Name: Kabul edilmiş Transfer ve antijenik Challenge Deneysel Otoimmün Encephalomyelitis (EAE) Dayanıklı Fare Suşlarında yanıtsızlık Aşmak (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-04-09T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 38 s
Description: Öğrenin, dirençli fare suşlarında EAE indüksiyonu için bağışıklık hücrelerinin aktarımı ve antijenik uyarım yöntemini. Bu teknik, otoimmün hastalık mekanizmalarını incelemeye olanak tanır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Ulusal Sağlık Enstitüleri hibeler (R01 NS37253 ve N01 NS055167) ve Ulusal Multipl Skleroz Derneği (RG 3288-A6) tarafından kısmen desteklenmektedir.

1. CFA-emülsifiye Antijen Hazırlanması <ol><li> 2 mg / ml arasında derişimde fosfat tampon solüsyonu (PBS) içinde kobay MBP (Swanborg1 bir metoda göre hazırlandı ve 4 ° C&#39;de iyofilleştirilmiş formda saklanan) içinde çözülür. Sentezlenen MBP peptitler (MBP 60-80, SHHAARTTHYGSLPQKSQR) 2 kullanılması halinde, 2 mg / ml solüsyon hazırlanır. Luer-lok bir cam şırıngaya antijen çözeltisi uygun miktarda (fare başına 0.1 ml aşı olmak) kadar çizin. </li><li> Luer-lok sahip başka bir cam şırınga içine antijen çözeltisi eşit komple Freund adjuvan H37Ra (0.1WT%) (CFA, Difco Laboratories) bir hacme kadar çizin. </li><li> Üç yollu ile iki cam şırıngalar bağlayın. Ileri ve geri pistonu iterek CFA ile MBP çözüm karıştırın. Bir emülsiyon meydana gelinceye kadar hareket tutmak. </li><li> Bir emülsiyon oluşturulur halinde test etmek için, bir şırınga içinde karışımı her püskürtülür. Boş şırınga ayırın, t çekino biraz piston geri ve oda sıcaklığında temiz su behere kalan emülsiyon bir damla boşaltın. Emülsiyon damla su yüzeyinin üzerinde olduğu gibi kalır, bir emülsiyon oluşmuştur. Emülsiyon halinde damla dağılır, şırınga yeniden ve karışım hareket etmektedir. </li><li> Antijen doğru bir doz teslim sağlamak için aşılama işlemi için 1 ml plastik şırınga kullanın. Plastik enjektöre antijen emülsiyonu aktarmak için, piston çekin ve önceki cam şırınga 1.4 gibi kesildi üç yollu deliğine boş plastik şırınga takın. </li><li> Cam enjektörün dalma piston iterek jantın plastik bir şırınga doldurun. Geri plastik şırınganın pompasına yerleştirin ve plastik şırınga üzerine 1.2 mL işaretine kadar ulaşan geri aşırı emülsiyon itin. Bu manevra hiçbir hava kabarcığı plastik şırınga içinde sıkışıp olduğunu garanti eder. </li><li> Üç yollu gelen plastik şırınga çıkarın. Attaplastik enjektöre bir # 26 gauge iğne ch. Emülsiyon artık iğne boşluk hacmine doldurur böylece 1 mL işareti piston püskürtülür. </li></ol> 2. Donör Fare Bağışıklama Not: Kadın C57BL / 6 fareleri genellikle başlangıçta Ulusal Sağlık Enstitüleri McFarlin grubu 3 tarafından tasarlanan yöntem izleyerek, yanları dört sitelerde antijen emülsiyonu ile enjekte edilir. Deneyimli bir araştırmacı, bir kişi bütün görevi gerçekleştirebilir. Yeni başlayanlar için, yardım bir kişi fare tutan ve diğer kişi enjeksiyon yapar böylece İstenen olabilir. Alternatif olarak, fare enjeksiyon için anestetize olabilir. <ol><li> Boyun cilt tarafından sıkıca tutun ve fare Göğüs ve karın kolayca erişilebilir olduğu gibi 4. ve 5. parmaklar arasında kuyruk geri tutun. </li><li> (Mo biraz sağ koltuk üzerinde toraks bir yerinde 1mL plastik enjektör iğnesi yerleştirinkullanın) ve subkutan antijen emülsiyonu 0,05 mL enjekte edilir. Beyazımsı CFA A little şişkinliği soluk cilt üzerinden görülebilir. Biraz sol koltuk altına yukarıda toraks site için aynı tekrarlayın. </li><li> Kuyruk bırakın ve sağ ayak (fare) tutun, çevirin ve 4. ve 5. parmaklar arasında tutun. Sağ kanadının sadece kaburga durumda aşağıdaki site bulun ve antijen emülsiyonu 0,05 mL enjekte edilir. </li><li> Sağ ayak bırakın, fare başka bir yol açmak ve 4. ve 5. parmaklar arasında sol ayak (fare) tutun. Sol kanadında sadece kaburga durumda aşağıdaki site bulun ve antijen emülsiyonu 0,05 mL enjekte edilir. </li><li> 10 farelerin enjeksiyonundan sonra taze bir iğne ile değiştirin veya iğne olursa dulled. </li></ol> 3. 7 ila 10 gün sonra Bağışıklama Doku Kültürü Lenf Bezleri Hücre İzolasyonu <ol><li> Yedi ile 10 gün sonra ortaya çıkabilir, fareler kurbanve lenf düğümleri kaldırın. Ötenazi tercih edilen yöntem CO 2 inhalasyon gereğidir. Bacaklarda uzattı ve iğneler ile kuruluna güvenli olan kurban sonra, diseksiyon gemide sırtında fare yatıyordu. Farelerde% 70 etanol bir sprey ile ıslatılır. </li><li> Kadar steril makas ve forseps ile çene karın alt ucundan ortasına uzunlamasına deri bir yarık kesin. </li><li> Her bacak için aşağı kasık bölgesinden karın cildi kesin. Sırt ve kasık lenf düğümleri açığa cilt aşağı pin soyun. </li><li> Cilt geri soyulmuş ve koltukaltı yakın koltuk altı lenf düğümleri maruz altına sokulamayacak böylece ön ayakları (sol ve sağ) boyunca