun uygulanmasıyla birlikte, incelenecek farenin evresine bağlı olarak bir prob seçin ve içi distile su ile doldurun.

Probu, ultrason sisteminin ayarlanabilir standına yerleştirin. Standı, platforma monte edilmiş bir farenin LV uzun eksen görüntüsünü sağlayacak ve LV apeksinin enjeksiyon koluna doğru bakacağı şekilde ayarlayın. Basınç sistemi; sıvı dolu bir basınç transduseri, köprü amplifikatörü, veri toplama sistemi ve lab chart'tan oluşmaktadır.

Bir yazılım paketi ve tüplerin yıkanması için %10 heparinli serum fizyolojik ile doldurulmuş 20 mililitrelik bir şırınga kullanılır. Tüplerde veya transdüser üzerinde hava kabarcığı kalmadığından emin olun. Transdüserle bağlantılı tüpler; üç yollu musluklar, luer kilitler ve hortum girişleri ile bağlanır.

Basınç dönüştürücü sistemini bir manometre ile kalibre edin; iğne borusunu ve kılıfı enjeksiyon koluna monte edin. Manometreyi, boruyu enjeksiyon koluna sabitleyecek bir kılıfla değiştirin. Kılıf, basitçe modifiye edilmiş üç mililitrelik bir şırınga gövdesidir.

Basınç transdüserini bir halka ile sabitleyin. Tıkanmayı önlemek için görüntüleme platformunun yaklaşık yüksekliğinde durun. İğne tüpüne mümkün olan en büyük boyutlu iğneyi takın ve birkaç damla gelene kadar heparinli salin enjekte edin.

İğneyi tekrar çıkarın. Hortumda veya transdüserin üzerinde hava kabarcığı kalmadığından emin olun. Şimdi, görüntüleme platformuna bir miktar ultrason jeli sürün.

İğnenin eğimli ucu yukarı bakacak şekilde üç mililitrelik şırınga gövdesinden döndürün. Ardından, ayarlanabilir standı kullanarak, iğnenin doğrudan jel içine ilerletilebilmesi için probu dikkatlice hizalayın. Görüntüleme probunun merkezinin altında iğne, prob kapağını delmeyecek kadar aşağıda, ancak probun odak derinliği içerisinde olacak kadar yakın olmalıdır.

Gerekirse, iğne, tüm hareketi boyunca doğru düzlemde kalacak şekilde elle bükülebilir. Hizalamayı koruyarak iğneyi geri çekin ve görüntüleme platformuna bir fare yerleştirmek için görüntüleme probunu kaldırın. Fare anestezi işlemine geçmeden önce iğneyi değiştirin.

%1,5 İzofluranın sürekli inhalasyonu ile zamanlanmış gebe bir anne veya neonatal fare anesteziye alınır; erken neonatal farenin küçük kafasına uyum sağlamak için standart bir burun konisine tüp yerleştirilebilir. Neonatal fareler için, fareyi sol ventrikül (LV) apeksi enjeksiyon koluna bakacak şekilde, dorsal dekubitus pozisyonunda ultrason sisteminin görüntüleme platformuna sabitleyin. Neonatal farelerin vücut sıcaklığını harici bir ısı lambası ile koruyun.

Gebe fareler daha fazla hazırlık gerektirir. Bağlı olan EKG detektörü ile kuplaj sağlamak için ekstremitelere ultrason jeli uygulayın ve kalp hızını izleyin. Geri bildirim almak için rektal termometreyi yerleştirin.

Vücut ısısının kontrolü. Karın bölgesindeki tüyleri tüy dökücü krem ile temizleyin ve suyla durulayın. Karın bölgesini diseksiyon makası ve kavisli pens kullanarak açın.

Bir uterus kornusunu dışarı çıkarın ve sıcak salin ile nemlendirilmiş bir gazlı bez pedin üzerine yerleştirin. Bu prosedür boyunca, tüm embriyoları ve annelerinin abdomenini nemli tutun. Periyodik olarak sıcak salin ekleyerek, LV'nin parasternal uzun eksen görüntüsünü elde etmek için bir embriyoyu dikkatlice uygun pozisyona getirin. Ultrason probu kullanırken, embriyonun yönelimini korumaya yardımcı olmak için bir rulo gazlı bez kullanılabilir.