deri kesin. </li><li> Birlikte çalışma forseps iki çift ile, kaplama bağ dokuları çekmeye ve inguinal lenf düğümleri etrafında. Bağ doku temizlendiği zaman, lenf düğümü altında forseps bir çift koyun ve vücudun uzak çekin. Yerleştirin35 mm petri lenf düğümleri steril PBS ile doldurulur. </li><li> Iki çift forseps kullanarak iki koltuk altı lenf düğümleri kapsayan bağ dokuları dışarı doğru çekin. Lenf düğümleri izole etmek ve Petri tabağına yerleştirin. Kanama çok zor lenf düğümleri tanımlamak yapar gibi bölgede geçen kan damarlarını kırmak için çok dikkatli olun. </li><li> Tüm lenf düğümleri toplandıktan sonra, biyogüvenlik kaput Petri taşıyın. Kırın ve diğer karşı bir taşlama, forseps, iki çift dışında lenf düğümleri kızdırmak. Alternatif olarak, lenf düğümleri Petri altındaki lenf düğümlerine karşı basarak 3 ml&#39;lik plastik şırınga pistonu düz ucunu kullanarak yukarı kırılabilir. </li><li> Membranlar ve enkaz kaldırmak için bir naylon gözlü bir alay lenf hücre süspansiyonu geçirin. </li><li> Lenf nodu hücre süspansiyonu steril PBS ile 50 ml kadar olun. 10 dakika 1000 rpm&#39;de santrifüj. Kültür ortamı içinde pelletini. Uygulanabilir bir c yapınell 4 x 10 6 hücre / mL konsantrasyon saymak ve ayarlayın. UseRPMI 1640% 10 fetal dana serumu, 2 mM L-glutamin, 1 mM sodyum piruvat MEM, 0.1 mM MEM olmayan amino asitler, 100 U / ml penisilin, 100 ug / ml streptomisin, 10 mM Hepes tamponu, 5 x ile desteklenmiş 10 -5 M 2-ME. Hücreleri resuspending Pre-sıcak kültürü. </li><li> Çukur başına 2 mL hacmi (nihai konsantrasyon hücre 8 x 10 6 hücre / çukur) ile birlikte 24 bölümlü kültür tabaklarına kültürü hücre. 100 ug / mL &#39;lik nihai bir konsantrasyon her oyuğa antijen ekleyin. % 5 CO2 içeren bir 37 ° C inkübatörde kültürü plakası yerleştirin. 5 gün boyunca hücre inkübe edin. </li></ol> 4. 5 Gün Kültürler başlatılması sonra Kültür Lenf Hücreler Hasat <ol><li> Pasteur cam pipet veya küçük hacimli pipet ile yukarı ve aşağı pipetleme her iyi hücreleri karıştırın. 50 ml&#39;lik bir santrifüj tüpüne hücreler hasat. </li><li> 10 dakika için 1000 devirde hücreleri santrifüjleyin. Edinmek vePBS küçük bir hacim içine hücre peleti pend. </li><li> Hücreleri saymak ve steril PBS ile 2.5 x 10 8 hücre / ml canlı hücre konsantrasyonunu ayarlamak. Bir # 26 gauge iğne ile donatılmış bir enjektöre hücre çizin. </li><li> Kuyruk damarından genişler yardımcı olmak için alıcı farelerin kafes üzerine bir ısı lambası yerleştirin. </li><li> Bir fare tutucu kullanarak, tutucu yarık boyunca farenin kuyruk uzanır. Kuyruk uzatmak için çekin. Ven bulun. </li><li> 5 x 10 7 hücreleri eşit, hücre süspansiyonu 0.2 ml / fare enjekte edilir. </li></ol> 5.. Alıcı Fare antijenik Mücadelesi 20 Gün Mesaj Hücre Nakil ve Hastalık Belirtileri Gelişimi <ol><li> Mücadelesi alıcı farelerin antijen ile hastalık belirtileri gösteren değil. Prosedürler &quot;Donör Fareler Bağışıklama&quot; bölümü 2 aynıdır. </li><li> 7 ile 10 gün antijenik uyarımı sonrası paralitik hastalık gelişimi dikkate alınmalıdır. <ol><li> Hastalık kuyruk güçsüzlük ile başlar. Hastalık 1 olarak sınıflandırılırkuyruğu gevşek hale gelir. Fare bir arka bacak felç olduğunda Hastalığı 2 olarak sınıflandırılır. Hastalık her iki arka ayakları felç olduğunda 3 derecelendirildi ve ileri tararken fare hem de arka ayakları sürükler edilir. Fare fare tamamen hareketsiz bırakarak, her iki ön ayakları kullanımı kaybettiğinde Hastalıkları 4 sınıflandırılır. Fare can çekişmekte olan ve cesedi kıvrılıyor zaman Hastalık 5 sınıflandırılır. Ölüm hastalığı 6. sınıfa 4 olarak kaydedilecektir. </li></ol></li><li> Bu protokolü takip C57BL / 6 fare uyarılan MBP spesifik EAE monofazik olup. Farelerde hastalığın kurtarmak ancak spontan relaps uğramamış. </li></ol> 6. Temsilcisi Sonuçlar Alan fareler astarlanmış ve in vitro-genişletilmiş donör lenf hücrelerinin hastalığın oluşumunda onların direncini yansıtan, EAE hastalık belirtileri ortaya vermedi. Bununla birlikte, şiddetli hastalığı antijenik uyarma kabiliyeti gösteren, antijenik meydan okuma (Tablo I) sonra geliştirilendirenç mekanizması tersine çevirmede. Belirtildiği antijenik meydan iki vasıflar antijen dozlarda ve hastalık indüklemek için meydan kinetiğini bulunmaktadır. Tablo III de gösterildiği gibi antijen arasında çok düşük doz ihtiyaç duyulmaktadır. Antijen (Tablo IV) ile meydan okuduğunda Hayret, bir yıl önce donör hücreleri alınan fareler hala şiddetli hastalık gelişebilir. Bu iki gözlem güçlü EAE direnç sağlamada &quot;uzun ömürlü&quot; T hücrelerinin tutulumunu telkin etmektedir. Bu protokol, birçok EAE dirençli fare suşları 4 uygulanabilir. <img alt="Şekil 1.." src="/files/ftp_upload/3778/3778fig1.jpg" /> Tanınmış dirençli fare suşlarının EAE indüksiyonu için deneysel tasarım Şekil 1. Akış çizelgesi. <table border="1"><tbody><tr><td></td><td></td><td colspan="3"> Klinik EAE evlatlık sonra transfer </td><td colspan="3"><strong&gt; Klinik EAE antijenik uyarımı sonrası </td></tr><tr><td> Zorlanma </td><td> Antijen </td><td> insidansı </td><td> Av. Hastalığın derecesi (Aralık) </td><td> Av. başlangıç ​​günde (Aralık) </td><td> İnsidans </td><td> Av. Hastalığın derecesi (Aralık) </td><td> Av. başlangıç ​​günde (Aralık) </td></tr><tr><td> SJL </td><td> MBP </td><td> 21/21 </td><td> 4.0 (3-5) </td><td> 8.0 (6-10) </td><td> ND </td><td> ND </td><td> ND </td></tr><tr><td> C57BL / 6 </td><td> MBP </td><td> 0/10 </td><td> - </td><td> - </td><td> 7/7 </td><td> 3.85 (3-5) </td><td> 9.28 (9-10) </td></tr><tr><td> Balb / c </td><td> MBP </td><td> 0/7 </td><td> - </td><td> - </td><td> 5/5 </td><td> 3.2 (3-4) </td><td> 7.0 (7) </td></tr><tr><td> C3H/HeJ </td&gt; <td> MBP </td><td> 0/7 </td><td> - </td><td> - </td><td> 4/4 </td><td> 3.2 (3-4) </td><td> 8.0 (8) </td></tr><tr><td> C57BL / 6 </td><td> MBP 60-80 </td><td> 0/4 </td><td> - </td><td> - </td><td> 4/4 </td><td> 2.75 (2-4) </td><td> 10.2 (9-11) </td></tr></tbody></table> Tablo I. MBP-aracılı C57BL yılında EAE / 6 farelerde indüksiyonu. C57BL / 6 farelerde astarlanmalı vitro ve in-genişletilmiş donör hücreleri neden vermedi EAE ve evlatlık transferi. Antijenik meydan yazılan hücre transferi hastalığın oluşumunda duyarlı fareler kıldı. Av., Ortalama. ND, bitmiş değil. <table border="1"><tbody><tr><td></td><td></td><td colspan="3"> Antijenik uyarımı sonrası Klinik EAE </td></tr><tr><td> Astar Antijen </td><td> Mücadelesi antijen </td><td> İnsidans </td><td> Av. Hastalığın derecesi (Aralık)</td><td> Av. başlangıç ​​günde (Aralık) </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> CFA yalnız </td><td> 0/3 </td><td> - </td><td> - </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> OVA&#39;ya CFA </td><td> 0/3 </td><td> - </td><td> - </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> MBP-CFA </td><td> 3/3 </td><td> 4.0 (4.0) </td><td> 7.7 (7-9) </td></tr></tbody></table> Antijenik meydan Tablo II. Özgünlük. Alıcı fareler priming antijeni yanı sıra diğer alakasız antijenleri ile itiraz edildi. Sadece priming antijen şiddetli hastalık indüklenen. OVA: tavuk ovalbumin. Av., Ortalama. <table border="1"><tbody&gt; <tr><td></td><td></td><td colspan="3"> Antijenik uyarımı sonrası Klinik EAE </td></tr><tr><td> Mücadelesi antijen dozları (mg / fare) </td><td> İnsidans </td><td> Av. Hastalığın derecesi (Aralık) </td><td> Av. başlangıç ​​günde (Aralık) </td></tr><tr><td> 200 </td><td> 4/4 </td><td> 3.75 (3-4) </td><td> 8.25 (7-9) </td></tr><tr><td> 100 </td><td> 4/4 </td><td> 3.67 (3-4) </td><td> 7.5 (7-8) </td></tr><tr><td> 50 </td><td> 4/4 </td><td> 3.25 (3-4) </td><td> 8.25 (7-10) </td></tr><tr><td> 25 </td><td> 4/4 </td><td> 3.0 (3.0) </td><td> 8.25 (8-9) </td></tr><tr><td> 10 </td><td> 4/4 </td><td> 3.0 (3.0) </td><td> 8.76 (8-9) </td></tr><tr><td> 5 </td><td> 4/4 </td><td> 2.5 (2-3) </td><td> 9.75 (9-10) </td></tr><tr><td> 1 </td><td> 2/4 </td><td> 1.0 (1.0) </td><td&gt; 16 (14-18) </td></tr><tr><td> 0 </td><td> 0/4 </td><td> - </td><td> - </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table> Tablo III. Mücadelesi antijen dozları hastalığın oluşumunda gereklidir. Alıcı farelere meydan kullanılan MBP çeşitli konsantrasyonlarda test edildi. Av., Ortalama. <table border="1"><tbody><tr><td></td><td></td><td colspan="3"> Antijenik uyarımı sonrası Klinik EAE </td></tr><tr><td> Mücadelesi antijen </td><td> Challenge Gün </td><td> İnsidans </td><td> Av. Hastalık notu (Aralık) </td><td> Av. Başlangıçlı Günü (Aralık) </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> 5 </td><td> 3/4 </td><td> 1.33 (1-2) </td><td> 9.67 (9-10) </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> 10 </td&gt; <td> 4/4 </td><td> 3.0 (3.0) </td><td> 8.25 (7-9) </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> 15 </td><td> 4/4 </td><td> 3.75 (3-4) </td><td> 7.25 (7-8) </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> 25 </td><td> 4/4 </td><td> 4.0 (4.0) </td><td> 8.0 (7-9) </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> 35 </td><td> 4/4 </td><td> 3.5 (3-4) </td><td> 7.5 (7-8) </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> 60 </td><td> 4/4 </td><td> 3.75 (3-4) </td><td> 9.0 (8-10) </td></tr><tr><td colspan="5"> -------------------------- </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> 343 </td><td> 3/3 </td><td> 3.0 (3.0) </td><td> 10.33 (10-11) </td></tr><tr><td> MBP-CFA </td><td> 445 </td><td> 3/3 </td><td> 3.0 (3.0) </td><td> 7.0 (7.0) </td></tr></tbody></table> Antijenik meydan Tablo IV. Kinetiği. Alıcı fareler benimsemeye çeşitli zaman noktada görevde itiraz edildiive hücre transferi. Av., Ortalama.