Diğer uterus kornuna geçmeden önce, bir uterus kornundaki tüm embriyolarda basınç ölçümünü gerçekleştirin. Embriyonik veya neonatal bir fare üzerine önceden ısıtılmış Degas ultrason jeli sürerek başlayın. Optimal parasternal LV uzun eksen görüntüsünü elde etmek için görüntüleme probunu indirin ve görüntüleme platformunun açısını ayarlayın.

İğne hizalamasının bozulmaması için probun açısını ayarlamayın. Ultrason ekranından LV görüntüsünü izlerken, iğneyi probun alt kısmına yaklaşana kadar yavaşça ilerletin. Hizalama kaymalarını düzeltmek için gerekirse iğne ve prob konumunu ayarlayın.

Yenidoğan fareden alınan görüntü, bir embriyo ile elde edilmesi zor olan lv için ideal bir yönelim göstermektedir. Basınç verilerini kaydetmeye başlayın. İğneyi nazikçe salin ile yıkayın ve stop musluğunu 20 mililitrelik şırınga ile atmosfer arasındaki bağlantılarda kapatın.

Basıncı gözlemleyin. İğneye minimum basınç uygulandığından emin olmak için programdaki değeri artırın. İğne, sol ventrikülde (lv) henüz görünmeden hemen önce, ultrason görüntüsünün kenarında görünene kadar yavaşça ilerletin.

Gerekirse, iğnenin apeks üzerinden LV'ye girmesi için konumunu ayarlayın. İğnenin net görüntüsünü korumak için gerekirse prob konumunu ayarlayın. Basınç verilerini kaydederken ve ultrason görüntüsünde iğne konumunu izlerken, iğneyi LV lümenine doğru ilerletin.

Basınç dönüştürücüsünden gelen pulsatil kayıtların başlaması, iğnenin LV lümeni içindeki konumunu doğrular. İğne LV lümeni içerisinde görünmesine rağmen basınç kayıtları pulsatil değilse, bir basınç artışı tespit edilene kadar şırınga pistonuna hafifçe vurarak iğneyi yıkayın. Basınç ölçümleri sırasında kalbin davranışının değişmesini önlemek için sıvı yıkama işlemi minimum düzeyde tutulmalıdır.

Basınç okumaları hâlâ pulsatif değilse, iğne doğru düzlemin üzerinde veya altında olabilir ve LV lümenine girmemiş olabilir. İğneyi geri çekin, serum fizyolojik ile yıkayın ve yeniden ilerletin.

Hala pulsatil okumalar elde edilemiyorsa bir sonraki fareye geçin ve her yeni fare için daima taze bir iğne kullanın. Embriyoların ve yenidoğanların deney süresince maruz kalacağı stresi en aza indirmek için tüm prosedür mümkün olduğunca hızlı bir şekilde gerçekleştirilmelidir. C 57 Black six J farelerinin ventrikül basıncı, bir E 18 faresinde ölçülmüştür.

Beklendiği üzere, iğne LV dışındayken basınç sıfıra yakındı ve yaşlı bir P 14 faresinde iğne LV içindeyken basınç pulsatil bir okuma gösterdi. Basınç genliği daha büyük ve kalp atım hızı daha yüksek olduğu için basınç okuması sönümlenmişti. Kalp atım hızları, E 18 ile P 14 arasındaki çeşitli yaşlar için pulsatil basınç okumalarının frekansından belirlendi.

Kalp hızları ölçülmüş ve sistolik LV basınçları hesaplanmıştır. Bu prosedür gerçekleştirilirken, embriyoların periyodik olarak nemlendirilmesi ve annenin durumunun kontrol edilmesi gerektiğini hatırlamak önemlidir. Bu teknik, kardiyovasküler fizyoloji alanındaki araştırmacıların gelişmekte olan farelerdeki kan basıncı değişikliklerini incelemesinin önünü açmaktadır.