<ol><li>Swanborg, R. H. Experimental allergic encephalomyelitis. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSwanborg%2C+RH+%22Methods+in+Enzymology%22">Methods in Enzymology</a>. Sabato, G. D. 162, Academic Press. New York, NY. 413-421 (1988).</li>
<li>Shaw, M. K., Kim, C., Hao, H. W., Chen, F., Tse, H. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+myelin+basic+protein-specific+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+in+C57BL%2F6+mice%3A+Mapping+of+T+cell+epitopes+and+T+cell+Vb+gene+segment+usage%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neuroscience+Research%22%5BJournal%5D)">Induction of myelin basic protein-specific experimental autoimmune encephalomyelitis in C57BL/6 mice: Mapping of T cell epitopes and T cell Vb gene segment usage.</a> J. Neuroscience Research. 45, 690-699 (1996).</li>
<li>McCarron, R., McFarlin, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adoptively+transferred+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+in+SJL%2FJ%2C+PL%2FJ%2C+and+%28SJL%2FJ+x+PL%2FJ%29F1+mice.+Influence+of+I-A+haplotypes+on+encephalitogenic+epitope+of+myelin+basic+protein%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Adoptively transferred experimental autoimmune encephalomyelitis in SJL/J, PL/J, and (SJL/J x PL/J)F1 mice. Influence of I-A haplotypes on encephalitogenic epitope of myelin basic protein.</a> J. Immunol. 141, 1143-1149 (1988).</li>
<li>Shaw, M. K., Kim, C., Ho, K. -L., Lisak, R. P., Tse, H. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+combination+of+adoptive+transfer+and+antigenic+challenge+induces+consistent+murine+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+in+C57BL%2F6+mice+and+other+reputed+resistant+strains%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neuroimmunol%22%5BJournal%5D)">A combination of adoptive transfer and antigenic challenge induces consistent murine experimental autoimmune encephalomyelitis in C57BL/6 mice and other reputed resistant strains.</a> J. Neuroimmunol. 39, 139-150 (1993).</li>
<li>Krishnamoorthy, G., Saxena, A., Mars, L. T., Domingues, H. S., Mentele, R., Ben-Nun, A., Lassmann, H., Dornmair, K., Kurschus, F. C., Liblau, R. S., Wekerle, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myelin-specific+T+cells+also+recognize+neuronal+autoantigen+in+a+transgenic+mouse+model+of+multiple+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Med%22%5BJournal%5D)">Myelin-specific T cells also recognize neuronal autoantigen in a transgenic mouse model of multiple sclerosis.</a> Nat. Med. 15, 626-632 (2009).</li>
<li>Anderson, A. C., Reddy, J., Nazareno, R., Sobel, R. A., Nicholson, L. B., Kuchroo, V. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IL-10+plays+an+important+role+in+the+homeostatic+regulation+of+the+autoreactive+reperteroire+in+na%C3%AFve+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">IL-10 plays an important role in the homeostatic regulation of the autoreactive reperteroire in naïve mice.</a> J. Immunol. 173, 828-834 (2004).</li>
<li>Anderton, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treg+and+T-effector+cells+in+autoimmune+CNS+inflammation%3A+a+delicate+balance+easily+disturbed%5BTitle%5D)+AND+%22Eur.+J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Treg and T-effector cells in autoimmune CNS inflammation: a delicate balance easily disturbed.</a> Eur. J. Immunol. 40, 332-334 (2010).</li>
<li>Arnon, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+allergic+encephalomyelitis+-+susceptibility+and+suppression%5BTitle%5D)+AND+%22Immunol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Experimental allergic encephalomyelitis - susceptibility and suppression.</a> Immunol. Rev. 55, 5(1981).</li>
<li>Billiau, A., Heremans, H., Vandekerckhove, F., Dijkmans, R., Sobis, H., Meulepas, E., Carton, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancement+of+experimental+allergic+encephalomyelitis+in+mice+by+antibodies+against+IFN-g%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Enhancement of experimental allergic encephalomyelitis in mice by antibodies against IFN-g.</a> J. Immunol. 140, 1506-1510 (1988).</li>
<li>Arbomson-Leeman, S., Alexander, J., Bronson, R., Corroll, J., Southwood, S., Dorf, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+autoimmune+encephalomyelitis-resistant+mice+have+highly+encephalitogenic+myelin+basic+protein+%28MBP%29-specific+T+cell+clones+that+recognize+a+MBP+peptide+with+high+affinity+for+MHC+class+II%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">Experimental autoimmune encephalomyelitis-resistant mice have highly encephalitogenic myelin basic protein (MBP)-specific T cell clones that recognize a MBP peptide with high affinity for MHC class II.</a> J. Immunol. 154, 388-398 (1995).</li>
<li>Reddy, J., Illes, Z., Zhang, X., Encinas, J., Nicholson, L., Sobel, R. A., Wucherpfennig, K. W., Kuchroo, V. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myelin+proteolipid+protein-specific+CD4%2BCD25%2B+regulatory+cells+mediate+genetic+resistance+to+experimental+autoimmune+encephalomyelitis%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Myelin proteolipid protein-specific CD4+CD25+ regulatory cells mediate genetic resistance to experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 101, 15434-15439 (2004).</li>
<li>Korn, T., Reddy, J., Gao, W., Bettelli, E., Awasthi, A., Petersen, T. R., Backstrom, B. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myelin-+specific+regulatory+T+cells+accumulate+in+the+CNS+but+fail+to+control+autoimmune+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Med%22%5BJournal%5D)">Myelin- specific regulatory T cells accumulate in the CNS but fail to control autoimmune inflammation.</a> Nature Med. 13, 423-431 (2007).</li>
<li>Shaw, M. K., Li, J., Ho, P. P., Hao, H., Lisak, R. P., Tse, H. Y. Induction of myelin basic protein-specific adoptive experimental autoimmune encephalomyelitis in C57BL/6 mice. Longevity of donor T cells and lack of disease relapses. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aShaw%2C+MK+%22Neuroimmunology+Research+Focus%22">Neuroimmunology Research Focus</a>. Broglie, P. V. , Nova Science Publisher. New York. 175-191 (2007).</li>
</ol>

Hiçbir finansal açıklamaları.

Farelerde EAE çalışmaları genellikle neuroantigens, miyelin bazik protein (MBP), proteolipid protein (HUA) ya da miyelin oligodendrosit protein (MOG) kullanmaktadır. Daha önceki çalışmalarda çoğunlukla MBP kullanılır. PLP SJL farelerden güçlü ve tutarlı yanıtları uyarır. B6 fareler bu antijeni ile hastalığın oluşumunda duyarlı olması nedeniyle Daha yakın zamanlarda, MOG kullanılan ortak neuroantigen olduğunu. Gen hedeflenen fare suşlarının çoğu B6 genetik birikimine vardır. İlginçtir, B6 fareler MOG indüksiyon EAE duyar...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif Adı </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> Gine domuzu omurilik </td><td> Rockland Immuno-kimya, Inc Gilbertsville, PA 19525 <a href="http://www.rockland-inc.com" target="_blank">www.rockland-inc.com</a> </td><td> GP-T065 </td><td> dondurulmuş </td></tr><tr><td> Freund yardımcı maddesi, tam H37Ra </td><td> Difco Laboratuvarları Detroit, MI </td><td> 231131 </td><td></td></tr><tr><td> Multifit değiştokuş-mümkün şırınga </td><td> BD <a href="http://www.bd.com/us" target="_blank">www.bd.com / bize</a> </td><td> 512133 </td><td></td></tr><tr><td> RPMI 1640 </td><td> MediatechA.Ş. Manassas <a href="http://www.cellgro.com" target="_blank">www.cellgro.com</a> </td><td> 10-040-CM </td><td></td></tr><tr><td> OVA </td><td> Sigma-Aldrich <a href="http://www.sigmaaldrich.com" target="_blank">www.sigmaaldrich.com</a> </td><td> A5503 </td><td></td></tr><tr><td> Fareler </td><td> Jackson Laboratuvarı Bar Harbor </td><td> B6 fareler: 0.000.664 </td><td></td></tr></tbody></table>

kabul edilmiş transfer ve antijenik challenge deneysel otoimmün encephalomyelitis (eae) dayanıklı fare suşlarında yanıtsızlık aşmak

Overcoming Unresponsiveness in Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) Resistant Mouse Strains by Adoptive Transfer and Antigenic Challenge

Deneysel otoimmun ensefalomiyelit (EAE) merkezi sinir sistemi (MSS) iltihabi bir hastalıktır ve insan demyelinizan hastalığı, multipl skleroz (MS) çalışma için bir hayvan modeli olarak kullanılmaktadır. EAE MSS içine mononükleer hücrelerin patolojik infiltrasyonu ve paralitik hastalığın klinik bulgusu ile karakterizedir. Diğerleri dirençli iken MS benzer şekilde, EAE bazı fare suşları arasındaki genetik kontrolü altında da hastalığın oluşumunda duyarlıdır. Tipik olarak, C57BL / 6 (H-2 b) farelerde miyelin temel protein ile aşılanan (MBP) paralitik işaretleri geliştirmek için başarısız. Burada anlatılan deneysel bir protokol C57BL / 6 fareler gibi diğer tanınmış dirençli fare suşlarının ciddi EAE ikna etmek için kullanılmış olan bu cevapsızlık, kesinlikle antijen işleme veya MBP antijen sunumu hataları nedeniyle değil. Buna ek olarak, C57BL / 6 ve MBP reaktif Balb / c fareleri gelen encephalitogenic T hücre klonu başarılı olmuşturtamamen izole edilmiş ve yayılır. Deneysel protokol (200 ug / fare) MBP-astarlanmış C57BL / 6 donör lenf düğümü hücreleri izole edilir ve MBP özel T hücrelerinin havuz genişletmek için antijen ile beş gün kültüre hangi bir hücresel adoptif aktarım sistemi kullanılarak içerir. Kültürü sürenin sonunda, 50000000 yaşayabilir hücrelerin kuyruk damarından vasıtasıyla Saf singeneik alıcı aktarılır. Bu yüzden normalde tedavi Alıcı fareler dolayısıyla dayanıklı durumu tazeleyen, EAE geliştirmek değil, onlar sonsuza kadar, normal kalabilir. On gün sonrası hücre nakli, alıcının fareler tam Freund adjuvan (CFA) emülsifiye yamaçlarında dört tesiste MBP ile zorlanmaktadır. Şiddetli EAE 10-14 gün, tehditten sonra bu farelerde gelişmeye başlar. Sonuçlar alakasız antijenleri ile meydan hastalığın klinik bulguları neden olmadı gibi hastalığın indüksiyon antijenik spesifik olduğunu gösterdi. Önemli ölçüde, antijene dozun bir titrasyonu için kullanılanmeydan alıcı farelerin, 5 mikrogram / fare gibi düşük olabileceğini göstermiştir. Ayrıca, antijenik meydan okuma bir zamanlama kinetik çalışmada hastalığın ikna etmek için, bu sorunu 5 gün sonrası antijenik meydan ve 445 gün sonrası antijenik meydan üzerinde olduğu sürece erken kadar etkili olduğunu gösterdi. Yanıtsızlık sağlanması bakımından önemli bir &quot;uzun ömürlü&quot; T hücre popülasyonunun katılımı yönünde Bu veriler, kuvvetli noktası. Bu sistem düzenleyici T hücreleri (Tregs) katılımı tanımlı değil.

Bazı fare suşlar miyelin temel protein olan deneysel otoimmün ensefalomyelit (EAE) indüksiyon karşı edebiliyoruz. Burada anlatılan yanıtsızlık tersine çevirir ve birkaç tipik EAE dirençli fare lekeler paralitik hastalığın neden basit bir bağışıklama protokoldür.

Kabul edilmiş Transfer ve antijenik Challenge Deneysel Otoimmün Encephalomyelitis (EAE) Dayanıklı Fare Suşlarında yanıtsızlık Aşmak

Deneysel otoimmün ensefalomiyelit (EAE), merkezi sinir sisteminin (MSS) inflamatuar bir hastalığıdır ve ... için bir hayvan modeli olarak kullanılmıştır.

Bu prosedürün genel amacı, EAE indüksiyonuna dirençli olduğu kabul edilenler de dahil olmak üzere, herhangi bir fare soyunda tutarlı ve kolay bir şekilde EAE indüklemektir. Bu işlem, öncelikle donör farelerin, komple Freud adjuvanı ile emülsifiye edilmiş miyelin spesifik proteinler veya peptid antijenlerle immunize edilmesiyle gerçekleştirilir. 10 gün sonra, donör farelerin lenf düğümleri izole edilir ve lenf düğümü hücreleri, dört ila beş gün boyunca aynı antijenle kültürlenerek in vitro ortamda yeniden stimüle edilir.Hücreler daha sonra naif alıcı farelere adoptif olarak transfer edilir. Duyarlı fare suşları, dirençli bir suşta EAE'yi tetiklemek için sekiz ila 14 gün içinde EAE geliştirecektir. Adoptif transferden 14 gün sonra, alıcı fareler CFA içindeki antijen ile immunize edilmiştir.Bu yöntem kullanılarak, dirençli fare suşlarında EAE indüklenebilir. EAE'yi indüklemek için adaptif transfer ve challenge protokolünün temel avantajı, hastalığın güvenilir bir şekilde indüklenmesine olanak sağlamasıdır. Klinik hastalığın %100'den daha düşük seyrettiği durumlarla nadiren karşılaşılır.Hastalığı indüklemek için protokolü duyarlı fare suşlarına göre uyarlayabiliriz; ancak daha da öneml

overcoming-unresponsiveness-experimental-autoimmune-encephalomyelitis

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Bu video, bir murin modelinde deneysel otoimmün ensefalomiyeliti (EAE) indüklemek için bir antijen adjuvan emülsiyonu oluşturmak için etkili bir homojenizasyon tekniğini göstermektedir. Emülsiyon, inaktive edilmiş bir patojenik bakteri içeren sürekli bir yağ fazı ile çevrili su fazında bir otoantijen - miyelin oligodendrosit glikoproteini (MOG) içerir. Emülsiyon, uzun süreli bir bağışıklık tepkisi için sürekli bir antijen salınımı sağlar.

Otoimmün ensefalomiyeliti indüklemek için bir antijen adjuvan emülsiyonunun hazırlanması

Video, miyelin oligodendrosit glikoproteinleri ve inaktive edilmiş Mycobacterium tuberculosis'in bir kombinasyonunu enjekte ederek bir fare modelinde deneysel otoimmün ensefalomiyelit indüksiyonunu göstermektedir. Model, araştırmacıların hastalık mekanizmalarını incelemelerine ve terapötik müdahaleleri test etmelerine olanak tanır.

Bir Fare Modelinde Deneysel Otoimmün Ensefalomiyelit İndüksiyonu

Bu video, beyne göç eden otoreaktif T hücrelerini aktive etmek için miyelin türevi peptitleri bir adjuvan ile enjekte ederek deneysel otoimmün ensefalomiyelit (EAE) indükleme yöntemini göstermektedir. Boğmaca toksini, kan-beyin bariyeri geçirgenliğini artırmak için uygulanır ve bu T hücrelerinin ve diğer bağışıklık hücrelerinin beyne girmesine izin verir. Bu bağışıklık hücreleri demiyelinizasyona neden olarak sinir iletiminin bozulmasına ve EAE gelişimine yol açar.

Bir Fare Modelinde Deneysel Otoimmün Ensefalomiyelit Oluşumu

Bu videoda, deneysel otoimmün ensefalomiyelit (EAE) kullanılarak multipl sklerozun bir fare modeli oluşturulmuştur. Fareye, otoreaktif T hücrelerini aktive eden bir bağışıklık tepkisini tetikleyen bir nöronal peptit ve bir adjuvan içeren bir emülsiyon enjekte edilir. Bunu, otoreaktif T hücrelerinin beyne sızmasına izin vererek kan-beyin bariyeri geçirgenliğini artırmak için bir boğmaca toksini (PTX) enjeksiyonu takip eder. Bu infiltrasyon, multipl sklerozun demiyelinizan durumunu taklit ederek...

Deneysel otoimmün ensefalomiyelit (EAE), çoklu skleroz kurulmuş bir hayvan modelidir. C57BL / 6 fareleri, merkezi sinir sistemi otoreaktif bağışıklık hücreleri tarafından neden olduğu artan gevşek felce neden, miyelin oligodendrosit glikoprotein (MOG) peptit 35-55 (MOG 35-55) ile immünize edilir. Hastalığın başlama ve izleme için protokoller tartışılacaktır.

Miyelin Oligodendrosit Glikoprotein (MOG<sub&gt; 35-55</sub&gt;) C57BL / 6 Farelerde Deneysel Otoimmün Ensefalomiyelit (EAE) Bağlı

Bu makale, deneysel otoimmün ensefalomiyelit (EAE) modelinin indüksiyon ve skorlama yöntemlerini, çeşitli hastalık evrelerinde sırasıyla akış sitometrisi ve kantitatif PCR kullanılarak lenf düğümleri, dalak, kan ve omurilikteki immün hücre dağılımı ve mRNA sitokin seviyelerinin değerlendirilmesi ile birlikte açıklamaktadır.

Çeşitli Dokularda Bağışıklık Hücreleri Hastalık bağımlı Dağıtım Fareler ve Değerlendirilmesi Deneysel Otoimmün Ensefalomyelitli indüksiyon

Burada, nörovasküler birim bozulma deneysel otoimmun ensefalomiyelit içinde vivo sırasında araştırmak için protokolleri mevcut. Biz özellikle kan - beyin bariyerini geçirgenliği ve gelatinase etkinlik lökosit göç dahil glia limitans belirlemek nasıl adres.

Nörovasküler biriminin endotel ve gliyal engelleri bozulma Vivo deneysel otoimmun ensefalomiyelit sırasında görüntülenmesi

Bu protokol, miyelin oligodendrosit glikoprotein kullanılarak bir fare modelinde deneysel otoimmün ensefalomiyelitin indüklenmesini ve klinik bir skorlama sistemi kullanılarak hastalık sürecinin izlenmesini açıklamaktadır. Deneysel otoimmün ensefalomiyelit ile ilişkili semptomlar, hastalık sürecini kapsamlı bir şekilde değerlendirmek için fare femur mikro-bilgisayarlı tomografi analizi ve açık alan testi kullanılarak analiz edilir.

Deneysel Otoimmün Ensefalomiyelitin İndüksiyonu ve Çeşitli Değerlendirme Göstergeleri

Multipl sklerozun bir hayvan modeli olan deneysel otoimmün ensefalomiyeliti indüklemek için, fareler bir otoantijen ve Freund'un adjuvanını tamamlayan bir yağda su emülsiyonu ile bağışıklanır. Bu emülsiyonların hazırlanması için çeşitli protokoller mevcut olsa da, emülsiyon hazırlığı için hızlı, basit ve standartlaştırılmış bir homojenizasyon protokolü burada sunulmaktadır.

Deneysel Otoimmün Ensefalomiyeliti İndüklemek için Antijen/Adjuvan Emülsiyonlar Hazırlamak için Hızlı, Basit ve Standartlaştırılmış Bir Homojenizasyon Yöntemi

Deneysel otoimmün ensefalomiyelit (EAE), insan hastalığı ile güçlü bir humoral otoimmün yanıtı paylaşan bir multipl skleroz (MS) hayvan modelidir. Burada, EAE ile aşılanmış farelerin serumundaki otoantikorları ölçmek için basit ve esnek bir ELISA protokolü bildiriyoruz.

Deneysel Otoimmün Ensefalomiyelit Üzerine Farelerde Otoreaktif Antikorların Miktar Tayini

Öğrenin, dirençli fare suşlarında EAE indüksiyonu için bağışıklık hücrelerinin aktarımı ve antijenik uyarım yöntemini. Bu teknik, otoimmün hastalık mekanizmalarını incelemeye olanak tanır.

Kabul edilmiş Transfer ve antijenik Challenge Deneysel Otoimmün Encephalomyelitis (EAE) Dayanıklı Fare Suşlarında yanıtsızlık Aşmak (Video) | JoVE Journal

Kabul edilmiş Transfer ve antijenik Challenge Deneysel Otoimmün Encephalomyelitis (EAE) Dayanıklı Fare Suşlarında yanıtsızlık Aşmak

Daha fazla video keşfet